绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 100
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 82756 条结果
[硕士论文] 郜星晨
生物学生物学 暨南大学 2015(学位年度)
摘要:鲀形目(Tetraodontiformes)现存10科100属约350种,主要分布在热带和亚热带海洋,仅少数种类定居在淡水中,或在一定季节进入江河。鲀形目很多种类是重要的养殖鱼类和海洋捕捞对象,其中绿鳍马面鲀(Thamnaconus modestus)、黄鳍马面鲀(T.hypargyreus)等目前面临资源枯竭的困境。东方鲀属(Takifugu)鱼类近年来在水产养殖、河豚毒素医药开发、脊椎动物基因组研究方面有着广泛的应用,具有重要的经济地位、科研及医药价值,与此同时误食河鲀引起的中毒乃至死亡事件也时有发生。准确的物种鉴定不仅能有效地区分鲀毒鱼类,而且可以促进渔业资源合理开发、生态调查及生物多样性保护。但由于鲀形目鱼类外部形态总体差异较大,近缘种间十分相似,传统分类学多以条纹、斑点、体色等易受主观因素影响的形态特征作为主要辨别依据,以致至今鲀形目鱼类分类一直存在争议。DNA条形码通过对标准基因DNA序列的分析快速鉴定物种,已成功应用于动物、植物及微生物。本文测定了中国沿海8科19属33种110尾鲀形目鱼类线粒体COI基因5’端652 bp的序列,结合GenBank下载的序列,共分析了8科25属56种210条鱼类COI序列,旨在利用DNA条形码技术鉴定我国沿海常见的鲀形目鱼类,澄清目前分类的混乱,揭示可能存在的隐存种,并进行初步的系统发育分析,基于K2P替代模型的研究结果如下:
  (1)鲀形目亚目内科间、科内属间、属内种间、种内平均遗传距离分别为20.38%(18.59%-27.04%)、16.57%(0.89%-22.74%)、7.35%(0.03%-17.09%)、0.56%(0-5.41%),其中53种种内遗传距离小于2%的遗传距离阈值,48种种内遗传距离小于1%。56种鱼类种间平均遗传距离约为种内遗传距离的34倍,51种鱼类最小种间遗传距离大于最大种内遗传距离,在种内、种间乃至属间均无重叠,形成理想的DNA条形码间隙。但东方鲀属的鱼类可能受到种间杂交、近期辐射进化等干扰,墨绿东方鲀(T.basilevskianus)与红鳍东方鲀(T.rubripes)、双斑东方鲀(T.bimaculatus)与黄鳍东方鲀(T.xanthopterus)等未形成明显的DNA条形码间隙;而兔头鲀属(Lagocephalus)鱼类种间遗传距离已经达到鲀形目鱼类属间平均水平(16.57%),分类地位需要进一步研究。
  (2)在邻接树上鲀形目鱼类总体按物种名聚类,与形态学鉴定结果基本一致;属内能形成具有较高支持率的分支,但较高阶类群的系统发育关系不明确。除兔头鲀属(Lagocephalus)外,其余24个属均为单系。马面鲀属(Thamnaconus)的马面鲀(T.septentrionalis)与黄鳍马面鲀(T.hypargyreus)、东方鲀属(Takifugu)的铅点东方鲀(T.alboplumbeus)和斑点东方鲀(T.poecilonotus)可能存在同物异名现象。棘箱鲀(Kentrocapros aculeatus)、尖鼻箱鲀(Rhynchostracion nasus)、翻车鲀(Mola mola)等可能存在隐存种。
[硕士论文] 朱杰
生物学生物学 新疆师范大学 2017(学位年度)
摘要:本研究以正十六烷为唯一碳源,从长期受石油污染土壤样品的富集样品中分离筛选出14株隶属于9个不同属的菌株,其中编号为LAM1007的菌株在复筛过程中表现出最高的降解效率,因此,后续以菌株LAM1007为研究对象通过单因素实验研究了环境因素(温度、pH、接种量和转速)对菌株降解效率的影响,以及不同初始浓度的正十六烷(0.1%、0.3%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%, v/v)对菌株降解效率的影响。同时,本实验也初步研究了该菌株对高浓度的柴油(2.0%,体积比)及液体石蜡(0.3%,v/v)样品中各烷烃组分降解能力进行初步评估。基于该菌株具有较强的烷烃降解能力,本研究对菌株LAM1007的功能基因alkB进行了克隆及表达,并对重组烷烃单加氧酶基因alkB的表达条件进行了初步研究,以期为后续基因工程菌的应用及酶学特性的研究奠定基础。
  对菌株LAM1007的16S rRNA基因序列分析后,结果表明该菌株与不动杆菌属(Acinetobacter)内的有效发表种最高相似度分别为98.8%,97.0%,初步判断其为不动杆菌属的疑似新种,因此对其进一步进行了系统分类学研究。并对另外一株编号为LAM-WHM-D11的Arenimonas属的菌株也同时进行了系统分类学研究。主要结论为:首先,以正十六烷为唯一碳源从石油污染样品的富集样品中分离筛选出14株分别隶属于布鲁氏菌属(Brucella)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、水杆菌属(Aquabacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、Spingopyxis属、Kosakonia属、戈登氏菌属(Gordonia)及铁矿沙单孢菌属(Arenimonas)的烷烃降解解菌。其次,实验中对菌株LAM1007降解正十六烷的特性进行了初步研究,结果表明该菌株在正十六烷无机盐培养基中的最适降解条件为:30℃,pH7.0,接种量1%(v/v),转速180 r/min,在该条件下浓度为0.3%(v/v)即2310.4 mg/L的正十六烷60 h内降解率高达90%,并且对于浓度高达2.0%(v/v)的正十六烷在相同时间内降解率仍能达53%。同时,菌株LAM1007经16S rRNA基因序列分析发现其与Acinetobacter junii LMG998T相似度最高为98.8%,与 Acinetobacter venetianus LMG19082T相似度为97.0%,并依据其菌落形态特征初步确定其为不动杆菌属(Acinetobacter)等结果的表明其为Acinetobacter一株疑似新种。而菌株LAM-WHM-D11经过多相分类学研究结果表明:该菌株是一株能生长于浓度为0.3%(v/v)正十六烷无机盐培养基并能耐受一定浓度的重金属离子,归属于Arenimonas属的一株新种。并且,以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中,菌株LAM1007对于柴油降解特性的研究结果表明,菌株LAM1007对于柴油中烷烃组分C13?C19具有显著降解作用,尤其是C16降解效果更为显著,在降解液体石蜡也表现出相同的规律,结果表明菌株对于石蜡中烷烃组分C13?C18降解效果明显,尤其对于C16的降解效果最明显。这更进一步说明该菌株在选择底物利用时更偏向选取C16为降解底物。最终,通过引物设计,成功扩增了alkB功能基因并成功构建了E.coli BL21/pET28a-alkB表达菌株。重组alkB的表达条件的结果表明其在37℃,30℃及25℃条件下, IPTG浓度为0.1-1.0 mM时均未获得可溶蛋白AlkB表达,而当温度为16℃条件下,IPTG浓度在0.1-1.0 mM时可溶性蛋白AlkB表达,但在含量上却无明显差异。
[硕士论文] 王浩鹏
生物学生物学 福建农林大学 2013(学位年度)
摘要:海洋微生物毒素资源丰富,是海洋天然产物的重要组成部分,也是海洋生物活性物质研究中进展最迅速的领域。海洋微生物所产毒素具有化学结构独特、新颖多样,活性广泛且活性强,作用机理特殊等优点。因而,从广阔无垠的海洋中发掘各类海洋毒素及产毒细菌逐渐引起了人们的重视。目前,国内外以海洋生物毒素为主要成分开发成功的医药产品已经在临床上得到应用,海洋细菌毒素在生物医药基础研究和临床治疗中将一直占有一席之地,具有广阔的应用前景。然而,海洋毒素和产毒素细菌的发掘与研究才是一切应用研究的基础。
  本研究用216L、Zobell2216E和普通海水琼脂等培养基从来自南大西洋、印度洋、太平洋和北极的海底沉积物与近海海水样品中分离出97株海洋细菌。这些海洋细菌分布于交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、深海螺旋菌属(Thalassospira)、海杆菌属(Marinobacter)葡萄球菌属(Staphylococcus)、盐单胞菌属(Halomonas)、海洋杆状菌属(Maricaulis)、埃希氏菌属(Escherichia)、假苍白杆菌属(Pseudochrobactrum)、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、微杆菌属(Microbacterium)和短状杆菌属(Brachybacterium)等12个属。并通过统计种属的分布情况,分析了深海沉积物样品和近海海水样品细菌多样性的差异。
  在分离培养获得海洋细菌后,采用血平板法测试法和MTT细胞毒性试验法进行了产海洋生物毒素菌株的筛选。从血平板中挑出能在菌落周围形成2~4 mm、界限分明的溶血圈具有溶血现象的菌株。共筛选出能产生溶血素的菌株10株。再对余下不溶血的菌株进行发酵,取发酵液过滤除菌,然后用无菌发酵液处理HEK-293细胞进行MTT细胞毒性检测。通过此方法筛选出3株具有明显细胞毒性的菌株。
  从上述的产毒菌株中挑选出一株未见毒素研究相关报道的深海螺旋菌(Thalassospira xianhensis)SDM1-7作为研究对象。首先,通过分析不同温度下深海螺旋菌溶血现象的差异,发现随着温度上升菌株的溶血现象加强。然后,通过生物信息学分析比对发现Thalassospira xianhensis基因组中含有hlyA同源基因。与Rhodospirillum rubrum ATCC11170中hlyA基因的相似度为87%。随之通过半定量RT-PCR技术,分析溶血素Hemolysin A的hlyA基因在不同温度下的基因表达差异。最后,利用 SDS-PAGE分析发现温度因素导致菌体蛋白表达出现差异。
[博士论文] 田宝玉
生物学分子生物学 云南大学 2007(学位年度)
摘要:植物寄生线虫是一种重要的农业害虫,每年给农业造成严重的损失。由于植物寄生线虫特殊的身体构造,使得外来病原很难通过其口针或者其他的体壁开口如气孔或者肛门进入其体内并产生作用。同时具有一定韧性和刚性的体壁也有效的抵御了各种外来病害。所以,只有少数种类的细菌被报道在植物寄生线虫体内分离得到或者可以寄生植物寄生线虫,巴氏杆菌(Pasteuria spp.)是唯一被报到的可以穿透线虫体壁侵染植物病原线虫的专性寄生菌。然而,巴氏杆菌在体外很难进行培养,这限制了这类细菌在实际生产及研究中的应用。研究细菌如何侵染线虫及其分子机制对于线虫的生物防治具有重要的意义。本论文以侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)为例,从生化和分子水平上探讨了细菌侵染线虫的过程及其分子机理。 长久以来,侧孢短芽孢杆菌一直被认为是一种能够抑制多种害虫的广谱生防细菌,例如,目前的研究表明它至少可以杀死四个种类的线虫,包括大豆胞囊线虫(Heterodera glycines),蛇形毛圆线虫(Trichostrongylus colubriformis),松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)和腐生线虫(Panagrellus redivivus)。但是它的杀线虫机制还不清楚。在本研究中,我们从云南省的土壤样品中分离到一株侧孢短芽孢杆菌G4菌株,它可以有效地杀死松材线虫和腐生线虫,重要的是,G4细菌可以像巴氏杆菌一样穿透线虫的体壁侵染线虫。在侵染试验中,侧孢短芽孢杆菌或其芽孢会附着在测试线虫的体壁上,随着细菌的生长,单个附着的细菌逐渐发展成一个个的细菌病灶(菌落)。这些附着在体壁上的细菌可以不断地降解线虫体壁的成分,最终穿透体壁进入到线虫体内,分解线虫体壁和组织作为其生长的营养物质,直至杀死线虫并完全分解之。 先前的研究表明,在穿刺巴氏杆菌(Pasteuria penetrans)侵染根结线虫的过程中,起主要作用的是其孢子萌发形成芽管时产生的机械力。水解酶也可能参与了其对线虫的体壁穿透,然而这个结论并没有具体的数据支撑。在侧孢短芽孢杆菌对线虫的侵染过程中,并没有类似于穿刺巴氏杆菌的机械力的参与,所以线虫体壁的穿透和组织的降解主要是细菌胞外水解酶的作用。进一步研究发现侧孢短芽孢杆菌胞外粗蛋白同样可以杀死线虫并分解线虫体壁及其组织。从粗蛋白中纯化杀线虫成分的结果显示侧孢短芽孢杆菌胞外的一个碱性蛋白酶BLG4起到了主要的杀线虫作用。BLG4的分子量是30 kDa,最适反应条件是50℃,pH 10。它的底物作用范围较广,可以不同程度的降解包括胶原蛋白,线虫体壁在内的各种测试的蛋白质类底物。通过电镜观察侧孢短芽孢杆菌粗蛋白和胞外碱性蛋白酶BLG4处理过的线虫发现,蛋白酶BLG4的杀线虫活性主要是通过酶对线虫体壁的降解和破坏来实现的。在处理过程中,线虫体壁的外层会逐渐的剥落和降解;随着处理时间的延长,线虫体壁结构的完整性受到了破坏,线虫的体壁开始出现裂纹直至大的裂口,线虫体内内容物泄出,线虫死亡;最后线虫被完全分解。测序的碱性蛋白酶BLG4前10个N端氨基酸序列与来自于液化淀粉芽孢杆菌的枯草蛋白酶BPN完全一致。根据克隆得到的BLG4编码基因翻译的氨基酸序列含有典型的丝氨酸蛋白酶活性催化中心三联体Asp32,His64,和5e,并且与枯草蛋白酶BPN有87%的一致性,说明BLG4也属于枯草蛋白酶家族。经过对研究中构建的侧孢短芽孢杆菌基因组文库进行两轮PCR筛选,进一步得到了该酶的调控序列(包括启动子和终止子)。将克隆得到的BLG4基因及其调控序列插入枯草芽孢杆菌表达载体进行异源表达,重组蛋白酶BLG4表明了同样的杀线虫活性。支持蛋白酶BLG4在细菌侵染线虫过程中发挥重要作用的最有力的证据来源于对蛋白酶缺失突变菌株的研究。侧孢短芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株是通过插入一段蛋白酶基因序列,使其与细菌基因组上的蛋白酶编码基因发生同源重组,打断蛋白酶的正常表达框构建而成。相对于野生型的侧孢短芽孢杆菌G4菌株,侧孢短芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株丧失了大约57%的杀线虫活性和78%的体壁降解活性。根据对侧孢短芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株的分析发现,敲除了体壁降解蛋白酶BLG4的侧孢短芽孢杆菌仍然具有一定的杀线虫能力,这表明了蛋白酶BLG4并不是细菌产生的唯一的杀线虫因子。 进一步从侧孢短芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株中分离杀线虫成分的结果显示,侧孢短芽孢杆菌的一个胞外中性蛋白酶NPE-4在细菌侵染线虫过程中也发生一定的作用。NPE-4分子量为41 kDa,该酶被金属蛋白酶抑制剂EDTA抑制,在37℃,pH7条件下具有最高的蛋白酶活性。野生型的中性蛋白酶NPE-4可以提高侧孢短芽孢杆菌G4菌株胞外粗蛋白的杀线虫活性。但是,当把这些酶加入侧孢短芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株胞外粗蛋白提取物中时,杀线虫活性没有明显的变化。筛选侧孢短芽孢杆菌基因组文库,得到了中性蛋白酶NPE-4的编码基因及其调控序列,并成功的在枯草杆菌表达宿主WB600中实现了重组表达。重组的NPE-4具有与野生型中性蛋白酶同样的作用效果。对中性蛋白酶NPE-4作用线虫体壁的精细研究显示NPE-4在体壁降解蛋白酶BLG4存在的情况下才具有对线虫的活性,它对线虫的作用可能是一个协同作用。 在最近的几年中,相继有几个不同的细菌胞外蛋白酶被证明参与了细菌对线虫的侵染过程。其中,分离自侧孢短芽孢杆菌G4,芽孢杆菌菌株B16,芽孢杆菌菌株RH219和其它的一些芽孢杆菌菌株的胞外丝氨酸体壁降解蛋白酶表现出了很高的氨基酸序列同源性(97-99%)。他们之间的高度相似性说明在杀线虫细菌中这类酶是高度特异和保守的。它们和来源于捕食线虫真菌的体壁降解蛋白酶一样,都属于丝氨酸蛋白酶的类枯草蛋白酶家族。尽管由于来源不同,它们相互之间的相似性较低,但是它们的氨基酸序列在活性位点和底物结合位点附近的序列却是高度保守的,并且预测得到的它们的三维结构的基本构架也是相似的。通过对这些不同微生物来源的体壁降解蛋白酶的系统聚类分析可以看到,这类酶已经不同程度的特异进化并与其侵染活性相适应。 本论文通过对侧孢短芽孢杆菌G4侵染线虫的研究,揭示了胞外蛋白酶(BLG4和NPE-4)在侵染过程中的重要性,使我们对细菌侵染线虫的过程和蛋白酶在侵染过程中的作用有了进一步的了解。
[硕士论文] 张伟
生物学生物学 河南大学 2013(学位年度)
摘要:背景:宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一,它的发病率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌居于第二位。目前,我国每年新确诊的宫颈癌病例及其死亡率呈逐年上升趋势,而且发病年龄日趋年轻化,宫颈癌已成为危害我国女性健康的一种重要疾病。手术治疗和化疗仍是目前宫颈癌的重要治疗手段。宫颈癌细胞对化疗药物的抵抗是阻碍化疗药物临床治疗有效性以及造成患者不良预后的重要原因,但是宫颈癌对化疗药物耐药的机制尚完全不清楚。
  包括阿霉素在内的部分临床常用化疗药物可以通过诱导抑癌基因 P53的表达以及活化,激活P53下游靶基因的表达,从而诱导抑制肿瘤细胞增殖或诱导肿瘤细胞凋亡。磷酸化、泛素化等多种翻译后修饰对于p53发挥其生物学活性至关重要。乙酰化修饰可增强p53的稳定性并促进p53的转录活性。P53的乙酰化修饰是一种可逆性反应。去乙酰化酶SIRT1可以使P53去乙酰化,抑制P53介导的转录活性,抑制下游靶基因的表达,从而促进肿瘤发生,发展。
  肿瘤患者普遍存在不同程度的心理压力,这会诱导机体产生慢性应激反应。大量事实表明,慢性应激反应可显著影响肿瘤的进程及患者的预后。本实验室在前期工作中发现应激反应相关激素-糖皮质激素可通过增强宫颈癌细胞中 HPV(人乳头瘤状病毒)基因编码的E6蛋白的表达,后者抑制p53以及miR145的表达,从而抑制化疗药物对宫颈癌细胞的杀伤。这一结果提示应激反应相关激素可能在慢性应激反应调控肿瘤恶性演进的过程中发挥重要作用。
  儿茶酚胺(肾上腺素和去甲肾上腺素)是另一类重要的应激反应相关激素,机体在经历慢性心理应激反应的过程中,体内儿茶酚胺的水平显著升高。我们实验室的前期工作已证明,儿茶酚胺在肿瘤细胞的生物学行为调控中具有重要作用。然而儿茶酚胺能否影响宫颈癌对化疗药物的敏感性以及相关的分子机制均不清楚。
  目的:探索儿茶酚胺调控宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性,以及此过程的精确分子机制。
  方法:
  (1)Western-Blot分析儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞对SIRT1的表达影响;
  (2)实时定量RT-PCR检测儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞刺激后SIRT1转录水平的影响;
  (3)Western-Blot和免疫荧光法检测儿茶酚对化疗药物诱导P53乙酰化的影响;
  (4)双荧光素酶法检测儿茶酚胺对阿霉素诱导的P53转录活性增强的影响;
  (5)TUNEL染色和Annexin V-FITC染色测定儿茶酚胺是否影响阿霉素诱导的细胞凋亡;
  (6)通过细胞增殖实验检测儿茶酚胺能否诱导宫颈癌细胞的化疗药物抵抗
  (7)Western-Blot和双荧光素酶实验检测SIRT1在儿茶酚胺抑制阿霉素诱导的P53乙酰化水平以及P53转录活性中的作用;
  (8)通过动物模型评价儿茶酚胺在体内能否拮抗化疗药物阿霉素的抑瘤效应
  (9)免疫组化检测β2-AR在宫颈癌临床组织标本中表达模式。
  结果:
  (1)Western-Blot分析结果显示儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞可以上调SIRT1的表达,并具有时间和剂量依赖性。
  (2)儿茶酚胺刺激后可以在转录水平,显著上调SIRT1的表达。
  (3)儿茶酚胺可抑制化疗药物诱导的P53乙酰化增强。
  (4)儿茶酚胺能够显著抑制阿霉素诱导的P53转录活性。
  (5)儿茶酚胺能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡。
  (6)儿茶酚胺能够明显拮抗阿霉素对细胞的增殖抑制效应。
  (7)SIRT1在儿茶酚胺抑制阿霉素诱导的P53乙酰化水平以及P53转录活性中起到了关键作用。
  (8)儿茶酚胺能够在移植瘤小鼠体内抑制化疗药物阿霉素的疗效。
  (9)β2-AR在宫颈癌临床组织中高表达。
  结论:在本研究中,我们首次发现儿茶酚胺通过诱导β2-AR活化,激活SIRT1表达上调,抑制P53乙酰化和P53的转录活性,拮抗化疗药物阿霉素的抗癌效应。并首次报道,儿茶酚胺能够在动物体内抑制化疗药物阿霉素对宫颈癌的治疗效果。此外,本研究亦首次发现β2-AR在宫颈癌临床组织中高表达。本研究的进一步深入可能为临床提高化疗药物疗效提供理论依据。
  
[博士论文] 潘兹书
生物学生物学 武汉大学 2001(学位年度)
摘要:研究伪狂犬病毒(PRV)毒力基因的结构和功能,揭示病毒的分子生物学背景,构建基因转移载体和将外源基因导入病毒基因组表达,是构建PRV基因工程疫苗最重要的基础工作.研究结果,有助于揭示PRVHB株基因组的结构和功能,加深了对病毒遗传变异、亲缘关系和减毒机理的认识;通过构建基因转移载体和把外源标记基因(β-LacZ)及保护性抗原基因(CSFVE2)导入PRV基因组表达,为研制具有自主知识产权的PRV基因工程载体疫苗奠定了坚实基础.
[硕士论文] 海米代·吾拉木
生物学生物学 新疆大学 2016(学位年度)
摘要:棉花是新疆的主要经济作物,资料得知,新疆地区的种植面积达到3151万亩(2015年),农作物秸秆的产量已超出7亿吨(2015年),其中棉花秸秆产量达650万吨(2012年)。棉花秸秆是一种产量巨大,蛋白质和其他营养物质含量较高的可再生植物蛋白饲料资源。但由于棉花全株包含着对动物生长繁殖有潜在危害的有毒物质─游离棉酚,从而限制了棉花秸秆做原料生产青贮饲料或棉籽油加工过程中的沉淀物─棉籽油泥作为饲料添加剂方面的利用价值,造成饲料资源的浪费问题。目前,在国内外降解有毒棉酚的方法有物理法,化学法和生物发酵法。虽然物理化学脱毒法对棉籽粕的解毒起到了一定作用,但处理当中也存在于成本高,营养物质易破坏等一些缺点。生物发酵法来降解棉酚是当前最安全,脱毒效果最好,生产成本低的脱毒方法。不仅可使棉花秸秆,棉籽油和棉籽油泥脱毒,同时可提高它们在饲料上的利用等方面有巨大的应用价值。
  1.本研究从棉花秸秆中共分离出14种菌株,通过以醋酸棉酚为唯一碳源培养基平板划线来分离筛选出6株具有分解棉酚能力的菌株,编号分别为A1、A2、A4、B1、B2、B9。为了进一步筛选出具有较高的分解棉酚能力的菌株,对其进行复筛。试验结果表明,菌株B1和B9在棉酚浓度不同的以醋酸棉酚为唯一碳源的固体平板上生长较快且好。从NA平板上菌落形态观察结果显示:B1菌落正反面颜色一致、圆形、边缘不整齐、乳白色、表面有褶皱、表面湿润、中心稍隆起、透明;B1菌体细胞长约1.27~2.30μm,杆状、着色均匀、能够产生椭圆形芽孢、革兰氏阳性。B9菌落圆形、淡黄色、边缘不整齐、不透明、中间凸起如脊状;B9菌体细胞长约1.26~2.69μm,着色均匀、长杆状、革兰氏阳性。根据一些形态特征初步鉴定为芽胞杆菌。利用Biolog微生物自动鉴定系统来对其进行鉴定,结果表明,菌株B1和B9都属于芽胞杆菌属,种名分别为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和漠海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。
  2.利用高效液相色谱(HPLC)方法来测定棉花秸秆、棉籽、棉籽饼、食用棉籽油、未加工的棉籽油和棉籽油泥中的总棉酚和游离棉酚含量。探讨吐鲁番本地样品中各个棉花副产品中棉酚含量,为后续研究提供参考数据。检验结果显示,棉花秸秆中总棉酚和游离棉酚含量分别为0.02%和小于0.8μg/ml,棉籽中总棉酚含量为1.66%和游离棉酚含量为5949.8 mg/kg,棉饼中总棉酚含量为0.68%和游离棉酚含量为159mg/kg,未加工棉籽油中总棉酚含量为2.50%和游离棉酚含量为8033.5 mg/kg,食用棉籽油中总棉酚含量未检出,游离棉酚含量≤0.25mg/kg,棉籽油泥中总棉酚含量为5.23%,游离棉酚含量为30796.5mg/kg。对棉籽油和棉籽油泥的脱毒效果试验得知,菌株B1和B9在同样的接种量和培养温度下对棉籽油的脱毒效果有一定的脱毒作用,对棉籽油的脱毒率分别为21.1%和22.2%。但对棉籽油泥的脱毒不太理想,需要继续研究。
  3.将为探讨棉酚分解菌B1和B9是否可以作为饲料添加剂,棉酚分解菌(B1、B9)与高效饲用乳酸菌和纤维素分解菌在2%的蔗糖溶液中混合培养,并对单独菌和混合菌生长特性进行研究,探讨这三类菌株之间有无相互抑制作用。试验得知,将这三类菌株在2%的蔗糖溶液中混合培养时,混合菌达到稳定期的时间比单独菌达到稳定期的时间显著缩短,这就表明这三类菌株之间无抑制作用,彼此促进生长,为开发新型的饲料混合添加剂提供理论基础。
[硕士论文] 卢园萍
生物学生物学 福建农林大学 2013(学位年度)
摘要:已有报道,G蛋白介导cAMP信号通路与真菌子实体形成有关。草菇是一种草腐生型食用菌,以稻草、废棉、玉米芯为主要原料栽培,年产量近40万吨,位居各种食用菌的第六位,但由于产量低,影响其发展。本研究是在我们已完成草菇基因组测序的基础上,应用生物信息分析技术来构建与草菇子实体形成相关的G蛋白介导cAMP信号通路,以期能为草菇品种改良提供新的靶标或途径。
  分析结果表明,草菇基因组中携有G蛋白介导cAMP信号通路的相关蛋白编码基因,包含G蛋白信号调节因子(RGS)、G蛋白ɑ亚基(Gɑ)、腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶(PDE)、蛋白激酶A调节亚基1(PKAr1)、蛋白激酶A调节亚基2(PKAr2)、蛋白激酶 A催化亚基1(PKAc1)和蛋白激酶 A催化亚基2(PKAc2)等8个基因,系统发育分析结果进一步证实了这些基因的注释的可靠性。
  本研究应用转录组测序技术,分析了上述8个基因的结构。应用表达谱分析上述8个基因在营养阶段、原基形成阶段及子实体生长阶段的表达量,应用实时定量 PCR技术验证表达谱的分析结果,研究结果表明,它们在原基形成时期高表达。本研究检测了营养阶段、原基形成阶段及子实体生长阶段的cAMP含量,检测结果其在原基形成时期含量显著高于营养阶段与子实体生长阶段。上述结果初步阐明了草菇G蛋白介导cAMP信号通路与子实体形成有关。
[硕士论文] 贺雅静
生物学、微生物学 河南大学 2015(学位年度)
摘要:背景:重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是神经系统的自身免疫性疾病(Autoimmune disease,AID),也是目前抗原最为明确的AID。迄今为止发病机制还不明了,缺乏特效的治疗方案,目前多以口服药物、免疫抑制剂注射及胸腺切除术等治疗手段较常见。课题组前期利用蛋白质组学方法从重症肌无力(MG)伴胸腺异常的病人胸腺组织中筛选出差异蛋白4.1R。4.1R(EPB41)是蛋白质4.1家族的成员之一,它是细胞骨架蛋白,在细胞膜、细胞质及细胞核中均有表达。它参与细胞增殖分裂的调控,且其表达异常会影响细胞的极性及细胞的迁移等。它与其他细胞膜骨架蛋白,肌肉收缩相关蛋白等均有相互作用,可引起如贫血、肌肉收缩障碍等疾病。同时与离子交换蛋白及细胞膜钙泵蛋白等相互作用,可以调节离子转运及钙离子的吸收等功能。蛋白质4.1R在多种肿瘤疾病中都有研究,且发现蛋白质4.1R是肿瘤的负调控分子。蛋白质4.1R对T细胞的活化有负调控作用,而T细胞的活化异常可导致AID的发生。与很多疾病的发生都相关,但目前4.1R在AID中的研究较少,在MG中的研究更少。本课题主要以重症肌无力两个典型的临床症状“自身免疫”和“肌无力”为主线,探讨蛋白4.1R在MG中的作用机制。将对MG的发病机制和MG的治疗提供更进一步的认识和帮助。
  目的:以“自身免疫”为主线利用4.1R对DC细胞的生物功能影响来探讨蛋白质4.1R在重症肌无力中的作用机制。另外以“肌无力”为主线利用4.1R在膈肌无力模型中的表达及意义来反映蛋白质4.1R在MG中的作用机制。
  方法:将基因4.1R的CDS区全长片段与pCMV-C-Flag和pEGFP-N2载体重组,构建过表达质粒4.1R-Flag和4.1R-GFP,然后将它们转到DC细胞中,加G418筛选,得到稳定株DC-Flag、DC-4.1R-Flag(DC-4.1R-Flag)、DC-GFP、DC-4.1R-GFP(DC-4.1R-Flag);将空病毒RNAi-Control及经慢病毒转染包装的sh-4.1R转入DC细胞,筛选得到空病毒的稳定株DC-RNAi-Control(对照NC)和DC-4.1R-RNAi(DC-sh-4.1R)。用RT-PCR和WB方法验证DC-4.1R-Flag、DC-4.1R-GFP、DC-sh-4.1R在mRNA及蛋白水平的表达。然后用流式细胞术检测DC-4.1R-Flag、DC-sh-4.1R及其相应对照组稳定株的表面分子MHCII及共刺激分子CD80、CD86的表达。用细胞划痕和Transwell小室实验来研究基因4.1R过表达与沉默后DC细胞迁移的改变。然后,用RT-PCR和免疫印迹杂交方法及免疫组化方法检测4.1R在感染致膈肌无力模型中的变化。用免疫印迹杂交方法和细胞免疫组化方法验证4.1R基因敲低后C2C12细胞中肌肉型乙酰胆碱受体的变化。
  结果:①成功构建4.1R-Flag及4.1R-EGFP过表达质粒。②成功筛选得到过表达稳定株DC-Flag(对照组)、DC-4.1R-Flag、DC-EGFP(对照组)、DC-4.1R-EGFP;沉默稳定株 DC-RNAi-Control(对照组 NC)和DC-sh-4.1R稳定株。③DC-4.1R-Flag稳定株与对照组相比体积变大,突触减少;DC-sh-4.1R稳定株与对照组相比体积变小,突触变的较细且多。④经流式检测,DC-4.1R-Flag稳定株与对照组相比表面分子MHCII和共刺激分子CD80、CD86的表达量降低(P<0.05);而DC-sh-4.1R稳定株与对照组相比表面共刺激分子CD80、CD86的表达量升高(P<0.05),但表面分子MHCII变化不明显。⑤经细胞迁移实验(细胞划痕和Transwell小室实验)发现DC-4.1R-Flag稳定株与对照组相比迁移能力变强(P<0.05),而DC-sh-4.1R稳定株与对照组相比迁移能力下降(P<0.05)。⑥用RT-PCR及WB、免疫组化实验证明4.1R在膈肌无力模型中mRNA水平及蛋白水平表达量与其对照组相比均增高。⑦通过在感染致膈肌无力模型及C2C12细胞中检测蛋白质4.1R及各肌肉收缩蛋白发现,蛋白质4.1R可以调节肌间、肌球蛋白的变化。⑧经WB与细胞免疫组化验证在C2C12细胞中沉默基因4.1R发现肌肉型AchR的阳性颗粒比对照组多且着色深,两者存在负相关性。
  结论:⑴4.1R可以影响DC细胞的形态、抗原递呈能力及迁移能力。⑵4.1R与肌无力发生相关,与乙酰胆碱受体在肌肉细胞中的表达成负相关。所以无论从自身免疫还是肌无力角度来探讨,4.1R都参与了MG的发生,是MG的重要分子。
[硕士论文] 麻文青
生物学与分子生物学 石河子大学 2014(学位年度)
摘要:目的:1.采用RQ-TRAP和 TRAP-ELISA法检测不同细胞端粒酶活性,证实 RQ-TRAP法的优越性,
  2.研究比较干细胞样肿瘤细胞与普通肿瘤细胞端粒长度的差异,探讨干细胞样肿瘤细胞中端粒的调节机制,
  3.研究比较干细胞样肿瘤细胞与普通肿瘤细胞端粒酶活性的差异和hTERT基因mRNA及蛋白质表达水平的差异。
  方法:1.采用RQ-TRAP和TRAP-ELISA两种方法同时检测12(9个肿瘤细胞系和3个正常细胞系)种细胞的端粒酶活性,并比较两种方法的检测结果,2.利用无血清悬浮培养的方法培养富集球状生长的干细胞样肿瘤细胞(sphere forming cells-SFCs),采用流式细胞术检测细胞表面标志物,比较干细胞样肿瘤细胞比例的变化,用RT-PCR方法检测、比较细胞的干性和分化标记物 Oct-4、SOX-2、CK-18的表达状态,3.采用实时荧光定量 PCR(Q-PCR)的方法检测干细胞样肿瘤细胞和正常培养的肿瘤细胞的端粒长度4.采用TRAP-ELISA方法检测干细胞样肿瘤细胞和正常培养的肿瘤细胞的端粒酶活性5.以普通的RT-PCR方法检测干细胞样肿瘤细胞和正常培养的肿瘤细胞hTERT基因的mRNA的表达水平、以Western blot方法检测其蛋白质表达水平。
  结果:1. RQ-TRAP方法能准确特异地检测系列稀释的293T细胞蛋白提取液的端粒酶活性,灵敏度可达8个细胞,扩增效率为99%。阴性对照组则未检测到端粒酶活性。RQ-TRAP方法测得12个细胞系中端粒酶的活性与TRAP-ELISA方法结果有相关性(R2=0.7625),
  2.流式细胞术分析结果显示无血清悬浮培养获得较高比例的干细胞样肿瘤细胞,并且比普通肿瘤细胞高表达干细胞转录因子Oct-4、SOX-2,低表达分化因子 CK-18(P<0.05),
  3.通过 Q-PCR方法检测结果分析,人乳腺癌干细胞样肿瘤细胞(MCF7-SFCs)端粒长度(1.201±0.05212)长于人乳腺癌 MCF7细胞(1.019±0.1005),人宫颈癌干细胞样肿瘤细胞(HeLa-SFCs)的端粒长度(1.602±0.1355)长于人宫颈癌 Hela细胞(1.024±0.0977),经 t检验分析p>0.05,乳腺癌干细胞样肿瘤细胞和宫颈癌干细胞样肿瘤细胞与肿瘤细胞间端粒长度的差异无统计学意义,
  4.采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性结果显示:人乳腺癌 MCF7细胞系、人宫颈癌 Hela细胞系、人乳腺癌干细胞样肿瘤细胞(MCF7-SFCs)和人宫颈癌干细胞样肿瘤细胞(HeLa-SFCs)端粒酶活性均阳性。干细胞样肿瘤细胞的相对端粒酶活性(RTA)明显低于普通肿瘤细胞,经 t检验分析p<0.05,差异有统计学意义。
  5.干细胞样肿瘤细胞(MCF7-SFCs和 Hela-SFCs细胞)hTERT mRNA表达低于普通肿瘤细胞(MCF7细胞和Hela细胞),经t检验分析P<0.05,差异有统计学意义;干细胞样肿瘤细胞的hTERT基因蛋白质表达水平均低于普通肿瘤细胞表达水平。
  结论:1.RQ-TRAP方法检测端粒酶可行,比 TRAP-ELISA方法成本低、时间短,且支持高通量,是一种新的可快速可靠定量端粒酶活性的方法。2.在 MCF7细胞系和Hela细胞系中干细胞样肿瘤细胞的端粒长度长于普通肿瘤细胞但是端粒酶活性和hTERT表达均低于普通肿瘤细胞。
[硕士论文] 薛建
生物学;微生物学 南京师范大学 2009(学位年度)
摘要:本文以本实验室保存的一株产灵菌红素的粘质沙雷氏菌RZ21 为出发菌株,对其菌株复壮、原生质体诱变、发酵条件优化、色素提取和生物防治等方面作了初步的研究。
   为提高RZ21 产灵菌红素的能力,对RZ21菌进行了原生质体的紫外诱变育种。通过紫外诱变原生质体、链霉素抗性平板初筛、摇瓶发酵复筛得到一株灵菌红素高产株RZ21-3,其灵菌红素产量达到了0.813g/L,比野生型的RZ21 提高了24.9%,而且突变株的灵菌红素生产能力遗传稳定性较好。
   为进一步提高RZ21-3 产灵菌红素能力,对RZ21-3 培养基和培养条件进行了优化。通过单因子试验和正交试验得出RZ21-3 发酵产灵菌红素的最佳培养基配比为:黄豆粉0.5%、酪素1%、蚕蛹粉1%、K2HPO4 0.2%、NaCl 0.5%。最佳培养条件为:培养温度28 ℃、装液量250mL 三角瓶30mL、转速150rpm、初始pH7.5、接种量2%。在上述条件下,灵菌红素产量达2.64g/L。
   通过提取、柱层析及TLC 分离纯化RZ21-3 产生的色素,并通过紫外全波长扫描、质谱、核磁对色素进行结构鉴定,确定该红色素为灵菌红素。
   粘质沙雷氏菌是昆虫的一种病原菌,能感染许多昆虫的成虫和幼虫。家蚕(Bombyx mori. L)是一种鳞翅目昆虫的幼虫,通过RZ21菌对家蚕的毒力试验,发现该菌对家蚕表现出明显的毒杀效果,口服感染48h 后毒力回归方程为y=1.5271x+1.8908,致死中浓度为1.09×10 9 cfu/mL。另外,RZ21 表现出较高的几丁质酶活力,采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)测定还原糖的方法测得在添加几丁质粉末的诱导培养基中,装液量为30mL的250mL的三角瓶中,28 ℃,150rpm,培养30h 后,RZ21菌发酵液的几丁质酶活力为237U/mL。
[硕士论文] 宋薇
生物学;微生物学 福建农林大学 2013(学位年度)
摘要:结核分枝杆菌是肺结核病的致病菌,是严重威胁人类的一类病原菌。有报道世界人口中大约三分之一有被感染,少于10%的感染者会有严重的病症发生,结核病死亡人数每年有增加的趋势,主要原因是出现了很多泛耐药、全耐药的菌株。耻垢分枝杆菌作为其模式生物,具有生长速度快,不具有致病性的优点,因此以其为出发点进行研究,对于后续结核分枝杆菌的研究起着很重要的作用。
  非编码RNA是一类广泛存在于多种生物体中,缺乏明确的开放阅读框,不编码蛋白质的RNA分子。目前分离的多数ncRNA是直接以RNA分子的形式在生命体内发挥一系列重要的生理调节功能,并且可能在细胞的基因表达调控方面有着超乎寻常的重要作用。由于现在出现了很多泛耐药,甚至全耐药的结核分枝杆菌,用于广泛治疗结核病的药物如异烟肼、利福平等都已经不能起到很好的治疗的作用,所以对于结核分枝杆菌非编码RNA的研究是迫在眉睫。
  在结核分枝杆菌中,已有文献报道发现的一些非编码RNA,但是数量很少。耻垢分枝杆菌作为其模式生物,是结核分枝杆菌的代理宿主,可以对结核分枝杆菌的研究起到重要的作用,本实验是针对一个已经报道的在结核分枝杆菌以及耻垢分枝杆菌中都存在的,并且功能可能相似的非编码RNA B11为实验对象,旨在发现该非编码RNA的功能。对于非编码RNA的功能研究首先是寻找到其靶标基因,因此本实验用于生物信息学预测的方法首先找出13个备选靶标基因,选出预测分数较高的5个基因再加上在基因组定位于B11基因较近的3个基因,用real-time PCR方法首先检测备选基因的表达量,得到结果为在B11过表达的菌体内MSMEG_6171与MSMEG_6172基因的表达量较高,将这两个基因过表达后观察菌体表型性状,从实验结果可以得出MSMEG_6172基因过表达后菌体形态与非编码RNA B11基因过表达菌体生长速度相似,超微照片结果显示MSMEG_6171基因与B11基因过表达菌体性状相似,由于MSMEG_6172还未报道是否可以编码蛋白质,制备抗体后检测MSMEG_6172蛋白是有表达,由此推断MSMEG_6172是为非编码RNA B11基因的靶标,B11基因靶标可能有多个。本研究为结核分枝杆菌的非编码RNA B11基因的功能研究等提供了一定依据。
[硕士论文] 樊洪
生物学;神经生物学 第四军医大学 2013(学位年度)
摘要:原发性脊髓损伤(primary spinal cord injury)后的继发性脊髓损伤(secondary spinal cord injury,SSCI)是造成功能障碍的重要原因。血管病理变化和继发的相关变化对于继发性损伤的进展起重要作用。血脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)的破坏会导致的大量血源性物质渗漏到脊髓实质,引发炎症和神经胶质增生。组织挤压、血栓形成和血管痉挛引起的损伤后缺血会导致神经元死亡,且损伤后缺血与损伤严重程度呈线性相关。我们先前的研究表明,不断扩大进展的继发性损伤空洞边缘存在两个缺血区,距空洞较近的缺血区内大多数的神经元变性、死亡,而在较远区域,虽有缺血迹象,但神经元尼氏体形态无太大改变,提示这些神经元可通过改善血液循环而被挽救。因此,增加脊髓的血流量可能是减轻继发性损伤一种有效策略。
  纤维蛋白原(Fg)是由肝细胞分泌的分子量为340kDa蛋白质,以较高浓度存在于血液中。一旦凝血级联反应被激活,凝血酶即降解Fg的α和β链形成纤维蛋白单体,后者聚合形成纤维蛋白多聚体,通过与血小板相互作用,完成凝血过程。此外,有研究表明,从破裂血管中渗漏的Fg可激活星形胶质细胞和小胶质细胞,表明其参与SSCI。
  巴曲酶(BX)是从Bothrops moojeni蛇毒液提取的一种类凝血酶样丝氨酸蛋白酶。与凝血酶相比,BX只降解Fg的α链,生成的纤维蛋白单体交联形成纤维蛋白多聚体的能力较差,因此,可通过降低血中Fg而改善血液循环。BX已成功应用于各种缺血性疾病,如中风、深静脉血栓、心肌梗死、外周动脉血栓和突发性耳聋。但对于脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用尚无研究报道。鉴于缺血在SCI病理机制中的重要作用,本研究旨在探讨BX对SCI的保护作用及可能的临床应用。本研究由以下三部分实验组成:
  实验一:巴曲酶对大鼠脊髓损伤后血流动力学和凝血功能的影响
  本部分实验通过建立大鼠脊髓夹伤模型,研究不同剂量BX对大鼠SCI后血流动力学、凝血功能和损伤局部血流量的影响。于第三次给药后2h采用全自动凝血因子分析仪、全自动血粘度测定仪和激光多普勒血流测定仪,检测BX对大鼠血中Fg、凝血功能的作用及对损伤局部血流量的影响。结果显示BX可剂量依赖性的减少血中Fg含量,并降低血粘度;凝血功能结果表明,2BU/kgBX对凝血功能无影响,4BU/kgBX可显著性延长凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)。激光多普勒血流测定结果提示,与生理盐水对照组相比,2BU/kgBX可显著性增加损伤局部脊髓血流量,而4BU/kgBX但无显著效果。
  实验二:巴曲酶对大鼠脊髓损伤的神经保护作用
  本部分实验通过大鼠脊髓夹伤模型研究BX对SCI的保护作用。于SCI后7d采用NeuN和GFAP免疫组化染色,SCI后1、4d和7d通过BBB评分、RHI实验和足迹分析实验进行行为学观察,观察BX对SCI后大鼠神经功能的影响,结果显示,2BU/kgBX可显著性增加损伤旁区NeuN阳性细胞数量并缩小损伤空洞面积,同时促进大鼠SCI后运动功能恢复,而4BU/kgBX无显著效果。
  实验三:巴曲酶对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞和小胶质细胞反应的作用
  本部分实验通过大鼠脊髓夹伤模型观察BX对星形胶质细胞和小胶质细胞反应的作用。于SCI后7d采用GFAP、Neurocan、Iba-1免疫组化染色,荧光强度分析结果显示,2BU/kgBX可显著性减轻脊髓损伤后星形胶质细胞和小胶质细胞反应,而4BU/kgBX无显著效果。
  以上研究发现:BX可通过减少血中Fg含量降低血粘度;2BU/kgBX可改善损伤脊髓局部血流量,增加损伤旁区神经元存活,并促进大鼠SCI后行为功能恢复,还可减轻SCI后星形胶质细胞和小胶质细胞反应,从而可能参与减轻胶质瘢痕和炎症反应。而4BU/kgBX对损伤脊髓局部血流量、神经元存活、行为学恢复及星形胶质细胞和小胶质细胞反应均无显著效果,其相关机制有待进一步研究。
  摘要2:
  SCI会破坏血脊髓屏障(blood spinal cord barrier),后者是触发SSCI的关键环节之一。BSCB的渗透性改变,会引起大量血液蛋白外渗而导致血管源性水肿,参与SSCI。已有研究表明,促进SCI后BSCB修复有助于减轻SSCI,并改善功能恢复。然而,参与SCI后BSCB改变的分子机制至今仍不甚清楚。
  SCI后,多种发育相关分子重新表达,参与SCI的病理改变。作为一种重要的模式发生信号,Sonic hedgehog/Gli1(Shh/Gli1)信号通路在胚胎发育中的作用已被广泛研究。在脊髓的发育中,Shh通过旁/自分泌的方式诱导神经管腹侧结构的形成。最近的研究发现,Hedgehog信号对于维持胚胎和成年血脑屏障(blood brain barrier)的完整性至关重要。SCI后,Shh/Gli1信号是否可被激活,并参与SSCI,至今尚未见报道。
  在本研究中,我们采用Shh/Gli1信号报告基因及Gli1基因敲除小鼠,研究了脊髓夹伤后Shh/Gli1信号的激活、BSCB的改变,以及运动功能的恢复,初步探讨了Shh/Gli1信号在SCI中的作用。本研究由以下三部分组成:
  实验一:脊髓损伤后Shh/Gli1信号的激活
  本部分实验采用Shh/Gli1信号报告基因Gli1lz小鼠,通过脊髓夹伤和假手术处理,于损伤后3d采用X-gal染色,观察Shh/Gli1信号在SCI后的激活情况。X-gal染色结果显示,SCI后3d脊髓损伤区呈深蓝色染色,而假手术小鼠脊髓呈X-gal染色阴性。提示Shh/Gli1信号可在SCI后激活。
  进一步观察了SCI后Shh/Gli1信号的来源及其反应细胞。于损伤后7d采用Shh/PDGFr-α、Shh/GFAP、LacZ/GFAP免疫组化染色,观察Shh/Gli1信号的来源及其反应细胞。双标结果显示,SCI后7d,绝大多数Shh阳性细胞为PDGFr-α阳性,并主要分布于GFAP阳性细胞构成的胶质瘢痕的内侧,提示脊髓损伤后损伤区中心的周细胞表达Shh。LacZ的免疫组织化学染色发现,LacZ阳性细胞主要分布在损伤区周围,绝大多数为GFAP阳性,损伤区远侧的星形胶质细胞未见LacZ阳性染色。提示SCI后,损伤区中心的周细胞可能表达并分泌Shh,后者激活了反应性星形胶质细胞中的Shh/Gli1信号。
  实验二:Gli1敲除对脊髓损伤后GFAP表达和血脊髓屏障的影响
  考虑到星形胶质细胞是Shh/Gli1信号的反应细胞,且星形胶质细胞是BSCB的重要组成部分。本部分实验采用野生型和Gli1lz/lz小鼠脊髓夹伤模型,研究Gli1敲除对SCI后GFAP表达和BSCB的影响。SCI后7d,采用免疫组织化学和实时定量RT-PCR法比较野生型和Gli1lz/lz小鼠SCI后损伤区周围GFAP的表达,结果发现两组小鼠脊髓损伤区周围的GFAP的mRNA表达无显著差异。提示Gli1敲除可能对SCI后GFAP的表达无显著影响。
  Gli1lz/lz小鼠脊髓损伤后14d,伊文斯兰染色可见损伤区淡蓝色染色,而野生型小鼠无明显伊文斯兰染色。取脊髓组织匀浆,分光光度计测量结果显示Gli1lz/lz小鼠脊髓中伊文斯兰的含量显著高于野生型小鼠。提示Gli1敲除可能参与SCI后BSCB通透性的改变。
  实验三:Gli1敲除对脊髓损伤后运动功能的影响
  考虑到BSCB改变参与SSCI,并影响运动功能恢复。本部分实验采用野生型和Gli1lz/lz小鼠脊髓夹伤模型,于术后1、3、5d和7d进行BMS评分,研究Gli1敲除对SCI后运动功能的影响。结果显示Gli1lz/lz小鼠SCI后的运动功能恢复显著差于同时间点的野生型小鼠。
  通过以上研究发现:Shh/Gli1信号在小鼠SCI后激活,可能参与SCI后BSCB渗透性的改变,并影响SCI后的运动功能恢复。
[硕士论文] 王亚军
生物学·微生物学 兰州大学 2017(学位年度)
摘要:AD是一种渐行性退化的神经系统疾病,其病理特征主要有老年斑、神经纤维缠结、神经元丢失等。其中老年斑主要由Aβ引起,神经纤维缠结主要由Tau的过度磷酸化引起,它们都涉及到了蛋白错误折叠和聚集这一问题。大量研究表明,AD的病因与错误折叠的蛋白质不断地在脑部积累所导致的神经功能异常并最终导致神经元的凋亡密切相关。目前对AD的药物治疗主要集中在AD本身的病理特征上,很少有针对于减少蛋白质的错误折叠来预防和治疗AD的药物。而热休克蛋白在防止蛋白质的错误折叠和聚集,修复错误折叠的蛋白质中发挥着重要作用,尤其是HSP70。研究表明,HSP70在减少Aβ的聚集与积累、恢复Tau蛋白体内平衡、减轻氧化应激程度、抑制神经炎症反应等方面发挥着非常重要的作用,因此可以将HSP70作为抗AD药物靶点来筛选抗AD药物。
  本研究以HSP70启动子作为目的基因,分别以EGFP和Luciferase作为报告基因,构建pHSP70-EGFP和pGL3-HSP70重组载体,转染HEK293T细胞,从而构建了基于pHSP70-EGFP的定性筛选细胞模型和基于pGL3-HSP70的定量筛选细胞模型。通过对有关老年痴呆的古方和验方的收集整理,对复方中出现的单味药按照出现的频率进行排序,以其中的单味药作为候选药物,利用定性和定量筛选HSP70启动子激活剂的细胞模型,优先对出现频率较多的35个单味药进行筛选,筛选得到四个HSP70启动子激活剂:黄芩、石菖蒲、蜘蛛香、五味子。用Aβ25-35构建AD细胞模型对这四个单味药水煎液的抗AD效果进行评价,得到的这四个HSP70启动子激活剂都能减少Aβ25-35的细胞毒性,其中黄芩效果最优,同时黄芩水煎液还能抑制PC12细胞的凋亡。综上所述,通过基于HSP70启动子筛选得到的黄芩水煎液具有作为抗AD药物候选物的潜力。
[硕士论文] 龙显莉
生物学·微生物学 兰州大学 2017(学位年度)
摘要:人类活动使全球范围内氮投入越来越多,土壤中氮的富营养化增加了植物群落的生产力,却减少了植物的多样性,进而影响植物群落的组成。丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)是土壤中一类重要的微生物,它能同80%的陆生植物建立互惠共生关系。AM真菌向植物提供磷、氮、镁等无机矿物质及水分,植物亦向AM真菌提供光合产物。土壤中速效氮含量及AM真菌均能直接或者间接地影响植物个体的生长发育,从而影响植物的种间相互作用,然而在长期氮施肥环境中,AM真菌群落生态功能的变化还尚待研究,且非生物因子(氮肥)与生物因子(AM真菌)的交互作用对植物种间相互作用的影响还需进一步的研究。
  本实验以青藏高原东缘的当地作物蚕豆(Vicia faba L.)、青稞(Hordeum vulgare L.)、油菜(Brassica napus L.)作为研究对象,采用盆栽实验系统地研究不同施氮水平、不同种植模式、不同时期(两次收获)、AMF处理对单种植物的生长及植物种间关系的影响。主要实验结果如下:
  (1)未施肥条件下,接种AM真菌对单独种植的蚕豆、青稞、油菜生长影响不显著。施肥条件下,接种AM真菌对单独种植的蚕豆、青稞生长影响不显著,但显著降低了油菜的总生物量、总磷含量(P<0.05)。
  (2)蚕豆/青稞混种时,在未施肥情况下,AM真菌不对称性地偏利蚕豆,抑制青稞的生长;施加氮肥增加了青稞的竞争力,而接种AM真菌后削弱了青稞的生长优势,促进了蚕豆的生长;蚕豆/油菜混种时,不施加氮肥条件下AM真菌显著地抑制了油菜的生长,削弱了油菜的竞争力而对蚕豆生长没有影响;施加氮肥后,接种AM真菌显著减弱了优势植物蚕豆的竞争力。青稞/油菜混种时,不施加氮肥,AM真菌增加了青稞的竞争力。施加氮肥后,接种AM真菌显著减弱优势植物青稞的竞争力。
  (3)蚕豆/青稞/油菜混合种植模式,未施肥条件下,蚕豆为优势植物,接种AM真菌削弱了蚕豆的竞争力;施肥条件下,青稞为优势植物,接种AM真菌显著削弱了青稞的竞争力。
  (4)各植物在两次收获期的菌根响应表现出不一致,因此AM真菌对各植物的响应存在时间异质性。而菌根的功能与植物的营养状态有关r=0.22(P=0.04),故菌根功能受植物自身营养状态影响,亦可能与土壤养分有关。
  总之,AM真菌群落在不同含氮量土壤中功能存在一定差异。未施肥条件下,AM真菌对单种的蚕豆、青稞、油菜无显著影响。而施肥处理后,AM真菌对蚕豆、青稞均表现出弱响应,而对油菜的生长表现出负响应。未施肥条件下,混种的各植物生长均受氮限制,接种AM真菌促进了菌根依赖性高的植物的生长;经长期施肥处理的AM真菌群落结构已发生一定程度的改变,在施肥环境中AM真菌表现出抑制不同种植模式中优势植物生长的趋势,削弱了因土壤氮含量增加带来的负效应,进一步促进植物种间的共存。当多种植物混合种植时,AM真菌具有抑制植物群落中优势植物生长的趋势,一定程度上维持了植物群落稳定。
[博士论文] 陈正军
生物学·微生物学 兰州大学 2016(学位年度)
摘要:铬[Cr(Ⅵ)]和对硝基酚(p-nitrophenol,PNP)是生产活动中广泛使用的工业原料,常常随着工业废水的排放进入环境,由于其高毒、致突变和致癌的特性,严重威胁着环境和人类的健康。兰州市西固区位于黄河兰州段上游,是中国西北主要的工业基地之一,该区常年受各种重金属和有机物的污染,当地微生物群落有很强的重金属和有机物抗性。但是目前对该地区Cr(Ⅵ)还原菌和PNP降解菌的分离筛选工作还鲜有报道。为了更好地开发该地区的微生物资源,挖掘出能够还原Cr(Ⅵ)和降解PNP的功能菌株,本实验在黄河兰州段西固工业园区的一条排污渠采集土壤样品,通过连续富集培养的方法分离筛选具有Cr(Ⅵ)还原能力和PNP降解能力的菌株,分别研究了该地区的优势铬还原菌解毒Cr(Ⅵ)的机制;PNP降解菌的降解特性,并且在微生物燃料电池(Microbial fuel cell,MFC)中测试了其同时产电和降解PNP的应用潜力,开发了一套便携式需氧阳极微生物燃料电池型PNP生物传感器;最后测试了2株铬还原菌及其共培养物在微生物燃料电池的阳极去除废水COD,在阴极去除Cr(Ⅵ)的能力。本实验主要研究结果如下:
  1.通过3种不同的分离方法,共获得了43株16属具有铬还原能力或对硝基酚降解能力的菌株,它们分别属于链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、诺卡氏菌属(Nocardia)、纤维微菌属(Cellulosimicrobium)、戈登氏菌属(Gordonia)、无色杆菌属(Achromobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、短状杆菌属(Brachybacterium)、红球菌属(Rhodococcus)、节杆菌属(Arthrobacter)、白色杆菌属(Leucobacter)、肠球菌属(Enterococcus)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棒杆菌属(Corynebacterium)和产碱杆菌属(Alcaligenes)。其中有11个属隶属于放线菌纲,因此在重金属和有机物共同污染的地区放线菌可能是优势类群。
  2.在同批次筛选的Cr(Ⅵ)还原菌中,菌株LZ-26-1表现出了较强的Cr(Ⅵ)还原能力,通过16SrRNA序列分析,该菌株与Streptomyces Ⅵolaceoruber(AB184174)的16SrRNA序列相似性为100%,将其命名为Streptomyces Ⅵolaceoruber LZ-26-1。该菌株在淀粉-酪素(SC)液体培养基中144h内能将0.6mM Cr(Ⅵ)还原92.86%。菌株还原Cr(Ⅵ)的最适温度和pH分别是28℃和7.0。透射电镜(TEM)和X-射线能量色散(EDX)分析结果表明,还原后的铬在菌株细胞内形成了Cr(III)沉淀。静息细胞和粗酶活性实验结果表明,NADPH作为电子供体能促进菌株对Cr(Ⅵ)的还原,而Cd2+抑制了该过程。在Cr(Ⅵ)胁迫下,菌株基因组中编码硫氧还蛋白操纵子的基因(TrxA,TrxB和memP)均获得了不同程度的表达上调。因此,推测菌株LZ-26-1可能是通过硫氧还蛋白途径还原Cr(Ⅵ)的。
  3.在同批次筛选的PNP降解菌中,菌株LZU-3对PNP的降解能力最强,通过16S rRNA序列分析,该菌株与Pseudomonas monteilii(AF064458)的16S rRNA序列相似性为99.8%,将其命名为Pseudomonas monteiliiLZU-3。PNP降解特性结果表明,LZU-3是一株能够耐受较高PNP浓度的高效PNP降解菌,接种量、pH、温度和起始PNP的浓度是影响PNP降解效率的主要因素。10%的接种量、pH8.0、30℃和外加50μM的FeSO4.7H2O是菌株LZU-3在矿物盐培养基(MS)中降解PNP的最优条件。菌株LZU-3还能在高盐和含有金属离子的条件下降解PNP。共底物丙酮酸钠、醋酸钠、乳酸钠、葡萄糖、甘露醇、甘氨酸和天冬酰胺均能促进菌株生长和其对PNP的降解,其中天冬酰胺的促进作用最明显。MFC应用结果表明,LZU-3是一株能够在需氧条件下同时产电和降解PNP的菌株。曝气能增加MFC的最大电压(189mV)和PNP的降解效率(20mg l-1h-1),但是却降低了MFC的库伦效率。当PNP浓度在300mg l-1以内时,菌株均能产电。循环伏安分析和扫描电镜结果表明,菌株LZU-3可能是通过和电极直接接触的方式传递电子的。丙酮酸钠作为共底物对菌株的产电有一定的促进作用,但是却抑制了PNP的降解。核黄素对菌株LZU-3产电没有明显的促进作用。本实验第一次将一株需氧PNP降解菌株应用到了MFC中,实现了对PNP同时降解和产电目的,为以后需氧或者兼性厌氧菌在MFC中的应用奠定了理论基础。
  4.本研究以需氧阳极MFC为基础,设计了一种便携式的PNP监测生物传感器。该传感器以需氧PNP降解菌LZU-3作为生物识别元素,以对硝基酚作为唯一底物,在实际PNP废水监测中表现出了极高的稳定性、精确性和选择性,为有毒、难降解污染物的实时、原位监测提供了一种快速有效的方法。
  5.在同批次筛选的同时具有Cr(Ⅵ)还原能力和PNP抗性的菌株中,菌株LZU-26和LZU-47-1不仅可以在MFC中产电,而且对Cr(Ⅵ)的还原能力最强,通过16S rRNA序列分析,菌株LZU-26与Cellulosimicrobium cellulans(X83808)的16S rRNA序列相似性为99.64%;菌株LZU-47-1与Corynebacterium Ⅵtaeruminis(X84680)的16S rRNA序列相似性为99.64%。将这2株菌分别命名为Cellulosimicrobium cellulansLZU-26和Corynebacterium Ⅵtaeruminis LZU-47-1。本研究以糖蜜废水作为MFC的底物,以菌株LZU-26、LZU-47-1及其共培养物分别作为阳极和阴极生物催化剂,在阳极去除废水COD、阴极去除Cr(Ⅵ)的同时产生电能。实验结果表明,将2株菌进行共培养能够提高菌株对COD和Cr(Ⅵ)的去除能力以及MFC的产电能力。当废水COD的浓度在400-8000mg l-1时,共培养物MFC均能产电,800mg l-1COD是菌株产电的最佳COD浓度。以Cr(Ⅵ)作为MFC的阴极电子受体,以共培养物同时作为MFC阳极和阴极生物催化剂,当阴极Cr(Ⅵ)的浓度在10-20mg l-1时,增大Cr(Ⅵ)的浓度均能增加MFC对COD的去除率、电流密度以及Cr(Ⅵ)的还原率。本研究利用MFC技术,在阳极去除有机物,阴极去除重金属的同时产生电能,该研究对复合污染的综合治理提供了一种经济可行的方法。
[硕士论文] 雒军
生物学;微生物学 南京师范大学 2009(学位年度)
摘要:纤维素是地球上数量最多的可再生自然资源,从廉价的可再生的木质纤维素生产生物能源及产品对维持人类社会的持续性发展至关重要。工业生产中将纤维素转化成葡萄糖,进一步发酵成为酒精是纤维素最有潜力的利用途径之一。
   许多类型的真菌和细菌能够产生水解纤维素的酶类,其中丝状真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)是最被广泛研究的纤维素降解生物。T. Reesei 产生一系列不同的纤维素酶,其中大多数已经被进行了深入的研究。目前已经分离的T. Reesei纤维素酶基因至少包括两种外切葡聚糖酶,Cel7A(CBH I)和 Cel6A(CBH II),五种内切葡聚糖酶,即Cel7B(EG I)、 Cel5A(EG II)、Cel12A(EG III)、Cel61A(EGIV)和 Cel45A(EG V)以及一种β-葡萄糖苷酶。
   为了研究纤维素酶的协同作用,需要获得各种纯的纤维素酶制剂。从微生物培养液中分离纯化天然纤维素酶需要花费大量时间和劳力,且常常存在其它微量多糖水解酶的干扰影响。最好的办法是利用基因工程菌异源表达重组纤维素酶。
   已知很多纤维素酶在真核细胞表达系统如酵母细胞或丝状真菌细胞中成功表达,但丝状真菌细胞存在内源纤维素酶干扰问题,酵母细胞也被发现存在内源果胶酶,因而需要探讨纤维素酶在原核细胞中异源重组表达。
   T. Reesei 葡聚糖内切酶Cel5A 又称EG II,占表达的纤维素酶总量的5-10%,是最重要的内切酶之一,它具有很高的催化活性,被广泛用于纺织、印刷、染料、造纸和洗涤等工业。本文报道Cel5A 首次在大肠杆菌中异源重组表达及其重组酶酶学性质的研究。通过RT-PCR的方法,获得不含信号肽的瑞氏木霉葡聚糖内切酶II(Cel5A)的cDNA,将其克隆到pET-28a(+)表达质粒上,与其N 末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pET-28a(+)-egl2 表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达。利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白,Western blot 结果显示重组Cel5A 分子量大约为43 Kda。进一步对重组Cel5A 进行Ni-NTA 亲和层析柱纯化并对纯化酶进行酶学性质测定,结果显示,以CMC-Na 为作用底物时重组酶最适作用pH 为4.5,最适作用温度为60 ℃;重组酶热稳定性较好,在65 ℃及以下保温1.5h,活性仍相当稳定。Mn 2+对Cel5A的酶活有促进作用,Fe 3+和Cu 2+有抑制作用,其它金属离子和EDTA 对酶活没有明显影响。底物特异性研究表明,重组Cel5A 只能水解β-Glucan和CMC-Na,对β-Glucan的水解能力是其对CMC-Na 水解能力的6.7倍,但对微晶纤维素Avicel、Glass microfiber filters、Xylan、 Arabiroxylan和Xyloglucan 没有水解作用。
   本文也进行了Cel6A(瑞氏木霉外切葡聚糖酶II)在大肠杆菌中重组表达研究,结果显示重组蛋白均以无活性的包涵体存在,没有检测到有活性蛋白的表达。
   由此可见蛋白多肽链的的正确折叠是异源表达这些真菌来源纤维素酶的关键因素,应该联合运用多种改善蛋白折叠的方法来有效表达这类蛋白。最后本文报道了毕赤酵母表达穿梭质粒pPICZ A-cbh2的构建。
[硕士论文] 宫晓燕
生物学;微生物学 南京师范大学 2009(学位年度)
摘要:核糖体蛋白RPL32(ribosome protein L32),是一种广泛存在于动物、植物和酵母等不同生物类群中的蛋白,进化上相对保守。绝大多数真核生物的核糖体蛋白RPL32 仅由一个基因编码,而粟酒裂殖酵母的核糖体蛋白RPL32 由两个基因编码,其表达蛋白分别是RPL32-1和RPL32-2。本实验室已经对rpl32-2基因进行了克隆表达,并对其功能进行了研究,证明其是一种潜在的转录调节因子;由于RPL32-1和RPL32-2 氨基酸序列相似度极高(96.85%),推测RPL32-1 可能也具有类似RPL32-2的转录调控功能。因此,本文首先对RPL32-1 编码基因进行了克隆和表达,并对RPL32-1的胞内分布进行了研究。
   本文首先提取了野生型Schizosaccharomyces pombe的基因组,通过PCR 扩增得到编码核糖体蛋白RPL32-1的基因rpl32-1,将其连接到pMD18-T Vector,用限制性内切酶EcoR I和Xho I 将rpl32-1 从pMD18-T/rpl32-1 切下,连到pET-28a(+)表达载体,构建质粒pET-28a(+)/rpl32-1,转化Escherichia coliRosetta(DE3)pLys 细胞。pET-28a(+)/rpl32-1 /Rosetta 重组菌采用1mM IPTG 诱导,37 ℃表达2h,0 ℃条件下超声破碎细胞后离心得到上清,上清用Ni-NTAHis·Bind Resins(Novagen)进行一步纯化。SDS-PAGE 显示,RPL32-1 蛋白成功表达,并且可溶性较好。
   本文还对核糖体蛋白RPL32-1的胞内分布进行了研究。通过overlap PCR 成功扩增了核糖体蛋白编码基因rpl32-1和增强型绿色荧光蛋白编码基因egfp的融合基因egfp-rpl32-1。Egfp和rpl32-1 两个基因之间通过一段互补的Linker相连以保证蛋白的正确折叠。得到的融合基因连接到pMD18-T Vector,用限制性内切酶NdeI和BamHI 将egfp-rpl32-1 从pMD18-T/egfp-rpl32-1 切下,连到pESP-3 表达载体,构建pESP-3/egfp-rpl32-1,转化到粟酒裂殖酵母SP-Q01 细胞。在EMM 液体培养基中培养转化子至对数期,置于荧光显微镜下观察。发现绿色荧光主要集中在核内,而胞质中的荧光则较弱;这表明对数期核糖体蛋白RPL32-1 主要分布在核内,而胞质中较少。DAPI 染核也表明荧光聚集区确实为核区。
[硕士论文] 吴峰
生物学·微生物学 湖南师范大学 2009(学位年度)
摘要:苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)在芽胞形成过程中能产生对目标害虫具有特异性毒杀作用的伴胞晶体。研究表明伴胞晶体中存在与原毒素相互作用的20kb DNA片段,该片段对晶体的形成及杀虫晶体蛋白在敏感害虫体内的激活过程具有重要的作用。但是,与毒素蛋白结合的20kb DNA的序列信息仍未得到阐明。本论文旨在利用基因文库的技术手段,挖掘20kb DNA更多的序列信息,进一步对Bt野生菌株晶体中DNA的序列与来源进行研究,为探讨晶体中原毒素与20 kb DNA的结合机制以及20kb DNA的功能提供基础。 在本研究中,以本室选育的Bt野生菌株4.0718为材料,提取与晶体蛋白CrylAc相结合的20kb DNA,以其Sau3AI部分酶切片段为供体、pbluescriptⅡ(SK+)为载体构建基因文库。基因文库建立后,通过检验文库的随机性、插入片段的平均长度、载体自连率等对文库质量进行鉴定。根据部分阳性转化子的测序结果,运用NCBI的BLASTn工具,通过网络数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)进行比对,根据NCBI输出的比对结果分析Bt基因组和20kb DNA之间的同源性。比对结果发现20kb DNA中存在来源于Bt染色体的基因,如16S rRNA基因、23S rRNA基因、编码RNA聚合酶亚单位的基因ropB、编码金属氨肽酶的基因pepQ、编码细菌毒力因子硫酸透明质酸酶的基因sulP、以及编码与转座相关的解离酶基因tnpR。同源性分析结果证明,Bt染色体上的基因参与20kb DNA的序列构成,即20kb DNA来源于宿主菌的染色体。 研究结果证实了20kb DNA来源于Bt染色体,并新发现了来自染色体的基因。本研究为进一步阐明Bt伴胞晶体中20kb DNA分子的来源、结构、功能及其与原毒素的相互作用机制奠定了重要基础。
[硕士论文] 蒋军风
生物学生物学 湖南师范大学 2009(学位年度)
摘要:量子点是一种半导体纳米晶体。与传统的有机荧光染料相比,它具有发射光谱窄且对称、激发光谱宽、荧光寿命长、分散性与稳定性好以及具有明显的抗光漂白作用等杰出的荧光性质。本研究以量子点的水相法直接合成及应用于细菌检测为目标,主要开展了以下两个方面的工作: 1.直接合成水溶性量子点。针对有机相中合成量子点耗时、反应条件苛刻、非水溶性等问题,本研究以NaHSe为前体、巯基乙酸为稳定剂以及在无氧、搅拌等氛围下直接合成了水溶性量子点。同时研究了pH值、稳定剂及其用量等因素对量子点荧光的影响,也使用荧光光谱线、透射电镜等对量子点进行了表征。实验结果表明,该方法能在简单的条件下快速合成稳定性好、荧光性能良好的量子点。 2.检测双歧杆菌种特异性16SrDNA。利本文构建了一种检测双歧杆菌种特异性16SrDNA的新方法。以羧基修饰的525nm量子点(QD)与氨基修饰的DNA在EDC的作用下通过脱水连接形成QD—DNA复合物并作为荧光能量共振转移体系的供体、有机荧光机团ROX修饰的DNA作为荧光能量共振转移体系的受体组成能与双歧杆菌种特异性16SrDNA杂交的检测探针。当探针与靶序列发生杂交时,作为供体的525nmQD与作为受体的ROX之间的距离被缩短至能有效发生荧光能量共振转移的距离之内。此时,以不能致ROX发光的波长激发量子点发光,其荧光强度下降,而ROX的荧光强度上升。在不存在靶序列的情况下,则不会发生这种荧光强度的变化。QD与ROX荧光强度的变化是实现本检测体系快速、简单的重要保证。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部