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[硕士论文] 王芹
生物技术 中山大学 2007(学位年度)
摘要:嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)广泛存在于天然水和生活环境的水体中,是一种兼性胞内寄生菌,能侵入并寄生在人类肺泡巨噬细胞及其它巨噬细胞、肺泡上皮细胞和水生环境中的原生动物中(巨噬细胞和阿米巴为两种主要的相关宿主细胞),是引起军团菌病(军团菌肺炎)的病原体。通过嗜肺军团菌的生命周期研究发现,处于传播期的细菌感染性强于对数生长期的细菌,表现出对逆境环境的抵抗性,以及高的细胞毒性等。但是该菌在逆境中的自我保护机制及相关调控的分子机制研究较少。 本论文通过军团菌基因组数据库搜索,发现了嗜肺军团菌中有两个命名为oxyR的基因(lpg0173,lpg1815),lpg0173编码的蛋白由286个氨基酸组成,lpg1815编码的蛋白由296个氨基酸组成,它们都属于LysR家族转录调控因子。一些研究表明oxyR基因在一些病原菌中调控过氧化氢酶保护细菌免受过氧化物的伤害,在军团菌中则还未见相关报道。lpg013由Crick链编码,同源性比对结果发现两个基因所编码蛋白的一致性仅有25﹪,lpg1815所编码蛋白与其它细菌的OxyR氨基酸同源性较高而忉lpg0173所编码蛋白的同源性则较低,因此我们认为两者不是同一个基因。 我们将lpg0173重新命名为oxyR2。本论文主要探讨oxyR2的结构和功能。启动子序列分析表明,oxyR2的转录起始位点为距ATG上游20个碱基的“T”,在转录起始位点上游11bp和30bp处各有两个非典型的-10盒(5'TGATAAATT 3')和.35盒(5'TTTATT3');OxyR2蛋白的N末端含有保守的螺旋-转角-螺旋结构域(5-64aa),C末端含有LysR底物结合的调控结构域(88-276aa),这一结构表明oxyR2是一个典型的LysR型的转录调控因子。 为了研究OxyR2的功能,首先利用自杀质粒pRE112,通过非极性缺失技术敲除了嗜肺军团菌染色体上的oxyR2基因,获得oxyR2缺失株。这一结果表明该基因是一个非必需基因。然后,测定了野生型和缺失株的生长曲线,结果表明oxyR2基因的缺失会使嗜肺军团菌的生长速度降低,并降低稳定期细胞的存活能力;抗逆实验发现,该基因与细菌的抗酸、抗渗透压和抗热没有直接关系,但降低对数期细胞的抗氧化能力,但对稳定期细胞抗氧化能力影响不大;处于稳定期的缺失株对盐的敏感性降低,提示该基因可能会影响细菌的毒力。但是,利用盘基网柄菌为宿主模型进行的感染试验初步结果显示该基因的缺失并不影响嗜肺军团菌对宿主的感染能力和胞内增殖能力。 oxyR2基因的上游有一个由Watson链编码、转录方向相反的操纵子,由5个读码框组成;启动子序列分析发现两者的启动子相互重叠。我们推测oxyR2调控了该操纵子的表达。为了确证这一假设,我们将操纵子上游的启动子序列连接到质粒载体pBG01中报告基因gfpmut2的上游,构建成pBG0174。将pBG01、pBG0174电击转化入野生型和缺失株中,测定转化子的绿色荧光强度。结果表明lpg0173能够调控该操纵子的表达。以上结果对进一步了解嗜肺军团菌在逆境环境下的存活机制以及致病机理均有重要的理论和现实意义。
[博士论文] 宋锐
水生生物学 中国科学院大学;中国科学院研究生院 2011(学位年度)
摘要:刀鲚是一种溯河产卵洄游型鱼类,在西北太平洋沿岸越冬。在产卵季节,可沿着长江洄游到长江中下游及其连通湖泊中,由于对淡水环境的适应以及江湖阻隔,现在长江及其附属湖泊中生活着三种类型的刀鲚,分别是:江海洄游型、淡水洄游型和淡水定居型。本论文对3种生态型刀鲚中寄生蠕虫的群落结构和陈氏刺棘虫的种群遗传结构进行了研究。
   在7个采样点对刀鲚的鳃和消化道的寄生虫群落调查中,共发现了10种寄生蠕虫。其中,江海洄游型刀鲚中崇明种群的寄生蠕虫群落平均物种丰富度和Brillouin多样性指数最高,分别为1.96±1.14和0.36±0.3348,淡水定居型中天鹅洲种群的寄生蠕虫物种丰富度和多样性指数最低,分别为0.4±0.53和0.02±0.0795;优势种类也有所不同,江海洄游型刀鲚的寄生蠕虫优势种类为鲚套茎吸虫,淡水定居型和淡水洄游型一般为林氏异钩铗虫,天鹅洲较特别,为陈氏刺棘虫。基于群落的百分相似度,对7个刀鲚寄生蠕虫群落间的相似性作聚类分析发现,淡水定居型中天鹅洲的单独为一枝,江海洄游型的崇明和舟山聚为一枝,淡水洄游型的安庆江段、鄱阳湖和鄂州江段聚为一枝,较为特殊的是太湖的与淡水洄游型聚在一起,该结果说明寄生虫群落结构主要与刀鲚的生活环境相关。此外,找到了几种区分3类生态类型刀鲚的寄生虫标记:细长嗜鯷虫、鲚套茎吸虫和对盲囊线虫只感染江海洄游型刀鲚,而长江中华钩铗虫、鲶异吻钩棘头虫和长江敖刺棘头虫只感染淡水洄游型刀鲚。另外,陈氏刺棘虫和林氏异钩铗虫虽然在三种生态型刀鲚中都有发现,但是他们的感染率和平均丰度明显不同,也可作为区分不同生态型刀鲚的辅助标志寄生虫。
   研究发现,淡水和海洋中陈氏刺棘虫的形态特征没有明显差异。分别以线粒体控制区序列和ITS rDNA基因为分子标记,对7个采样点的刀鲚和陈氏刺棘虫进行了种群遗传结构分析,发现陈氏刺棘虫各种群间也没有发生显著的遗传分化。而对不同采样点刀鲚种群的研究发现,石首天鹅洲、长江鄂州江段、鄱阳湖刀鲚种群与长江安庆江段、太湖、崇明和舟山种群之间发生了显著的遗传分化。由于目前刀鲚溯河洄游的最远位置在鄱阳湖和安庆江段之间,说明刀鲚的洄游距离是引起刀鲚种群间遗传分化的重要因素。上述结果显示:刀鲚种群的遗传分化没有显著影响陈氏刺棘虫的种群遗传,地理隔离和生境差异也没有显著影响陈氏刺棘虫的种群遗传。
  
[博士论文] 曾伯平
动物学 中山大学 1995(学位年度)
[硕士论文] 党宏月
海洋底栖生物 中国海洋大学;青岛海洋大学 1992(学位年度)
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