绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 100
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 6840 条结果
[硕士论文] 马天宇
动物遗传育种与繁殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:分娩启动是一个复杂的生理过程,影响因素有很多,包括机体内部环境和外界环境两方面。外界因素包括摄入食物、不当的机械运动等;内在调节主要包括激素、免疫炎症以及细胞凋亡等。目前关于分娩启动过程具体分子机制的研究鲜有报道。在本实验室大白猪分娩前后胎盘组织转录本测序中筛选出GPX1差异表达基因,有研究表明GPX1可以缓解氧化应激反应,GPX1缺乏会导致非正常分娩。本试验旨在探究谷胱甘肽过氧化物酶GPX1在分娩启动的进程中的作用。
  为了探究GPX1是否在分娩启动中发挥作用,我们在怀孕15.5天孕鼠腹腔注射LPS构建小鼠早产模型,检测胎膜中ROS水平、氧化标志基因HSP90、炎症因子TNFα、IL1β以及分娩相关基因COX2的表达变化。在WISH细胞中分别转染干涉片段si-GPX1和超表达质粒,检测分娩相关基因HSP90、COX2、Caspase3、IL1β以及NFκB。为了判断GPX1发挥作用的通路,采用NFκB通路抑制剂CAPE处理WISH细胞,通过细胞免疫荧光检测NFκB以及COX2的表达变化。通过ELISA检测清平猪有无分娩征兆的羊水中PGE2的浓度。在WISH细胞中转染重组质粒pCMV-GPX124小时和48小时后,分别检测细胞上清液中的PGE2浓度。最后,通过PGE2处理WISH细胞,检测对GPX1、NFκB和COX2的影响。试验主要研究结果如下:
  1)小鼠早产模型中实验组小鼠胎膜ROS水平显著增强,氧化应激标志基因HSP90表达水平显著高于对照组,同时炎症因子TNFα、IL1β和COX2呈现高表达,蛋白结果表现一致。表明分娩启动时,氧化应激水平加剧,并出现炎症反应。在三类抗氧化标志基因GPX1、Catalase和SOD2中,实验组与对照组相比,表达水平分别是1.80、1.27和1.18倍。其中GPX1相对变化最剧烈,推断GPX1作为主要抗氧化基因。
  2)在长妊娠期及短妊娠期清平猪种中,有分娩征兆组羊水中PGE2浓度均显著高于无分娩征兆组,结果表明PGE2对分娩启动发挥重要作用。高水平GPX1可以降低HSP90的水平,表明GPX1可以降低氧化应激反应,同时激活NFκB通路上调COX2的表达,在24以及48小时后,PGE2水平均显著上升。低水平GPX1使HSP90水平升高,氧化应激水平加剧,上调炎症因子IL1β水平。GPX1从激素水平以及免疫炎症两方面参与妊娠以及分娩启动的调节。
  3)PGE2处理WISH细胞后,对GPX1产生促进作用,对NFκB以及COX2有负反馈抑制作用。这种机制可以防止PGE2水平通过NFκB通路进一步升高,避免PGE2高峰提前引发早产。GPX1的稳定表达是正常妊娠分娩的必要条件。
[博士论文] 杨艳
转基因生物安全学 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:任何转基因作物在进入商业化应用之前都必须经过严格的环境风险评价。评价转基因作物特别是抗虫作物对农田重要非靶标节肢动物的生态影响是其中一项重要内容。非靶标安全评价需要以农田中栖居的节肢动物群落知识等作为依据。此外,田间节肢动物种类繁多,不可能对所有节肢动物进行评价。因此,需要遴选合适的节肢动物代表种。基于系统的文献检索和Microsoft Access2010(结构化查询语言SQL)软件,构建了我国主要作物田节肢动物数据库。该数据库可用于转基因作物环境风险评价的四个方面1)非靶标物种的识别,2)辅助实验量物种的确定;3)辅助高级Tier试验物种的选择,4)为商业化后的环境监测确定合适的物种。
  该数据库收集了来自中国34个省级行政区域超过900篇的文献,包括2520种节肢动物18375条物种丰富度的记录。数据库提供了我国主要作物水稻、玉米、大豆、棉花和小麦五种作物田节肢动物的详细生物学信息及地理分布信息,主要包括节肢动物物种的拉丁名、异名、分类、地理分布、丰富度、生态功能、栖息习性及取食习性等,还包括了不同研究中采集物种的经纬度信息、节肢动物的调查取样方法和时间等信息。
  数据库收集的节肢动物种类涵盖了25个目、255个科。其中,蜘蛛目(458种)、半翅目(436种)和鞘翅目(417种)是记录物种最多的三个目。来自蜘蛛目、膜翅目、半翅目、鞘翅目、鳞翅目和双翅目六个目的节肢动物数量占总物种数的93%。所记录的节肢动物中,植食性节肢动物1091种,捕食性节肢动物938种;寄生性节肢动物502种。有关传粉类节肢动物的研究记录很少,本数据库仅收录28种传粉类节肢动物。分解类节肢动物(土壤昆虫)的研究记录极少,该数据库仅收录9种分解类节肢动物。
  结合我国各省五种作物的种植分布情况,绘制了我国节肢动物分布图。每种作物在每个省因种植情况的不同,其田间节肢动物物种的研究情况也不相同。其中,水稻田节肢动物物种数量最多的省份是湖南省(1198种)、其次是福建省(993种)、广东省(785种)、贵州省(602种)及湖北省(478种),棉花田节肢动物记录最多的省份是湖北省(553种)、其次是新疆维吾尔自治区(401种)、河南省(293种)、山东省(256种)和安徽省(236种),大豆田节肢动物记录最多的省份是吉林省(363种)、其次是安徽省(349种)、黑龙江省(158种)、福建省(144种)和江苏省(124种),玉米田节肢动物记录最多的省份是山东省(175种),其次是吉林省(146种)、湖北省(110种)、河南省(101种)和黑龙江省(84种),小麦田节肢动物记录最多的省份是河南省(132种)、其次是新疆维吾尔自治区(108种)、河北省(103种)、陕西省(49种)、宁夏回族自治区(45种)及黑龙江省(45种)。不同省份不同作物上的节肢动物被研究和记录频次与该作物在本地区的种植面积和重要性相关。
  为了阐明该数据库的功能和作用,通过5个假设案例和2个实际案例演示了如何利用该数据库科学遴选节肢动物指示种以支持转基因作物的生态风险评价工作。基于数据库中数据的分析,初步提出了在转基因作物非靶标效应评价中应该重点关注的物种名单,为精准评价转基因作物的生态风险奠定了基础。同时,分析了该数据库在查询田间濒危物种及田间节肢动物种群动态监测方面可发挥的作用。最后,分析了数据库的不足之处及需要进一步完善的地方和方法。
[博士论文] 王泽祥
预防兽医学 中国农业科学院 2017(学位年度)
摘要:弓形虫是专性细胞内寄生的顶复门原虫,具有复杂的两宿主生活史,速殖子和包囊是其在中间宿主体内产生的两种形态,卵囊是终末宿主体内产生的形态。弓形虫分为四种主要的基因型(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和12型),中国1型(Chinese1,ToxoDB#9)是中国大陆占主导地位的基因型,不同基因型的分布和对宿主的致病性有较大差异。本课题应用定量蛋白质组学技术和修饰蛋白质组学技术,对弓形虫不同发育期、不同虫株孢子化卵囊的蛋白质组和不同虫株速殖子的磷酸化修饰和乙酰化修饰蛋白质组进行了研究。
  应用iTRAQ技术研究了Ⅱ型(ToxoDB#1)PRU虫株速殖子、包囊、孢子化卵囊三种不同发育阶段的比较蛋白质组。毒力因子和核糖体蛋白呈现出独特的表达方式,毒力因子在孢子化卵囊阶段表达量最高,包囊次之,速殖子最低。孢子化卵囊和包囊与速殖子相比,分别有33个、46个核糖体蛋白上调表达,无核糖体蛋白下调表达,这可能与孢子化卵囊和包囊的宿主适应性有关。
  应用iTRAQ技木研究了Ⅱ型(ToxoDB#1)PRU虫株和ToxoDB#9PYS虫株孢子化卵囊的比较蛋白质组。与PYS虫株相比,PRU虫株2个毒力因子上调表达,13个毒力因子下调表达,10个与孢子化卵囊对外界环境抵抗力相关的卵囊壁蛋白上调表达,3个卵囊壁蛋白下调表达,提示PRU虫株和PYS虫株孢子化卵囊在毒力和对外界环境抵抗力方面存在差异。
  应用定量磷酸化修饰蛋白质组学技术,研究了不同基因型弓形虫速殖子之间的磷酸化修饰蛋白质组学差异。共鉴定到759个磷酸化蛋白,在RH/PRU组、PRU/PYS组、PYS/RH组中分别鉴定到392个、298个和436个差异磷酸化蛋白。在RH/PRU组、PRU/PYS组、PYS/RH组中分别有3个基序、3个基序、5个基序差异表达,这在一定程度上揭示了弓形虫不同基因型速殖子表达激酶种类和激酶识别底物特性的差异。
  应用非标记定量乙酰化修饰蛋白质组学技术,研究了不同基因型弓形虫速殖子之间的乙酰化修饰蛋白质组学差异。共获得566个乙酰化蛋白,在RH/PRU组、PRU/PYS组、PYS/RH组中分别鉴定到15个、3个和26个差异乙酰化蛋白。与PYS虫株和PRU虫株相比,RH虫株速殖子中的组蛋白乙酰转移酶和甘氨酰-tRNA合成酶上调表达,这在一定程度上反映了不同虫株弓形虫应对外界压力和发育万面的差异。
  综上所述,本课题首次对弓形虫Ⅱ型(ToxoDB#1)PRU虫株不同发育期的比较蛋白质组、Ⅱ型(ToxoDB#1)PRU虫株和ToxoDB#9PYS虫株孢子化卵襄的比较蛋白质组,以及Ⅰ型(ToxoDB#10)RH虫株、Ⅱ型(ToxoDB#1)PRU虫株和ToxoDB#9PYS虫株速殖子的磷酸化及乙酰化修饰蛋白质组进行了研究,揭示了弓形虫不同发育期、不同虫株孢子化卵囊的蛋白质组差异和不同虫株速殖子的蛋白质翻译后修饰特征。研究结果为进一步深入研究弓形虫的生物学特性和基因型多样性奠定了基础。
[硕士论文] 尹晓燕
化工过程机械 山东大学 2017(学位年度)
摘要:马蹄蝙蝠有一个积极的超声波声纳系统,允许动物在结构丰富的自然环境中导航和捕捉猎物。这种生物声纳系统的组件包含一个不寻常的动态系统,在实现动物的优良的感官性能中起着关键性作用。马蹄蝙蝠生物声纳采用精心设计的挡板形状来对传出和传入的超声波进行衍射,超声从被鼻叶包围的鼻孔发出然后被大外耳接收。当超声衍射发生时,鼻叶和耳朵就被驱动。在发射端,两鼻叶即前叶和鞍,已被证明是与超声发射同步运动。在接收侧,外耳已显示在约100毫秒内发生高达20%的相对于耳朵总长度的形变。由于这些形变的产生,传入和传出超声的衍射变成了一个动态的过程。动态的衍射过程导致类似的动态装置特性,如果这种额外的动态维度被发现在本质上提高了感官信息的编码,那么马蹄蝙蝠生物声纳可以作为一个动态的过程应用于传感技术。本文将会介绍目前已知的关于蝙蝠生物声纳的动态效果,同时将会对生物声纳和类似工程的感官系统如声纳和雷达进行对比。
  蝙蝠种群中的马蹄蝠(Rhinolophidae)和相关的旧大陆鼻叶蝠(Hipposideridae)都显示出将明显的耳朵动作作为其生物体行为的一部分。在当前的工作中,通过耳朵上标记点的三维重建来定量分析这些耳朵运动。在两种物种中观察到的耳朵运动都分为两类:在“刚性旋转”运动中,耳朵的几何形状保持不变,仅仅改变在空间中的旋转方向。在“柔性运动”中,耳朵的几何形状发生变化,这在标记点之间的距离变化中是明显的。线性判别分析结果表明,两种类型的运动可以在分析的数据集中没有任何重叠的情况下分离。因此,来自两个物种的蝙蝠有两种独立类型的耳朵运动,它们之间显然没有过渡。两种不同运动在动物生物体行为中的作用仍有待确定。
  已知蝙蝠通过多普勒频移补偿机制来进行捕猎和追踪,本文将通过实验的方法来探究快速耳朵运动能否对回声产生较大的多普勒频移值,从而激发蝙蝠启动其多普勒频移补偿机制。
[硕士论文] 许铁龙
动物学 贵州师范大学 2017(学位年度)
摘要:本研究至2016年12月止共对贵州省包括毕节市、大方县、盘州市、威宁彝族回族苗族自治县、纳雍县、水城县、兴义市、道真仡佬族苗族自治县、务川仡佬族苗族自治县、绥阳县、赤水市、习水县、金沙县、遵义县、凤冈县、兴仁县、惠水县、关岭布依族苗族自治县、开阳县、修文县、安顺市、长顺县、清镇市、贵阳市花溪区、贵阳市乌当区、贵定县、织金县、息烽县、龙里县、平坝县、黔西县、余庆县、荔波县、榕江县、从江县、三都水族自治县、独山县、丹寨县、江口县、印江土家族苗族自治县、松桃苗族自治县、施秉县、黎平县、雷山县、凯里市、沿河土家族自治县、思南县、安龙县、贞丰县、望谟县、罗甸县在内的共计51个县、市、区进行了野外翼手目动物标本采集,采集翼手目动物标本共计2036号,结合文献记录,现贵州省共有翼手目动物7科18属59种。与《贵州兽类志》相比增加19种。其中,中国特有种8种。经过实地调查,贵州省分布最为广泛的大蹄蝠Hipposiderideros armiger,其在贵州省的分布地共计47个县市。在贵州高原山区省的5个动物地理亚省中均有分布的翼手目物种分别为:托氏菊头蝠Rhinolophusthomasi、菲菊头蝠Rhinolophus pusillus、皮氏菊头蝠Rhinolophuspearsonii、贵州菊头蝠Rhinolophusrex、云南菊头蝠Rhinolophusyunanensis、大蹄蝠Hipposiderosarmiger、黄大蹄蝠Hipposiderospratti、三叶蹄蝠Aselliscusstoliczkanus、西南鼠耳蝠Myotisaltarium、中华鼠耳蝠Myotischinensis、中华山蝠Nyctalusplancyi、南蝠Iaio、印度伏翼Pipistrelluscoromandra、东亚伏翼Pipistrellus abramus,共计14种。五个动物地理亚省之中,翼手目种类最多的是黔东南低山丘陵盆地亚省,共计48种,占贵州省总数59种的81.4%;另黔西高原中山亚省共有翼手目动物31种,占贵州省总数59种的52.54%;黔北中山峡谷亚省的翼手目种类为31种,占贵州省总数59种的52.54%;黔中山原丘陵亚省的翼手目共计38种,占贵州省总数59种的64.41%;黔南低山河谷亚省的翼手目种类共计33种,占贵州省总数59种的55.93%。贵州省翼手目分布型以东洋型为主要类型,为27种,南中国型13种排列第二,云贵高原及附近山地型6种,东亚季风区型4种,旧大陆热带-亚热带型3种,古北型2种,东北型、岛屿型、喜马拉雅-横断山区分布型各1种,不易归类的分布型1种(由于其分布比较广泛,不能视为某一类),即大耳黄蝠Nycticeiusemarginatus。
[硕士论文] 陈佳丽
生物学 牡丹江师范学院 2017(学位年度)
摘要:本文综述了东北林蛙(Rana dybowskii)的生物学分类地位、地理分布、生活习性、形态特征、食性、消化酶的研究进展和经济价值,从生物化学的角度研究了东北林蛙消化酶的性质。文中探讨了①pH和温度对东北林蛙消化系统(将东北林蛙的消化系统分为食道、胃、肠道和肝脏4部分)中主要消化酶的影响;②8种金属离子(K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Fe3+、Zn2+、Pb2+、Hg2+)对东北林蛙肝脏中消化酶活性的影响;③采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法对东北林蛙消化系统的6种同工酶(酯酶同工酶(Esterase)、乙醇脱氢酶同工酶(Alcohol dehydrogenase)、超氧化物酶同工酶(Superoxide)、过氧化物酶同工酶(Peroxidase)、苹果酸脱氢酶同工酶(Malate dehydrogenase)、淀粉酶同工酶(Amylase))和组织蛋白进行分离分析。结果如下:
  1.在37℃条件下,设定21个pH梯度(2、2.4、2.8、3.2、3.6、4.0、4.4、4.8、5.2、5.6、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8、8.4、8.8、9.2、9.6和10.0),测定东北林蛙食道、胃、肠道和肝脏的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力。食道、胃、肠道和肝脏的蛋白酶最适pH分别为6.0、5.6、7.2和8.0;脂肪酶最适pH分别为5.6、4.4、5.2和7.6;淀粉酶最适pH分别为6.0、5.6、6.4和8.0。
  2.在最适pH条件下,设定11个温度梯度(20℃、23℃、26℃、29℃、32℃、35℃、38℃、41℃、44℃、47℃和50℃),测定东北林蛙食道、胃、肠道和肝脏的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力。食道、胃、肠道和肝脏蛋白酶最适温度分别为38℃、38℃、32℃和41℃;脂肪酶最适温度分别为38℃、35℃、26℃和26℃;淀粉酶最适温度分别为29℃、41℃、26℃和35℃。东北林蛙消化系统4种组织中,蛋白酶在肝脏中活力最强,活力大小为:肝脏>食道>胃>肠道,差异显著(P﹤0.05);脂肪酶在肠道中活力最强,活力大小为:肠道>肝脏>胃>食道,差异显著(P﹤0.05);淀粉酶在胃中活力最强,活力大小为:胃>食道>肝脏>肠道,差异显著(P﹤0.05)。
  3.选用8种金属离子(K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Fe3+、Zn2+、Pb2+、Hg2+),设定6个金属离子浓度(2×10-6 mol/L、2×10-5 mol/L、3×10-4 mol/L、3×10-3mol/L、3×10-2 mol/L、4×10-2 mol/L),测定其对东北林蛙肝脏中3种主要消化酶活力的影响。结果显示:蛋白酶在Na+、Mg2+、K+和Fe3+浓度为3×10-4mol/L,Ca2+、Hg2+、Zn2+、Pb2+浓度分别为3×10-3mol/L、2×10-5 mol/L、3×10-2mol/L、2×10-6mol/L时活力最强;脂肪酶在Na+和K+浓度为3×10-4mol/L,Mg2+和Pb2+浓度为3×10-3mol/L,Ca2+、Fe3+和 Zn2+浓度为2×10-5mol/L,Hg2+浓度为2×10-6mol/L时活力最强;淀粉酶在Na+和Pb2+浓度为3×10-4mol/L,Mg2+和Ca2+浓度为3×10-2mol/L,K+浓度为3×10-3mol/L、Zn2+浓度为2×10-5mol/L,Fe3+和Hg2+浓度为2×10-6mol/L时活力最强。各种金属离子在不同浓度条件下对酶活力的影响表现为激活或抑制。
  4.分别采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)方法和十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(SDS-PAGE)方法对东北林蛙消化系统中的EST、ADH、POD、SOD、MDH和AMY等6种同工酶和组织蛋白进行分离分析,结果如下:
  东北林蛙消化系统中共分离出电泳迁移率为0.464~0.753的EST1~EST18的18条谱带,活力顺序为肝脏﹥肠道﹥食道﹥胃;共分离出电泳迁移率为0.181~0.275的ADH1~ADH5的5条谱带,活力顺序为肝脏﹥食道﹥胃﹥肠道;共分离出电泳迁移率为0.034~0.649的SOD1~SOD16的16条谱带;共分离出电泳迁移率为0.093~0.814的POD1~POD13的13条谱带,4种组织中SOD和PPO活力顺序均为肝脏﹥食道﹥肠道﹥胃;共分离出电泳迁移率为0.067~0.326的MDH1~MDH9的9条谱带,活力顺序为肝脏﹥肠道﹥胃﹥食道;共分离出电泳迁移率为0.138~0.304的AMY1~AMY8的8条谱带,活力顺序为肝脏﹥食道﹥胃﹥肠道。
  东北林蛙消化系统4种组织中同工酶表达具有明显的组织特异性:EST、ADH、SOD和POD同工酶在肝脏中谱带最多,活性最强,在胃中谱带最少,活性最弱,与东北林蛙食性和动物肝脏主要吸收消化脂肪相一致;MDH同工酶的表达与肝脏排毒、消除机体疲劳机能相一致;AMY同工酶的表达与蛙类的摄食习性相一致。
  东北林蛙消化系统4种组织中组织蛋白电泳分离结果为:共分离出迁移率为0.275~0.978的56条组织蛋白谱带。将电泳图谱从阴极至阳极划分为6个区域(Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区、Ⅳ区、Ⅴ区以及Ⅵ区),对各蛋白谱带在这6个区域中的分布情况进行分析。Ⅰ区有2条谱带,分子量大于200KD;Ⅱ区有13条谱带,分子量位于130~200KD之间;Ⅲ区有6条谱带,分子量位于97.4~130KD之间;Ⅳ区有13条谱带,分子量位于66.2~97.4KD之间;Ⅴ区有8条谱带,分子量位于43~66.2KD之间;Ⅵ区有14条带,分子量小于43KD。蛋白质是动物组织中重要的组成成分,东北林蛙消化系统的4个组织中蛋白谱带数分别是:食道有34条谱带,胃有35条谱带,肠道有36条谱带,肝脏有33条谱带。
[硕士论文] 刘欢
生物学 牡丹江师范学院 2017(学位年度)
摘要:本文通过对中鼩鼱、长爪鼩鼱、扁颅鼩鼱的消化道解剖结构的测量、脏器系数的比较、头骨变量及尾部针毛超微结构的测量进行分析比较,展开对三个物种鼩鼱形态学的初步研究。
  制作头骨标本后,分别对三个物种间及长白山山脉、大、小兴安岭三个地区的中鼩鼱之间、中鼩鼱种内雌雄个体之间的颅全长、上颌长、齿列长等17个变量进行测量分析,结果表明:1.长爪鼩鼱和中鼩鼱的头骨指标除颅高之外,长爪鼩鼱其他指标均大于中鼩鼱,P<0.01,存在显著差异,扁颅鼩鼱头骨指标测量值均大于中鼩鼱,与长爪鼩鼱相近,通过判别函数发现,主要是颅全长、基长、下颌长等变量导致了这种差异。2.分布于长白山山脉、大小兴安岭地区的中鼩鼱头骨变量大部分指标未出现显著差异,只有分布在长白山山脉和大兴安岭地区的中鼩鼱头骨指标中的眶间距、上颌宽、腭前部宽等5个指标 P<0.05,差异明显,经聚类分析得到大、小兴安岭两个地区的种群相关系数为2.106,最后与长白山山脉合为一类,相关系数为3.962,说明大、小兴安岭关系更近,与 SPSS统计结果吻合;3.对中鼩鼱雌雄个体头骨指标分析,结果为:雄性个体的下颌长(不含第一门齿)为(7.65±0.09)mm,雌性为(7.01±0.09)mm,雄性下颌齿列长(不含第一门齿)为(4.18±0.16)mm,雌性为(3.57±0.12)mm,雄性大于雌性且差异显著,而在基长、上齿列长等少部分指标,测量值雌性大于雄性,产生这种结果的原因是繁殖期间,生命活动差异导致的,可能是性二型自然选择的结果。
  对三种鼩鼱的消化道长度和重量进行测量和称重,结果显示:中鼩鼱的胃长为(11.04±0.46)mm,胃重(含内容物)为(0.11±0.01)g,胃重(不含内容物)为(0.03±0.005)g,小肠长、小肠重(含内容物)、小肠重(不含内容物)分别为(123.87±5.54)mm、(0.25±0.01)g和(0.07±0.008)g,大肠长、大肠重(含内容物)、大肠重(不含内容物)分别为(99.70±9.44)mm、(0.19±0.01)g、(0.06±0.01)g,每个指标均是三种鼩鼱值最小的,这与中鼩鼱的食性和对能量的需求有关。
  由于扁颅鼩鼱其中一个样本脏器腐坏,无法称重,故对中鼩鼱和长爪鼩鼱的脏器进行观察描述、称重、计算脏器指数,同时也对中鼩鼱雌雄个体的脏器系数进行统计,结果表明:长爪鼩鼱的每个脏器系数均大于中鼩鼱,但只有心脏出现了极显著差异,P为0.001;对中鼩鼱的雌雄个体脏器系数比较分析后发现并无显著差异,说明在中鼩鼱种内,脏器系数未体现明显的性二型。
  在扫描电子显微镜下观察三个物种尾部的针毛结构,判断针毛鳞片类型,利用 MB-RULER测量软件对鳞片高度、密度进行测量,SPSS对测量结果进行统计,结果如下:三种鼩鼱针毛鳞片类型有4种,分别是条纹型、规则扁平型、规则镶嵌型和简单冠状型,从鳞片高度上来看,扁颅鼩鼱近根部、主体部、近梢部鳞片高度分别为(12.24±0.75)μm、(7.22±0.27)μm、(3.20±0.20)μm,均大于中鼩鼱、长爪鼩鼱三个部位的鳞片高度,且差异显著,从鳞片密度来说,未出现某一物种的三个部分均大于另外两个物种的现象,由于鳞片高度和密度都受到遗传和环境的影响,所以出现了种间差异性;对于三个物种的鼩鼱来说,针毛的鳞片密度由近根部、主体部、近梢部的顺序依次增大,这与鳞片功能有关,排列越紧密的鳞片对光的反射作用越强,对机体产生更好的保护作用,主体部与近梢部针毛与外界环境接触几率较近根部大,所以拥有相对较大的鳞片密度。
[硕士论文] 赵焕乐
动物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:机场及其周边鸟类种类调查及其多样性研究对于新建机场开展鸟击防范工作具有重要意义。2015年1-12月,采用样线法和固定半径样点法对内蒙古扎兰屯成吉思汗机场及其周边8km范围内的区域进行鸟类多样性调查。调查结果如下:
  (1)调查期间共记录到鸟类有15目31科82种。
  (2)扎兰屯成吉思汗机场围界内麻雀、喜鹊、家燕、白鹊钨为主要鸟类。鸟类四季活动的共同高峰期为早晨6点到8点,其中春季4点到6点的鸟类种类最高,为6种,夏季的6点到8点鸟类数量最多,为363只。
  (3)根据对鸟类的群落结构分析:机场围界内春季的鸟类多样性指数(0.740)和均匀度指数(0.819)最高;冬季的优势度(0.683)最高;夏季的平均密度(2.826ind· hm-2)最高。机场围界外:夏季湿地的多样性指数最高,为1.576;冬季的草地均匀度指数最高,为0.902;冬季的居民区优势度最高,为2.113;春季的湿地平均密度最高,为28.600 ind·hm-2。
  (4)本文在前人研究的基础上综合鸟类的体积、数量、出现次数、飞行高度、与机场的距离、出现的样带数以及是否集群7个因子对鸟类的危险值重新赋值并计算得出危险值。严重危险鸟类有普通鸬鹚Phalacrocorax carbo、麻雀、赤麻鸭Tadorna ferruginea等14种。
  根据调查结果提出不同季节,不同区域以及不同鸟种的针对性防范措施以及机场管理对策,为今后的扎兰屯机场鸟击防范工作提供重要的科学依据。
[博士论文] 吕伟华
生物学;发育生物学 东北农业大学 2017(学位年度)
摘要:鲤鱼(Cyprinus carpio)作为世界性的经济鱼类,其年产量超过445万吨,约占全球淡水养殖年产量的10%,在全球水产养殖业中占据重要地位。我国是最大的鲤鱼生产和消费国,产量约占全球的75.3%。同时,我国也是培育出鲤鱼优良品种最多的国家,在过去的几十年里大大促进了我国水产养殖业的发展,满足了市场“量”的需求,为人们提供了优质的动物蛋白。随着消费者生活水平的不断提高,水产品品质越来越受到人们重视。鲤鱼肉质、口感、营养价值等已远不能满足市场日益增长的“质”的需求。利用与肌肉品质性状紧密连锁的基因,培育肉质优良、营养价值高的品种是解决此问题的有效技术途径之一。
  肉质性状为复杂的经济性状,受诸多因素影响。鱼类中,肌肉脂肪酸组成及含量、脂肪含量等是影响肌肉品质的重要因素。本研究以镜鲤全同胞F2家系为材料,利用鲤鱼250 K高密度SNP芯片对肌肉脂肪酸、脂肪含量等肌肉脂肪性状进行全基因组关联分析(GWAS),获得肌肉脂肪性状显著相关的SNP位点;利用鲤鱼全基因组注释信息,获得肌肉脂肪性状候选基因。采用克隆、mRNA表达、基因多态性与性状关联分析等手段对部分候选基因进行了验证,确定基因与性状的关系。利用基因敲除手段,构建了鲤鱼和斑马鱼LPL基因突变体,探讨了LPL基因敲除对脂肪沉积的影响及其作用机制。本研究结果将为鲤鱼肌肉脂肪性状的遗传机制解析和品质提升的分子选育奠定基础。主要结果如下:
  1)采用全同胞家系设计,应用混合线性模型,开展了肌肉脂肪酸、脂肪含量等性状全基因组关联研究。获得了C22∶0、C24∶ln9、C18∶3n6、C20∶3n3、C22∶2n6、EPA、DHA、EPADHA、HUFA和n-3PUFA等10个脂肪酸性状,5%基因组水平显著性SNP位点54个,注释基因34个。获得背部肌肉脂肪含量(MFdo)、腹部肌肉脂肪含量(MFab)、腹部脂肪重(AbFW)和腹部脂肪占净重比例(AbFP)等4个脂肪含量相关性状,基因组潜在关联显著性水平SNP位点18个,注释基因10个,其中,carp089419达到5%基因组水平显著性,且与AbFW和AbFP均显著相关。利用荧光定量PCR(RT-qPCR)对8个已注释基因(ANKRD10A、TANC2、FJX1、CHKA、ADAM8A、FASN、LPL-a和LPL-b)在脂肪含量极高、极低样本中进行了初步验证,结果表明:ANKRD10A和TANC2在脂肪含量高的肌肉样本中表达量低于脂肪含量低的样本,且差异极显著;而FJX1、CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b在脂肪含量高的样本中表达量显著高于低脂肪含量样本,其中CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b在两组样本间表现出极显著差异。因此,可将ANKRD10A、TANC、FJX1、CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b作为候选基因进一步研究。
  2)克隆了FASN、 LPL-a和LPL-b3个候选基因cDNA全长,并对基因序列、生物学信息及基因表达规律进行分析。FASN基因(KY378913) cDNA全长为8927 bp,编码2511个氨基酸,5'非编码区(5'-UTR)为202 bp,3'非编码区(3'-UTR)为1192 bp; LPL-a基因(KM213240.1)cDNA全长2631 bp,编码507个氨基酸,5'-UTR为162 bp,3'-UTR为945 bp; LPL-b基因(KM213241.1)cDNA序列全长2413bp,编码507个氨基酸,5'-UTR为158bp,3'-UTR为732 bp。同源性及系统进化分析发现,FASN与其它鱼类氨基酸同源性为68%-96%; LPL-a和LPL-b氨基酸同源性为95%,两者与其它鱼类氨基酸同源性为61%-93%;进化树显示,鲤鱼与金线鲃FASN基因的进化关系最近,鲤鱼与鲫鱼LPL基因的进化关系最近。蛋白生物信息学分析显示,FASN蛋白质相对分子量274.1456 kD,理论PI值为6.10,其不稳定系数为41.14,说明该蛋白不稳定。FASN蛋白以无规则卷曲结构为主,占44.66%。LPL-a和LPL-b蛋白质的相对分子量分别为57.6688kD和57.5877kD。蛋白均以无规则卷曲为主,分别占50.10%和51.87%。两者均含有脂肪酶和PLAT/LH2两个结构域。不同组织中RT-qPCR结果显示,3个基因在多个组织中均广泛表达,FASN在脑组织中表达量最高,在背部肌肉与腹部肌肉中表达差异不显著;LPL-a在腹部肌肉中表达量最高,LPL-b在脂肪组织中表达量最高,LPL-a和LPL-b在腹部肌肉和背部肌肉组织中表达量均具有极显著性差异。不同发育时期RT-qPCR结果显示,FASN在囊胚晚期表达量最高,囊胚时期相对受精卵期表达量显著增加; LPL-a和LPL-b均在在开口期的表达量达到最高,在7体节时期的表达量最低。
  3)开展了FASN、 LPL-a和LPL-b基因多态性与肌肉脂肪性状相关性研究。根据FASN、 LPL-a和LPL-b基因在鲤鱼基因组中的位置和鲤鱼SNP数据库,寻找到基因所含的SNP位点22个;采用测序法获得22个SNP位点在鲤鱼群体中基因型数据,其中5个SNP位点(carp165086、carp165090、carp165099、carp076700和carp076701)为单态,17个多态性SNP位点有效等位基因为1.0195-1.9998,平均值为1.8094;观测杂合度为0.0145-0.7374,平均值为0.5070;期望杂合度为0.0192-0.5012,平均值为0.4216。基因型与性状相关性分析显示:8个SNP位点与脂肪性状显著相关。FASN基因上,carp165088(A>T)与AbFW和SFA显著相关;carp165093(G>A)与MFdo和n-3PUFA显著相关;carp165096(A>T)和carp005641(G>A)与EPA显著相关;carp005638(C>T)与MFdo和n-6PUFA显著相关。LPL-a基因上的carp076703(T>C)与MFab显著相关;LPL-b基因上carp076738(T>G)和carp076740(T>C)与MFab显著相关;且carp076740也与SFA显著相关。综上,FASN、 LPL-a和LPL-b基因可作为鲤鱼脂肪性状的候选主效基因。
  4)利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,制备了鲤鱼LPL基因突变F0代,获得鲤鱼LPL-a和LPL-b基因突变F0个体分别为203尾和197尾。并以斑马鱼为模型,探索了LPL基因敲除对斑马鱼肌肉脂肪沉积的影响。构建了斑马鱼LPL基因突变纯系2个,即1号突变系(-13 bp)和2号突变系(+11/-7 bp),形态结果显示:LPL-/-斑马鱼在胚胎和出苗20天没有明显异常,2月龄检测发现2个突变系LPL-/-斑马鱼生长速度显著慢于野生型;解剖发现LPL-/-斑马鱼腹腔肠系膜脂肪沉积减少,甚至无脂肪沉积;肌肉脂肪酸测定结果显示:对照野生型,LPL-/-斑马鱼SFA、MUFA和PUFA含量降低,且SFA和PUFA差异显著;而三酰甘油(TG)含量增加,且差异极显著。荧光定量PCR检测显示:LPL基因mRNA表达量在LPL-/-斑马鱼中显著降低。同时,LPL基因突变导致其所在的糖代谢通路和PPAR通路中,其上下游基因mRNA表达量呈现不同程度下调。本结果将为LPL基因在鲤鱼脂肪沉积中的作用机制研究提供参考。
[硕士论文] 高群
动物学 聊城大学 2017(学位年度)
摘要:本研究通过对2015.2016年夏季多个站位沉积物的分析,对胶州湾小型底栖动物生态学和自由生活线虫的群落结构、多样性和分类进行研究。结果表明,胶州湾小型底栖动物的平均丰度为2651±707(ind/10cm2),生物量为1284.8±423.5(μgdwt/10cm2),该区域共有11个小型底栖动物类群被分选出来,自由生活线虫的丰度最占优势,可达95.7%。各站位自由生活海洋线虫的平均丰度和生物量分别为2538±6768(ind/10cm2)和1015.1±270.6(μgdwt/10cm2)。自由生活线虫的生物量同样最占优势(79.2%),其次为底栖桡足类(10.8%)、多毛类(5.9%)和双壳类(2.0%)等。垂直分布上,小型底栖动物和自由生活线虫的丰度在沉积物表层(0-2cm)分别占总量的56.5%、53.1%。本研究海区,包含4个潮间带站位,16个浅水站位(5.5-22.5米),多数站位位于人种养殖点附近,底栖环境相对不稳定,线虫在0-2cm表层和2-8cm底层的分布相差不大。从2015、2016年夏季胶州湾采集的多个站位样品中,共鉴定出198种自由生活海洋线虫,隶属于87个属,27科,4目。不同站位种类数差别较大:站位JZW-8最多(85种),站位JZW-10最少(26种)。整个研究海域主要的优势种有Parodontophora marina Zhang,1991,Terschellingia longicaudata De Man,1907,Dorylaimopsis turneri Zhang,1992, Setosabatieria coomansi Huang et Zhang,2006, Leptolaimus sp1, Sphaerolaimus gracilis De Man,1884。建立了1个新属(Ptycholaimelloides gen. nov.),描述了5个新种(青岛拟折咽线虫 Ptycholaimelloides qingdaoensis sp. nov.,异带矛咽线虫 Dorylaimopsis hetoroapophysis sp. nov,关节萨巴线虫Sabatieria articulata sp.nov.,大交接刺萨巴线虫Sabatieria macrospicula sp.nov.,周氏韦氏线虫Wieseriazhoui sp.nov.),20个新记录,列出了胶州湾自由生活线虫的种名录。
[硕士论文] 沈妍其
海洋生物学 辽宁师范大学 2017(学位年度)
摘要:Vav家族蛋白最主要的功能是它们可以作为Rho/ Rac蛋白的鸟嘌呤核苷酸交换因子起调节作用。Vav鸟嘌呤核苷酸交换因子3(Vav3),Vav家族的第三个成员,广泛表达在各个组织中,在脊椎动物中调节多种细胞信号转导通路,其中包括T、B细胞受体介导的Rho家族成员的信号转导过程。目前对Vav3的研究更多的集中于高等脊椎动物,而对无颌类脊椎动物是否存在Vav3及其功能研究尚无报道。由于七鳃鳗是一种重要的低等无颌类脊椎动物的代表,因此本文主要通过克隆日本七鳃鳗Vav3基因进而进行原核细胞表达、抗体制备,为更深入了解Vav3基因在七鳃鳗免疫调节过程中的作用奠定基础。
  日本七鳃鳗Vav3分子(Lja-Vav3)开放阅读框的长度为2568bp,编码含有855个氨基酸残基的蛋白质。Lja-Vav3含有典型的Vav家族蛋白8个保守结构域,通过对26条Vav3和Vav2的蛋白质序列进行比对分析,Lja-Vav3与有颌类脊椎动物Vav3分子的序列一致性(大约53%)比与有颌类及无颌类脊椎动物Vav2分子(大约51%)的序列一致性更高。为更深入的明了其进化关系,采用了构建进化树的方法和保守基序排布模式分析的方法进行了分析。结果显示,Vav3和Vav2这两种分子的8个保守结构域中最显著的差异体现在它们的SH3结构域。由此推测,Vav3和Vav2起源于一个共同的祖先基因的基因复制过程,并可能通过各自所作用底物的特异性选择分化而来。
  为了更好地了解Vav3在免疫调节中的作用,我们制备了七鳃鳗Vav3兔源多克隆抗体。首先构建了Vav3-pET32a(+)重组质粒,将重组质粒导入E.Coli BL21表达菌诱导蛋白表达并进行了纯化,以纯化后的Vav3蛋白做为抗原免疫刺激新西兰兔制备抗体,采用颈动脉取血的方式将抗血清分离并纯化,得到了特异性较好的兔抗Lja-Vav3多克隆抗体。使用实时定量PCR和Western blot实验分别检测Lja-Vav3在基因转录水平和在蛋白水平的表达,结果表明,Lja-Vav3在白细胞和髓样小体组织中其mRNA水平和蛋白水平在免疫刺激后显著增加。另外,Lja-Vav3的表达水平在受到LPS的刺激后上调显著,而在PHA刺激后无明显变化。这些结果证明,Lja-Vav3可能参与了七鳃鳗VLRB+淋巴细胞(类B细胞)的免疫应答过程,我们的研究结果为进一步研究Vav3分子在七鳃鳗淋巴细胞免疫应答过程中的作用奠定了基础。
[硕士论文] 陈磊磊
生物化学与分子生物学 安徽师范大学 2017(学位年度)
摘要:水螅体内除了刺细胞、腺细胞和神经细胞外,其他细胞都具有干细胞特性。其中,间质干细胞可以分化成皮肌细胞以外的所有细胞,外胚层皮肌细胞可以不断分裂形成新的外胚层皮肌细胞,内胚层皮肌细胞亦可以不断分裂形成新的内胚层皮肌细胞,这就是水螅具有强大再生能力的物质基础。但水螅身体不同部位的再生能力并非均衡。水螅极性化体轴的主体为体柱,体柱一端为头区,头区由口、垂唇及触手组成;另一端为足区,足区末端为水螅的固着器官基盘。一般认为分别位于体柱两端的触手和基盘位置的细胞分化程度较高。在水螅体柱任何位置通过切割手术得到的身体片段均能再生成一条水螅体,基盘组织已被证明具备一定程度的再生能力,但触手组织的再生能力目前未知。基于此,本研究开展如下工作:
  通过切割手术,获得纯粹的水螅触手组织、1根触手连带垂唇组织、2根触手连带垂唇组织、3根触手连带垂唇组织、4根触手连带垂唇组织及整个头区组织(5或6根触手连带垂唇组织)。再生实验结果表明,纯粹的水螅离体触手组织实验组所有样本全部分解;1根触手连带垂唇组织实验组中的大部分样本完成再生,而小部分样本分解,其余实验组样本全部完成再生。结果显示,纯粹的水螅离体触手组织已失去再生能力,但切割手术时保留在离体触手基部的垂唇组织能促进离体触手的再生。
  水螅触手的形态结构及细胞组成与体柱位置类似,但离体的纯粹触手组织为何失去了再生能力?这个现象内在的细胞及分子机理值得深入研究。动物再生主要涉及伤口附近原有旧结构的改造及新生结构的形成。旧结构的改造势必有部分细胞要凋亡,伤口附近的干细胞进行细胞分裂产生新细胞为新生结构提供物质基础。因此,水螅再生进程直接相关的细胞活动主要包括细胞凋亡和细胞分裂。本研究通过实时定量荧光PCR技术对水螅离体触手组织(纯粹触手组织和2根触手连带垂唇组织)在再生进程中细胞凋亡相关基因(Bak和Bcl-2)和细胞分裂相关基因(Pcna)的表达水平的变化进行了测定。纯粹触手组织实验组在8h后的Bak和Bcl-2基因表达量的比值明显低于触手连带垂唇组织实验组,这表明纯粹触手组织实验组细胞凋亡程度较低,这样看手术后离体的水螅纯粹触手组织丧失再生能力的主因并不是其细胞凋亡程度提高。水螅纯粹触手组织实验组在切割手术后Pcna基因表达量波动较小,而触手连带垂唇组织实验组Pcna基因表达量随着再生进程逐渐提高,8h后所有时段表达量均是0h时的2倍以上。
  为深入研究水螅纯粹触手组织失去再生能力的细胞和分子机理,本研究还对切割手术后24 h时的水螅纯粹触手组织及2根触手连带垂唇组织进行了比较转录组的测定和分析。纯粹的水螅触手组织与触手连带垂唇组织相比,表达上调的基因共435个,表达下调基因共1007个。所有差异表达基因共涉及79个代谢通路,以富集分析检验P值递增排序的前6个代谢通路分别是嘧啶代谢(Pyrimidine metabolism)、细胞周期(Cell cycle)、核糖体生物合成(Ribosome biogenesis)、DNA复制(DNA replication)、碱基切除修复(Base excision repair)及嘌呤代谢(Purine metabolism),其中仅核糖体生物合成代谢通路与蛋白质合成有关,其余5个通路均与核酸合成和细胞分裂相关,并且涉及这5个通路的所有差异表达基因在触手连带垂唇组织实验组中为表达上调,而在纯粹触手实验组中为表达下调。在DNA复制和碱基切除修复代谢通路中均为重要节点的增殖细胞核抗原(Pcna)基因在纯粹触手组织与触手连带垂唇组织之间表达量差异显著,触手连带垂唇组织中Pcna基因表达量是纯粹触手组织的120倍左右。纯粹水螅触手组织中Pcna基因表达水平与触手连带垂唇组织相比较显著下调,说明离体的纯粹水螅触手组织内的3种干细胞分裂指数很低或未启动细胞分裂。另外,在差异表达基因所涉及的79个代谢通路中,有15个细胞信号通路,这些信号通路绝大部分与细胞分裂增殖、细胞分化、细胞凋亡、个体发育和伤口愈合等生命活动直接相关。值得注意的是,Ras信号通路(Ras signaling pathway)和PI3K-Akt信号通路(PI3K-Aktsignaling pathway)的主要功能都是抑制细胞凋亡,而这涉及这两个信号通路的差异表达基因都在纯粹触手组织中上调,这个现象暗示纯粹触手组织细胞凋亡程度较低。
  综上所述,无论是通过实时定量荧光PCR技术对水螅纯粹触手组织和触手连带垂唇组织之间在再生进程中细胞凋亡相关基因和细胞分裂相关基因表达水平的比较研究,还是水螅纯粹触手组织和触手连带垂唇组织之间的比较转录组的研究均表明离体的纯粹触手组织中细胞凋亡程度和细胞分裂指数都较低,可能是水螅纯粹触手组织缺乏细胞凋亡和细胞分裂诱导因子;而触手连带垂唇组织中细胞凋亡程度和细胞分裂指数均较高,保证了其再生时旧结构的重组以及新生结构的形成,连在触手上的垂唇组织可能带有细胞凋亡和细胞分裂诱导因子。
[硕士论文] 张淑熠
生物学 河南师范大学 2017(学位年度)
摘要:圆线虫是马属动物体内最重要的寄生虫,严重危害宿主的健康,使其患病乃至死亡,对畜牧养殖业造成较大损失。大量使用驱虫药使盅口线虫出现抗药性,增加了患病率。马属动物寄生圆线虫的分类鉴定和系统发育学研究,对于有针对性地控制圆线虫病具有重大意义。目前,国外学者为圆线虫的研究提供了丰富的数据资料,国内对于圆线虫的研究较少,且主要是形态学方面的研究,缺乏相关分子资料。本研究以采自河南新乡地区的35种圆线虫为研究对象,经光学显微镜初步鉴定后,通过PCR技术扩增其线粒体COⅠ和nad1基因,探究马圆线虫的系统发育关系。35种圆线虫的扩增产物经测序共获得39条COⅠ序列和32条nad1序列。通过使用多种生物学软件,对所得目的片段进行了碱基组成、遗传距离等分析。采用最大似然法(ML)和贝叶斯法(BI)分别基于COⅠ和nad1序列构建系统发育树,并且构建基于COⅠ和nad1联合数据集的系统树。发现BI法更适合马圆线虫的系统发育学研究。
  本研究主要内容包括:⑴所测样品的COⅠ序列长度均为393 bp,通过多序列比对显示,其中保守位点、变异位点、简约信息位点、单核苷酸位点分别占总位点的64.63%、35.37%、29.52%、5.85%。A+T平均含量(67.3%)明显高于G+C(32.7%),表现出明显的AT碱基偏好性。从氨基酸密码子来看,第三位点的A+T平均含量最高(78.6%),第二位点(63.1%)稍高于第一位点(61.2%)。转换和颠换比值R最大的是第1密码子位点,其次是第3密码子位点,进化最快,第2密码子位点没有发生碱基替换,进化最慢。基于COⅠ序列构建的系统树显示,种内个体均聚为独立分支,对于属以上分类阶元的区分结果不够理想,但仍有一定的参考价值。⑵测序所得32条nad1序列的总长度均为354 bp,对序列进行多序列比对分析,其中保守位点218个,变异位点136个,简约信息位点115个,单核苷酸位点21个。A、C、G、T四种碱基的平均含量为25.4%、9.8%、21.7%、43.1%,A+T平均含量(68.5%)明显高于G+C(31.4%),表现出AT碱基偏倚性。就氨基酸密码子来看,A+T平均含量最高(74.2%)的是第3位点,第1位点(66.1%)和第2位点(65.1%)相差不大。三个密码子位点的转换和颠换比值R最小的为第3密码子位点,进化最快,其次是第1密码子位点,第2密码子位点的R值最大,进化速率最慢。在构建的系统树中,31种圆线虫形成两大类群:一个大类群包括圆形属、三齿属和卡拉干斯齿线虫、不等齿杯口线虫以及伊氏双齿口线虫;另一大类群包括杯冠属、杯环属、冠环属、盅口属和杯状彼得洛夫线虫、拉氏杯口线虫、双冠双冠线虫、头似辅首线虫。其中冠环属、盅口属和杯冠属的亲缘关系较近;长形杯环线虫和外射杯环线虫与杯环属的亲缘关系较远。基于COⅠ+nad1序列构建的系统发育树拓扑结构与之类似,仅支持率存在差异。采用ML法重建圆线虫的系统进化关系自展支持率较低,BI法构建的系统树支持率高,说明依据COⅠ和nad1序列进行圆线虫的系统发育分析时,BI法更加适合。⑶在河南省发现卡拉干斯齿线虫(Skrjabinodentus caragandicus),对其进行了形态学观察和分子序列测定与分析。结果表明:卡拉干斯齿线虫中等大小,口囊壁呈“S”状,前端极度膨大,厚10~12μm,后端稍薄,约4~6μm,外叶冠由8个长而宽的小叶组成,内叶冠由16~18个短而宽的小叶组成,食道漏斗发达,雄虫生殖锥长337μm,引器长245μm;所测核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)及5.8S片段长度为853 bp,其中ITS1长369 bp,ITS2长331 bp,从GC含量上看,ITS1区(47.2%)明显高于ITS2区(40.7%);线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因长度为393 bp,A、T、G、C碱基含量分别为25.2%、42.7%、21.4%、10.7%; nad1序列长354 bp,其中A、T、G、C碱基的含量分别为24.9%、43.5%、21.5%、10.2%。卡拉干斯齿线虫在河南省属首次报道,为河南省新记录种。
[硕士论文] 何玉晓
生物学、动物学 河南师范大学 2017(学位年度)
摘要:臭蛙属(Odorrana)隶属于两栖纲(Amphibia)无尾目(Anura)蛙科(Ranidae),是一类生活在山涧溪流中的两栖动物,全球已知58种,中国有36种,分布范围遍及中国秦岭以南、琉球群岛、印度东北部和东南亚地区,为亚洲特有。臭蛙属是蛙科动物中从真蛙类向水蛙类进化的重要过渡类群,重建其系统发育关系及起源和扩散历史一直是两栖类系统发育研究的热点,然而由于前期研究依据的物种数量有限、分子标记较少,臭蛙属在蛙科中的分类地位、属内物种组成、种组划分及系统发育关系存在广泛争议。本研究通过广泛野外考察和数据收集,获得臭蛙属86%样本,基于线粒体12S、16SrRNA基因和16个核基因及16053 bp大数据,运用贝叶斯法(BI法)、最大似然法(ML法)、松散分子钟模型、RASP软件S-DIVA和BBM模型,重建臭蛙属的系统发育关系、探讨臭蛙属地理分布格局、揭示其起源、分化、扩散机制。
  本研究主要内容包括:⑴臭蛙属为高支持率的单系群,分为8个支系(即A-H支系)。⑵荔浦臭蛙最早从臭蛙属中分化,为A支系。⑶沙巴臭蛙和越北臭蛙聚为一支,为B支系。⑷构成C支系的13个臭蛙属物种主要分布于云贵高原。龙胜臭蛙、宜章臭蛙和安龙臭蛙聚成的C1支和云南臭蛙种组构成的C2支,前者在臭蛙属中的地位不稳定,基于核基因序列C1支与广义花臭蛙种组形成姊妹群关系。⑸来自琉球群岛的石川臭蛙镶嵌在臭蛙属内,形成独立的一支D,但在臭蛙属内的位置未很好解决。⑹广泛分布于秦岭-大巴山-巫山一线和东南丘陵的广义花臭蛙种组与海南臭蛙、滇南臭蛙、封开臭蛙等构成高支持率的支系E,支系内物种间的关系尚未解决。⑺圆斑臭蛙、墨脱臭蛙镶嵌在广义大绿臭蛙复合体内,形成高支持率的F支系;大绿臭蛙复合体广布于横断山区、秦岭-大巴山、东南丘陵及中南半岛。⑻凹耳臭蛙与竹叶臭蛙种组聚为一支,构成高支持率的东南丘陵支系(G支系)。⑼除了石川臭蛙,分布于琉球群岛的臭蛙与台湾的台岛臭蛙和棕背臭蛙形成高支持率的岛屿物种支系(H支系)。⑽臭蛙属起源于约21.62 Ma B.P.(中新世早期),从19.25~8.69 Ma B.P.(中新世中期和后期)发生了快速分化,A支到H支依次形成。⑾各支系内部物种的分化事件主要发生在第四纪更新世以后(2.6 Ma),占本研究50个臭蛙物种的60%;物种分化主要发生在云贵高原(10个)、其次在东南丘陵(9个),台湾和琉球群岛的7个臭蛙中的5个物种在2.6~1.6 Ma B.P.分化。⑿臭蛙属分为8个支系。⒀臭蛙属起源于新近纪中新世早期,自中新世中期至后期8个支系依次分化,在更新世臭蛙属物种经历了一个快速成种和分化时期。⒁云贵高原是臭蛙属的起源中心,受青藏高原持续隆升的影响,向东南丘陵、台湾和琉球群岛扩散;横断山的形成,为臭蛙向北扩散至喜马拉雅南缘、秦岭-大巴山-巫山一线,向南扩散至中南半岛建立了通道。⒂青藏高原隆起、第四纪冰期与间冰期气候波动及冰期避难所的形成,导致更新世臭蛙属物种快速分化。
[硕士论文] 张汾
生态学 广西师范大学 2017(学位年度)
摘要:本文对桂林漓江流域的洞穴进行调查,以洞穴马陆作为研究对象,对其类群、数量、分布状况及与所在环境进行了初步调查分析。共调查31个洞穴,在其中的17个洞穴中采到马陆,共计129只,分属于3目5科共15个类群。其中雌性105只,雄性14只,分别占81.40%和18.60%。
  酒精保存马陆标本形状有蜷曲呈齿轮形、圆球形、蠕虫状以及扁平带状;颜色有白、浅褐、棕褐、深褐、黑红、粉红不等。洞穴马陆体长介于8.94-112.94mm之间,头宽为0.81-5.03mm,触角反转最多可达第7体节,颈板宽为0.60-6.43mm,触角长度为0.92-8.70mm,步足数量为14-114对,步足长度为0.70-8.33mm,躯干中间环节直径为0.85-7.00mm,侧突形状有鹿角状、乳突状、刺棘状、蝶翼状、鸟翅状等
  洞穴马陆所处光带的温度在15℃-26.1℃;湿度在52.7%-93.1%。水平分布方面,15只分布于有光带,占11.63%;114只分布于黑暗带,占88.37%;弱光带未记录到马陆个体。垂直分布上,1只采于洞顶,占0.78%;45只采集于洞壁,34.88%;83只采于洞底,占64.34%。马陆具体位置环节方面,7只所在位置干燥,占标5.43%;122只所在位置湿润,占94.57%;微生境有土壤、岩石、木板、蝙蝠粪便及动物尸体,70只采于岩石表面,54.26占%;42只采于土壤表面,占32.56%;剩余的采于木板、蝙蝠粪及动物尸骸,数量各为7只、7只及3只,各占5.43%、5.43%和2.33%。
  根据研究结果,在水平分布上,马陆更倾向在黑暗带活动,光照可能是造成洞穴马陆水平分布格局的主要因子;垂直分布方面,更多马陆选择在洞底活动,可能与马陆个体大小及食物丰富程度有关;洞穴马陆数量在一定程度上与其所在光带温度有关,即一定范围内温度越高,数量越多;湿润环境对马陆更具吸引力,马陆数量与湿度的Spearman相关系数为0.602,呈显著相关。在微生境选择方面,马陆在木板、蝙蝠粪便及动物尸体上的呈集群状态,但主要仍分布于岩石。土壤相关元素含量与马陆数量的相关性不显著,与Cu呈负相关。
[硕士论文] 陈红苗
动物学 山西大学 2017(学位年度)
摘要:为了研究镉胁迫对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)的生殖毒性作用,以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对其氧化损伤是否具有缓解作用,本学位论文采用急性和慢性镉胁迫相结合的方法进行了设计。急性组设置了对照组、7.25和14.5 mg/L镉浓度组,分别处理3 d、5 d和7 d;慢性组设置了对照组、0.725和1.45 mg/L镉浓度组,分别处理7 d、14 d和28 d。NAC实验则设置了对照组、镉(0.725 mg/L)单独作用组以及镉(0.725 mg/L)和NAC(0.1、0.2、0.4 g/L)联合作用组,分别处理7 d、14 d和28 d。
  实验内容包括三部分:
  1.镉对河南华溪蟹卵巢的影响研究了急性与慢性胁迫下,镉在河南华溪蟹卵巢组织的积累;同时,对卵巢超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GPx)活性,脂质过氧化水平(malonyldialdehyde, MDA含量)和金属硫蛋白(metallothionein, MT)的表达水平进行了检测。结果显示,卵巢组织的镉含量在慢性和急性条件下显著增加,均具有浓度效应;慢性条件还具有明显的时间效应。慢性条件下,SOD、CAT和GPx活性在7 d或14 d开始下降,在14和28 d显著升高。MDA和MT含量整体呈现增加趋势。但急性条件下,抗氧化酶活性、MDA含量和MT水平均无显著性变化。
  2.镉对河南华溪蟹副性腺的影响研究了镉在河南华溪蟹副性腺组织的积累,镉对副性腺组织细胞显微与亚显微结构改变,抗氧化酶SOD、CAT和GPx活性,MDA含量,蛋白质羰基化(PCO含量)和DNA-蛋白质交联(DPC)的影响。结果显示,镉在副性腺组织中的积累显著或极显著高于对照组,且随着时间的延长和浓度的增加,副性腺组织镉的积累逐渐升高。副性腺组织细胞结构发生了不同程度的改变,主要表现在:上皮细胞与基膜分离甚至破裂导致细胞核丢失。镉浓度0.725 mg/L和1.45 mg/L处理28 d,基膜结构发生明显改变,上皮细胞和基膜之间出现较大空腔,上皮细胞细胞核变形。电镜结果显示,细胞器结构改变,例如染色质凝集固缩,核膜消失;线粒体嵴断裂,出现空泡化;粗面内质网和高尔基体肿胀形状不规则,髓样体增多。SOD和GPx活性先升后降,而CAT的活性则随着镉浓度的增加逐渐升高。PCO含量和DPC均随着时间和浓度的增加而显著升高。MDA含量也呈明显的升高趋势。但在28 d有所下降。
  3. NAC对河南华溪蟹卵巢镉氧化损伤的影响研究了镉在河南华溪蟹卵巢组织中的含量,SOD、CAT和GPx活性,MDA含量和卵巢组织细胞结构的变化。结果显示,镉单独作用下,卵巢组织镉含量和MDA含量显著高于对照组;SOD、CAT和GPx活性在不同时间段显著升高;组织显微结构随着时间的延长而损伤严重。NAC和镉联合作用下,卵巢组织镉含量在14 d和28 d显著降低;SOD活性于14 d显著降低;CAT、GPx活性和MDA含量在28 d均降低,并逐渐恢复到正常水平;随着时间的延长和NAC浓度的增加,卵巢组织细胞损伤出现改善,核膜逐渐完整,仅有少量染色质凝集,细胞内及细胞核内空泡化现象基本消失,卵巢组织结构趋于正常化。NAC对镉诱导河南华溪蟹副性腺氧化损伤的缓解作用有待于进一步研究。
  通过实验研究得出以下结论:
  (1)急性和慢性镉暴露均可导致镉在河南华溪蟹卵巢组织中积累,但只有慢性镉暴露会引起卵巢的氧化应激反应,对卵巢损伤较大,损伤河南华溪蟹雌蟹的生殖功能。
  (2)慢性镉胁迫对河南华溪蟹副性腺组织特别是管壁上皮细胞层造成了损伤,并且对抗氧化系统产生了氧化损伤。使河南华溪蟹雄蟹正常的生殖功能受到影响。
  (3)作为重要的抗氧化剂,NAC可以有效地缓解镉对河南华溪蟹卵巢的氧化损伤,进一步证明氧化损伤是镉对蟹体毒性作用的重要机制之一。同时也说明NAC对镉污染的动物具有保护作用。
[硕士论文] 鲍淼
海洋生物学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:由于气候变化、人类活动的加剧,全球生物多样性和生态环境遭到较为严重的破坏,人们的环保意识与保护生物多样性的要求越来越高,保护生物学者需要及时更新专业知识与技能,用最前沿的技术与专业的素养为管理者制定保护措施、做管理决策提供更多的帮助。珍稀濒危野生动物的保护是保护生物学中最重要的内容之一,中华白海豚作为近岸海洋生态系统的旗舰濒危物种,又是国家一级重点保护动物,对其开展的保护生物学研究具有重要意义。一个物种灭绝的风险与其栖息地的大小和质量有关,生态学和保护生物学的一个关键问题是确定物种如何在空间中分布,并保护其可能的潜在栖息地。尽管过去二十多年来我国对中华白海豚实施了相当多的研究,获得了丰富的种群生物基线信息,但是目前我们对中华白海豚分布范围的了解仍然局限在少数区域。由于传统生态考察的局限性,我国沿海仍有许多未经考察的区域,这使我们所得到的基线信息存在着缺口,包括宏观尺度下中华白海豚分布区域以及栖息地结构的信息缺口,关于中华白海豚分布与环境特征的关联性的信息缺口,以及关于核心(关键)栖息地环境特征的缺口,面对这三个主要的信息缺口,我们有必要用新的理念与技术手段进行研究,填补基线信息缺口,进而为保护中华白海豚及其栖息地提供决策建议。
  本研究基于汕头与厦门实地考察的中华白海豚出现位点,使用叶绿素浓度、海水表面温度与海水深度3个环境变量的遥感数据,利用物种分布模型中的最大熵值模型预测我国闽粤沿海中华白海豚潜在栖息地的分布,预测结果如下:
  1、我国闽粤沿海中华白海豚栖息地的总面积约为24963.91km2,核心栖息地(Likely core habitats,LCH)面积约为14525.38km2,潜在栖息地(Likely potential habitats,LPH)面积约为10438.53km2。
  2、我国闽粤沿海中华白海豚的栖息地呈现出不连续的岛状结构,在雷州湾,珠江口,汕头以及厦门等水域具有较大的栖息地面积,在这些区域之间存在小型不连续分布的潜在栖息地,如惠东、汕尾、陆丰等沿海的港湾水域。
  3、关键栖息地的主要特征是高叶绿素浓度与浅的海水深度,即我国闽粤沿海的中华白海豚主要分布在具有较高叶绿素浓度(3.5~4.5mg/m3为可能的阈值值域)和水深小于十米的浅水沿岸海域,而海水表面温度对其分布的影响甚微。
  以上结果暗示:
  1、中华白海豚在我国闽粤沿海可能是不连续分布的。从栖息地面积来看,除湛江与珠江口水域可能存在数量庞大的群体外,其它地区则可能存在由许多小群体所形成的“集合种群(metapopulation)”,然而不同水域间是否存在个体交流仍然有待进一步研究证实。
  2、在宏观尺度下,中华白海豚分布与叶绿素浓度和水深有关,叶绿素浓度作为海洋基础生产力的指标,与水深因子协同影响饵料鱼的分布与获取,这暗示着食物资源的丰富度与可获得度,可能是影响中华白海豚分布的最主要因素。
  本研究在一定程度上弥补了传统生态考察的不足,提供了一种利用有限信息建立较为完整的基线信息并避免信息缺口的方法与思路,虽然模型预测从来都不能代替实地考察,但可以为之后进一步的研究指明方向:
  1、加强不同水域关键栖息地之间被预测为潜在栖息地水域的考察,确定其栖息现状,若有白海豚出现则可以为填补基线信息缺口提供更多的数据支持,若确定没有白海豚出现则可以研究在基本环境条件具备的前提下没有白海豚出现的原因,为潜在栖息地之间廊道的修复与现有栖息地的保护提供建议。
  2、我们现有的数据很可能低估了我国中华白海豚的分布范围,现有的保护区不足以完全保护中华白海豚的潜在栖息地,保护潜在栖息地中具有高生产力的生物多样性热点区域应当是优先考虑的保护原则。
  3、未来可以考虑利用更多其它区域的实地考察数据做更多更精细的模型预测,用分辨率更高、时间尺度更精细、片段更多的预测结果来描绘出更加精确的潜在栖息地分布图,为更合理地设置保护区提供支持。
[硕士论文] 杨文志
生物化学与分子生物学 河北农业大学 2017(学位年度)
摘要:基因组印记是一种表观遗传现象,是指基因组中的部分基因能够以依赖亲本来源的方式实现单等位基因表达。印记基因通常成簇存在,并且在物种间相对保守。Dlk1-Dio3印记域在细胞分化和胚胎发育过程中发挥着重要作用,该区域内印记长非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)的表达与诱导全功能干细胞的发育潜能有关。
  长非编码RNA是指长度大于200bp的一类非编码蛋白的RNA,因其在基因组中的含量巨大及具有重要的生物学功能而引起了学术界的广泛关注。根据长非编码RNA在基因组中的位置,可以将其分为反义lncRNA,基因间lncRNA,增强子lncRNA和内元lncRNA。最近,在小鼠的Dlk1-Dio3印记域内发现了一些位于基因间和基因内元的lncRNA,然而牛Dlk1-Dio3印记区域内的lncRNA研究还很少。
  为了鉴别牛Dlk1-Dio3印记区域内的长非编码RNA,本研究选取位于Meg8基因内元上及Meg8与Meg9基因间的4组EST序列,经RT-PCR扩增,得到3个内元lncRNA和1个基因间lncRNA,分别命名为Meg8-IT1,Meg8-IT2,Meg8-IT3和Linc24062。分析这4个lncRNA基因在成年牛8个组织(心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、皮下脂肪和大脑)中的表达,发现其在被检测的组织中均表达。利用基于SNP的PCR产物直接测序法,发现Meg8-IT1,Meg8-IT2,Meg8-IT3和Linc24062在牛被检测组织中均为单等位基因表达,说明它们在牛中是印记的。
  Mico1和Mico1os基因是在鼠Dlk1-Dio3印记域内被发现的两个母源表达的印记lncRNA。在此研究中,首先用RT-PCR的方法获得牛Mico1和Mico1os基因的cDNA序列,并通过链特异性RT-PCR确定两个基因的转录方向,证明两者是来自同一区段的双向转录物。检测Mico1和Mico1os基因在来自围产期死亡的体细胞核移植牛和自然繁殖牛的组织中的表达情况,发现在自然繁殖牛6个被检测的组织(心、肝、脾、肺、肾和大脑)中,Mico1和Mico1os基因均呈现单等位基因表达,而在体细胞核移植牛组织中发现多种异常的表达模式。为揭示DNA甲基化是否调控Mico1和Mico1os基因的单等位基因表达,针对Mico1和Mico1os基因正常和异常表达的组织,选取Mico1和Mico1os基因内部和上游的6个区域进行甲基化分析。结果显示在自然繁殖牛和体细胞核移植牛的组织中,被检测的6个区段均呈现高甲基化状态,推测DNA甲基化修饰可能未参与调控Mico1和Mico1os基因的单等位表达。在Mico1和Mico1os基因异常表达的体细胞核移植牛组织中,3个下游已知的印记基因(Gtl2,Meg9和Dio3)均呈现正常单等位基因表达,表明Mico1和Mico1os基因紊乱并未影响Dlk1-Dio3印记域内下游基因Gtl2,Meg9和Dio3的印记表达。
[硕士论文] 刘淑琰
渔业 河南师范大学 2017(学位年度)
摘要:鲇(Silurus asotus),属鲇形目(Siluriformes)、鲇科(Siluridae)、鲇属(Silurus)。以鲇仔鱼、稚鱼、幼鱼和成熟雄性鲇为对象,系统研究了鲇性腺发生及精巢分化、精巢发育、成熟精巢周期性变化、精子结构和精子活力特征等项内容。
  本研究主要内容包括:⑴鲇性腺的发生始于鲇出膜后3日龄,生殖嵴的出现为起始标志。性腺分化发生在鲇18日龄~40日龄:卵巢分化开始于鲇18日龄,标志为卵巢腔的形成,卵巢分化完成于鲇24日龄,此时卵巢内出现大量初级卵母细胞;精巢分化于30日龄,标志为输精管的出现;而精巢分化完成于鲇40日龄,标志为精巢内出现大量初级精母细胞。⑵根据精巢形态特征,结合精子发生的组织学和细胞学特点,将鲇精巢从分化后至发育成熟分为6个时期:Ⅰ期精巢(2月龄)为1对细丝,透明或淡黄色,长≦2mm,重≦0.03g,组织切片可见少量精原细胞分散于间质细胞群间;Ⅱ期精巢(3月龄~5月龄)呈”V”形,半透明或白色,表面光滑,无明显血管,长≦35mm,重0.02 g~0.12 g,组织切片可见精原细胞增多;Ⅲ期精巢(6月龄~8月龄)边缘凹凸不平,稍皱褶,少量毛细血管,呈淡粉色,长40mm~62mm,重1.0g~3.73g,组织切片中可见精母细胞;Ⅳ期精巢(9月龄~11月龄)呈分枝不明显的树枝状,白色或淡红色,表面褶皱明显,血管粗而多,长81mm~109 mm,重1.8g~4.8g,组织切片可见精子细胞;Ⅴ期精巢,已成熟,分枝明显,白色或淡红色,长89 mm~117 mm,重2.34 g~5.0 g,组织切片可见大量成熟精子;Ⅵ期精巢为排精后的精巢,其体积缩小,血管收缩,组织切片可见少量发育不成熟的精子。⑶春季(2月~4月)精巢呈淡粉色,不饱满,血管不明显,处于Ⅲ~Ⅳ期。夏季(5月~8月)精巢呈白色或淡红色,血管显著,成熟系数为1.24%~1.83%,处于Ⅳ~Ⅴ期;7月的精巢已充分成熟,即处于第Ⅴ期,可进行人工催产。秋季(9月~11月)鲇精巢呈白色或米黄色;鲇已经排过精子,精巢明显萎缩,成熟系数下降至0.75%,处于Ⅲ期、Ⅳ期和Ⅵ期。冬季(12月~翌年2月)鲇精巢呈米黄色,其内精子退化。⑷鲇精巢分为白膜和实质两部分,实质主要由小叶间质、精小叶、贮精囊和输出管构成。小叶间质由间质细胞、微血管和纤维结缔组织组成。精小叶呈不规则的管状结构,其壁分布多个精小囊;精小囊是生精细胞的发源地。贮精囊呈蜂窝状,内有嵴和腔隙,为成熟精子的贮存地。⑸采用扫描电镜和透射电镜技术观察:鲇精子由头和尾两部分组成,无颈部。精子头部近球形,直径1.85μm~2.51μm;头部无顶体,内有高度致密的细胞核染色体;头部后方凹陷形成植入窝,内有近端中心粒和远端中心粒;细胞核后方与质膜间的空隙(称袖套)内富含细胞质和线粒体、囊泡等细胞器。尾部细长,无主段、尾段之分,长44.3μm~50.7μm;横切面呈圆形,直径0.269μm~0.308μm;透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,无侧鳍;轴丝为典型的“9+2”结构。⑹观察不同pH、水温下鲇精子的快速运动时长和存活时长,结果表明:精子活力的适宜pH为7.0~8.5,pH8.0时,精子活力最强;精子活力的适宜温度为25℃~28℃,28℃时,精子活力最强。
[硕士论文] 杨峰
水产学、水产养殖学 河南师范大学 2017(学位年度)
摘要:在目前集约化水产养殖模式下,草鱼(Ctenopharyngodon idella)作为我国产量最大的经济鱼类,在实际养殖过程中,特别容易出现肝脏脂肪过度蓄积进而导致脂质代谢紊乱等症状,免疫力也下降,严重者则表现为脂肪肝。因此,如何提高鱼类肝脏对脂肪利用能力及肝脂质蓄积调控的研究已显得非常迫切和必要。近年来,关于microRNA(miRNA)的研究越来越深入。研究显示miRNA参与陆上动物的胆固醇、甘油三酯和脂肪酸代谢等,因而在脂质代谢调控中发挥重要作用。目前,有关miRNA调控鱼类脂质代谢的研究还不深入,相关机理还不明晰。本研究主要以草鱼和草鱼肝细胞系(L8824)为实验材料,采用基因克隆、基因过表达及干扰、qRT-PCR、酶活性测定及腹腔注射等营养学、生物化学、分子生物学和细胞生物学相关技术与方法,在活体与细胞水平上较系统地研究了miR-33/122调控草鱼肝脏脂质代谢的作用及初步机理。研究结果为丰富鱼类脂质代谢调控机理提供了基础资料,为防治鱼类营养性脂肪肝等代谢性疾病及提高机体免疫力提供了思路及理论基础,进而为促进鱼类健康生长提供了科学依据。
  本研究主要内容包括:⑴采用RT-PCR技术,克隆了miR-33的前体序列,并进行了同源性比对和组织分布规律分析。结果显示,miR-33的前体长度为65bp,和其它物种的同源性较高;构建系统进化发育树也显示草鱼miR-33和鱼类miR-33的进化关系最近;组织分布规律显示在脑、眼睛、肝脏、肌肉和肠道中表达量较高,而在肾脏、脾脏、心脏和脂肪中的表达量较低。⑵采用miR-33 mimic(miR-33模拟物)转染草鱼肝细胞L8824的方法,开展了miR-33的功能研究。实验设置三个组,空白对照组、阴性对照组和miR-33 mimic转染组,处理24h后收集细胞。采用油红O染色提取法检测了L8824细胞中甘油三酯(TG)含量,qRT-PCR技术检测了与脂质代谢相关基因的mRNA表达水平。结果显示,相对于空白对照组和阴性对照组,miR-33 mimic转染细胞24h使miR-33超表达后,显著增加了细胞中TG含量(P<0.05),且和脂质合成有关的转录因子(PPARγ,SREBP-1c)的表达水平显著增加(P<0.05)。为进一步验证miR-33在肝脂质代谢中的功能,本研究亦在活体水平上进行了腹腔注射miR-33 antagomir(miR-33拮抗剂)实验。实验共设置三个组,空白对照组,注射0.65%生理盐水组和注射miR-33 antagomir组(12.5 nmol/尾.次)。实验采用连续注射的方法,即在每天上午9:00注射1次,连续注射3天。在实验进行的第4天上午9:00进行取样。实验采用全自动生化分析仪对草鱼血清相关生化指标进行了分析,qRT-PCR技术对脂质代谢和免疫相关基因转录水平进行了检测。结果显示,注射miR-33 antagomir组比空白对照组和生理盐水组血液中的总胆固醇和甘油三酯含量显著减少(P<0.05);进一步在基因转录水平的研究发现,和脂质合成有关的转录因子(PPARγ,SREBP-1c)的表达水平显著降低(P<0.05);和免疫有关的促炎因子(TNFα,IL-1β,IL-6和NF-κB)水平降低(P<0.05),而抗炎因子(TGF-β1和IL-10)的表达量升高(P<0.05)。以上结果表明miR-33通过调节脂代谢相关基因和免疫相关因子等的表达在草鱼肝脏脂肪代谢紊乱引起的脂肪肝(炎)过程中发挥重要作用。这一工作也是国际上对鱼类miR-33调节脂质代谢机制的首次阐述。⑶采用和miR-33实验相同的方法,本节实验首先获得了miR-122前体基因序列。结果显示,miR-122前体序列长度为99bp。和其它物种的同源性较高,说明miR-122具有很高的保守性;系统进化关系分析也显示草鱼miR-122和斑马鱼miR-122的进化关系最近;而组织分布规律则说明miR-122仅在草鱼肝脏中特异性高表达,而在其它组织中尚未检测到其表达。采用在肝细胞L8824中转染miR-122agomir(miR-122激动剂)方法来研究miR-122的功能。实验分组、实验时间及实验方法等都和miR-33的实验相同。结果显示,和空白对照组及阴性对照组相比,转染miR-122激动剂后,miR-122在L8824细胞中的相对含量明显增加(P<0.05),TG含量显著升高(P<0.05),表明超表达miR-122后促进了脂肪的合成。进一步检测发现,与脂质合成有关mRNA的表达水平也显著增加(FAS,ACC,PPARγ);为进一步研究miR-122的功能,本节研究在活体水平也开展了腹腔注射实验。分组及注射时间和miR-33的实验相同,只是注射剂量变为了5 nmol。结果显示,注射miR-122激动剂后,草鱼肝脏中miR-122的含量明显增加(P<0.05);进一步在基因表达水平的研究显示,注射miR-122 agomirs后,PPARγ,SREBP-1c,ACC,FAS和H-FABP等和脂质合成有关mRNA的表达量显著升高(P<0.05),说明miR-122促进脂肪合成的作用是通过调节脂肪合成基因进行的;检测免疫有关基因的转录水平发现,促炎因子TNFα,IL-6,IL-1β的相对表达量出现显著地升高(P<0.05),而抗炎因子IL-10和TGF-β1的相对丰度则明显降低(P<0.05),表明miR-122在促进肝脏脂肪过量增加的基础上可能进一步降低了其免疫力。⑷开展了GSPE对肝脏脂质代谢及miR-33/122影响的实验。在细胞水平研究GSPE对肝脏脂质代谢调控的作用及对相关基因和miR-33/122表达的影响;在活体水平上进一步验证GSPE的上述作用。在细胞水平上,首先利用不同浓度的油酸构建草鱼脂肪肝细胞模型。然后设置两个实验组,即添加GSPE组和未添加GSPE组。取样的时间设置为0h、1h和3h。实验结束后检测细胞中脂肪含量的变化、miR-33/122的表达水平以及脂质代谢合成相关基因的mRNA水平。在活体水平上,一共分三组,即空白对照组,灌喂生理盐水组和灌喂GSPE组(250mg/Kg),分别在0h、1h和3h取样。检测血清生理生化指标、miR-33和miR-122的表达变化、脂质代谢和免疫相关基因mRNA表达水平的变化。结果显示,添加GSPE后不论在活体还是细胞水平TG含量都显著降低(P<0.05),miR-33和miR-122的表达水平也都受到抑制(P<0.05);检测脂代谢相关基因的表达水平发现,灌喂GSPE1h时,脂肪分解相关的基因(CPT-1,ATGL及PPARα)表达量显著升高(P<0.05),而脂合成及转运相关的基因PPARγ及H-FABP表达则显著降低(P<0.05);当灌喂GSPE3h时,更多脂肪合成基因的表达受到抑制(SREBP-1c,PPARγ,ACC,FAS和H-FABP);对免疫相关基因mRNA表达的检测发现,在脂肪肝细胞中添加GSPE1h时,促炎因子TNFα,IL-6,IL-1β和NF-κB的表达量都显著下降(P<0.05),而抑炎因子IL-10和TGF-β1的表达显著上升(P<0.05),表明GSPE能够通过调节脂肪肝细胞相关免疫基因的表达而提高机体免疫力的作用,且这种作用是快速和短暂的,因为在添加GSPE3h时,促炎因子TNFα,IL-6,IL-1β和NF-κ3以及抑制炎症因子的表达水平都发生了反转。而在活体水平上,GSPE在灌喂1h时除显著降低促炎因子IL-1β外,对免疫相关的其他基因没有显著性影响;而在灌喂3h时,则显著降低了促炎因子TNFα,IL-6,IL-1β的转录水平(P<0.05),而抑制炎症的因子IL-10显著上升(P<0.05),表明GSPE在活体水平需要较长的时间才能发挥作用,也可能是因为机体内慢性代偿反应的缘故。结果表明, GSPE能改善鱼类的肝脂肪代谢紊乱症状,这可能和GSPE能抑制miR-33和miR-122的表达进而调节一系列脂代谢和免疫相关基因有关。研究结果为在生产实践中改善饲料配方进而预防脂肪肝(炎)等代谢性疾病提供了理论基础。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部