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[硕士论文] 肖荣
生物学 新疆大学 2014(学位年度)
摘要:荒漠昆虫小胸鳖甲(Microdera punctipennis)是新疆准噶尔盆地的拟步甲科特有种,属于避冻型昆虫,对小胸鳖甲低温转录组数据库分析发现一个超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因上调表达,该抗氧化酶除了具有抗氧化防御作用外,是否能在低温环境胁迫时发挥作用,值得深入研究。
  本研究以小胸鳖甲cDNA为模板,克隆得到MpSOD基因,利用RT-PCR进行低温表达谱分析,并利用大肠杆菌和酵母表达系统,对MpSOD蛋白抗冻和抗氧化的功能进行验证,利用过氧化氢敏感性鉴定了MpSOD的类型,免疫组化分析确证了MpSOD在小胸鳖甲幼虫脂肪体中的表达,具体结果如下:
  1、小胸鳖甲超氧化物歧化酶基因的克隆与低温表达谱。以小胸鳖甲cDNA为模板克隆获得超氧化物歧化酶基因,MpSOD。生物信息学分析表明,MpSOD包含600bp的开放阅读框,编码199个氨基酸,理论分子量为22kD,包含FeSOD和MnSOD保守的N端FGSGWAW域和C端DVWEHAYY域,将其编码蛋白命名为MpSOD。实时荧光定量PCR结果显示,在4℃与-4℃冷胁迫时,MpSOD的mRNA水平均呈现上升-下降-上升的应激反应趋势,其中4℃处理3h和11h后,MpSOD的mRNA水平分别为对照组的48.8倍和69.2倍;-4℃胁迫7h和11h后,为对照组的7.5倍和7.8倍,表明MpSOD是冷响应基因,对小胸鳖甲应对低温胁迫可能发挥作用。
  2、MpSOD的原核表达与抗氧化抗低温功能验证。将MpSOD构建至pET32a载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选出阳性克隆BL21(pET32a-MpSOD),优化诱导表达条件,获得可溶性蛋白。Western blot印迹显示,重组蛋白Trx-His-MpSOD正确表达。利用浸蘸H2O2的纸片扩散实验验证MpSOD蛋白的抗氧化功能,测量抑菌圈直径结果显示,对照菌BL21(pET32a)的抑菌圈直径大于实验菌BL21(pET32a-MpSOD)。10mM和40mM的H2O2处理后,对照菌的抑菌圈直径分别是实验菌的1.4倍和1.2倍。生长曲线法检测重组菌的氧化胁迫耐受性,结果显示在50 mM,100 mM,200 mM的H2O2处理后,实验菌的生长优于对照菌,表明实验菌中异源表达的MpSOD有助于细胞抵抗H2O2的危害。酶活性测定结果表明,实验菌的超氧化物歧化酶酶活性是对照菌的1.6倍,说明融合蛋白具有超氧化物歧化酶活性。实验菌与对照菌在-4℃、-7℃、-18℃的生长曲线结果显示,实验菌的生长优于对照菌。-7℃胁迫处理后观察菌落形态,结果显示实验菌的菌落密度均大于对照菌,说明Trx-His-MpSOD可以赋予大肠杆菌BL21(pET32a-MpSOD)抗冻性。
  3、利用真核表达系统进行MpSOD蛋白的功能研究。将MpSOD构建至pYES2载体上并转化酿酒酵母(INVSCⅠ),获得实验菌 INVSCⅠ(pYES2-MpSOD),以载体pYES2的转化菌INVSCⅠ(pYES2)作为对照菌,利用半乳糖诱导外源蛋白MpSOD的表达。氧化胁迫实验表明,添加5mM H2O2的培养基中,对照菌生长迟缓,而实验菌所受影响较小;-7℃低温胁迫实验菌与对照菌的生长曲线表明,实验菌的生长优于对照菌;菌落计数结果显示,-7℃胁迫10d实验菌是对照菌的1.3倍,胁迫17d是对照菌的1.7倍,胁迫20d后对照菌几乎停止生长,实验菌是对照菌的3倍,表明酵母表达的MpSOD可提高其胁迫耐受性。
  采用核酸免疫小鼠制备MpSOD蛋白的特异性抗体,获得MpSOD的小鼠抗血清,效价为1:50000,用此抗体进行Western blot检测INVScⅠ(pYES2-SOD)裂解液,表明酵母中的外源蛋白已正确表达。酶活性测定表明,实验菌的过超氧化物歧化酶活性是对照菌的2.4倍(P<0.05)。
  4、SOD同工酶FeSOD和MnSOD的鉴定。用大肠杆菌和酵母表达的SOD分别进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,利用MnSOD对H2O2不敏感而FeSOD敏感的特性,在染液中添加H2O2,结果显示,原核和真核表达的MpSOD都出现了清晰透明的SOD活性条带,说明MpSOD蛋白对H2O2不敏感,可判定为MnSOD。提取小胸鳖甲幼虫的总蛋白,用制备的抗MpSOD血清进行Western印迹检测,结果显示在44kD处出现了特异的抗原-抗体免疫反应条带,其大小约为预期条带的2倍,表明该抗体能与小胸鳖甲的MpSOD蛋白特异性结合。免疫组化结果显示,小胸鳖甲脂肪体内存在大量MpSOD蛋白。
[硕士论文] 王梦龙
特种经济动物饲养 江苏科技大学 2014(学位年度)
摘要:小金蝠蛾(Thitarodes xiaojinensis)幼虫是我国名贵中药冬虫夏草的寄主昆虫,主要生活于青藏高原及其周边的高海拔、高寒地区,低温适应性强,但在室温下(25-27℃)不能正常存活。由于虫草价格不断上涨、过度采挖,导致虫草资源日益紧缩;另外,随着全球气候变暖,寄主昆虫的生境温度改变,这对虫草资源也造成了一定的影响。本文针对小金蝠蛾幼虫室温下不能正常存活这一问题,就其生理生化和分子机制进行研究。
  首先,通过对虫体的血淋巴中的氧化损伤标志物——丙二醛(Malonalde hyde, MDA)的测定,发现27℃胁迫后,血淋巴中的MDA含量是对照组的将近2倍,说明虫体内氧化损伤程度严重,大量的膜脂结构发生过氧化,确定了高温胁迫下氧化损伤的存在。对血淋巴中保护酶(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶)进行了测定,发现只有过氧化物酶的相对酶活力升高显著,但超氧化物歧化酶以及过氧化氢酶的相对酶活力均没有变化,而在活性氧的清除中,超氧化物歧化酶属于关键环节,可催化超氧阴离子生成过氧化氢,然后由过氧化物酶或过氧化氢酶进一步降解过氧化氢。可见27℃胁迫后,虫体血淋巴中的保护酶相对酶活力整体水平较低,不足以清除过多的活性氧,导致活性氧在体内积累造成氧化损伤。
  其次,从结构上对27℃胁迫后的虫体进行研究,发现其中肠细胞的线粒体出现肿胀、线粒体膜破裂,线粒体内嵴排列混乱,说明小金蝠蛾幼虫在27℃胁迫下,线粒体受到了氧化损伤。
  利用气相色谱-质谱联用技术,对血淋巴及脂肪体进行了代谢组学分析,结果显示血淋巴与脂肪体中的还原性物质,如还原性糖类、氨基酸类含量显著下降,其中血淋巴中胆固醇含量显著性上升,而有研究表明胆固醇与诱导活性氧的生成有一定的关联;通过对磷酸戊糖途径多种物质含量变化的分析,得出磷酸戊糖途径整体代谢水平的变化情况,结果显示,在血淋巴中该代谢途径是增强的,说明该途径为机体提供了大量的还原力NADPH,而酶活测定表明NADPH氧化酶活性是显著性升高的,代谢组数据显示,胆固醇含量显著升高,胆固醇可诱导NADPH氧化酶催化NADPH瞬时生成大量活性氧,所以推测NADPH的升高恰恰得到了一个相反的效果;脂肪体中该途径则是减弱的,说明脂肪体中的还原力水平较低。27℃处理后,虫体内的还原性物质水平低下,虽然血淋巴中磷酸戊糖途径代谢水平提高,提供较多的还原力NADPH,但是由于NADPH氧化酶活力升高,活性氧大量声称,活性氧代谢平衡难以维持,造成氧化损伤。
[硕士论文] 郭慧芳
昆虫学 南京农业大学 1998(学位年度)
摘要:为了解高温对棉铃虫繁殖的生理学效应,观察了23、28、33、36℃四种温度下试虫繁殖力,以确定繁殖的最适温度和抑制高温;用抑制温度分别处理不同性别和虫态,探讨高温影响繁殖力的敏感性差异;运用解剖、组织化学和生化分析等方法,研究了高温抑制铃虫繁殖的生理机制.高温影响真核、无核精子的形成过程,不影响其发生过程.作用的敏感期为真核、无核精细胞囊期,阻断真核精子形成的虫态为6龄幼虫和蛹前期,阻断无核精子形成的虫态为全蛹期.高温抑制了精细胞囊的伸长,导致了精子束头部的缩短,鞭毛异常卷曲.成虫期高温处理抑制了精包腺的分泌功能,分泌物中蛋白含量减少,而蛹期高温处理不影响精包腺分泌蛋白质量.高温能加快雄性附腺和精包腺的生长,但不影响最大生长量,高温也不影响雄性附腺分泌蛋白质量和种类.
[硕士论文] 董亚敏
昆虫学 西南大学;西南农业大学 2001(学位年度)
摘要:以栖居于活树木上的危害严重、分布广泛的星天牛Anoplophorachinensis幼虫为试验材料,对其消化木聚糖的机制及肠道木聚糖酶进行了分析和研究.以木聚糖、微晶纤维素(CM)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和稻草粉作碳源液体培养纤维单胞菌XY1,其产生的木聚糖酶在木聚糖培养基中酶活最高.该菌也降解CMC-Na,其产生的内切-β-1,4-葡聚糖酶(C<,x>酶)活性也是在木聚糖培养基中最高.在CM、稻草粉和CMC-Na培养基中,木聚糖酶和C<,x>酶酶活则显著偏低.经丙酮沉淀、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、制备PAGE从星天牛幼虫肠道中纯化出一种木聚糖酶,纯化收率5.80﹪.该酶的分子量为25kD,等电点约为4.0.酶学特性测定显示,该酶的比活为4.45U/mg,最适作用温度和最适pH分别为50℃和pH5.4;酶活在pH3.0-7.8之间稳定;50℃处理2h后,该酶仍有60﹪的残余酶活;该酶具有C<,x>酶交叉活性;Hg<'2+>、MnO<,4><'->、SDS、Cu<'2+>、Zn<'2+>、Ag<'+>、Urea、Pb<'2+>、Mn<'2+>强烈抑制该酶活性;在pH4.4、50℃条件下,以山毛榉木聚为底物,其K<,m>、V<,max>值分别为2.47mg/ml、0.6μmol/min/ml.从以上试验结果可以看出,星天牛幼虫主要利用中肠组织分泌的内源性木聚糖酶消化利用食物中的木聚糖,外界环境中的微生物及其产生的木聚糖酶在星天牛幼虫肠道木聚糖消化中的作用不大.
[硕士论文] 邱保国
病毒学 华中师范大学 1999(学位年度)
摘要:该文以HaSNPV-Hz细胞实验系统为研究对象,用整 装细胞电镜技术观察了病毒感染 不同时期细胞的核骨架结构变化,并用间接免疫荧光技术显示了肌动蛋白在细胞中和核骨架上的分布.结果表明,在多角体形成前,核骨架和肌动蛋白的变化不明显.在病毒感染的极晚期,随着多角体的大量形成,细胞核骨架发生了较明显的变化,核骨架上的肌动蛋白亦有变化,说明了核骨架和肌动蛋白对病毒的复制具有作用.
[硕士论文] 徐世新
昆虫学 东北农业大学 2000(学位年度)
摘要:美洲斑潜蝇是世界上最为严重和危险的多食性斑潜蝇之一.芦苇格姬小蜂作为美洲斑潜蝇的天敌目前在世界上尚没有相关的报道,对其生物学的研究也是一个空白.为了环境保护和可持续发展的要求,开发利用新的天敌资源,控制斑潜蝇的为害,该实验对该蜂的生物学详细、系统的研究.
[硕士论文] 童彦
作物 江西农业大学 2012(学位年度)
摘要:美国白蛾Hyphantria cunea以幼虫为害多种林木和果树,由于其繁殖量大,适应性强,传播途径广,成为世界性检疫害虫。给我国造成了严重的经济损失,对环境的高度适应性和惊人的繁殖力是其猖獗成灾的重要原因。本论文系统研究了环境条件对美国白蛾羽化以及交配的影响,研究结果分述如下:
   1、温度和光周期对美国白蛾羽化节律的影响
   试验在不同条件下对美国白蛾H.cunea成虫的羽化节律进行了详细的研究,在25、28℃下配合光周期LD11∶13、LD12∶12、LD13∶11、LD14∶10、LD15∶9和LD16∶8时,美国白蛾的羽化高峰出现在进入暗期的第一个小时,高温可以使成虫的羽化更加集中;在全光LL和全暗DD条件下,表现出了完全自由运转的羽化节律,成虫的羽化分布在了全天24h当中,无明显的羽化高峰,说明美国白蛾的羽化节律并不是由内源的生物钟控制的,而是需要外界光照的参与才能表现;自然条件下的羽化节律进一步证明了光周期对美国白蛾成虫的羽化起着重要的控制作用。
   2、光周期和温度对美国白蛾雄性先熟的影响
   在昆虫中,雄虫先于雌虫羽化,称为雄虫先熟现象,而雌虫先于雄虫羽化,称为雌虫先熟现象。前者最为普遍,后者报道较少。本试验在25℃和28℃下,配合光周期LD18∶6和16∶8,研究了美国白蛾H.cunea的羽化模式及环境条件对美国白蛾羽化模式的影响,结果表明,美国白蛾属于雄性先熟的昆虫种类,环境条件对美国白蛾的羽化模式有明显的影响。另外,美国白蛾的雄性先熟的羽化模式在滞育解除的个体中也存在,但只存在于在5℃冷藏90天之后解除的个体,冷藏120和180天的个体不存在雄性先熟。
   3、光周期对美国白蛾交配的影响
   试验研究了光周期对美国白蛾H.cunea交配持续时间的影响以及交配持续时间对美国白蛾产卵量以及卵孵化率的影响。结果表明,美国白蛾的交配持续时间受光周期的影响显著,交配持续时间随着光照时间的延长而延长,交配持续时间对美国白蛾的产卵量影响不大,但对卵孵化率有显著的影响。
[博士论文] 施祖华
昆虫学 浙江大学;浙江农业大学 1998(学位年度)
摘要:菜蛾绒茧蜂(Cotesia plutellae(Kurdjumov)是十字花科蔬菜重要害虫-小菜蛾(Plutella xylostella(Linnaeus))幼虫期的主要寄生性天敌昆虫之一,在中国分布极为广泛,田间寄生率通常在20~60%之间,最高时可达80%以上,在小菜蛾综合治理具有很大的应用前景.作者在已有的零星研究基础上,在室内对采自浙江杭州的菜蛾绒茧蜂的生物学、生态学特性进行了系统、定量的研究,旨在为定量评估该蜂的控害潜能及保护利用,研究大田小菜蛾幼虫寄生蜂群落结构变化机制提供科学依据.该文还对今后需深入研究的工作进行了讨论.认为菜蛾绒茧蜂的大量饲养、保存技术,助增释放对小菜蛾种群动态的影响,该蜂与其它技术蜂间的关系,其它防治措施如Bt和化学农药的应用等对该蜂田间动态的影响的关系,其它防治措施如Bt和化学农药的应用等对该峰田间动态的影响等是以后需优先考虑的研究领域,只有这样,才有可能真正了解田间该蜂的动态变化机制,有效地助增和利用该蜂,充分发挥该蜂的控害作用.
[硕士论文] 李萍
农业昆虫与害虫防治 西北农林科技大学 2001(学位年度)
摘要:一般认为大多数昆虫体内没有运输氧的血细胞存在,昆虫呼吸主要是靠遍布全身的气管系统来完成,O<,2>靠扩散作用由分布于昆虫身体两侧的气门处进入,经气管、微气管的运输而直接给组织供氧.然而,近年来加拿大昆虫学家Locke(1998)提出鳞翅目幼虫中有一个适应血细胞进行气体交换的"肺"结构,它位于昆虫腹部第8节气门与臀腔中的气管处,这是昆虫生理学方面的一个新内容.这篇论文以Locke的研究为依据,运用电镜及其它化学方法,以棉大卷叶螟与粘虫为代表进一步研究了"肺"的结构与功能特点,并对"肺"在鳞翅目及昆虫纲中的普遍性、进化关系进行初步探讨.昆虫纲"肺"结构和功能的研究是对Locke研究的大力支持和补充,是昆虫基础生理方面的一个新突破和重要进展.
[硕士论文] 刘跃满
生态学 湖北大学 2008(学位年度)
摘要:多次交配行为是动物界普遍存在的现象。本文以三突花蛛为材料,系统研究了三突花蛛的多次交配行为,研究交配次序、交配经验以及雌、雄蛛体重对三突花蛛多次交配行为的影响。并且探讨了多次交配对三突花蛛雌性生殖力的影响以及雌蛛日龄对三突花蛛求偶交配行为及其生殖力的影响。本研究包括了四部分实验。 第一部分实验,同一对没有交配经验的雌蛛和雄蛛交配,并将实验分为三组:(1)一雄一雌单次交配;(2)一雄一雌重复二次交配;(3)一雄一雌重复三次交配。第二部分实验,1头未交配的雌蛛与3头雄蛛交配,根据雄蛛的交配经验不同将实验分为三组:(1)与无交配经验的3头雄蛛交配;(2)与有一次交配经验的3头雄蛛交配;(3)与有两次交配经验的3头雄蛛交配。第三部分实验,1头未交配的雄蛛与3头不同的雌蛛交配,根据雌蛛的交配经验不同将实验分为三组:(1)与无交配经验的3头雌蛛交配;(2)与有一次交配经验的3头雌蛛交配;(3)与有两次交配经验的3头雌蛛交配。第四部分实验,1头未交配的雌蛛(日龄不同:1,3,5,7)与1头雄蛛交配,根据雄蛛的交配经验不同将实验分为两组:(1)与无交配经验的雄蛛单次交配;(2)与有一次交配经验的雄蛛单次交配。 通过对这四部分实验各组的比较分析得出,(1)三突花蛛雌雄蛛存在多次交配习性;(2)雌蛛体重对多次交配各个阶段(按时间顺序把每次交配行为分为三个阶段:潜伏期、求偶期、交配期)均无显著影响。而雄蛛体重对多次交配的交配期时间长短有显著影响;(3)雄蛛交配次序对一雄一雌重复交配与一雄多雌交配的交配期时间长短有显著影响,雌蛛的交配次序对一雌多雄交配的交配期时间有显著影响;(4)雄蛛的交配经验对一雄一雌重复交配和一雌多雄交配的交配期时间长短有显著影响。而雌蛛的交配经验对一雄多雌交配的各个阶段均无显著影响;(5)雌蛛的日龄对三突花蛛的求偶交配行为的各个阶段都无显著影响,并对雌蛛生殖力也无显著影响。本文通过对三突花蛛单次交配雌蛛生殖力和多次交配雌蛛生殖力的比较分析得出,多次交配的交配次数的增加能显著提高雌蛛的产卵率、孵化率以及孵化的幼蛛个体数,雌蛛体重与其孵化的幼蛛个体数正相关。由此得出多次交配能提高三突花蛛的个体适合度,具有重要的适应意义。
[博士论文] 栾丰刚
微生物学 安徽农业大学 2011(学位年度)
摘要:昆虫病原真菌作为最早被鉴定的昆虫病原微生物,其许多种类在自然界中对昆虫种群的调控发挥着重要作用。昆虫疾病流行学发展至今,依靠传统的微生物与昆虫生态学技术已经取得了大量的成果并已用来指导制定害虫微生物防治策略。开展害虫流行病学及分子生态学研究,以系统地进行昆虫疾病流行发生特点及机理的研究,明确引起昆虫自然流行病的昆虫病原真菌种群分化情况,进一步揭示其遗传变异规律,用以指导害虫微生物防治和益虫保护利用工作已势在必行。本论文在昆虫病原真菌种群遗传结构结合宏观生态调查水平上对昆虫流行病的发生进行了探讨,研究分析了10个引起昆虫自然流行病的昆虫病原真菌种群的遗传结构,并结合分子生态学理论,探讨种群或亚种群间基因流强度等指标对昆虫病原真菌种群遗传分化及昆虫疾病流行的影响。本研究获得以下结果:
   1、不同昆虫病原真菌使用ISSR-PCR扩增结果表明,本研究中的10个昆虫病原真菌种群内的菌株呈现丰富的ISSR分子标记多态性,而且可重复性较好,说明ISSR分子标记是评估昆虫病原真菌种群遗传多样性的有效方法。应用Shannon信息指数和Nei基因多样性指数统计昆虫病原真菌种群遗传多样性,结果显示两个指标的大小顺序一致,但前者更为敏感。通过UPGMA聚类及主坐标分析较好地识别和区分了不同株系及种群内/间内分化情况;而引起不同昆虫自然流行病的(亚)种群间遗传分化系数反映出不同病原真菌的种群分化情况存在较大的差异(0.1137<Gst<0.9101)。
   2、对在安徽省引起螳螂流行病的球孢白僵菌种群结构进行分析,分子证据表明,引起皖西南潜山9月份和皖北皇藏峪10月份螳螂流行病的病原菌种群间可能存在广泛的基因交换或长距离的基因流(Nm=1.032);安徽省螳螂白僵病是由一场大范围的流行病和局部的地方病共同构成的泛流行病;球孢白僵菌分生孢子在安徽螳螂栖息地间传播,且传播受从南向北的季风影响。引起安徽省螳螂泛流行病的球孢白僵菌的种群异质性的成因是多方面的,包括空间异质性、时间异质性和寄主专化性。
   3、研究分析了引起浙江千岛湖小皱蝽流行病的球孢白僵菌种群结构,UPGMA聚类和主坐标分析数据表明:引起小皱蝽流行病具有明显的发病中心,僵虫高密度集中出现的原因是小皱蝽若虫的群集行为尚未扩散所致。分子数据表明该球孢白僵菌种群具有由中心向外扩散的趋势。
   4、引起皖东明光马尾松毛虫流行病的球孢白僵菌种群在三个不同时间的群体遗传分化系数Gst很小,在0.0986和0.0818 之间变动,基因流Nm很大,在2.2857和2.8048之间变动;2006年4月13的群体、2007年4月28日的群体和2006年6月22日的群体的91.9%菌株聚在一起,遗传相似度超过80%。3个群体间总的遗传分化系数为0.1137,仅为轻度分化;而上述3个群体与当地释放过的生产菌株Bb13 之间遗传分化较大,均超过0.6,充分证明引起2006年和2007年的马尾松毛虫流行病的不是由外来的生产菌株Bb13,而是由包括这三个群体以及离散于它们之外的另外三个菌株的土著菌株引起,它们在当地有效地持续控制了松毛虫。
   5、引起皖东南敬亭山根土蝽绿僵病流行的金龟子绿僵菌小孢变种种群遗传结构分析结果表明:在遗传相似系数为0.837 处可将菌株分为两个主要分支,可以将采自不同时间的70%以上的绿僵菌菌株分开,表现出较为明显的时间异质性;分子变异分析进一步证明了该金龟子绿僵菌小孢变种种群分化明显,异质性的金龟子绿僵菌小孢变种种群有利于持续控制根土蝽。
   6、引起皖西漫水河鳞翅目昆虫幼虫及皖北皇藏峪鳞翅目昆虫蛹流行病的细脚棒束孢种群、皖西西山林场鳞翅目昆虫蛹流行病的粉棒束孢种群、湘西新晃一种同翅目昆虫及内蒙古准格尔旗木蠹蛾流行病的球孢白僵菌种群的菌株均可通过UPGMA 聚类和主坐标分析并归为两个主要分支,尽管这5个特定寄主昆虫流行病的昆虫病原真菌种群均处于范围有限的寄主栖息地内,然而5个昆虫病原真菌种群均为分化明显的异质性种群。
   7、引起皖东南敬亭山及国内其他9个流行区蝉若虫流行病的蝉棒束孢种群遗传结构分析结构表明:研究中所用的10个种群中除分离自牯牛降土壤的2 株菌外,其余遗传相似度超过80%的47 株菌聚为一类;种群的聚类与地理来源、采样时间和分离载体均无关。
   综合10个昆虫自然流行病案例发现:本论文中的引起昆虫自然流行病的15个昆虫病原真菌种群均为异质性种群,然而异质性高低差别较大:异质性最高的为漫水河的细脚棒束孢种群(Gst=0.9101),最低的为明光的球孢白僵菌种群(Gst=0.1137),但绝大多数种群的Gst均超过重度分化的指标0.25。大多数种群中均并存着数个或单个优势类群与一些分化明显的较小类群或离散菌株;这种分化增加了种群的异质性,提高了昆虫病原真菌种群的环境适应能力。优势类群有利于迅速提高致病率,在寄主种群中形成流行病,而非优势类群所占比例小,因此以地方病形式影响寄主种群,有利于长期的生态平衡。这些异质性的昆虫病原真菌种群引起的昆虫疾病的流行病学特征为流行病和地方病共存;异质的昆虫病原真菌种群对昆虫自然流行病的发生、延续和下次爆发可能是必要的。
[硕士论文] 周媛
昆虫与害虫防治 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:大部分昆虫可在滞育诱导期感受光周期信号的变化从而进入滞育,而昆虫在滞育诱导期对光周期信号的分子响应尚不明确。二化螟Chilo suppressalis是一种重要的水稻害虫,受短光照诱导后可以幼虫形式进入滞育,幼虫3龄期是滞育诱导敏感期。本研究以滞育诱导光周期(LD12:12h)和非滞育诱导光周期(LD16:8h)下的二化螟幼虫为材料,采用了转录组测序、qRT-PCR、基因克隆等技术探究了二化螟滞育诱导期对光周期信号的分子响应,主要结果如下:
  1、二化螟滞育诱导期响应光周期信号的敏感日龄
  光周期转换试验结果表明,25℃条件下,二化螟幼虫响应光周期信号的敏感日龄为9-12日龄(幼虫3龄时期)。
  2、二化螟滞育诱导期响应光周期信号的差异表达基因
  将25℃下,LD12:12h和LD16:8h光周期下的二化螟10日龄幼虫进行比较转录组分析,共得差异表达基因1260个,在滞育诱导条件下上调基因664个,下调基因596个。结果分析表明,差异基因富集到显著富集在Cardiac muscle contraction和Parkinson's disease通路上,同时也富集在ECM-receptor interaction、Calcium signaling pathway、cGMP-PKG signaling pathway、Phototransduction-fly等与光信号转导相关的通路上。研究结果为进一探讨二化螟滞育诱导期光信号转导过程提供了基础。
  3、二化螟滞育诱导期光信号转导基因的克隆与表达模式
  对inaD、myosin-Ⅲb(属“Phototransduction-fly”通路),PKG(属“cGMP-PKG signaling pathway”通路)和CBP E63-1这4个光信号转导相关基因进行克隆和表达模式分析。结果表明PKG、myosin-Ⅲb可能在滞育诱导期对光周期信号进行转导;CBP E63-1、inaD可能主要在滞育诱导后期对光周期信号进行转导。结果说明这4个基因可能参与二化螟滞育诱导期响应光周期信号的调控。
  本研究明确了二化螟滞育诱导期响应光周期信号的敏感日龄,获得了二化螟滞育诱导期响应光周期信号的差异基因,分析了与光信号转导相关基因在二化螟滞育诱导期的表达模式。研究结果为明确二化螟滞育诱导期对光周期信号的响应机制奠定了基础,同时可为昆虫滞育诱导期光信号转导机制的研究提供参考。
[硕士论文] 张善明
昆虫学 华中师范大学 1999(学位年度)
摘要:该文以苏云金杆菌工程菌GC-91和昆虫离体细胞系(5B1、Hz)为研究对象,进行了两种细胞系的抗性筛选,并用Na<,2>SeO<,3>对Hz细胞进行了研究;测定了正常Hz细胞和抗性细 胞Z<,12>在B.t.制剂降解液作用下浓度与放热量的关系;研究了荧光增白剂对B.t.制剂降解液的作用的影响.
[硕士论文] 李孝明
生物工程 中国科学院大学 2016(学位年度)
摘要:昆虫光依赖的磁感受行为对于其迁飞中的定向与导航机制意义重大。昆虫迁飞与种群暴发成灾有关,其迁飞行为的发生与调控机制一直是国内外昆虫迁飞研究领域中的热点。针对昆虫光依赖的磁感受行为的研究将有助于阐明生物地磁导航的原理,强化生物磁感受的理论基础,揭示昆虫在迁飞过程中的内在调控机制。
  本文通过研制用于昆虫光依赖磁感受行为研究的实验设备,检测模式昆虫—水稻迁飞性害虫褐飞虱的光依赖磁感受行为。该研制装置包括有机玻璃框架,线圈系统,照明系统和选择系统。有机玻璃框架是用来支撑整个装置,线圈系统为实验提供特定的磁场环境。照明系统产生特定的光波长,为整个实验提供特定需要的光照环境。利用本实验设备,可以研究多种小型模式昆虫光依赖的磁感受行为。
  在实验中主要使用初羽化1-3天的褐飞虱成虫作为实验对象,分别在5G和10G两种实验磁场条件下,分别对λ>500nm、λ>420nm、λ>370nm三种波长段的光照环境下褐飞虱的磁感受行为进行考察,实现从多角度来分析褐飞虱光依赖的磁感受行为特性。实验中对褐飞虱进行了1.8T强磁场的处理后重复上述实验,探索强磁场对实验对象可能产生的影响。实验中对褐飞虱进行磁场条件训练,研究褐飞虱对磁场的记忆能力。
  通过上述研究,我们发现在实验中,褐飞虱的磁选择行为与磁场大小和环境中的光照波长密切相关,并且揭示了短波长光对褐飞虱磁感受行为的重要作用。研究还发现,褐飞虱光依赖的磁感受行为受强磁场的影响,其对磁场具有一定的记忆能力。上述结果将有助于对褐飞虱光依赖的磁感受行为开展更深入的研究与分析,为褐飞虱的磁定向研究奠定基础,以期对迁飞性害虫的迁飞行为与定向机制提供研究思路,为其预测预报和在农业生产中的实际应用提供理论基础。
[硕士论文] 张传骞
渔业资源 中国科学院海洋研究所 2001(学位年度)
摘要:于1999年5-6月间在实验室内对暧温性底层鱼类褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)和暧水性近底层鱼类大黄鱼(Pseudosciaena crocea)进行了自受精卵开始到早期仔鱼的发育生态学实验.褐牙鲆和大黄鱼的培育温度分为17.4±0.3℃和23.2±0.3℃,盐度均为31±0.2﹪,遮光静养.通过测定其受精卵细胞的干重、湿重、卵黄和油球体积以及细胞发育过程中的耗氧率、氨排泄率、铵离子含量、游离氨基酸、蛋白质、总脂、肥肪酸等参数的变化(大黄鱼仅限于卵黄和油球体积、耗氧率、氨排泄率、铵离子含量、游离氨基酸和蛋白质),分析不同发育阶段的生化代谢和能量代谢特征;结合已有的研究成果,比较鱼类发育能量学的基本规律.
[硕士论文] 曹治杰
再生医学 中国科学院大学 2018(学位年度)
摘要:免疫系统是生物体对外界刺激开启的防御系统,虽然昆虫缺乏获得性免疫,但其机体内存在的天然免疫系统可以抵抗病原微生物的感染。研究表明,昆虫在受到感染后,脂肪体会分泌大量的抗菌肽并运输到血淋巴中以抵御感染。果蝇在遭受革兰氏阳性菌或者真菌感染时,Toll信号通路被激活;当感染革兰氏阴性菌时,Imd信号通路被激活。Toll和Imd信号通路中的转录因子激活后入核调控抗菌肽基因进行转录,从而翻译出抗菌肽并进行免疫应答。
  本文着力研究dTraf2在果蝇Imd信号通路中的调控作用。首先在S2细胞中利用荧光素酶报告基因实验对其进行研究,发现dTraf2过表达后能引起Imd信号调控的荧光素酶活性升高,而在敲低uev1a或bendless时,却抑制了dTraf2的调控作用。通过体外泛素化实验,检测到dTraf2与泛素激活酶E1、泛素结合酶E2以及泛素相互作用形成了多聚泛素化链。并且通过pull down实验检测到此泛素链与dTak1的结合蛋白dTab2存在相互作用。利用体外磷酸化实验,检测到多聚泛素链能引起hTak1的磷酸化。随后,利用纯化后的多聚泛素化链在体外引发dTak1的磷酸化。最后,通过在脂肪体中特定过表达或敲低dtraf2的果蝇进行革兰氏阴性菌的感染,经实时荧光定量PCR检测抗菌肽的mRNA表达水平发现,过表达dtraf2可以增强Diptericin、Attacin和Cecropin A1等抗菌肽基因的mRNA水平,而敲低dtraf2结果则相反。
  综上可知,本研究结果表明dTraf2正调控果蝇Imd天然免疫信号通路,其调控机制可能是通过形成的多聚泛素链来激活dTak1进而调控抗菌肽基因的表达。
[硕士论文] 宋宜娟
动物学 苏州大学 2011(学位年度)
摘要:为了解印楝素对鞘翅目昆虫生长发育和免疫功能的影响及作用机理,本文以黄粉虫术龄幼虫为研究材料,开展印楝素对黄粉虫代谢过程中几种主要的储能物质及相关消化酶的研究,同时研究其对黄粉虫免疫相关指标的影响。食料浸药后饲喂试虫,称其体重,采用紫外分光光度法和余重法测定黄粉虫储能物质及中肠消化酶的生物活性,并从分子水平上探讨印楝素对胰蛋白酶基因表达的影响;此外还采用紫外分光光度法、抑菌圈法、FITC标记法等测定试虫血淋巴蛋白含量,PO活性,溶菌酶活性,抑菌活性以及细胞吞噬和血细胞扩散率等的变化。
   结果发现,随着浸药浓度的增加,黄粉虫体重增量减少,且龄期延长,可溶性总蛋白、糖原和脂质合成减少:胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均有下降,而体外试验检测上述三种酶没有发现其活性发生显著变化。同时,以不同浓度的印楝素处理得饲料饲喂黄粉虫之后,分别于0 h,4 h,8 h,12 h,20 h取样,制备血淋巴,测得黄粉虫血淋巴蛋白含量,PO活性,溶菌酶活性,抑菌活性等均随着印楝素浓度的增加而降低,细胞吞噬活性及细胞扩散率也下降,且这种变化呈剂量依赖性。本研究系统探讨印楝素对黄粉虫生长发育及免疫功能的影响,我们认为印楝素在体内能够间接降低黄粉虫消化酶的活性,导致储能物质减少,从而明显抑制黄粉虫的生长发育。与此同时,印楝素显著的抑制黄粉虫的免疫功能,包括体液免疫和细胞免疫。
[硕士论文] 刘晶晶
动物学 苏州大学 2011(学位年度)
摘要:黑化反应在昆虫的表皮鞣化、色素形成以及免疫防御过程中起着重要的作用。黑化反应是酪氨酸在酶的作用下首先羟化为3,4-二羟苯丙氨酸(DOPA),然后DOPA再在相关酶的催化作用下转化为儿茶酚类及其衍生物,最终形成色素的过程。酪氨酸羟化成多巴的反应是黑化反应的限速步骤,可在两种酶的作用下进行:酚氧化酶(phenoloxidase,PO,EC1.14.18.1)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH,EC1.14.16.2)。其中PO广泛存在于鳞翅目、鞘翅目、双翅目、蜚蠊目和直翅目等昆虫的各个发育期,且对其研究较为深入。而对昆虫TH的研究则主要集中在双翅目及鳞翅目类昆虫,尤以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)研究最深入,对鞘翅目昆虫TH基因及其功能研究极少。对鞘翅目昆虫TH基因及其功能研究较少。
   本研究以鞘翅目昆虫黄粉虫(Tenebrio molitor)为研究对象,成功构建黄粉虫酪氨酸羟化酶(TmTH)基因的原核表达载体,并表达出有活性的酶蛋白,利用高效液相色谱法测定产物DOPA的含量,通过抑制TH酶活性,以PO作为参照,初步探讨TmTH在黄粉虫黑化过程中的生理功能。为进一步研究鞘翅目昆虫的表皮形成机理及免疫黑化打下基础,同时也为研究昆虫病虫害防治提供理论依据。主要内容及结果包括:⑴黄粉虫酪氨酸羟化酶基因表达载体构建与原核表达:将TmTH编码区克隆到表达载体pET28a(+)中,并在大肠杆菌BL21中进行了IPTG诱导浓度表达及诱导时间表达,结果表明1mM IPTG诱导菌体表达5h时,表达出的蛋白量最大。经SDS-PAGE分析以及western-blot分析显示诱导表达出活性蛋白的大小约为62 kD,这为进一步研究TmTH体外酶学性质及相关功能等方面的研究提供材料。⑵高效液相色谱法测定产物多巴的含量:将原核表达出的活性TmTH以及黄粉虫幼虫不同组织提取物的TmTH样品,在TmTH催化反应体系中反应10min,用高氯酸终止酶反应,应用高效液相色谱紫外检测法测定反应生成的L-DOPA含量,计算酶的活性。结果表明3ml原核表达菌体酶的比活性为10.028 U/mg,TH抑制剂3-碘-L-酪氨酸(3-iodo-tyrosine,3IL)明显抑制了产物L—DOPA的生成。⑶抑制酪氨酸羟化酶活性对黄粉虫幼虫血淋巴黑化及凝集功能的影响:幼虫血淋巴与不同浓度的PO抑制剂PTU及TH抑制剂3IL混合反应,室温下拍照并记录血淋巴的黑化时间变化,同时利用倒置显微镜拍摄黑化前后的血淋巴凝集状况。结果表明3IL和PTU均有不同程度的抑制作用,且抑制效果随着抑制剂浓度增大而越明显,其中3IL处理的血淋巴,其黑化时间稍微延长,且凝集块明显减少。⑷抑制体内酩氨酸羟化酶活性对黄粉虫幼虫表皮黑化反应的影响:配制含有不同抑制剂浓度的生理液注射不同发育体色的黄粉虫末龄幼虫,观察记录注射创口的黑化时间。选取白色幼虫进行注射,并记录其白色表皮发育为黄褐色表皮的时间。剥离的白色幼虫表皮组织在不同条件下培养,进一步研究TmTH在表皮黑化过程中作用,48h后倒置显微镜下观察表皮颜色变化。PTU和3IL抑制结果表明PO和TmTH均参与了表皮色素沉着。
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