绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 100
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 19326 条结果
[硕士论文] 董浩
外科学(泌尿外科) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:利用基因芯片技术分析小鼠草酸钙肾结晶模型的基因表达谱的变化,筛选出有研究价值的目的基因,并进行初步的临床验证,再通过动物及细胞学实验检测目的基因的表达变化,及其对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探索其在草酸钙肾结晶形成中的作用和机制。
  方法:通过乙醛酸腹腔注射,构建小鼠草酸钙肾结晶模型,Von Kossa染色检测小鼠肾脏组织钙盐沉积情况。再通过基因芯片技术分析模型组肾脏组织基因谱的变化并筛选出目的基因;分别收取肾结石患者肾脏组织和肾癌根治患者正常部位肾脏组织标本,利用电镜扫描观察患者肾小管上皮细胞的微观结构,并用免疫组化检测患者肾脏组织目的基因的表达差异。再次构建小鼠草酸钙肾结晶模型,利用qPCR和Western blot检测小鼠肾脏组织目的基因的表达水平,HE染色和TUNEL凋亡实验分别检测小鼠肾脏组织细胞的微观结构改变和细胞凋亡情况,用免疫组化检测目的基因在小鼠肾脏组织的表达及利用Western blot检测凋亡相关蛋白水平。用一水草酸钙晶体刺激肾小管上皮细胞,构建草酸钙晶体刺激的细胞模型,同时构建PANK1过表达和PANK1-siRNA慢病毒,免疫荧光检测细胞感染情况,Western blot检测细胞水平目的基因的表达及细胞凋亡情况,qPCR检测下游相关蛋白的表达变化。
  结果:成功构建了小鼠草酸钙肾结晶模型,Von Kossa染色显示模型组肾脏组织切片均有明显的钙盐沉积;基因芯片筛选出结晶模型中下调最明显的目的基因PANK1(p<0.05);扫描电镜结果显示,草酸钙肾结石患者肾脏超微结构较对照组发生了明显的损伤和凋亡性改变;免疫组化结果显示,草酸钙肾结石患者肾脏组织中PANK1的表达水平明显低于对照组。在小鼠模型中,qPCR结果显示,模型组小鼠肾脏组织的PANK1mRNA水平显著低于对照组(p<0.05);Western blot显示模型组小鼠肾脏组织中的PANK1蛋白的水平相对于对照组也显著下调;免疫组化结果显示,模型组小鼠肾脏组织PANK1的表达也明显降低,且PANK1的表达主要集中在肾小管上皮细胞中;HE染色和TUNEL检测结果显示,相对于对照组,模型组小鼠肾脏组织细胞发生明显的凋亡性改变,且凋亡主要发生在肾小管上皮细胞中;Western blot结果显示,模型组小鼠肾脏组织的促凋亡蛋白Bax水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2水平降低。在草酸钙晶体细胞模型中,Western blot结果显示,草酸钙结晶刺激后,肾小管上皮细胞内PANK1的表达水平显著下调。流式细胞仪结果显示,相对于对照组,结晶刺激组的细胞凋亡水平明显增高;成功构建PANK1过表达和PANK1-siRNA慢病毒并感染细胞后,流式细胞仪检测结果发现,PANK1过表达组细胞凋亡水平明显降低,而PANK1-siRNA组凋亡明显增加;qPCR结果显示,与能量代谢凋亡相关的信号通路中,下游蛋白SIRT3和FOXO3a的表达水平与PANK1的表达呈正相关。
  结论:草酸钙结晶刺激会下调肾小管上皮细胞内PANK1的表达,PANK1对肾小管上皮细胞的损伤和凋亡起到调控的作用。PANK1可能通过影响细胞能量代谢,激活能量感受器,并影响下游关键蛋白SIRT3的表达变化及转录因子FOXO3的转录活性,从而调节肾小管上皮细胞的凋亡,并促进草酸钙肾结晶的形成。
[硕士论文] 陈思秀
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究主要探讨PHD锌指蛋白(PHF)14受缺氧诱导因子(HIF)1α诱导以及PHF14在马兜铃酸诱导的肾间质纤维化中的抑制效应及机制。
  方法:
  1.利用前期构建PHF14条件敲除小鼠,实验组小鼠基因型为phf14flox/floxCre+,同龄基因型为phf14flox/flox Cre-的小鼠为对照组。在8-12周龄时,予以他莫西芬连续5天腹腔注射敲除PHF14,确认实验组小鼠PHF14成功敲除后,马兜铃酸(3mg/kg体重)腹腔注射3周(每3天一次)诱导肾纤维化。6周后处死小鼠,留取肾组织行Masson染色及免疫组化检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-sma),用Western blot、Real time PCR分别检测PHF14、ColⅠ、α-sma、结缔组织生长因子(CTGF)表达,留血液标本检测肌酐、尿素氮。
  2.大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)予以HIF脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG刺激,使细胞内HIF-1α升高,另一组同时加入HIF-1α抑制剂KC7F2,抑制HIF-1α表达及入核,使用Western blot、Real time PCR检测不同时间点(0,1,3,6h)HIF-1α、PHF14和CTGF变化。
  3.在NRK-52E细胞中,利用染色质免疫共沉淀的方法,检测HIF-1α是否可分别结合在PHF14与CTGF启动子区域。
  4.利用siRNA技术干扰NRK-52E细胞中PHF14表达,给予DMOG升高细胞内HIF-1α,通过Western blot、Real time PCR检测CTGF表达。
  5.在NRK-52E细胞中,应用染色质免疫共沉淀的方法明确PHF14是否可结合在CTGF的启动子区域。
  结果:
  1.机体在遭受马兜铃酸的纤维化刺激后,敲除PHF14的小鼠纤维化指标ColⅠ、α-sma表达较对照组明显升高。相比野生型小鼠,敲除组小鼠的肌酐、尿素氮的指标明显升高。
  2.在细胞水平上,使用DMOG刺激细胞后,PHF14、CTGF的表达也升高,而抑制HIF-1α入核后,PHF14、CTGF的表达增加被抑制。通过染色质免疫共沉淀的方法证明了HIF-1α可结合在PHF14和CTGF的启动子区域。
  3.在细胞水平上干扰PHF14表达后,使用DMOG刺激后CTGF的表达明显升高,通过染色质免疫共沉淀的方法证明PHF14可结合在CTGF的启动子区域。
  结论:
  在马兜铃酸诱导的肾纤维化小鼠中,敲除PHF14的小鼠纤维化表型更重,肾功能损害更严重。通过细胞水平的研究发现,PHF14和CTGF都可以被HIF-1α诱导,在干扰PHF14表达后CTGF的表达增加,通过染色质免疫共沉淀的方法证明PHF14可结合在CTGF的启动子区域。PHF14通过调控CTGF表达抑制了HIF-1α促纤维化作用的过度激活,本研究进一步阐述了PHF14在抑制纤维化进展中的重要作用。
[博士论文] 王萍
儿科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:在我们前期研究的SRNS家系中,先证者7岁患SRNS,肾脏病理显示局灶节段性肾小球硬化,电镜显示足细胞足突数量减少伴融合。她于15岁进展至终末期肾脏病,16.4岁接受肾移植,至今未出现肾病综合征复发。NUP160基因致病突变2407G>A(E803K)遗传自母亲,NUP160基因致病突变3517C>T(R1173X)遗传自父亲,因此,这两个突变系NUP160基因复合杂合致病突变,可以解释先证者SRNS的病因,符合该SRNS家系的遗传方式,即常染色体隐性遗传。先证者肾组织超微结构显示足细胞足突数量减少伴融合,我们推测NUP160基因功能缺失可导致足细胞损伤,进而引起大量蛋白尿。
  研究目的:
  应用RNA干扰技术构建NUP160基因沉默的小鼠足细胞稳定细胞株,降低小鼠足细胞中Nup160蛋白的表达,观察其对小鼠足细胞增殖、凋亡、自噬、迁移能力及足细胞相关因子Nephrin、Podocin、CD2AP和α-actinin-4表达和分布的影响,探讨NUP160功能缺失是否会引起足细胞损伤。
  研究方法:
  1、设计并合成3对针对小鼠NUP160mRNA(NM_015231)的shRNA,应用分子克隆技术构建重组载体pLKO.1-NUP160_shRNA,酶切鉴定并测序后,将构建成功的重组质粒pLKO.1-NUP160_shRNA、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞,收集病毒上清感染条件永生化小鼠足细胞,嘌呤霉素筛选10d~14d,获得NUP160shRNA稳定转染的小鼠足细胞。应用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western Blot)和细胞免疫荧光检测NUP160敲低效果。
  2、探究NUP16基因沉默对小鼠足细胞增殖影响的实验:设空白对照组、阴性对照组和shNUP160稳定转染组。应用CCK-8实验测定OD值,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术PI染色法检测细胞周期分布;应用qRT-PCR检测CCND1、CDK4、CDKN1B mRNA的表达;应用Western Blot检测细胞周期调控因子Cyclin D1、CDK4、p27蛋白的表达。
  3、探究NUP160基因沉默对小鼠足细胞凋亡影响的实验:应用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP的表达。
  4、探究NUP160基因沉默对小鼠足细胞自噬影响的实验:应用qRT-PCR检测自噬调控因子BECN1、LC3B mRNA的表达;应用Western Blot检测Beclin1、LC3B蛋白的表达;应用细胞免疫荧光检测LC3B蛋白的荧光强度。
  5、探究NUP160基因沉默对小鼠足细胞迁移能力影响的实验:应用划痕实验检测划痕修复率;应用Transwell实验检测穿过transwell小室的细胞数量。
  6、探究NUP160基因沉默对足细胞相关因子影响的实验:应用qRT-PCR检测NPHS1、NPHS2、CD2AP、ACTN4mRNA的表达;Western Blot检测Nephrin、Podocin、CD2AP、α-actinin-4蛋白的表达;应用细胞免疫荧光检测Nephrin、Podocin、CD2AP、α-actinin-4蛋白的荧光强度和亚细胞定位。
  所有实验均重复三次。应用SPSS18.0统计软件进行统计分析,计量资料数据以均数±标准差((x)±s)表示,多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA),两两比较分析当方差相等时采用最小显著性差异法(LSD),当方差不齐时采用Dunnett's T3。P<0.05表示差异有统计学意义。
  研究结果:
  1、3种NUP160shRNA均能有效抑制NUP160基因在MPC5细胞中的表达,NUP160-shRNA-1、NUP160-shRNA-2和NUP160-shRNA-3对NUP160mRNA表达的抑制率分别为49.43%、74.56%和62.02%,对Nup160蛋白表达抑制率分别降低39.28%、68.66%和57.78%。NUP160-shRNA-2干扰效果最明显,被用于后续实验。
  2、CCK-8实验结果显示在24h、48h、72h和96h这4个时间点,NUP160shRNA稳定转染细胞的OD值明显低于空白对照组细胞和阴性对照组细胞(P均<0.001);流式细胞术PI染色检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组G0/G1期细胞数显著增多,S期细胞数显著减少,细胞增殖指数明显低于两对照组(P均<0.001);qRT-PCR和Western Blot检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中CCND1mRNA(Cyclin D1)和CDK4mRNA(CDK4)表达水平显著降低(CCND1mRNA、Cyclin D1和CDK4mRNA,P均<0.001;CDK4,P<0.01),CDKN1B mRNA(p27)表达水平显著升高(P均<0.001);而在空白对照组和阴性对照组之间上述结果均无明显差异。
  3、流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中早凋细胞和晚凋细胞均较空白对照组与阴性对照组明显增多,细胞凋亡率较两对照组明显增高(P均<0.001);Western Blot结果显示NUP160shRNA稳定转染组中cleaved-Caspase-3和cleaved-PARP的表达均较两对照组明显增多(P均<0.001);而在空白对照组和阴性对照组之间上述结果均无明显差异。
  4、qRT-PCR检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中BECN1mRNA和LC3B mRNA表达显著增多(P均<0.001);Western Blot检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中Beclin1和LC3BⅡ/LC3BⅠ明显高于空白对照组与阴性对照组(Beclin1,P均<0.01;LC3BⅡ/LC3BⅠ,P均<0.001);细胞免疫荧光检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中LC3BⅡ荧光强度明显高于两对照组(P均<0.01);而在空白对照组和阴性对照组之间上述结果均无明显差异。
  5、划痕实验结果显示NUP160shRNA稳定转染细胞划痕修复率高于空白对照组与阴性对照组(P均<0.001);Transwell实验结果显示NUP160shRNA稳定转染组穿过transwell小室的细胞数量明显多于两对照组(P均<0.001);而在空白对照组和阴性对照组之间上述结果均无明显差异。
  6、qRT-PCR检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中NPHS1mRNA、NPHS2mRNA和CD2AP mRNA表达明显减少(P分别<0.05、<0.001、<0.001),ACTN4mRNA表达明显增多(与空白对照组相比,P<0.001,与阴性对照组相比,P<0.01);Western Blot检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中Nephrin、Podocin和CD2AP表达明显减少(P分别<0.05、<0.001、<0.001),α-actinin-4表达明显增多(与空白对照组相比,P<0.01;与阴性对照组相比,P<0.05);细胞免疫荧光检测结果显示NUP160shRNA稳定转染组中Nephrin、Podocin和CD2AP荧光强度明显高于两对照组(与空白对照组相比,P分别<0.05、<0.001、<0.01;与阴性对照组相比,P分别<0.05、<0.001、<0.05),α-actinin-4荧光强度明显低于两对照组(P均<0.001);而在空白对照组和阴性对照组之间上述结果均无明显差异。NUP160shRNA稳定转染组中Nephrin、Podocin和CD2AP主要分布在细胞核周围,而两对照组Nephrin、Podocin同时分布于核周和胞膜,CD2AP同时分布于核周、胞质和胞膜。NUP160shRNA稳定转染组、空白对照组和阴性对照组α-actinin-4的分布无明显差异,均呈细丝状均匀分布于足细胞胞质内,同时亦呈放射性分布于足细胞足突中。
  研究结论:
  NUP160基因沉默损伤小鼠足细胞,表现为抑制小鼠足细胞增殖、促进小鼠足细胞凋亡、诱导小鼠足细胞的自噬、增加小鼠足细胞迁移、影响足细胞相关分子Nephrin、Podocin、CD2AP和α-actinin-4的表达及Nephrin、Podocin和CD2AP在足细胞中的分布。
[硕士论文] 阮梦娜
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:背景:
  慢性肾脏病(CKD)患者肾功能逐渐减退,通常伴随大量代谢产物的蓄积,其中有多种物质具有生物活性,影响机体及细胞的功能,其表现称之为尿毒症症状,而引起这些症状的相关物质称其为尿毒症毒素。欧洲尿毒症毒素工作组(EUTox)将目前已证实的尿毒症毒素建立了数据库(EUTox Database),截止2012年共计有146种尿毒症毒素。对于CKD患者,肾脏无法彻底清除潴留的尿毒症毒素,故需要肾脏替代治疗包括肾移植,血液透析及腹膜透析(PD)发挥清除作用。迄今为止,仍有诸多研究者致力于识别更多的尿毒症毒素,并证实其作用机制。
  通常将尿毒症毒素根据分子大小,水溶性或脂溶性,是否能被透析清除等特性分为三大类:(1)小分子水溶性毒素,分子量<500Da,如肌酐、尿素氮等;(2)蛋白结合毒素(PBUT),分子量通常<500Da;(3)中分子毒素,通常包括一些小分子多肽。也有按照产生部位的分类方法,如肠源性或非肠源性毒素。而PBUT指大部分为与蛋白结合的小分子毒素,如硫酸吲哚酚(IS)、硫酸对甲酚(PCS),也包括少量蛋白结合的中分子毒素,且PBUT多在肠道内产生。目前已知的PBUT总计10大类,32种。随着研究的深入,越来越多的证据表明,PBUT直接或间接地对心、脑、肾等重要脏器造成严重损害。
  通过文献检索,选用超高效液相色谱/质谱-电喷雾电离串联(UHPLC-ESI-MS/MS)技术,拟对包括硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate,IS),马尿酸(Hippuric acid,HA),对羟基马尿酸(p-hydroxyhippuric acid,p-OH HA),犬尿喹啉酸(Kynurenic acid,KYNA),3-羧-4-甲-5-丙基呋喃戊酮酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid,CMPF)等进行检测及探讨,证实上述研究对象在PD患者中血清浓度异常,探讨可能影响PBUT浓度的相关因素,最后对患者进行随访,探究PBUT是否会影响PD患者长期预后。
  目的:
  本试验研究主要分为三部分,研究目的为:1证实健康志愿者、CKD4-5期未透析患者及PD患者三类人群PBUT(IS、HA、p-OH HA、KYNA、CMPF)浓度差异;2.在腹膜透析患者中,对血清PBUT影响因素进行分析;3.探究蛋白结合毒素对PD患者长期预后的影响。通过以上研究,明确肾功能不全的患者可导致蛋白结合毒素在体内的蓄积,拟探究对血清蛋白结合毒素浓度的影响因素,并探讨PBUT对腹膜透析患者长期预后的影响。
  方法:
  (一)健康志愿者、CKD4-5期未透析患者及PD患者三类人群血清蛋白结合毒素浓度差异
  招募海军军医大学上海长征医院腹透中心2016年1月至2016年12月期间符合入选标准PD患者(n=50),性别比例男∶女=1∶1,排除年龄大于75岁或小于18岁,腹膜透析维持时长小于1个月,合并血液透析患者,1月内发生腹膜炎或合并其他感染性疾病,处于自身免疫性疾病活动期,合并恶性肿瘤,近1月内发生心血管事件的患者。收集同时间段至长征医院肾内科住院诊治,病情稳定的慢性肾脏病患者(n=50)(根据EPI公式计算eGFR值),收集两类患者血清标本,测定血清蛋白结合毒素浓度。同时至长征医院体检中心招募50例健康志愿者,收集血清标本按上述方法处理作为对照组。三组研究对象均签署知情同意书。本临床试验已通过海军军医大学上海长征医院生物医学研究伦理委员会审批,批件编号2014SL027。选择超高效液相色谱/质谱-电喷雾电离串联(UHPLC-ESI-MS/MS)技术同时检测样本血清中7种PBUT的浓度。分析三组人群血清PBUT浓度差异。计量资料以均数±标准差((x)±SD),中位数(第一四分位数,第三四分位数)表示,选用SPSS21.0软件进行统计分析,三组计量数据服从正态分布并方差齐性的前提下,组间两两比较采用LSD-t检验,不满足上述条件的,选用Kruskal-Walhs H检验检验,组间两两比较采用nemenyi法检验。计数资料采用频数描述,计数资料组间比较采用Fisher确切概率检验。P<0.05为差异有统计学意义。
  (二)腹膜透析患者多种血清蛋白结合毒素影响因素分析
  2016年1月至2017年7月,招募上海长征医院腹透中心符合入选条件的PD患者进行研究。研究对象是慢性肾衰竭维持性腹膜透析治疗的患者,排除年龄小于18岁或超过75岁,要求腹透维持时间超过1个月,不合并血液透析治疗。同时排除有慢性自身免疫性疾病活动期或活动性感染;哺乳期或妊娠期;合并晚期恶性肿瘤;既往1个月内发生过心脑血管事件的患者。所有参与研究的患者均要求签署知情同意书。收集患者各项临床资料,血检验结果等。收集血清标本,采用UHPLC-ESI-MS/MS法检测血清标本中IS、HA、p-OH HA、KYNA、CMPF浓度,分析血清PBUT浓度与性别、残余肾功能、小分子毒素、腹透充分性、腹膜转运性质,营养及炎症指标CRP等之间的关系。计量资料以均数±标准差((x)±SD),中位数(第一四分位数,第三四分位数)表示,选用SPSS21.0软件进行统计分析,对于未满足双变量正态分布的数据,单因素相关性分析采用Spearman等级相关,多因素分析采用多重线性回归分析方法。P<0.05为有统计学意义。
  (三)蛋白结合毒素影响腹膜透析患者预后的队列研究
  按上述第二部分纳入、排除标准,招募PD患者242人,按上述要求留取患者血清标本,行PBUT浓度检测。按PBUT浓度水平分为高浓度及低浓度两组,并对其进行随访。设定终点事件为发生心脑血管事件,腹透相关性腹膜炎。研究终点时间为2018年2月10日,时间度量单位为天。采用SPSS21.0软件行Kaplan-Meier检验,绘制生存曲线。两组生存曲线比较行Log-rank检验。检验水准(α)为0.05,P<0.05差异有统计学差异。
  结果:
  (一)健康志愿者、CKD4-5期未透析患者及PD患者三类人群血清蛋白结合毒素浓度差异
  健康志愿者年龄54.38±8.95岁,慢性肾脏病患者年龄5822±10.30岁,PD患者年龄为55.14±13.09岁。三组之间年龄无统计学差异。健康志愿者组:IS170.88(79.17,398.06)ng/ml,HA101.19(52.99,266.68)ng/ml,p-OH HA5.94(0.00,36.72)ng/ml,KYNA1.15(0.00,4.34)ng/ml,CMPF166.05(119.53,279.37)ng/ml;CKD患者:IS7922.58(2650.39,14589.39)ng/m1,HA1163.51(363.17,3200.91)ng/ml,p-OH HA222.47(100.43,714.56)ng/ml,KYNA75.04(36.48,180.32)ng/ml,CMPF1789.04(803.39,3557.57)ng/ml;PD患者:IS26554.56(7282.30,55338.06)ng/ml,HA4203.98(1350.10,17691.15)ng/ml,p-OH HA1730.12(47852,3695.43)ng/ml,KYNA252.16(134.12,444.34)ng/ml,CMPF730.14(390.81,1448.12)ng/ml。健康志愿者分别与CKD患者及PD患者比较血清PBUT浓度,有统计学差异。CKD患者及PD患者,比较IS、HA、p-OH HA、KYNA血清浓度,P<0.05,差异有统计学意义。
  (二)腹膜透析患者多种血清蛋白结合毒素影响因素分析
  共有122例PD患者入组,年龄48.61±15.24岁,其中女性42例(344%),透析龄18.53±26.99个月。PD患者血清IS21371.31(10875.88,46991.80)ng/mL,HA4049.45(1350.10,16299.32)ng/mL,p-OH HA1607.74(657.72,3319.72)ng/mL,KYNA257.41(137.74,466.40)ng/mL,CMPF845.30(376.78,1588.37)ng/mL。血清IS与透析龄、腹膜Kt/V、腹膜Ccr、BUN、Scr、P、CaP乘积正相关,与总Kt/V、残肾Kt/V、总Ccr、残肾Ccr、残肾eGFR、AST、Na、HDL呈负相关。
  结论:
  1.肾功能异常患者血清蛋白结合毒素明显高于健康志愿者。同时PD患者的血清多种蛋白结合毒素与慢性肾功能不全未透析患者比较,浓度存在差异,考虑腹膜透析对PBUT浓度有影响。
  2.蛋白结合毒素IS、HA、p-OH HA、KYNA与小分子毒素(BUN、Scr)、磷代谢指标(P、CaP乘积)呈正相关,与残肾功能(Kt/V、Ccr、eGFR)、总Kt/V、总Ccr呈负相关。而与WBC、PLT,CRP,Ca、PTH等指标无相关性。而蛋白结合毒素CMPF与腹膜功能、残肾功能无相关性。以上数据提示PBUT主要依靠残肾功能清除,腹膜具有部分清除能力,保护残肾功能有利于PD患者清除血清PBUT。
  3.蛋白结合毒素IS、HA、p-OH HA、KYNA对PD患者长期预后无影响。
[硕士论文] 孙博
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 血清抗PLA2R抗体对原发性膜性肾病的预后价值
  目的:
  探讨抗PLA2R抗体对原发性膜性肾病(Primary Membranous Nephropathy,PMN)的预后价值,分析其预测疾病自发缓解或高风险进展趋势的能力,更好地指导治疗方案的选择。
  方法:
  1.选取2014年3月至2016年5月期间,上海长征医院经过肾活检确诊为PMN的患者,记录患者的临床资料和病理报告,收集这些患者肾活检当日的血清样本,采用欧蒙公司的抗PLA2R抗体ELISA试剂盒对血清样本进行定量检测,滴度水平≥20RU/ml为抗体阳性,观察PMN患者血清抗PLA2R抗体的阳性率,然后将抗体阳性的PMN患者均分为抗体低水平组和抗体高水平组,这样所有的PMN患者分为抗PLA2R抗体阴性组、抗体低水平组和抗体高水平组三组,比较三组患者临床指标的差异。
  2.通过电子病历系统、电话、微信等多种方式随访PMN患者的血肌酐、24小时尿蛋白定量、血清白蛋白等指标及其治疗方案、疾病转归、病程特点,随访时间大于12个月,比较三组患者上述资料,分析抗PLA2R抗体水平对PMN疾病转归的预测情况。
  结果:
  1.共收录96例PMN患者,其中60例血清抗PLA2R抗体阳性,阳性率62.5%;根据血清抗PLA2R抗体滴度水平分为三组:抗体阴性组36人(<20RU/ml)、抗体低水平组30人(20.2-83.3RU/ml)和抗体高水平组30人(86.6-1048RU/ml);三组患者的临床基线指标进行单因素方差分析:24小时尿蛋白定量总组间比较P=0.067(P>0.05),无统计学差异,但各组间进一步比较,抗体高水平组24小时尿蛋白定量高于抗体阴性组P=0.033(P<0.05);血清白蛋白总组间比较P=0.009(P<0.05),有统计学差异,血清白蛋白水平抗体阴性组>抗体低水平组>抗体高水平组。其余指标包括性别、年龄、体重、血清肌酐、eGFR、血红蛋白、总胆固醇、甘油三脂等指标各组间均未表现统计学差异(P>0.05)。
  2.所有患者随访时间30.8±5.9(14-44)月,其中保守支持治疗方案患者27(28.1%)例,其余69例患者均进行不同方案的免疫抑制治疗;经治疗后完全缓解的患者46(47.9%)例,自发缓解的18(18.8%)例,主要分布在抗PLA2R抗体阴性组,各组间交叉列联表卡方检验有统计学差异(P<0.01);病情进展的16(16.7%)例,主要分布在抗PLA2R抗体高水平组,各组间交叉列联表卡方检验有统计学差异(P<0.01)。
  3.随访中记录了患者达到完全缓解的时间或病情开始进展的时间,并进行多因素Cox回归分析,抗PLA2R抗体水平是影响患者完全缓解的独立因素(P=0.001),完全缓解的趋势PLA2R抗体阴性组>抗体低水平组>抗体高水平组,HR=4.815(95%CI:2.065-11.226);另外分析显示24小时尿蛋白和年龄也是影响患者完全缓解的独立因素(P<0.05);另一方面,抗PLA2R抗体水平是影响患者病情进展的独立因素(P=0.013),病情进展的趋势抗PLA2R抗体高水平组>抗体低水平组>抗体阴性组,HR=0.146(95%CI:0.032-0.668)。
  结论:
  PMN患者初诊时抗PLA2R抗体水平与24小时尿蛋白水平、血清白蛋白水平相关;抗PLA2R抗体水平是影响患者完全缓解和病情进展的独立因素,抗体高水平组完全缓解及自发缓解趋势低于抗体阴性组和低水平组,而病情进展趋势高于另外两组,建议抗体高水平组早期使用免疫抑制治疗。
  第二部分 两种免疫抑制治疗方案的疗效分析
  目的:
  目前PMN的一线免疫抑制治疗方案主要为激素联合环磷酰胺(CTX)方案和激素联合钙调磷酸酶抑制剂(CNIs)方案,本研究主要比较激素联合环磷酰胺与激素联合环孢素两种免疫抑制剂治疗方案的疗效差异。
  方法:
  结合笫一部分收集的PMN患者临床资料,通过电子病历系统、电话、微信等多种方式随访患者的治疗方案、疾病转归和病程特点,选取其中进行激素联合环磷酰胺(CTX)或激素联合环孢素(CsA)进行免疫抑制治疗的患者,将其分为CTX组和CsA组,随访中记录入组患者达到完全缓解的时间或病情开始进展的时间,以及治疗中复发或严重不良反应事件等并发症情况,随访时间大于12个月,比较两组的临床完全缓解或病情进展情况,分析两种治疗方案的疗效差异。
  结果:
  1.第一部分随访的PMN患者中共有69名进行了免疫抑制治疗,其中采用激素联合CTX免疫抑制治疗患者28例,采用激素联合CsA免疫抑制治疗患者22例,两组患者24小时尿蛋白定量分别为5.33±3.33(g/d)和5.81±3.72(g/d),eGFR分别为96±24(ml/min/1.73m2)和96±18(ml/min/1.73m2),通过t检验比较两组上述指标无统计学差异(P>0.05),其余性别、年龄、体重、血肌酐、血清白蛋白、血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯等指标,两组均无统计学差异(P>0.05)。
  2.CTX组患者中12(42.9%)例经治疗后完全缓解,CsA组患者中11(50%)例经治疗后完全缓解,卡方检验无统计学差异(P>0.05);CTX组患者6(21.4%)例治疗后病情进展,CsA组2(9.1%)例治疗后病情进展,卡方检验无统计学差异(P>0.05)。
  3.比较两组的并发症情况,CsA组(22.7%)复发率高于CTX组(3.6%)(P=0.036),有统计学差异,而不良反应发生率CTX组(39.3%)则高于CsA组(13.6%)(P=0.045),有统计学差异,其中CTX组的不良反应主要为肝功能受损、感染和骨髓抑制,CsA组的不良反应主要为肾毒性。
  4.随访中记录了患者达到完全缓解或病情开始进展的时间,并进行多因素Cox回归分析,免疫抑制治疗方案是影响患者完全缓解时间的独立因素P=0.013(P<0.05),CsA组的完全缓解时间早于CTX组,HR=0.276(95%CI:0.1-0.758)。病情进展时间方面两组无统计学差异(P>0.05),另外多因素Cox回归分析表明抗PLA2R抗体水平是病情进展的独立因素(P=0.02)HR=0.053(95%CI:0.004-0.626)。
  结论:
  激素联合CTX与激素联合CsA两种免疫抑制剂治疗方案的总缓解率和病情进展率无明显差异,但CsA组治疗的完全缓解时间早于CTX组;并发症方面CsA组复发率高于CTX组,而不良反应发生率CTX组则高于CsA组。
[硕士论文] 薛贤
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是发病率最高的单基因遗传性肾病,多在成年以后起病,主要累及肾脏,患者会逐步出现肾功能下降,50%的患者会在60岁左右进入终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD),目前是ESRD的第四位病因。该病目前尚无特异性治疗药物。中国传统的中草药雷公藤具有抗炎、抑制免疫、抗肿瘤等药理作用,其在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、血液系统肿瘤及实体肿瘤均有不少应用。ADPKD是一种类肿瘤性疾病,其囊肿细胞无限增殖,2007年首次有研究者将雷公藤提取物雷公藤内酯应用于PKD小鼠模型,证实其可对PKD小鼠的囊肿生长起到抑制作用,后续有研究者将雷公藤内酯应用于不同生长阶段的小鼠,均发现雷公藤内酯对囊肿生长有抑制作用。2014年一项小样本的临床研究证实了雷公藤多苷应用于合并蛋白尿的ADPKD患者的有效性和安全性,从而提示雷公藤多苷可能是潜在的一种ADPKD治疗药物。因此,本研究试图将雷公藤多苷用于治疗ADPKD患者,以探索其治疗ADPKD的有效性和安全性。
  方法:收集2014年7月至2017年11月符合入组条件的ADPKD患者共58例,其中满足2年随访时间截点的患者共41例,随机分配至雷公藤多苷组和安慰剂组,雷公藤多苷组20例,安慰剂组21例。雷公藤多苷组给予患者雷公藤多苷1mg/Kg/d口服,分三次饭后服用;安慰剂组给予同等剂量的安慰剂,相同的给药方法。采集病史,每6个月行相关实验室指标的检查(血常规、尿常规、肝功能、肾功能、血脂、尿蛋白、尿肌酐及尿蛋白肌酐比),利用磁共振成像技术(MRI)行双侧肾脏平扫,并利用手动测量分割法完成肾脏体积的测算。通过比较两组之间主要疗效指标肾脏总体积(total kidney volume,TKV)、次要疗效指标估计肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)的变化来评估雷公藤多苷治疗ADPKD的疗效,通过两组之间血常规、肝功能、血脂等指标的变化及不良事件的发生来评估雷公藤多苷治疗ADPKD的安全性。
  结果:20例雷公藤多苷组患者中,剔除病例3人,脱落病例2人,21例安慰剂组患者中,剔除病例1人,脱落病例4人,故全分析集(full analysis set,FAS)和符合方案集(per protocol set,PPS)分别为37人和31人,安全分析集(safety set,SS)与FAS人数相同,为37人。在FAS中比较两组患者基线,两组患者在年龄、身高、体重、性别构成、是否合并有高血压病史、是否服用ACEI/ARB类药物、有无多囊肾病家族史,在肝功能、肾功能、血白细胞、血中性粒细胞比例、血红蛋白、血脂、尿蛋白谱均无统计学差异。雷公藤多苷组的基线血小板明显高于安慰剂组[(232.41±29.89)×109/L vs(204.40±45.49)×109/L,P=0.037],基线TKV明显高于安慰剂组(1876.83±763.44ml vs1296.18±589.97ml,P=0.016),htTKV也明显高于安慰剂组(1127.52±475.29ml/mvs759.14±342.80ml/m,P=0.013)。用t检验比较两组TKV及eGFR的首末变化率,两组之间无统计学差异。进一步用协方差分析校正基线血小板、基线TKV以及基线htTKV不一致给TKV变化率及eGFR变化率的影响,以基线血小板和基线TKV为协变量时,在PPS中发现基线血小板对于TKV变化率有影响,基线血小板水平与TKV增长呈负相关,但并未发现两组之间的TKV变化率存在差异;以基线血小板和基线htTKV为协变量时,在FAS即发现了血小板对于TKV变化率的影响,但未发现组间存在差异,在PPS则进一步证实了血小板越低,TKV增长越快,同时发现了雷公藤多苷组和安慰剂组存在差异,雷公藤多苷组的校正TKV变化率明显高低于安慰剂组(13.22±3.08%vs22.47±2.97%,P=0.049),此过程未发现基线TKV、基线htTKV对于TKV变化率有影响。FAS及PPS中基线血小板、基线TKV以及基线htTKV对于eGFR变化率无显著影响,校正基线差异后,两组之间的eGFR变化率无统计学差异。雷公藤多苷组发生的主要不良事件有感染、白细胞减少、月经紊乱等,与安慰剂组无统计学差异,血常规、肝功能、血脂等的首末变化值在两组之间无统计学差异。
  结论:雷公藤多苷有潜在的抑制ADPKD患者囊肿进展的作用,对肾功能无显著影响,用于ADPKD患者的治疗安全性良好。血小板减少可能与ADPKD患者囊肿体积增大相关,但有待于大样本研究证实。
[博士论文] 徐德超
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:背景及目的:常染色体显性多囊肾病(autosomal-dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是最为常见的遗传性致死性肾脏囊肿性疾病,由PKD1和PKD2基因发生突变导致。PKD1编码多囊蛋白1(polycystin1,PC1);PKD2编码多囊蛋白2(polycystin2,PC2)。PC1和PC2可定位于细胞的多种膜结构上,如:细胞顶端膜的初级纤毛,内质网高尔基体膜和细胞基底侧膜等,并对维持细胞膜正常生理功能至关重要。顶端基底细胞极性紊乱在ADPKD患者肾组织中十分常见,且与肾囊肿发生发展密切相关。顶端基底细胞极性的正常建立主要依赖于三种核心蛋白复合体:PAR复合体、Crumbs复合体和Scribble复合体。其中Scribble复合体包含Scribble、DLG和LGL等蛋白,在建立和维持细胞基底侧面极性方面发挥重要作用。Scribble蛋白的N端含有16个富含亮氨酸的重复片段(leucine-rich repeats,LRR)结构域,而在其C末端则含有4个PDZ(PSD95/DLG/ZO-1)结构域,这些结构域与Scribble蛋白生物学功能密切相关。研究表明,敲低斑马鱼scrib基因表达可导致其产生前肾囊肿表型,提示Scribble蛋白在调控肾囊肿形成方面具有重要作用,但其在ADPKD肾囊肿发生发展中的作用尚不明确。近期研究发现,Scribble可以通过活化Hippo通路上游LATS1/2激酶来影响YAP蛋白的磷酸化水平,从而调控YAP蛋白亚细胞定位。而在ADPKD患者肾组织中,Hippo通路活性受到抑制,降低了YAP蛋白的磷酸化水平,从而促使YAP蛋白由细胞质中转移到细胞核内。研究表明,YAP蛋白在细胞核内聚集与肿瘤进展相关,但也有研究指出,细胞质中YAP可通过调控Wnt/β-catenin通路来抑制肿瘤细胞增殖。因此,探究细胞质YAP和细胞核YAP在ADPKD肾囊肿形成中的作用具有重要意义。本研究拟探究Scribble和细胞质YAP在肾囊肿形成中的重要作用,并阐明Scribble通过调控YAP蛋白亚细胞定位来影响ADPKD肾囊肿发生发展的具体机制。
  方法:(1)利用蛋白免疫印迹、免疫荧光和RT-PCR技术,分别检测ADPKD斑马鱼模型(pkd2morphants)和细胞模型(小鼠Pkd2-/-细胞系)中Scribble的表达及定位情况;通过显微注射技术探究Scribble蛋白及其不同结构域(Scribble-LRR和Scribble-PDZ)对pkd2morphants前肾囊肿形成的调控作用。(2)利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼scrib突变体,观察突变体鱼是否存在多囊肾相关表型。(3)通过蛋白免疫印迹、免疫荧光和RT-PCR技术分别检测Hippo通路分子(pLATS1、LATS1、pYAP和YAP)在斑马鱼scrib突变体和敲低Scribble的人肾小管上皮细胞中的表达情况。(4)利用蛋白免疫印迹、免疫荧光和RT-PCR技术,分别检测pLATS1、LATS1、pYAP以及YAP在pkd2morphants和Pkd2-/-细胞系中的表达及定位情况;构建Tg(Tolcdh17:yap-gfp)、Tg(Tolcdh17:yapS87A-gfp和Tg(Tolcdh17:yapS87D-gfp)转基因鱼,观察不同类型YAP蛋白(YAP、YAPS87A和YAPS87D)在斑马鱼前肾管上皮细胞中的定位情况;在pkd2morphants中显微注射过表达不同类型YAP蛋白,观察其对pkd2morphants前肾囊肿形成的影响;给予pkd2morphants Verteprofin药物干预,观察拮抗YAP蛋白进入细胞核后效应对pkd2morphants前肾囊肿形成的影响。(5)构建斑马鱼lats1突变体和yap突变体,观察突变体鱼是否存在前肾囊肿表型。(6)在Pkd2-/-细胞系中过表达Scribble腺病毒,观察Scribble可否在ADPKD疾病背景下调控pLATS1、LATS1、pYAP和YAP蛋白表达;在HEK293T细胞中分别过表达Scribble、Scribble-LRR和Scribble-PDZ,明确Scribble是通过哪一结构域来调控YAP蛋白的细胞亚定位;利用morpholino技术构建scrib morphants,并在scrib morphants中过表达不同类型YAP蛋白(YAP、YAPS87A和YAPS87D),观察其对scrib morphants前肾囊肿形成的影响。
  结果:(1)Scribble在pkd2morphants和Pkd2-/-细胞中表达下调。(2)免疫荧光检查发现Scribble定位于斑马鱼前肾管上皮细胞的基底侧膜上,且Scribble可与PC2在细胞膜上共定位。(3)过表达Scribble和Scribble-PDZ可抑制pkd2morphants前肾囊肿形成,而过表达Scribble-LRR不具有类似效应。(4)斑马鱼scrib突变体具有前肾管增粗表型,而敲除scrib可促使pkd2morphants前肾囊肿表型加重。(5)pLATS1和pYAP水平在scrib突变体和敲低Scribble的人肾小管上皮细胞中表达下调,且免疫荧光染色发现YAP蛋白在scrib突变体前肾管上皮细胞中由细胞质中转移到细胞核内。(6)pLATS1和pYAP水平在pkd2morphants和Pkd2-/-细胞中表达下调;免疫荧光检测发现,在pkd2morphants前肾管上皮细胞和Pkd2-/-细胞中,细胞质中YAP蛋白减少,细胞核内YAP增多。(7)免疫荧光染色发现,YAP和YAPS87D蛋白定位于转基因鱼前肾管上皮细胞的细胞质中,而YAPS87A定位于细胞核内。(8)过表达YAP和YAPS87D可抑制pkd2morphants前肾囊肿形成,而过表达YAPS87A不具有类似效应;当给予pkd2morphants Verteprofm药物处理时,其多囊肾相关表型不能得到有效缓解。(9)斑马鱼lats1突变体不具有多囊肾相关表型,但敲除lats1可促使pkd2morphants前肾囊肿表型加重。(10)斑马鱼yap突变体具有前肾囊肿表型;过表达YAP和YAPS87D可抑制yap突变体前肾囊肿形成,而过表达YAPS87A不具有类似效应。(11)在Pkd2-/-细胞中过表达Scribble可有效提升pLATS1和pYAP表达水平。(12)过表达Scribble和Scribble-PDZ可提升pYAP表达水平,促使YAP蛋白从细胞核内转移到细胞质中,而过表达Scribble-LRR不具有类似效应。(13)scrib morphants具有前肾囊肿表型;过表达YAP和YAPS87D可抑制scrib morphants前肾囊肿形成,而过表达YAPS87A可促进scrib morphants前肾囊肿形成。
  结论:(1)Scribble和细胞质YAP在ADPKD肾囊肿发生发展中发挥重要调控作用;(2)Scribble和细胞质YAP对斑马鱼前肾管发育以及前肾囊肿形成至关重要;(3)Scribble可通过调控YAP蛋白亚细胞定位来影响ADPKD肾囊肿的发生发展。
[硕士论文] 单婵娟
社会医学与卫生事业管理 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)是严重危害人类生命健康的慢性疾病,是世界公认的公共卫生问题,具有患病率高、知晓率低和医疗费用高等特点,给个人、家庭及社会带来巨大的疾病负担。在许多国家,慢性肾脏病的发病率高达200例每百万人/年。美国肾脏病数据系统(USRDS)2016年数据年报统计显示,成人普通人群CKD的患病率为14.8%。在中国,不同地区CKD患病率约为9%-13%,且仍呈现上升趋势。截止2015年年末,中国成人慢性病的患病总数高达1.3亿人,但知晓率只有12.5%。如果能够提早发现、提早预防,可有效延缓疾病发展进程,防止终末期肾病的发生。因此,尽快筛查并了解上海市不同年龄、性别及区域人群的患病情况及其高危因素,成为制定合理的公共卫生政策和有效干预手段的急切需要。
  本研究紧密结合国家健康发展战略和三级诊疗制度,在充分分析人口、经济及卫生资源三要素的情况下,通过选取静安区和闵行区常住户籍人口,对其进行CKD筛查,探索研究上海市慢性肾脏病不同年龄、性别及区域的患病情况及影响因素,为上海市制定慢性肾脏病防治策略提供可靠依据,同时充分发挥示范作用,为全国其他省市的慢性肾脏病调查提供思路和借鉴。
  方法:
  采用整群随机抽样法,截取2015年1月1日至2017年1月在静安区和闵行区共27家社区卫生服务中心年龄大于18岁且自愿参加CKD筛查工作的上海市常住户籍人口。筛查内容包括问卷调查、体格检查和实验室检查数据。问卷调查涉及一般人口学特征、疾病史、家族史;体格检查涉及身高、体重和血压;实验室检查包括尿常规和血肌酐等检测。诊断标准采用美国肾脏病基金会制定的K/DOQI指南,当肾损害>3个月,或有肾小球滤过率下降(GFR<60ml/min/1.73m2)>3个月,诊断为慢性肾脏病。主要诊断指标为尿蛋白、尿红细胞、尿ACR和eGFR。年龄分组标准为:18-39岁为青年组;40-64岁为中年组;65岁及以上为老年组。
  利用SPSS21.0软件对研究对象的基本情况、病史情况、实验室检查和患病情况进行统计分析。采用描述性分析、卡方检验、Mann-Whitney U检验和Kruskal.WaillisH检验法对不同年龄、性别、区域的研究对象进行分析,在研究各因素与是否患慢性肾脏病的关系时,采用了单因素分析和Logistic逐步回归分析法。P<0.05认为具有统计学意义。
  结果:
  1.基本情况
  在研究对象中,男性21343例,占40.51%,平均年龄(70.37±8.98)岁;女性31342例,占研究对象的59.49%,平均年龄(69.78±9.16)岁。从区域分布上看,静安区18554例,占研究对象的35.22%,闵行区34131例,占64.78%。从年龄分布上看,77%的调查对象集中分布在60-80岁之间,年龄跨度大,最小18岁,最大102岁。按照青年(18-34岁)、中年(35-64岁)和老年(65岁及以上)分组标准,则青年组513人,占0.97%;中间组13867人,占26.32%;老年组38305人,占72.71%。
  2.疾病史
  52685例研究对象中,高血压患者29912例(56.78%),糖尿病共检出19078例(36.21%),高尿酸血症1284例(2.44%),遗传性肾脏病史65例(0.12%),慢性肾炎家族史97例(0.18%),肾小管病变史950例(1.80%),肾脏超声异常383例(0.73%),肾穿刺活检术史23例(0.04%),肾移植病史12例(0.02%)。
  3.CKD患病情况
  CKD检出人数为13569例,患病检出率为25.75%。女性检出率为27.29%,男性检出率为23.50%,男女间差异无统计学意义(P=0.569);老年组检出率高于中年组,中年组检出率高于青年组,其中65岁及以上老年组检出率为77.31%,与青年组间差异有统计学意义(P=0.037),与中年组间差异无统计学意义(P=0.411)。静安区检出率为35.32%,高于闵行区(18.32%),且两区间差异有统计学意义(P=0.006),这可能与静安区发达的区域经济和宏大的人口规模有着密不可分的关系。
  4.CKD分期与危险分层
  分期:3252例处于CKD1期(23.97%),5667例处于CKD2期(41.76%),6826例处于CKD3期(50.31%),756例处于CKD4期(5.57%),484例处于CKD5期(3.57%)。危险分层:低危患者4830例(35.60%),中危患者6089例(44.87%),高危患者1670例(12.31%),极高危患者980例(7.22%)。
  5.CKD影响因素
  慢性肾脏病影响因素包括地域、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、高尿酸血史和遗传性肾脏病史这7大因素(P<0.05),得到的回归方程为Y=-1.257+0.377X1-0.77X2-0.177X3+0.135X4+0.108X5+0.208X6-0.729X7。纳入标准为α=0.05,模型的正确预测率66.1%。
  结论:
  青年组、中年组与老年组的慢性肾脏病患者分别集中于CKD前三期,这提醒要积极应对、提早防治,以延缓CKD进程,减少家庭和社会的经济、心理和疾病负担。应加强CKD初期患者的健康宣传教育,提醒其定期复查以延缓进一步发展进程;定期随访CKD中期患者,严格按照三级转诊制度对实行治疗。
  整体上来看,应因地制宜,强化年龄分层管理,首先,应着重加强中老年CKD患者的管理,降低高血压、糖尿病的患病率,从源头上阻止一部分高血压和糖尿病患者转化为慢性肾脏病患者。其次,广泛开展中低危患者定期筛查和中末期患者的定期随访工作,在未实行CKD筛查的地区广泛推广筛查工作,对已开展CKD筛查的地区提倡定期随访,以达到早发现、早治疗的目的。再次,在思想上应重视CKD流行病学调查研究,及时掌握CKD患病情况、分布特征和影响因素,为卫生政策的制定和决策做基础,重视不同区域CKD流行病学调查,控制关键危险因素。最后,政府应积极开展健康宣教活动,提高居民的CKD认知水平,使患者在CKD初期症状轻微时及时就诊。
[硕士论文] 林恒之
外科学(泌尿外科学) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  经会阴途径的前列腺穿刺因其检出效能高、减少感染率的优势获得广泛应用,但该术式目前为止并没有标准的局麻方式,在临床实践中我们发现了肛门前缘左右约2cm的2个相对固定的位点,在其附近进针注射局麻药物可获得显著的镇痛效果,我们认为其可能与阴部神经的分支会阴神经的阻滞相关,因此本研究首先通过解剖学和神经电刺激的实验证实这两个点位作为会阴神经阻滞进针点的可能性,并进一步通过随机对照试验观察通过这两个点位进行会阴神经阻滞应用于经会阴前列腺穿刺术时患者疼痛程度及不良事件的发生率,探索其作为经会阴前列腺穿刺术的一种新的局麻方式的有效性、便捷性及安全性。
  方法:
  (一)会阴神经解剖学基础研究:
  对5具成年男性尸体的会阴部进行初步的解剖研究,测量肛门前缘水平两侧会阴神经与中线的平均距离。
  (二)神经电刺激仪引导下验证会阴神经相对深度的研究
  对20例患者使用外周神经丛电刺激器验证阻滞点的相对固定位置并探测会阴神经的深度范围,同时在其引导下完成神经浸润麻醉并进行经会阴前列腺穿刺活检术,利用视觉模拟评分法(Visual Analogue Scale,VAS)(下均简称为VAS评分)评估并记录各阶段疼痛程度,记录手术时间,术中心率、血压的变化、术中术后的不良反应以及术后病理结果,使用SPSS22统计软件进行数据分析。
  (三)无神经刺激仪引导时,会阴神经阻滞行会阴前列腺穿刺术的随机对照研究
  将90例患者随机分为3组,组1为对照组,接受前列腺周围漫润麻醉(包括进针途径)。组2为对照组,接受“PAT”浸润麻醉,组3为观察组,接受会阴神经阻滞点神经阻滞,分别进行经会阴前列腺穿刺活检术,利用VAS评分评估并记录各阶段疼痛程度,记录手术时间,术中心率、血压的变化、术中术后的不良反应以及术后病理结果,使用SPSS22统计软件进行数据分析。
  结果:
  (一)会阴神经解剖学基础研究:
  肛门前缘水平,会阴神经浅支与中线的总平均距离为1.86±0.06cm,会阴神经深支与中线的平均距离为2.16±0.06cm,与我们发现的位点相符。
  (二)神经电刺激仪引导下验证会阴神经相对深度的研究
  完成左侧会阴神经阻滞所需进针深度为3.00cm至4.00cm,平均3.48±0.31cm,右侧会阴神经阻滞所需进针深度为3.00cm至4.00cm,平均3.49±0.33cm。
  (三)无神经刺激仪引导时,会阴神经阻滞行会阴前列腺穿刺术的随机对照研究
  三组患者年龄、身高、体重、BMI、前列腺体积、PSA及术后前列腺检出率的差异无统计学意义(P>0.05),组2和组3的手术时间和麻醉时间要长于组1(P<0.001)。三组患者在超声探头置入时、局麻注射时疼痛评分的差异无统计学意义(P>0.05),在穿刺皮肤、突破包膜、发针取样时出现疼痛的针数和最高疼痛评分(VAS)差异无统计学意义(P>0.05),穿刺针于皮下与前列腺进针过程中的疼痛针数在组3为2.20±1.61,显著低于组1(5.00±2.56)和组2(4.17±2.28),其最高疼痛评分(VAS)的平均值1.70±0.88也显著低于组1(2.27±0.58)和组2(2.17±0.83)。三组患者术中及术后相关并发症的差异均无统计学差异(P>0.05)。
  结论:
  解剖学、电生理研究及临床试验均证实了肛门前缘水平左右2cm的位点可以作为会阴神经的阻滞点,通过其进行会阴神经阻滞应用于经会阴前列腺穿刺是有效、安全、可重复的,同时其在减轻穿刺进针过程中的疼痛方面有着独特的优势。为了更便捷地记住这两个位点,我们将其命名位“经会阴前列腺穿刺局麻开关”(Transperineal Prostate biopsy local Anesthesia switch,TPA switch)。
[硕士论文] 杨文军
遗传学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:随着核能技术的不断探索与开发,电离辐射的应用已经广泛深入到生活中的各个方面。这也不可避免的引起公众对电离辐射对身体健康的潜在不利影响的关注。增殖分化旺盛的细胞对电离辐射的敏感程度比较高,比如男性生殖细胞,其作为电离辐射的敏感细胞之一,较容易受到电离辐射引起的损伤,从而对男性的生育能力造成影响。因此迫切需要探索相关可以增强机体抗电离辐射能力的药物来保护工作环境长期处于电离辐射人群的生殖健康。
  姜黄素是一种从姜黄的根茎中分离出来的酚类化合物,具有抗肿瘤、抗炎症、抗氧化等生物学作用。研究证实氧化应激在电离辐射诱导的生殖系统损伤中发挥了关键作用,但是姜黄素是否能在电离辐射诱导的男性生殖系统损伤过程中发挥保护作用尚未报道。本课题主要探究了姜黄素在电离辐射致男性生殖系统损伤中的防护作用以及可能的作用机制。
  本课题使用BALB/c雄性小鼠作为动物模型,探究姜黄素对电离辐射损伤男性生殖系统的保护作用。实验结果表明不同剂量的单次电离辐射导致了小鼠的生殖系统损伤。与未辐射的正常小鼠相比,经电离辐射处理后的小鼠睾丸重量以及附睾尾部精子的浓度出现显著降低,HE染色显示电离辐射破坏小鼠睾丸组织正常的生理结构;用TUNEL法检测睾丸组织内的凋亡情况,结果发现电离辐射显著增加了睾丸组织内的凋亡。同样在细胞水平上检测了电离辐射对小鼠精母细胞的影响。结果表明电离辐射处理后细胞的活力出现显著下降,细胞凋亡率明显升高。4Gy的单次辐射剂量破坏了精母细胞正常的线粒体膜电位。辐射后小鼠睾丸以及精母细胞内caspase-3的蛋白水平均升高。接着探究是否姜黄素能够减弱电离辐射对生殖系统造成的损伤。口服姜黄素可显著提高辐射后小鼠睾丸附睾尾部精子浓度,降低睾丸组织内生精细胞的凋亡情况。细胞实验同样发现姜黄素预处理可以显著降低电离辐射引起的细胞活力下降以及细胞凋亡,改善线粒体膜电位。上述实验结果表明姜黄素对电离辐射后的生殖系统具有保护作用。4Gy的单次电离辐射破坏了小鼠以及精母细胞的氧化应激系统之间的平衡。电离辐射处理后,小鼠睾丸内SOD、Total GSH表达水平出现显著降低,MDA和ROS水平显著上升。姜黄素预处理可以明显增加SOD、Total GSH的活性,降低MDA和ROS水平。
  在明确姜黄素能够在电离辐射诱导的男性生殖系统损伤过程中发挥保护作用的基础上,进一步探索其发挥保护作用的具体机制。Nrf-2/HO-1信号通路是机体内重要的抗氧化通路,前面的实验结果表明姜黄素预处理可以显著改善小鼠以及细胞内的氧化应激状态。基于这个实验结果,设想Nrf-2/HO-1信号通路参与姜黄素在电离辐射诱导的男性生殖系统损伤的保护过程。实验结果显示姜黄素预处理可以显著增加精母细胞以及小鼠睾丸组织内Nrf2的蛋白水平,促进Nrf2蛋白从胞浆向胞核内的转移。在精母细胞内对Nrf2基因进行干扰后显著降低了姜黄素对精母细胞的保护作用。
  总而言之,本研究首次报道了姜黄素能够在电离辐射诱导的男性生殖系统损伤过程中发挥保护作用。其发挥保护作用的机制可能与通过调控Nrf-2/HO-1抗氧化信号通路维持机体氧化应激状态平衡有关。姜黄素作为祖国传统中草药,其具有副作用小,原料易获取等优点,有可能开发成为一种新的抗辐射损伤防护剂。
[硕士论文] 刘洁玮
儿科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:本文从以下两部分进行了阐述:
  第一部分 应用二代测序诊断1列Papillorenal综合征
  目的:应用二代测序确诊1例具有慢性肾功能不全、眼部异常和先天性手指屈曲畸形症状的Papillorenal综合征患儿,并进行基因突变分析和总结该病临床特点。
  方法:提取患儿及其父母基因组DNA,应用二代测序技术对患儿基因组DNA进行全外显子组测序,对父母进行Sanger验证。
  结果:①10岁女孩,有典型的Papillorenal综合征临床表现,具有尿毒症、视神经缺损和左手中指屈曲畸形症状。②二代测序和Sanger验证结果提示:在患儿第10号染色体上的PAX2基因编码区外显子3检测到1个致病性插入突变(220_225dup);其父母基因组DNA未发现该突变。PAX2基因220_225dup突变于1998年由Devriendt等报道。在患儿基因组DNA中未发现肢端-肾-眼综合征(acro-renalocular syndrome,AROS)的致病基因SALL4基因存在突变。
  结论:我们报道了一例具有慢性肾功能不全、眼部异常和先天性手指屈曲畸形症状的Papillorenal综合征病例,并认为PAX2基因突变可引起除已知的肾、眼先天异常外,还可导致骨发育异常。
  第二部分 先证者诊断为IgA肾病的家族性血尿家系基因变异分析
  目的:家族性血尿是由单基因突变所致的一组遗传异质性疾病,如COL4A3/COL4A4/COL4A5基因突变导致的Alport综合征(AS)、COL4A3/COL4A4基因突变导致的薄基底膜肾病、COL4A1基因突变导致的HANAC综合征、MYH9基因突变导致的Fechtner综合征和Epstein综合征、CFHR5基因突变导致的补体因子H相关蛋白5肾病(CFHR5肾病)等。部分家族性血尿患者肾组织出现IgA沉积,在缺乏电镜检查或肾组织超微结构正常的情况下,根据肾脏免疫病理,家族性血尿先证者被诊断为IgA肾病。本研究旨在查明先证者诊断为IgA肾病的家族性血尿家系的病因。
  方法:应用二代测序对先证者诊断为IgA肾病的3个家族性血尿家系进行家族性血尿相关基因检测,对检测出的基因变异进行Sanger测序验证,并复习文献和分析基因变异的致病性。
  结果:在家系一先证者(Ⅲ2,男)的CFHR5基因外显子4检测到533A>G杂合突变;先证者之父(Ⅱ1)携带相同的杂合突变,先证者之母(Ⅱ2)未携带该突变。在家系二先证者(Ⅱ3,男)COL4A5基因外显子10检测到566G>C半合子突变;先证者之母(Ⅰ2)、姐姐(Ⅱ2)和先证者之女(Ⅲ2)均携带相同的杂合突变,先证者之父(Ⅰ1)和先证者的侄儿(Ⅲ1)未携带该突变。在家系三先证者(Ⅱ3,女)COL4A5基因外显子9检测到539G>A杂合突变;先证者的姐姐(Ⅱ2)和女儿(Ⅲ5)均携带相同的杂合突变,先证者的侄儿(Ⅲ2)携带相同的半合子突变,先证者的大儿子(Ⅲ4)和小儿子(Ⅲ6)未检测到该突变。另外,在家系三先证者(Ⅱ3,女)CFHR5基因外显子4检测到508G>A杂合突变;先证者的姐姐(Ⅱ2)、侄儿(Ⅲ2)和大儿子(Ⅲ4)均携带相同的杂合突变,先证者的女儿(Ⅲ5)和小儿子(Ⅲ6)未检测到该突变。CFHR5基因533A>G(Asn178Ser)突变的致病性不明确;COL4A5基因566G>C(Gly189Val)和539G>A(Gly180Glu)突变,以及CFHR5基因508G>A(Val170Met)突变均为致病突变。家系二先证者诊断为AS,家系三先证者诊断为AS合并CFHR5肾病。
  结论:对先证者诊断为IgA肾病的家族性血尿家系应进行家族性血尿相关基因的检测,以明确病因。
[硕士论文] 王欢
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过回顾性分析泌尿系结石患者的临床病例资料,探讨梗阻性肾病的患病率及术后急性肾损伤的发病率,并分析梗阻性肾病以及结石术后急性肾损伤的危险因素,为梗阻性肾病的防治提供依据。
  方法:回顾性分析2014年9月-2017年12月在上海长海医院泌尿外科住院并行手术碎石治疗的泌尿系统结石患者的病例资料,收集泌尿系结石患者的病历信息:性别、ID号、年龄、诊断、手术方式(经皮肾镜碎石术、输尿管镜碎石术)、是否患高血压、血肌酐(术前及术后)、肾小球滤过率、是否患糖尿病、血尿酸、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、二氧化碳结合力、血白蛋白、血红蛋白、红细胞、尿白蛋白、尿红细胞、影像学资料等。其中肾小球滤过率小于60ml/(min·1.73m2)的患者为梗阻性肾病,48小时内血肌酐升高26.5μmol/L以上,或高于基础值的1.5倍为急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)。在梗阻性肾病患病的危险因素分析中,根据是否发生梗阻性肾病将研究对象分为梗阻性肾病组和非梗阻性肾病组。以是否发生梗阻性肾病为应变量,各研究变量为自变量,进行多因素Logistic回归分析。在术后AKI的危险因素分析中,根据是否发生AKI将研究对象分为AKI组和非AKI组。以是否发生AKI为应变量,各研究变量为自变量,行多因素Logistic回归分析。
  结果:3年多的时间内泌尿外科共有13496名住院患者。本次研究共纳入1313例泌尿系结石患者的病例资料。其中,梗阻性肾病236例(17.97%),非梗阻性肾病1077例(82.03%)。结石相关梗阻性肾病在我院泌尿外科的患病率为1.75%,泌尿系结石在泌尿外科的患病率为9.73%。梗阻性肾病中,女性占32.6%,男性占67.4%,年龄结构分布以51-70岁占多数(69.1%)。梗阻性肾病合并高血压共114例(48.3%),合并糖尿病共60例(25.4%)。单因素分析中,年龄、高血压、糖尿病、血尿酸、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、二氧化碳结合力、血白蛋白、血红蛋白、红细胞、尿蛋白有统计学差异(P<0.05)。再将上述有意义的变量行多因素Logistic回归分析,结果显示年龄、高血压、糖尿病、血尿酸、二氧化碳结合力、血红蛋白与梗阻性肾病患病相关。在结石术后AKI的研究中,输尿管镜碎石组共858例患者,其中52例发生AKI(6.1%),经皮肾镜碲石组共455例患者,其中43例发生AKI(9.5%)。术后发生AKI的患者共95例(7.24%)。多因素Logistic回归分析及列线图显示,手术方式、血尿酸、术前血肌酐有统计学差异(P<0.05)。
  结论:高龄、高血压、糖尿病、高尿酸血症、代谢性酸中毒等是梗阻性肾病患病的独立危险因素,与梗阻性肾病密切相关。手术方式(经皮肾镜碎石术)、血尿酸、血肌酐(术前)是泌尿系结石患者术后发生AKI的独立危险因素。
[博士论文] 夏天一
临床药学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:随着以他克莫司为基础的肾移植术后免疫治疗方案应用愈发深入与广泛,他克莫司在长期应用过程中的肾毒性作用日益凸显。传统、保守的他克莫司基础免疫治疗方案使得其急性与慢性肾脏损伤发生率超过90%,造成移植肾功能以4%/年的速度下降,诱发一系列并发不良反应,增加肾移植患者二次肾脏替代治疗的风险,威胁肾移植患者的长期生存质量与生命安全。
  早期鉴别他克莫司肾毒性并进行有效干预是临床应用中减低他克莫司急性和慢性肾损伤的必要手段。他克莫司药代动力学/药效动力学过程呈现显著的个体差异,导致药物暴露量与毒性效应关系难以简单推断。临床实践多综合考虑药物浓度监测结果、肾功能生化指标与病理切片对他克莫司肾毒性进行非特异性鉴别,进而采取减药、换药或撤药的方式加以干预。然而上述诊断标准的非特异性/亚灵敏性/损伤性特点使得临床终点判断多处于他克莫司肾毒性效应的“既发阶段”,长期、反复的毒性效应过程造成了移植肾的不可逆损伤。
  探究他克莫司肾毒性的替代临床效应终点是实现早期、有效干预的重要方法,灵敏、特异的生物标志物是近年来被认可的临床效应终点判断指标。代谢组学技术,因其高通量、高灵敏度的特点,成为了生物标志物发掘的有力手段;其中氨基酸类物质与肾脏结构、功能关系紧密,是肾毒性亚临床病理变化指征的关键切入点。通过归纳前人研究,建立关键氨基酸代谢途径与信息节点的靶向分析方法,可以进一步实现氨基酸生物标志物的有效识别与准确判断。
  将基于氨基酸靶向代谢组学发掘的生物标志物与有效临床(药物、环境、人口)信息结合起来,运用生物信息学中数据提取、分析、判别与整合手段,可以建立针对不同患者的,大数据背景下的,多层次、多角度的个体化生物标志物体系模型,进而实现他克莫司肾毒性“高危人群”有效识别与早期临床干预。
  黄葵胶囊是由黄蜀葵花乙醇提取物制备而得的中药制剂,在免疫性肾脏病治疗中应用广泛。前期研究已经证实其具有改善蛋白尿、钠潴留,调节血糖、血脂,缓解炎症和免疫反应等药理活性。据此,本研究推测,黄葵胶囊可能影响他克莫司药效,对其毒性效应发挥缓解作用。前期关注黄葵胶囊与他克莫司合用的研究甚少,黄葵胶囊在肾移植后的临床应用较为局限。
  目的:
  探究他克莫司肾毒性临床背景下的危险因素;建立完善的血浆氨基酸靶向代谢组学分析方法(分析前阶段/分析阶段);构建整合临床危险因素和关键氨基酸的生物标志物体系模型并绘制列线图以实现数据可视化;探究黄葵胶囊与他克莫司合用时黄葵胶囊对他克莫司毒性效应的影响,提出优化的临床干预方案。
  方法:
  第一部分:展开系统综述与Meta分析,识别肾移植术后钙调神经蛋白抑制剂(CNI,包括他克莫司和环孢素)肾毒性临床背景下的危险因素。通过电子数据库检索辅助人工核对,对相关回顾性研究文献进行评价。数据分析使用Cochrane推荐的Review Manager5.2软件操作完成,运用I2检验和Q检验评估结论显著性与异质性。CNI肾毒性以生化指标、病理切片和药物浓度等常用临床终点效应事件为首要结局;移植肾功能恢复延迟为次要结局。
  第二部分:建立基于超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱的血浆23种氨基酸靶向分析方法。色谱柱选用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(3.0mm×150mm,5μm),通过在流动相中添加离子对试剂(七氟丁酸),实现多种氨基酸有效的色谱保留与分离。质谱检测在正离子多重反应监测模式下完成。
  第三部分:招募25名健康志愿者进行上臂静脉采血,按顺序分装至EDTA-2K、EDTA-3K、促凝、肝素和枸橼酸采血管中至规定刻度,并于采血管中保存6、12、24h后检测。运用第二部分建立的氨基酸含量测定方法对不同采血管中血清/血浆的氨基酸含量进行分析。使用重复测量方差分析结合球形检验进行不同保存时间的氨基酸含量测定结果比较。运用Student's t检验分析不同采血管中氨基酸含量测定结果,同时使用Bland-Altman一致性检验和Passing-Bablok回归分析探讨采血管间含量测定差异规律。
  第四部分:设计回顾性研究,收集122份发生/不发生他克莫司肾毒性的肾移植患者血浆样本,和与上述患者年龄、性别匹配的健康志愿者血浆样本一同纳入“预验证集”,进一步随机选取42份发生/不发生他克莫司肾毒性的肾移植患者血浆样本纳入“验证集”。运用第二部分建立的氨基酸靶向代谢组学分析方法,参照第三部分推荐操作完成样本采集与氨基酸分析。通过模式识别的计算机学习算法筛选氨基酸生物标志物,并同第一部分研究中指征的危险因素整合,构建生物标志物体系模型,绘制列线图以辅助实现良好的临床应用。
  第五部分:构建大鼠他克莫司肾毒性模型,将模型分为空白对照、他克莫司肾毒性和他克莫司与黄葵胶囊联合使用三组。收集模型不同阶段的大鼠血液与组织样本,进行相应的肾功能生化指标、组织病理和药物浓度分析。表征不同采样时间下氨基酸生物标志物变化,初步验证第四部分研究结论,指征氨基酸生物标志物在肾脏毒性状态下的变化规律,和与常规肾脏功能指标相比的灵敏度与特异性;探究黄葵胶囊与他克莫司合用时,对他克莫司肾毒性效应的影响和其作用机制。
  结果:
  第一部分:研究纳入了12篇回顾性研究中共计2849例样本进行分析。供体年龄(OR,1.01;95%CI,1.01-1.03;p=0.02),受体移植时动脉硬化(OR,1.44;95%CI,1.04-1.99;p=0.03)与受体CYP3A5*3/*3基因型(OR,2.80;95%CI,2.63-2.98;p=0.00)是具有统计学意义的CNI肾毒性危险因素。亚组分析与敏感性分析表明,供体年龄在亚裔和高加索人种中不存在异质性。
  第二部分:待测氨基酸在既定的考察范围内均呈现良好的线性关系。日内/日间精精密度、稳定性、累积效应和真实样本再分析结果满足《FDA生物样本分析方法指导原则》(2013版)和《中国药典》(2015版)的相关要求。该方法能够用于有效的健康志愿者和肾移植患者的血浆样本氨基酸分析。
  第三部分:肝素(其次是EDTA-3K)采血管氨基酸含量测定结果随存放时间变化较小。用于氨基酸检测的血浆样本在采血管中的存放时间推荐不超过6h。同肝素采血管氨基酸含量测定结果相比,枸橼酸采血管测定结果偏低而抗凝采血管测定结果偏高;EDTA和肝素血浆氨基酸含量测定结果差异具有统计学意义。在超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测条件下,EDTA-3K和肝素血浆氨基酸含量测定结果一致性良好。
  第四部分:胱氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、对称二甲基精氨酸、色氨酸、犬尿氨酸为有效的他克莫司肾毒性生物标志物。上述氨基酸参与了“精氨酸代谢”、“甲基化过程”、“色氨酸代谢”和“支链氨基酸代谢”等关键生化途径。将上述氨基酸生物标志物与第一部分发掘的危险因素整合为生物标志物体系模型,该模型在“预验证集”和“验证集”中得到受试者工作曲线的曲线下面积均>0.8。
  第五部分:动物模型结果显示,黄葵胶囊和他克莫司合用能够有效降低并延缓他克莫司肾毒性的氧化应激效应。其分子机制为降低肾间质纤维化程度、改变肾小管表型与肾小管扩张状态、降低肾间质炎症细胞浸润,但是不影响他克莫司血药浓度。氨基酸生物标志物能够在他克莫司肾毒性早期产生灵敏变化,以对称二甲基精氨酸为代表的生物标志物,其波动值较常规肾功能指标血肌酐和尿素氮更加显著。
  结论:
  供体年龄、受体移植时动脉硬化与受体CYP3A5*3/*3基因型是具有统计学意义的钙调神经蛋白抑制剂肾毒性危险因素,可以作为有效协变量,纳入他克莫司肾毒性生物标志物体系模型。本研究中建立的氨基酸靶向代谢组学分析方法能够对血浆中23种氨基酸进行准确、快速检测;通过控制样本从采集到检测过程中的两个重要变量,采血管类型和采血管中的样本保存时间,能够有效减少测定结果误差。本课题开展回顾性临床研究筛选并验证的基于氨基酸靶向代谢组学的生物标志物体系模型灵敏度高,并在动物模型中得到了初步验证。黄葵胶囊与他克莫司合用可以有效降低他克莫司所致的肾脏损伤,具有广阔的临床应用前景。
[博士论文] 张艳
外科学(泌尿外科) 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:本文分为以下几个部分进行探讨:
  第一部分 新生儿排尿与大脑神经控制的相关研究新生儿排尿与大脑皮层觉醒的关系
  材料与方法:
  选取入住我院新生儿观察室的33例早产儿[男19例,女14例,孕龄(32.1±1.6)w,天龄(11.2±3.1)d,体重(1.7±0.3)kg]和31例足月儿[男20例,女11例,孕龄(38.2±1.2)w,天龄(10.5±3.6)d,体重(3.3±0.4)kg]。所选新生儿均为因母亲围生期因素(妊娠期高血压、糖尿病、胎膜早破等)而入新生儿观察室进行观察,新生儿相对情况较好,并经相关检查证实不存在疾病。所有新生儿均配带动态脑电图及心电监护。对新生儿进行4h排尿方式观察(早8点至12点),记录排尿次数、每次排尿量、残余尿量和肢体活动及液体总入量,以及排尿开始前后5s及排尿开始前后30s脑电图、呼吸频率和心率的变化。
  结果:
  所选新生儿共记录184次排尿。结果发现早产儿每次排尿量,肢体活动百分比[(19.8±7.9)ml和(41±19)%]明显小于足月儿[(26.4±8.7)ml和(62±21)%](P<0.05);而早产儿的残余尿量和排尿次数[(1.7±0.9)ml和(3.2±1.1)次]显著大于足月儿[(1.2±0.7)ml和(2.6±0.9)次](P<0.05)。足月儿心率变化在排尿开始前后5s显著高于排尿期开始前30s[(152±6)和(152±5)次/分vs.(147±6)次/分,P<0.05];脑电图频率在排尿开始前后5s显著高于排尿开始前30s[(2.6±0.1)Hz和(2.6±0.1)Hz vs.(1.5±0.1)Hz,P<0.05]。早产儿脑电图频率、心率在排尿开始前后5s与排尿开始前30s相比无明显变化。(P>0.05)。呼吸频率在排尿开始前和排尿开始后于两组新生儿均无明显改变。(P>0.05)。两组新生儿排尿均发生在静态睡眠期(QS)。
  新生儿排尿与脑室周围脑室内出血的关系
  材料与方法:
  选取在我院新生儿观察室住院的31例早产儿,男19例,女12例,胎龄均在32~36周。所有早产儿均在出生后7d内行床旁颅内超声学检查,根据是否存在PIVH,将其分为正常组16例,男9例,女7例,胎龄(34.2±1.1)w,日龄(11±2)d,体重(2.6±0.4)kg,后续颅内超声影像学检查未发现异常;PIVH组15例,男10例,女5例,胎龄(34.1±1.1)w,日龄(11±1)d,体重(2.6±0.5)kg。对两组早产儿分别进行连续8h排尿方式观察,记录每组早产儿在观察时间内的排尿次数、每次排尿量、残余尿量、清醒排尿次数以及是否出现间断排尿。
  结果:
  正常组早产儿膀胱排空率显著高于PIVH组(34%vs.18%)(P<0.05);PIVH组早产儿残余尿量显著多于正常组[(2.4±0.8)ml vs.(2.0±0.7)ml,P<0.05];清醒排尿比例显著低于正常组[(35±6)% vs.(44±8)%,P<0.05]; PIVH组与正常组早产儿在观察时间内的排尿次数[(7.4±1.0)vs.(7.2±1.0)]和每次排尿量[(15.6±5.7)mlvs.(16.5±6.0)ml]差异均无统计学意义(P>0.05); PIVH组(47%)与正常组早产儿(44%)出现间断排尿比例差异无统计学意义(P>0.05)。
  第二部分 神经源性膀胱功能障碍患儿的尿动力学评估和治疗
  神经源性膀胱伴输尿管反流患儿的尿动力学特点分析
  材料与方法:
  选取我院就诊并经影像尿动力检查发现伴有膀胱输尿管反流的神经源性膀胱患儿68例,男30例,女38例,年龄4~12岁,平均7.5岁。根据充盈期是否伴有逼尿肌过度活动(DO),将其分为DO组(n=20),年龄为(7.5±2.9)岁;无DO组(n=48),年龄为(7.6±2.6)岁。影像尿流动力学检查:按照国际尿控协会(ICS)推荐的方法,影像图使用飞利浦公司移动式C型臂X线机,尿动力测定使用MMS尿动力检测仪,即在进行压力流率测定时连续监测膀胱及输尿管的形态变化。在膀胱结束充盈时和出现膀胱输尿管反流时记录膀胱容量、逼尿肌压力并计算膀胱顺应性。按照国际反流分级标准,将膀胱输尿管反流分为轻度反流(Ⅰ~Ⅱ度),重度反流(Ⅲ~Ⅴ度),并记录患儿反流的侧别与严重程度。
  结果:
  DO组和无DO组发生膀胱输尿管反流时的膀胱容量与顺应性分别为[(98.7±16.1)ml,(5.2±1.9)ml/cmH2O]和[(127.3±36.3)ml,(7.1±2.1)ml/cmH2O],均有统计学差异(P<0.05);两组的逼尿肌压分别为(21.6±9.2)cmH2O和(19.2±7.4)cmH2O,没有统计学差异(P>0.05); DO组充盈结束时的膀胱容量与顺应性分别为(182.7±31.2)ml和(5.4±1.7)ml/cmH2O,与无DO组充盈结束时的膀胱容量(230.6±34.6)ml与顺应性(6.5±1.1) ml/cmH2O相比,有统计学差异(P<0.05);两组尿动力学检查结束时逼尿肌压分别为(33.8±7.8)cmH2O和(36.4±8.1)cmH2O,没有统计学意义(P>0.05)。
  CIC和CDS联合托特罗定治疗神经源性逼尿肌过度活动患儿的疗效研究
  材料与方法:
  选取我院门诊神经源性膀胱患儿44例,男19例,女25例,年龄5岁~16岁,平均年龄(7.9±2.5)岁,体重均在正常范围内。尿动力学检查表现为充盈期逼尿肌过度活动和排尿期逼尿肌无收缩。按随机数字表法将所有患儿分为实验组(24例):CIC和CDS联合托特罗定,年龄(8.1±2.3)岁;对照组(20例):CIC和CDS联合安慰剂,年龄(7.5±2.9)岁。参加本研究的所有患儿及其监护人均知情同意。服药开始和4周后分别行尿动力学检查和记录3天排尿日记。记录服药期间所有可能与托特罗定有关的不良反应,如不能耐受者可停药退出本研究。比较服药前和服药后尿动力学检查及排尿日记的各参数变化。
  结果:
  实验组22例和对照组19例完成4周随访,3例中途失访。疗程结束后实验组首次逼尿肌收缩时容量,相对膀胱安全容量,逼尿肌顺应性及每次导尿量较对照组明显增大[(109±30)ml vs.(84±35)ml,(251±45)ml vs.(212±40)ml,(6.2±1.4) ml/cm H2O vs.(5.1±1.4)ml/cmH2O,(209±46)ml vs.(155±44)ml],差异有统计学意义(P<0.05);24h尿失禁次数较对照组明显减少[(1.3±1.1)次vs.(2.7±0.9)次],差异有统计学意义(P<0.05)。实验组22例患儿中6例随访出现副作用:1例口干,2例头痛,3例(14%)泌尿系感染。对照组19例患儿2例(11%)出现泌尿系感染。治疗结束后未发现常规实验室检查和心电图检查、胃肠功能检查有异常改变。
  第三部分 幼鼠脊髓损伤神经源性膀胱动物模型的建立及其尿动力学评估
  材料与方法
  雌性清洁级Wistar大鼠22只,体重(200±20)g,年龄4~6周。随机分为神经源性膀胱组(n=14)和正常对照组(n=8)。采用水合氯醛注射液腹腔内麻醉(300mg/kg),必要时追加。神经源性膀胱组采用改良的Allen's法(冲击损伤法50gcm)建立T12脊髓损伤模型。神经源膀胱组和正常对照组在术后5~6d均行X线影像尿动力学检查。记录神经损害的表现及最大膀胱容量、膀胱压、膀胱顺应性、逼尿肌漏尿点压和膀胱形态变化等影像尿动力学参数。
  结果:
  NB组大白鼠术后出现后肢瘫痪等脊髓损伤表现,对照组无神经损伤表现。与对照组比较NB组逼尿肌无收缩,最大膀胱容量[(3.93±2.03)ml vs.(0.081±0.247)ml]和膀胱顺应性[(0.093±0.54)ml/cmH2O vs.(0.022±0.01)cmH2O]显著增加(P<0.001),逼尿肌漏尿点压力显著升高[(45.38±12.52)cmH2O vs.(26±3.85)cmH2O,P<0.001]。NB组大鼠术后5~6d影像尿动力学检查显示膀胱体积逐渐增大,成典型的“橄榄球”状。对照组膀胱影像学图像示膀胱体积无明显增加。
  结论:
  1.足月儿和早产儿排尿方式明显不同,足月儿排尿多伴有大脑皮层的觉醒。提示足月儿的膀胱功能及其受控制的神经系统发育过程较早产儿成熟;
  2.脑室周围-脑室内出血对早产儿残余尿量及排尿时意识状态具有显著影响,提示脑室周围-脑室内出血影响早产儿的排尿方式;
  3.膀胱容量小、膀胱顺应性差是有输尿管反流的NB患儿伴发DO的尿动力学特征;
  4.CIC和CDS联合抗胆碱药托特罗定治疗NB伴发DO患儿安全有效,可明显减少患儿尿失禁次数,改善生活质量。
  5.采用改良的Allen's法(冲击损伤法50gcm)可以建立幼鼠高位脊髓损伤NB模型,尿动力学检查符合NB改变。
[博士论文] 翟明玉
麻醉学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  右美托咪定(Dex)做为一个高效、高选择的α2受体激动剂,由于其具有镇痛、镇静、抗炎和利尿等积极作用,同时无明显的呼吸抑制及脑电干扰等副作用,目前在临床中以麻醉辅助用药的身份得到了广泛的应用,在心脏手术中,Dex表现出了能够减少麻醉药物的需要量,增强血液动力学的稳定性和提供心脏手术后患者的镇静作用等方面的优势。随着Dex在心脏手术中的广泛应用,Dex表现出可以降低CPB下心脏手术患者的术后肺损伤和脑损伤的发生率及减轻术后肺损伤和脑损伤的程度。然而,Dex对CPB下心脏手术患者的肾保护作用的安全性和有效性仍存在争议。Sugita S等报道在动物模型中,Dex可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,然而Kari等却报道在临床中Dex仅增加了尿量,并没有对肾脏产生保护作用。
  心脏直视手术大多需要在体外循环(CPB)辅助下完成,但CPB过程中引起的小栓子脱落、非生理性灌注及炎症反应等可导致肾组织局部产生不同程度的缺血,再灌注被认为是缺血的必要挽救措施,但是随着研究的深入发现缺血后再灌注反而加重原来缺血器官的损伤,所以CPB下心脏手术后,肾脏遭受着缺血及缺血后再灌注等多重打击,最终有可能引起术后不同程度的急性肾损伤(AKI)。肾小管上皮细胞是肾脏主要实质细胞,与其它肾单位相比其最容易发生缺血性损伤,肾H/R损伤很容易导致肾小管上皮细胞凋亡。AKI是一种发病率及死亡率极高和使医疗费明显增加的全球公共卫生问题。临床研究表明CPB下心脏瓣膜置换术是心脏手术后AKI发生的一个独立危险因素。实施合理的肾保护策略具有重要意义,麻醉药物的选择和合理使用是围术期实施肾保护策略的一个重要方面。对于CPB下心脏瓣膜置换术,这一术后高发AKI的手术类型,Dex是否具有肾保护作用,降低术后AKI的发生率尚未见报道。
  内质网(endoplasmic reticulum,ER):与各种膜蛋白、分泌蛋白、和磷脂胆固醇代谢相关的真核细胞内的最大细胞器,是细胞内折叠蛋白的场所。内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS):过度的氧化应激、缺血再灌注和钙离子浓度改变等病理生理改变时均可导致ER功能发生紊乱,细胞对ER功能的需求超过其自身能力,在ER内出现未折叠或错误折叠的蛋白质聚集以及Ca2+稳态失衡的病理状态。适度的ERS是细胞的自我保护性机制,其能够触发哺乳类动物真核细胞内的一种保护性应激反应即未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),最终恢复内质网稳态以使细胞生存;但是过强或过长时间的ERS则可能导致细胞凋亡或坏死,从而造成组织和器官受损。在缺血缺氧、葡萄糖缺乏、钙浓度变化以及氧化应激等病理情况时则能诱发ERS,这是启动细胞凋亡的重要途径之一。研究表明ERS参与心、脑、肾等重要器官缺血再灌注损伤的病理生理过程。但Dex对肾脏的保护作用是否与ERS途径有关尚不清楚。
  脂质过氧化反应是指机体必须的多不饱和脂肪酸在体内氧化酶的作用下生成了一系列生物活性物质,同时也产生了大量氧自由基。增高的氧自由基不仅可以直接氧化脂质以及蛋白质和DNA等生物大分子,还可以作为信号分子引起细胞内外信号传导通路的异常,导致人体正常细胞和组织的损坏,从而引起多种疾病。围术期肾损伤的发病率不断上升,以缺血再灌注肾损伤最为多见,常发生于肾移植、CPB下心脏手术后、创伤、失血性休克及脓毒血症等疾病基础下,有研究表明肾损伤的发病机制除了与ATP的减少、细胞凋亡基因的调控和细胞内钙超载外,与大量氧自由基的产生也有着密切关系。所以脂质过氧化反应过程中产生的大量氧自由基在缺血性肾损伤的发生发展中具有重要意义,许多减轻肾缺血再灌注的因素亦可以通过抑制脂质过氧化反应而发挥肾保护作用。目前,有关脂质过氧化反应是否参与Dex对肾缺血再灌注的保护作用尚无定论。
  目的:
  本研究分临床试验和细胞实验两部分。
  第一部分 临床试验部分
  1.通过给予CPB下瓣膜置换术患者Dex干预后,检测患者各时点的血清中NGAL和尿IL-18的水平,BUN和Cr的浓度,同时记录术中、术后1d和术后2d患者的尿量,诊断并记录患者术后AKI的发生情况,评估Dex对患者肾功能及术后AKI发生率的影响。
  2.测定患者各时点的血清中MDA浓度和SOD活性,了解脂质过氧化反应是否参与Dex对CPB下瓣膜置换术患者肾功能的影响。
  第二部分 细胞实验部分
  1.通过给予肾小管上皮细胞(HK-2细胞)Dex培养后,测定细胞活力及细胞凋亡率,评估Dex对缺氧复氧诱导HK-2细胞凋亡的保护作用
  2.通过测定经不同培养方式后的HK-2细胞GRP78、CHOP、caspase-12和活化caspase-3的表达水平及MDA浓度和SOD活性,探讨ERS和脂质过氧化反应在Dex肾保护作用中的潜在机制。
  方法:
  第一部分 临床试验部分
  右美托咪定对CPB下瓣膜置换术患者术后急性肾损伤的发生率及肾功能的影响:一项双盲、随机、对照研究
  择期CPB下心脏瓣膜置换术患者入选了本随机、前瞻性、安慰剂对照和双盲试验。性别不限,年龄18~65岁,ASA分级Ⅱ或Ⅲ级,NYHA分级Ⅱ-Ⅲ级,采用电脑随机数字表法,将其分为两组:对照组(Placebo组)和右美托咪定组(Dex组)。麻醉诱导前Dex组静脉注射4.0μg/ml的右美托咪定0.6μg/kg(给药时间15min),随后以0.2μg·kg-1·h-1速率输注至术毕,Pacebo组给予等容量的生理盐水。分别于麻醉诱导前(T1)、手术结束时(T2)及术后12h、24h和72h(T3-5)留取颈内静脉血样和尿液,采用ELISA法测定NGAL和尿IL-18的水平及测定MDA浓度和SOD活性,并测定血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的浓度,同时记录术中、术后1d和术后2d患者的尿量,记录患者术后急性肾损伤等围术期不良事件的发生情况。
  第二部分 细胞实验部分
  内质网应激在右美托咪定对缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用
  将培养成功的人肾小管上皮细胞系(HK-2细胞),采用随机数字表法,将其分为4组(n=5):正常对照组(C组):置于37℃常氧恒温细胞培养箱28h;右美托咪定组(Dex组):终浓度0.1nmol/L的Dex孵育2h,随后置于37℃常氧恒温细胞培养箱进行培养28h;缺氧/复氧组(H/R组):置于37℃的厌氧培养罐中缺氧24h后,随后置于37℃常氧恒温细胞培养箱进行复氧4h;Dex+缺氧/复氧组(各Dex+H/R组):用终浓度0.1nmol/L的Dex孵育2h,随后置于37℃的厌氧培养罐中缺氧24h后置于37℃常氧恒温细胞培养箱进行复氧4h。各组培养结束后采用MTT法检测细胞活力,计算细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率。Western blot法检测GRP78、CHOP、caspase-12和活化caspase-3的表达并测定细胞丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性。
  结果:
  第一部分 临床试验部分
  最终共有72例患者完成本项试验,两组患者一般资料各指标及术中情况各指标的比较差异无统计学意义(P>0.05)。与T1(麻醉诱导前)比较,两组T5时(术后72h)血清BUN和Cr的浓度升高,T3,4时(术后12h和24h)血清NGAL和尿IL-18的水平升高,T2,3时(手术结束时和术后12h)血清MDA浓度升高,SOD活性降低(P<0.05)。与Placebo组比较,Dex组T5时(术后72h)血清BUN和Cr的浓度降低,T3,4时(术后12h和24h)血清NGAL水平降低(P<0.05),两组各时点尿IL-18水平差异无统计学意义(P>0.05),T2,3时(手术结束时和术后12h)血清MDA浓度降低,SOD活性升高(P<0.05)。与Placebo组比较,Dex组术中尿量增多,术后AKI的发生率明显较Placebo组低(P<0.05)。两组患者术后恢复情况及其他不良事件各指标的比较差异无统计学意义(P>0.05)。
  第二部分 细胞实验部分
  倒置显微镜下,C组和Dex组细胞贴壁良好,形态正常;H/R组活细胞数减少,细胞呈水泡样变性;Dex+H/R组细胞状态较H/R组明显改善。与C组比较,H/R组和Dex+H/R组HK-2细胞活力降低,凋亡率升高(P<0.05);与H/R组比较,Dex+H/R组HK-2细胞活力升高,凋亡率降低,与C组比较,H/R组和Dex+H/R组SOD活性降低,MDA浓度及GRP78、CHOP、caspase-12和活化caspase-3的表达上调(P<0.05);与H/R组比较,Dex+H/R组SOD活性升高,MDA浓度及GRP78、CHOP、caspase-12和活化caspase-3的表达下调(P<0.05)。
  结论:
  第一部分 临床试验部分
  1.右美托咪定可减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者术后肾损伤,降低术后AKI的发生率。
  2.脂质过氧化反应参与右美托咪定对CPB下心脏瓣膜置换术患者术后肾功能的影响。
  第二部分 细胞实验部分
  1.右美托咪定可减轻缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞的凋亡。
  2.内质网应激通路参与右美托咪定减轻缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞的凋亡。
[博士论文] 王海涛
外科学(整形) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:包皮过长(redundant prepuce)作为男性外生殖器最常见的疾病,在我国18岁以上男性发病率30%-50%,其存在阻碍阴茎的正常发育、导致包皮与阴茎头及尿路的炎症、增加性传播疾病、诱发阴茎癌等众多危害。随生活水平和保健意识的提高,行包皮过长手术治疗的患者也越来越多。
  传统的包皮环切术将包皮与阴茎浅筋膜、血管、淋巴管、神经等组织一并切除,手术创伤大,术后并发症多。近年来,较为先进的术式主要集中在去除包皮皮肤或表皮层的改良包皮环切术,保留了阴茎浅筋膜系统,术后效果良好。然而,作为此类手术的基础解剖研究甚少,目前尚术见有关包皮断层形态学观察的报道,鉴于此,我们从包皮环行断层解剖的角度出发,寻找各包皮断层形态学的差异与联系,尤其是各断层脉管系统、神经构筑的差异与联系,探究分层剥离包皮皮肤或表皮层的解剖可能与基础,旨在为仅切除多余的包皮皮肤或表皮层,保留包皮固有层及内外板间的筋膜、血管、淋巴管、神经的一系列改良手术方式提供理论依据,进而探讨仅切除多余的包皮皮肤或表皮层的改良包皮环切术联合阴茎增粗术治疗包皮过长伴阴茎细小的临床应用效果。
  在第一章第一部分通过对50例传统包皮环切术后包皮组织标本进行包皮断层脉管系统观察,结果表明:通过包皮断层解剖证明仅切除多余的包皮表皮层手术操作的可行性;包皮表皮层缺乏血管、淋巴管,而真皮层及肉膜层含有丰富的血管、淋巴管,血管以小静脉为主、真皮层内较真皮下层内丰富,仅切除包皮表皮层、保留包皮固有层及内外板间的筋膜、血管、淋巴管的手术方式,可有效避免血肿、水肿等并发症。在本章第二部分通过对本章第一部分50例标本进行包皮断层组织形态学及神经构筑观察,结果表明:包皮表皮层缺乏神经纤维,而真皮层及肉膜层含有丰富的神经纤维,仪切除包皮表皮层、保留包皮内外板固有层间的筋膜与神经等组织的手术方式,可避免损伤神经而发生感觉异常等并发症;内板表皮较平坦,角质层薄,易受伤,且含较多作为病毒靶细胞的郎格罕氏细胞,易受到HIV、HPV等病毒及细菌的感染,为病毒及细菌进入男性生殖道的主要途径。
  在第二章选择我院收治的120例包皮过长伴阴茎细小者,随机将其分成研究组与对照组,每组各60例,研究组采用改良包皮环切阴茎浅筋膜后移法行阴茎增粗术,对照组实施单纯去表皮包皮环切阴茎增粗术,比较分析两组阴茎周径、直径变化差、勃起功能、术后并发症等指标,结果表明:改良包皮环切阴茎浅筋膜后移法阴茎增粗术效果显著,其能够更好地充分利用自体组织增粗阴茎,且能同时解决包皮过长的问题;术中保留较少的包皮内板对降低HIV、HPV等病毒及细菌感染率有重要意义,且能提供更多的阴茎浅筋膜组织用于阴茎增粗。
  第一章 包皮断层形态学观察
  第一部分 包皮断层脉管系统观察
  目的:探讨包皮各环行断层脉管系统的差异与联系,从脉管系统角度探究分层剥离包皮皮肤或表皮层的解剖可能与基础。
  方法:随机选取威海市立医院烧伤整形美容外科2013年6月至2014年12月间,利用传统包皮环切术后包皮组织标本50例进行组织形态学观察。分别将标本自表皮真皮交界层行断层皮片剥离,并将其分为包皮内板表皮组、包皮外板表皮组、包皮内板真皮肉膜组、包皮外板真皮肉膜组4组。应用HE染色及SMA免疫组化染色光镜观察各组组织形态及其各断层脉管系统的差异与联系。
  结果:包皮内板表皮较平坦、角质层较薄,外板表皮突延伸、角质层较厚;内、外板表皮均缺乏血管、淋巴管;包皮内、外板真皮经剥离后,已无表皮残留,真皮及肉膜内缸管、淋巴管丰富,血管以小静脉为主、真皮层内较肉膜层内丰富;内板真皮肉膜组血管密度明显大于外板真皮肉膜组,有显著差异(P<0.05)。
  结论:通过包皮断层解剖证明仅切除多余的包皮表皮层手术操作的可行性;包皮内、外板表皮层缺乏血管、淋巴管,而真皮层及肉膜层含有丰富的血管、淋巴管,故而仅切除多余的包皮表皮层,保留包皮固有层及内外板间的筋膜、血管、淋巴管的手术方式,可有效减少损伤血管、淋巴管而发生血肿、水肿等并发症。
  第二部分 包皮断层神经构筑观察
  目的:观察包皮各环行断层组织形态及其神经构筑的差异与联系,从神经构筑角度探究分层剥离包皮皮肤或表皮层的解剖可能与基础。
  方法:以随机选取的威海市立医院烧伤整形美容外科2013年6月至2014年12月间、利用传统包皮环切术后的50例包皮组织标本为实验对象,采用S-100免疫组化染色及NFP免疫荧光染色等方法,对各组组织形态及其各断层神经构筑的差异与联系进行观察。
  结果:包皮内、外板表皮均缺乏神经纤维,但内板真皮乳头内含有较丰富的触觉小体,且内板表皮层分布较多的郎格罕氏细胞;真皮及肉膜内神经纤维丰富,但肉膜层内较真皮层内神经纤维分布密度大;内板真皮肉膜组神经纤维分布较外板真皮肉膜组明显丰富,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:包皮内、外板表皮层缺乏神经纤维,而真皮层及肉膜层含有丰富的神经纤维,因此仅切除包皮表皮层、保留包皮内外板固有层间的筋膜与神经等组织的手术方式,可减少损伤神经而发生感觉异常等并发症;内板表皮较平坦,角质层薄,易受伤,且含较多作为病毒靶细胞的郎格罕氏细胞,易受到HIV、HPV等病毒及细菌的感染,为病毒及细菌进入男生殖道的主要途径。
  第二章 改良包皮环切浅筋膜后移法阴茎增粗术的疗效观察
  目的:探讨改良包皮环切浅筋膜后移法阴茎增粗术的临床治疗效果。
  方法:选择2010年6月至2015年6月我院收治的120例包皮过长伴阴茎细小者,随机将其分成研究组与对照组,每组各60例,研究组采用改良包皮环切阴茎浅筋膜后移法行阴茎增粗术,对照组实施去表皮包皮环切阴茎增粗术,比较分析两组阴茎周径、阴茎直径、阴茎勃起功能、术后并发症等指标。
  结果:研究组术后静息状态下阴茎周径7.61±0.30cm,术后勃起状态阴茎周径11.23±0.78cm,较术前明显增粗(P<0.05),且优于对照组术后静息状态下阴茎周径及术后勃起状态阴茎周径(P<0.05)。研究组术后1个月、3个月、6个月的阴茎直径变化差与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者手术对其阴茎勃起功能无明显影响。随访3~12个月,两组已婚患者感觉性生活质量改善,研究组术后不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。
  结论:与去表皮包皮环切阴茎增粗术比较,改良包皮环切阴茎浅筋膜后移法在解决包皮过长问题的同时,能够更好地充分利用自体组织增粗阴茎,且阴茎增粗术效果更显著;可有效减少血肿、水肿、感觉异常等并发症的发生;术中保留较少的包皮内板有利于降低HIV、HPV等病毒及细菌感染率,同时尽可能多的提供阴茎浅筋膜组织用于阴茎增粗。
[博士论文] 乔颖进
内科学(肾病) 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:在中国,原发性肾小球病是导致终末期肾脏病(End stage renaldisease,ESRD)的首位病因[1],在美国等西方欧美国家,它是继糖尿病肾病和高血压肾损害之后的第三位病因[2]。蛋白尿,作为肾小球病最突出的临床表现,已被证实是加速肾功能恶化、卒中、心血管死亡的独立危险因素[3-6]。虽然血管紧张素拮抗剂和免疫抑制在原发性肾小球病的治疗中取得了不俗的疗效[7-9],但是难治性蛋白尿始终是一大临床难题。因此,寻求更为有效的治疗方案促进蛋白尿缓解改善肾损伤是势在必行的。近期,大量证据显示黑皮质素系统是治疗蛋白尿的新靶点[10]。
  作为4种天然黑皮质素之一,促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic hormone,ACTH)于上世纪50年代开始被广泛用于肾病综合征的治疗[11,12]。研究显示,ACTH对多种肾小球病有效,包括特发性膜性肾病(Idiopathic membranous nephropathy,iMN)[13-17]、微小病变病(Minimal change disease,MCD)[14-161、局灶节段性肾小球硬化症(Focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)[14-16,18,19]和免疫球蛋白A肾病(Immunoglobulin A nephropathy,IgAN)[16],这提示黑皮质素的治疗靶点应该是或很可能是所有肾小球病的共同致病通路。因此,足细胞,作为肾小球滤过屏障的重要组成部分,大量蛋白尿发病机制的重要参与者[20-23],就有可能成为黑皮质素的作用靶细胞。已经有研究显示,黑皮质素可能通过对足细胞的直接保护作用发挥抗蛋白尿和肾脏保护作用[24,25]。
  黑皮质素通过与5种不同受体结合而发挥下游的生物学效应[26-28],而究竟哪种受体介导了黑皮质素的非激素依赖的抗蛋白尿和肾脏作用尚存有争议。本研究利用自然发生黑皮质素受体1(Melanocortin receptor1,MC1R)基因突变的人类和小鼠探讨MC1R失功能对黑皮素抗蛋白尿和肾脏保护作用的影响。
  第一部分 MC1R失功能对黑皮质素治疗激素抵抗的肾小球病疗效的影响
  目的:
  观察黑皮质素是否对MC1R失功能的激素抵抗的肾小球病患者有效。
  方法:
  回顾性选择自2009年3月至2015年10月就诊于瑞典隆德大学附属医院肾内科的、先天性红发、激素抵抗的肾小球病患者。收集这些患者的外周血分离单个核细胞进行环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)释放实验,同时提取全基因组DNA进行MC1R测序。
  结果:
  1.4例先天性红发患者MC1R存在D84E或R151C突变。
  2.4例患者突变的MC1R不能诱导细胞内cAMP的释放。
  3.ACTH治疗对这4例MC1R失功能的激素抵抗的肾小球病有效。
  结论:
  1.4例MC1R突变的先天性红发患者存在MC1R的基因失功能。
  2.ACTH可有效治疗MC1R失功能的激素抵抗的肾小球病患者。
  3.MC1R失功能不影响ACTH非激素依赖的抗蛋白尿作用。
  第二部分 MC1R失功能对黑皮质素缓解肾小球病模型小鼠尿蛋白的影响
  目的:
  观察黑皮质素对肾小球病模型鼠的抗蛋白尿和肾脏保护作用,探讨MC1R失功能对这一作用的影响。
  方法:
  1.长期饲养WT和e/e小鼠,观察二者除被毛颜色外是否还存在其他生理异常。
  2.应用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和阿霉素(Adriamycin,ADR)在野生型(Wild type,WT)和Mc1re/e阴性纯合基因突变(e/e)小鼠诱导肾小球病模型,同时给予肾小球病模型鼠黑皮质素干预。
  3.检测小鼠尿蛋白定量、肾小球结构改变、肾小球中足细胞损伤相关蛋白的表达评价LPS和ADR所致的肾脏损伤及黑皮质素的保护效应。
  结果:
  1.WT和e/e小鼠除被毛颜色外其他生理功能无异常。
  2.LPS和ADR可在WT和e/e小鼠成功诱导出肾小球病模型,WT和e/e小鼠的尿蛋白和肾小球的损伤程度相似,二者没有统计学差异。
  3.黑皮质素可减轻LPS和ADR所致的蛋白尿和肾小球损伤,减轻程度在WT和e/e小鼠没有统计学差异。
  结论:
  1.MC1R失功能不影响e/e小鼠的正常生理功能。
  2.MC1R失功能性不影响黑皮质素对LPS和ADR诱导的足细胞病的抗蛋白尿和肾脏保护作用。
  第三部分 MC1R缺失在黑皮质素减轻LPS和ADR所致足细胞损伤中的作用
  目的:
  观察黑皮质素对足细胞损伤的保护作用,探讨探讨MC1R失功能对这一作用的影响。
  方法:
  1.自WT和e/e小鼠分离肾小球并提取原代足细胞,分别给予LPS和ADR刺激,用应用黑皮质素干预。
  2.通过检测白蛋白流入量、细胞活力、足细胞损伤相关蛋白、足细胞迁移率评价细胞的损伤程度。
  结果:
  1.LPS和ADR和导致足细胞单层滤过屏障功能下降,细胞活力下降、细胞固有蛋白的表达减少、损伤相关蛋白的重新表达以及细胞迁移的加快,在WT和e/e小鼠的足细胞,LPS和ADR所致的损伤程度类似,二者没有统计学意义。
  2.黑皮质素可减轻LPS和ADR所致的足细胞损伤,减轻程度在WT和e/e小鼠没有统计学差异。
  结论:
  1.LPS和ADR可导致直接的足细胞损伤。
  2.MC1R失功能不影响黑皮质素对LPS和ADR所致足细胞损伤的保护作用。
  全文结论:
  1.黑皮质素具有非激素依赖的抗蛋白尿作用。
  2.MC1R失功能不影响黑皮质素非激素依赖的抗蛋白尿作用的发挥。
[硕士论文] 赵凤琦
急诊医学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  本研究旨在通过对既往急性肾损伤(AKI)患者资料的回顾性分析,初步探索3型心肾综合征(CRS)在此类人群的发生情况、临床特征、危险因素及其对疾病预后的影响,以期能更好的预防或延缓3型心肾综合征的出现,改善患者的预后。
  方法:
  本研究为单中心病例对照研究,通过陆军总医院出入院病例电子数据库筛选出2013年1月1日至2016年10月1日期间接受住院治疗的急性肾损伤的患者资料共186例,并根据住院期间是否出现急性心脏损伤将病例分为3型心肾综合征组(53例)和非3型心肾综合征组(133例)。详细记录两组患者的性别、年龄、血压、体重指数、既往病史、临床相关化验及检查指标、治疗药物使用情况、住院时间、医疗费用及出院时转归等资料。采用SPSS22.0软件建立数据库分析3型心肾综合征在急性肾脏损伤患者的发生率、危险因素及其对预后的影响。主要统计方法包括t检验、x2检验、单因素相关性分析及二分类多因素Logistic回归分析。
  结果:
  (1)3型CRS中AKI主要诱因是感染性疾病(36.02%)及肾毒性药物的使用(29.03%);(2)在186例急性肾损伤患者中,53例(28.49%)发生3型CRS,在心脏并发症中以不稳定型心绞痛(33.96%)占比最高;(3)单因素分析显示:年龄、体重指数(BMI)、慢性肾病史、病因、AKI分期、D-二聚体、肌酐/尿素氮(SCr/BUN)、肾小球滤过率估计值(eGFR)、纤维蛋白原及胆固醇增高、左心舒张功能减退、心功能分级≥3级、使用激素、利尿剂、微循环改善药物及肾脏替代治疗在两组间的差异存在统计学意义。进一步行多因素Logistic回归分析,结果表明年龄≥60岁、慢性肾病史、eGFR<60ml/min/1.73m2、胆固醇增高、左心舒张功能减退是AKI患者住院期间发生3型CRS的危险因素;使用微循环改善药物是AKI患者住院时3型CRS的保护因素;(4)3型CRS组患者的住院时间、医疗费用及死亡率均高于单纯AKI组;且3型CRS与年龄及血管活性药物共同成为影响AKI患者死亡率的独立危险因素。
  结论:
  急性肾损伤住院患者中3型心肾综合征的发生率较高且导致患者临床预后差,同时加重了患者的医疗负担。年龄≥60岁、既往慢性肾病史、eGFR<60ml/min/1.73m2、胆固醇增高、左心舒张功能减退是AKI患者合并3型CRS的预测因子,使用微循环改善药物可能使3型CRS的发生率降低,了解这些或对于3型CRS的早期预防及改善AKI患者预后有重要意义。
[硕士论文] 郭织运
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  明确慢性肾脏病(CKD)时ROCK1的激活是否刺激线粒体裂变增加,并参与慢性肾脏病肌肉萎缩的发生和发展;
  研究方法:
  体内动物实验:雄性,C57BL/6J小鼠,40只,按照实验处理方法的不同分成4组:假手术组(WT组),CKD组,假手术+Fasudil组(WF组),CKD+Fasudil组(CF组);其中,WT组行肾脏包膜剥离术,CKD组行5/6肾脏切除术,1月后,两组老鼠行尾静脉取血,测血清尿素氮(BUN)及血清肌酐(Cr)水平,筛选CKD成模老鼠;将WT组和CKD组老鼠,随机分成上述四组,配对饲养;其中WT组和CKD组老鼠,行腹腔注射生理盐水(3次/周,持续8周),高蛋白饲料喂养;WF和CF组老鼠,腹腔注射Fasudil(30mg/kg/次,3次/周,持续8周),高蛋白饲料喂养。每周测量老鼠体重。实验结束后,按照实验目的和操作步骤,收取老鼠腓肠肌、胫骨前肌等下肢肌,用于免疫荧光染色及蛋白免疫应迹(Western Blot)或Real time-PCR,检测ROCK1、MuRF1等目标分子的表达情况,从而明确Fasudil能否逆转CKD所致肌肉萎缩及线粒体裂变相关蛋白的增加。体外细胞实验:体外培养C2C12成肌细胞,2%马血清诱导细胞分化成熟,腺病毒载体ROCK1刺激细胞过表达ROCK1,对照组给予腺病毒载体GFP(绿色荧光蛋白),,按照给予刺激的不同,实验分成四组:1)Ad-GFP组,给予腺病毒载体-GFP(AAV-GFP,5nmol/l);2)Ad-ROCK1组,给予腺病毒载体-ROCK1(AAV-ROCK1,5nmol/l);3)Ad-GFPF组,在给予GFP的前提条件下,给予Fasudil(10umol/l)刺激;4)Ad-ROCK1F组,在给予AAV-ROCK1前提下,给予Fasudil(10umol/l)刺激。各组病毒刺激持续48小时。通过细胞能量代谢分析仪(Seahorse)评估C2C12成肌细胞在不同刺激条件下时,细胞呼吸过程中耗氧量及产酸率的改变情况;通过染色,证实ROCK1过表达对C2C12成肌细胞线粒体形态和功能的影响;检测各组肌萎缩相关蛋白及线粒体裂变相关基因的表达的变化情况。
  研究结果:
  体内实验中,与WT组相比,CKD组老鼠,ROCK1表达增加,肌肉横截面积减少肌纤维分布左移,同时电镜下观察发现,CKD组老鼠线粒体裂变增加;CF组与CKD组相比,给予Fasudil腹腔注射老鼠,CKD所致肌肉横截面积减少不明显,肌纤维分布右移,肌萎缩相关蛋白MuRF及线粒体裂变相关蛋白p-Drp1表达减少。体外实验中,Seahorse检测线粒体应激变化时,Ad-ROCK组较GFP组细胞基础呼吸、最大呼吸、额外呼吸增加,给予FCCP刺激后,细胞呼吸的耗氧量及产酸率也明显增加;细胞线粒体染色观察到,Ad-ROCK组细胞线粒体裂变增加,表现为碎片化,线粒体裂变蛋白p-Drp1表达增加,而且活性氧的的释放增加;给予Fasudil刺激后,能明显改善ROCK1过表达所导致的p-Drp1,MuRF1、Atrogin1的增加,纠正细胞呼吸异常。
  研究结论:
  慢性肾脏病时,激活ROCK1,刺激线粒体裂变增加,增加活性氧释放,并增加细胞耗氧量和产酸率,影响蛋白的合成和降解速率,参与肌肉萎缩的发生;Fasudil作为ROCK1的抑制剂,能够在一定程度上阻断ROCK1通过激活p-Drp1所引起的线粒体裂变增加,从而阻断由此继发的一系列不良影响,并最终实现改善肌肉肌肉萎缩的目的,为临床防治慢性肾脏病肌肉萎缩提供新的思路及方法。
[博士论文] 宋燕
内科学(肾病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 ADSCs通过抑制肾小管上皮-间质转化(EMT)改善UUO大鼠肾间质纤维化
  目的:
  探讨ADSCs对UUO大鼠肾小管上皮细胞EMT和间质纤维化的影响及其可能的机制。
  方法:
  体外分离培养鉴定大鼠脂肪来源的ADSCs并用绿色荧光蛋白(GFP)进行体外标记。45只雄性Wistar大鼠,分为3组,各15只:(1)单侧输尿管梗阻组,称UUO组。大鼠行左侧输尿管结扎,术后7天尾静脉注射生理盐水1ml;(2)单侧输尿管梗阻+细胞移植组,称UUO+ADSCs组,大鼠行左侧输尿管结扎术,术后7d尾静脉注射5×106ADSCs;(3)正常对照组,称Sham组,手术入路方式同UUO组,进入腹腔后分离左输尿管但不结扎输尿管,术后7d尾静脉注射生理盐水1ml。为了示踪干细胞移植后在肾脏内的分布,另有8只UUO大鼠于手术后当天经尾静脉注射转染GFP的ADSCs。术后第14天处死动物留取血和肾组织标本。应用自动分析仪测定血肌配和尿素氮水平。HE、Masson染色评估肾间质纤维化程度。用免疫组化法测定肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),成纤维细胞特异蛋白1(FSP-1),纤连蛋白(FN)和E钙粘蛋白(E-cadherin)水平表达变化。应用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法分别检测肾组织中α-SMA、FSP-1、FN和E-cadherin的基因水平和蛋白水平的表达。
  结果:
  1.ADSCs形态学观察与鉴定显示大鼠脂肪来源的ADSCs具有典型的成纤维细胞形态,贴壁生长,在适当的培养环境下可向脂肪细胞和成骨细胞分化,表达CD29,CD90,CD44,不表达CD34,CD45,CD11b。
  2.ADSCs肾脏内示踪显示ADSCsGFP移植后24h,在肾小球及附近的血管可以观察到少量的ADSCsGFP,但在移植后8周,仅在肾小球中发现极少的ADSCsGFP细胞。
  3.手术后第14天,S ham组、UUO组与UUO+ADSCs组血肌酐、尿素氮无显著差异(p>0.05)。
  4.HE、Masson染色结果显示,Sham组大鼠肾脏组织学正常,UUO组大鼠可见严重肾间质纤维化,包括肾小管扩张、萎缩以及小管上皮细胞空泡变性,肾间质大量炎症细胞浸润。经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组肾间质纤维化程度明显减轻(p<0.05)。
  5.免疫组化结果显示,UUO组α-SMA、FSP-1和FN表达较Sham组明显增加,E-cadherin表达较Sham组明显减少(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组α-SMA、FSP-1和FN表达明显减少,E-cadherin表达明显增加(p<0.05)。
  6.实时荧光定量RT-PCR和Western blot显示,UUO组α-SMA、FSP-1和FN表达较Sham组明显增加,E-cadherin表达较Sham组明显减少(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组α-SMA、FSP-1和FN表达明显减少,E-cadherin表达明显增加(p<0.05)。
  结论:
  ADSCs可以减轻单侧输尿管梗阻模型大鼠早期肾间质纤维化程度和肾小管上皮-间充质细胞转化,该作用可能与ADSCs下调肾间质α-SMA、FSP-1和FN表达,上调E-cadherin表达有关。
  第二部分 ADSCs通过抑制炎症反应改善UU0大鼠肾间质纤维化
  目的:
  观察ADSCs对UUO大鼠间质炎症反应的影响,探讨ADSCs延缓肾间质纤维化进展的机制。
  方法:
  实验分组及组织标本收集同第一部分。采用免疫组化法测定肾组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),Toll样受体4(TLR4),肿瘤坏死因子α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的表达。实时荧光定量RT-PCR检测MCP-1,TLR4,TNF-α,IL-1β和IL-6基因水平表达变化。
  结果:
  免疫组化及实时荧光定量RT-PCR结果显示,UUO组MCP-1,TLR4,TNF-α,IL-1β和IL-6表达较Sham组明显增加(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组MCP-1,TLR4,TNF-α,IL-1β和IL-6表达明显减少(p<0.05)。
  结论:
  ADSCs可以减轻UUO大鼠早期肾间质纤维化程度,该作用可能与ADSCs抑制UUO大鼠肾脏间质炎症反应有关。
  第三部分 ADSCs改善UUO大鼠肾间质纤维化的分子机制
  目的:
  探讨ADSCs是否可以通过抑制TGF-β1/Smad信号通路抗UUO大鼠肾间质纤维化
  方法:
  实验分组及组织标本收集同第一部分。采用免疫组化法检测各组肾组织中TGF-β1蛋白表达。实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β1、Smad7基因水平的表达。Western blot方法检测各组大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。
  结果:
  1.免疫组化结果显示,UUO组TGF-β1表达较Sham组明显增加(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组TGF-β1表达明显减少(p<0.05)。
  2.实时荧光定量RT-PCR结果显示,UUO组TGF-β1表达较Sham组明显增加,Smad7表达较Sham组明显减少(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组TGF-β1表达明显减少,Smad7表达明显增加(p<0.05)。
  3.Western blot结果显示,UUO组TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3表达较Sham组明显增加,Smad7表达较Sham组明显减少(p<0.05);经ADSCs治疗后,UUO+ADSCs组较UUO组TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3表达明显减少,Smad7表达明显增加(p<0.05)。
  结论:
  ADSCs能通过抑制TGF-β1/Smad信号通路而改善UUO大鼠肾间质纤维化。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部