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[硕士论文] 汤瑞瑞
数学 中北大学 2018(学位年度)
摘要:性传染病的广泛蔓延,已经严重危害到人类的生命安全。由于我国社会文化对同性性行为的排斥,使得男-男性接触人群成为了性传染病传播的隐性人群,严重阻碍了性传染病的预防与控制。因此,分析男-男性行为对性传染病的传播至关重要。另外,在性传染病的预防与控制中,疫苗作为有效的预防策略被广泛的使用,则研究疫苗接种对性传染病的传播与控制同样具有重要意义。基于这两方面的考虑,本文的主要研究内容有:
  (1)为了分析男-男性行为对性传染病传播的影响,建立了带有男-男性行为的性传染病动力学模型,获得了模型的基本再生数,给出了无病平衡点、边界平衡点及地方病平衡点的存在性且证明了其全局渐近稳定性。最后通过数值模拟对理论结果进行了验证,数值模拟结果显示:对于性传染病中异性与男-男的控制都能有效的控制疾病的传播,但后者的效果更显著。
  (2)预防接种是控制疾病传播的主要方法之一,本文建立了高危人群自愿接种的性传染病模型,结合博弈论思想利用Logistic方程给出了疫苗接种率函数,求出了模型的基本再生数并分析了平衡点的存在性与稳定性。最后,通过数值模拟给出了自愿接种对疾病传播的影响,即当个体的预防意识较弱或对疫苗接种的效益估计越准确时,潜藏着疾病暴发的可能;同时应控制疫情信息的传播,避免过多的疫情信息阻碍疾病的控制。
[硕士论文] 沈旭
流行病与卫生统计学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)存在beta2-糖蛋白Ⅰ(β2-GPⅠ)依赖型与β2-GPⅠ非依赖型两种性质类型。前者主要存在于抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid antibody syndrome,APS)等自身免疫性疾病患者中,且可导致患者出现动/静脉血栓形成和血小板减少等凝血功能异常表现;而β2-GPⅠ非依赖型ACA则主要存在于感染性疾病患者中,且与上述临床表现无关。另外研究发现某些感染性疾病患者可能存在凝血功能障碍,而梅毒患者的凝血功能未见报道。而近来报道感染性疾病可能也存在β2-GPⅠ依赖型ACA。梅毒患者与梅毒生物学假阳性(biological false-positive,BFP)人群血清中均存在梅毒非特异性抗体阳性,ACA作为梅毒非特异性抗体的主要组分,但其β2-GPⅠ依赖性质和凝血功能仍有待进一步明确。本研究重点明确梅毒患者与BFP人群中ACA的异质性,同时探讨其与凝血功能的相关性。
  方法:
  共纳入675例患者(包括梅毒患者465例,BFP人群146例,APS患者64例)以及选取新西兰雄兔8只。使用化学发光试验方法检测实验人群的血清β2-GPⅠ依赖型ACA IgA/IgG/IgM和抗β2-GPI IgA/IgG/IgM抗体以及活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶原时间(prothrombintime,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、纤维蛋白原浓度(fibrinogen concentration,FIB)和血小板计数等相关常规凝血功能指标;使用自行构建ELISA方法检测实验兔血清β2-GPI依赖型ACA,同时使用性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory,VDRL)检测实验兔血清梅毒非特异性抗体情况。
  结果:
  BFP人群与APS患者血清β2-GPⅠ依赖型ACA和抗β2-GPⅠ抗体的阳性率均高于梅毒患者,差异有统计学意义(BFP:22.60%和28.77%,APS:32.81%和32.81%,梅毒:3.87%和1.08%;P<0.001);而BFP人群与APS患者血清自免抗体阳性率无统计学差异(P=0.119;P=0.556)。梅毒患者与BFP人群血清β2-GPⅠ依赖型ACA浓度水平和阳性率均与快速血浆反应素试验(rapid plasma regain,RPR)滴度均无统计学相关性(P>0.05)。梅毒患者血清β2-GPI依赖型ACA和抗β2-GPⅠ抗体的主要亚型均为IgM;而BFP人群和APS患者则以IgG亚型为主,且其IgA亚型抗体也有较高的检出率。本研究还发现与梅毒患者相比,BFP人群和APS患者的APTT(P<0.001)、PT(P<0.001)延长,FIB降低(P=0.022),血小板计数减少(P<0.001)。与自身免疫性抗体阴性的各组人群相比,自身免疫性抗体阳性的梅毒患者、BFP人群与APS患者的APTT均有延长(P<0.05)。另外,对实验兔免疫偶联牛血清白蛋白的心磷脂抗原后可诱导其产生β2-GPⅠ依赖型ACA,并可导致部分实验兔的VDRL检测结果呈阳性。
  结论:
  梅毒患者和BFP人群的ACA存在异质性,梅毒患者的ACA为β2-GPⅠ非依赖型,而BFP人群存在明显比例的阳性β2-GPⅠ依赖型ACA,且其阳性率接近于阳性对照的APS患者,同时推测β2-GPⅠ依赖型ACA可能是导致梅毒生物学假阳性现象的原因之一。另外,β2-GPⅠ依赖型ACA与梅毒非特异性抗体检测的一致性差,β2-GPⅠ依赖型ACA浓度和阳性率与梅毒非特异性抗体滴度均无统计学相关性,提示β2-GPⅠ依赖型ACA与梅毒非特异性抗体检测方法所测的ACA是不同的。凝血功能分析发现与梅毒患者相比,BFP人群更易出现凝血功能障碍倾向,且自身免疫性抗体可能通过内源性途径影响机体的凝血功能。
[硕士论文] 孙培宏
皮肤性病学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  了解无症状神经梅毒的临床特点,进一步探讨无症状神经梅毒的血清学和脑脊液检查特点及治疗、随访效果,提高对无症状神经梅毒的认识。
  方法:
  对2013年3月-2017年5月在我院出院诊断为无症状神经梅毒的45例患者进行回顾性分析。收集无症状神经梅毒的住院、随访资料,对患者规范化治疗前和治疗半年后的血清学和脑脊液检查结果进行分析和比较。
  结果:
  1.45例无症状神经梅毒患者,男性22人,女性23人。20-40岁患者24人,女性患者18/24(75%),40岁以上患者共21人,男性患者15/21(71%),我院近几年每年新发无症状神经梅毒的患者人数为12人左右。
  2.住院时梅毒血清固定患者31人,血清RPR滴度小于或等于1∶4的9人,脑脊液RPR滴度波动于1∶1-1∶2之间;血清RPR滴度为1∶8的6人,脑脊液RPR滴度滴度波动于1∶1-1∶8之间;血清RPR滴度为1∶16的5人,脑脊液滴度波动于1∶1-1∶4之间;血清RPR滴度为1∶32的11人,脑脊液滴度波动于1∶1-1∶8之间。
  3.治疗前45位患者的脑脊液常规检查中13例白细胞数升高(28.8%),28例蛋白定性实验阳性(62.2%)。治疗随访半年后,15位患者再次做腰椎穿刺复查,其中7位患者治疗前蛋白定性表现异常,经过治疗后4例患者转阴;7例患者治疗前脑脊液细胞数升高,经过治疗后6例患者降至正常,差异无统计学意义(x2=1.4,P=0.237)。
  4.经过治疗随访半年后再次行腰椎穿刺检查的有15人。治疗前后血清RPR滴度未变化的有4人,3例脑脊液RPR转阴,1例脑脊液RPR下降1个滴度;血清滴度下降2倍的2人,其脑脊液RPR均转阴;血清滴度下降4倍的5人,脑脊液RPR滴度均未转阴;血清RPR滴度下降在8倍及以上的患者,脑脊液RPR滴度全部转阴。5.38例患者半年后血清学检查仍在随访中,青霉素治疗的27人,13(48%)人血清RPR滴度下降4倍以上;使用头孢曲松治疗的11人,5(45%)人血清RPR滴度下降4倍以上,差异无统计学意义(x2=0.023,P=0.88)。15人脑脊液检查结果半年后仍在随访中,10(15)例脑脊液RPR转阴,4例脑脊液RPR出现不同程度下降,1例脑脊液RPR滴度升高。青霉素治疗9人,6(66%)人血清脑脊液RPR滴度转阴;头孢曲松治疗6人,4(66%)人脑脊液RPR滴度转阴,差异无统计学意义(x2=0.000,P=1.00)。
  6.二期梅毒中有5例患者在经过早期青霉素的推荐治疗半年后血清RPR滴度下降4倍以上,但在后期的随访中依然进展为无症状神经梅毒。
  结论:
  1.无症状神经梅毒具有性别和年龄差异,我院近几年无症状神经梅毒的新发病例比较稳定。
  2.无症状神经梅毒患者的脑脊液常规检查中,蛋白定性实验的阳性率(62.2%)大于白细胞数(28.8%)异常。两者对治疗的反应无明显差异。
  3.无症状神经梅毒患者中,血清固定患者的比例较高(69%),血清固定患者中血清RPR滴度1∶32的比例较高,占35%。血清固定患者中血清RPR滴度与脑脊液RPR滴度无明显相关性。
  4.无症状神经梅毒经过推荐治疗,在半年后的随访中,血清RPR滴度下降小于等于4倍时,经过治疗后脑脊液滴度转阴率高(83%),但仍需要做腰椎穿刺复查;血清RPR滴度下降大于8倍以上时,血清学检查可能代替腰椎穿刺复查,有待进一步研究。
  5.无症状神经梅毒经过治疗,脑脊液RPR滴度半年后的转阴率较高(75%),半年后血清学RPR滴度均未转阴;头孢曲松钠与水剂青霉素治疗无症状神经梅毒时,血清学和脑脊液RPR滴度的变化无明显差异;对于青霉素过敏者及应用青霉素治疗依从性较差者可考虑将头孢曲松钠作为替代药物。
  6.现有的推荐疗法治疗早期梅毒可能存在着治疗剂量不足的问题。
[硕士论文] 徐桐桐
病原生物学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)俗称淋球菌(gonococcus),是淋病的病原菌,主要通过性传播,只感染人类,在男性常引起急性尿道炎,女性则一般表现为无症状感染,但病菌可向深部组织播散导致宫颈炎或不孕等严重后果。目前淋病没有可用疫苗进行预防,而治疗又因淋病奈瑟菌耐药性的日趋严重而越来越困难。全面理解淋病奈瑟菌的生物学特性可为淋病防治带来新的靶点。
  成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat,CRISPR)是近年发现的细菌获得性免疫系统,可使细菌防御外源DNA的再次入侵,为细菌抵抗不利环境因素提供了保障。该系统由CRISPR簇、Leader序列和Cas蛋白编码基因等3部分组成,其中CRISPR簇由交替排列的保守性重复序列和特异性间隔序列组成。约90%古细菌和40%真细菌基因组中发现有CRISPR系统,但淋病奈瑟菌的CRISPR系统尚未见报道。我们前期用生物信息学技术分析显示在淋病奈瑟菌WHO-A株中存在CRISPR簇和Cas蛋白,并且发现CRISPR簇的间隔序列部分靶向自身基因,可能对细菌的生长活动具有某种调控作用。本研究旨在研究WHO-A株CRISPR簇与自身靶基因间的相互作用,为研究淋病奈瑟CRISPR系统的结构与功能积累资料。
  一、淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇自身靶基因的筛选与克隆
  运用CRISPRs Finder在线系统从前期测序获得的WHO-A株基因组DNA序列中筛查CRISPR系统,获得P1~P6和CL等7个CRISPR簇,同时用重复区比对法进行人工分析获得1个CRISPR簇FAl。对这8个CRISPR簇的所有间隔序列进行BLAST分析,发现这些间隔序列与多个淋病奈瑟菌自身基因具有同源性。进一步按照间隔序列-靶基因间存在≧18 bp匹配序列的原则在已公布基因组序列的所有淋病奈瑟菌株中查找靶基因,再将所筛选的候选靶基因与WHO-A株基因组信息进行同源性比较,从WHO-A株自身基因组中初筛出自身间隔序列所靶向的基因。考虑到靶基因中上游受到干扰时对其表达的影响更显著,从上述靶基因中按照匹配位点位于中上游且至少有连续18 bp以上序列完全匹配的原则作进一步筛查,最终获得3个自身靶基因,即前噬菌体蛋白基因NGFG_01062、假定蛋白基因NGK_0072和菌毛相关蛋白基因NGK_2578。多个CRISPR簇中存在靶向NGK_2578基因的间隔序列,且CRISPR簇CL中存在多个间隔序列前后靶向该基因,提示淋病奈瑟菌CRISPR系统对菌毛可能发挥着重要的调控作用。运用PCR技术分别扩增了3个自身靶基因,插入到pET-GFP质粒中,重组载体pET-Targets-GFP导入到大肠埃希菌BL21中诱导表达,通过SDS-PAGE和荧光显微镜检测到靶蛋白-GFP的融合表达。
  二、利用重组大肠埃希菌分析淋病奈瑟菌CRISPR簇对自身靶基因的作用
  淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR系统的Leader与Cas蛋白的作用机制也不明确。但目前CRISPR/Cas9系统的结构与功能研究非常深入,Addgene提供的成熟载体pCas9中Leader与Cas9的作用方式非常明确,可作为研究未知CRISPR簇功能的理想工具。为在大肠埃希菌中借助pCas9系统研究淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇与靶基因间的相互作用,我们合成了筛选的CRISPR簇间隔序列并插入到pCas9中的克隆位点,构建重组质粒pCas9-S,导入含有靶基因表达载体pET-Targets-GFP的大肠埃希菌。重组菌用LB培养液传代,每代细菌分别在氯霉素和卡那霉素LB平板上活菌计数以分析间隔序列是否引导Cas9对靶基因发挥核酸酶的切割作用。结果表明,在pCas9-S导入的最初并没有发现其对靶基因产生明显作用。随着传代的进行,间隔序列P1S对靶基因NGFG_01062、CLS4对靶基因NGK_0072、CLS4和CLS5对NGK_2578基因都表现出了抑制效果,受体菌在含有卡那霉素平板上的CFU明显减少;qRT-PCR和SDS-PAGE分析显示靶基因的转录和蛋白表达水平明显下降。质粒提取提示,间隔序列对靶基因产生作用的过程中可能造成了含靶基因重组质粒的降解。间隔序列FAS1尽管不能降解靶基因NGK_2578但可抑制靶基因的转录从而降低目的蛋白的表达量。
  三、淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇的转录分析及基因敲除载体的构建
  提取淋病奈瑟菌WHO-A株总RNA进行RT-PCR检测发现,以针对CRISPR簇CL的特异性引物可以扩增出明显条带;对总RNA进行转录组测序,发现存在与CRISPR簇CL部分序列完全匹配的转录产物,提示CRISPR簇CL可转录形成前体crRNA。为构建CRISPR簇CL基因敲除的淋病奈瑟菌突变株,设计了6组针对CRISPR簇CL的sgRNA,插入pCas9的克隆位点获得打靶载体pCas9-sgRNA;同时克隆了淋病奈瑟菌CRISPR簇CL基因片段作为待敲除的靶基因。大肠埃希菌中证明特异性pCas9-sgRNA降解CL基因,pCas9-sgRNA转化淋病奈瑟菌WHO-A株构建突变株的实验正在进行中。另外还计划应用基于自杀载体的基因编辑技术对CRISPR簇CL进行突变,利用卡那霉素抗性基因kan替换了CL基因的中间部分,获得的携带kan抗性筛选标记的CL上下游同源臂插入自杀载体pGMB152,构建了重组载体pGMB152△CL∷Kan,为后期突变WHO-A株中CRISPR簇CL奠定了基础。
[硕士论文] 卞晓锐
病原生物学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:淋病是全球发病率最高的性传播疾病之一,淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,Ng)是淋病的病原体。淋病奈瑟菌感染可导致不孕不育,还可促进人类免疫缺陷病毒(HIV)的传播。随着抗生素使用种类的更新,淋病奈瑟菌耐药性范围也不断扩增,给淋病治疗带来极大难度。为此亟需全面了解淋病奈瑟菌的生物学特性,以利于从根本上控制淋病。
  近年发现约90%古细菌和40%真细菌基因组中存在CRISPR系统,由CRISPR簇、前导序列(Leader)以及一系列CRISPR相关蛋白(Cas)基因构成,为细菌防御噬菌体和外源基因的侵袭发挥重要作用,是细菌的获得性免疫系统。课题组前期分析淋病奈瑟菌WHO-A株基因组信息发现6个CRISPR簇和2个分别属于CT1133家族和TM1801家族的Cas基因(下文分别称CT和TM),本研究检测了淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的表达,并对其功能进行了初步探究。研究内容分为以下四个部分:
  一、淋病奈瑟菌Cas基因的类型分析与原核表达载体构建
  目前至少报道了45个Cas基因家族,为了分析淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的类型,对WHO-A株的两个Cas基因进行BLAST分析,与已公布的相关基因进行同源性比较。为研究淋病奈瑟菌中CRISPR系统中Cas蛋白的结构和功能,根据前期WHO-A株基因组序列测定结果确定其Cas基因的具体位置并设计引物。为将CT或TM基因均分别插入pCold-TF和pGEX-6p-1中,上下游引物两端分别添加有PstⅠ和KpnⅠ以及BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点。提取淋病奈瑟菌WHO-A株总DNA为模板,PCR扩增Cas基因。扩增产物和载体使用相同双酶切处理,酶切产物分别纯化回收后用T4连接酶连接,构建Cas基因原核表达载体。
  二、重组Cas蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
  将原核表达载体pCold-CT(TM)和pGEX-CT(TM)分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),得到的重组菌用IPTG作可溶性表达的小量诱导,经SDS-PAGE检测到分子量与预期大小一致的表达产物后,用同样方法进行大量诱导,取pCold-CT(TM)-BL21和pGEX-CT(TM)-BL21的上清分别通过镍亲和层析柱和谷胱甘肽树脂柱,纯化产物CT(TM)-His和CT(TM)-GST用SDS-PAGE作分子量分析,并用BCA试剂盒检测目的蛋白的含量。用纯化的CT(TM)-His融合蛋白免疫BALB/c小鼠,4w后收集血清,以CT(TM)-GST融合蛋白为抗原检测免疫血清中特异性抗体的效价。结果表明,获得了符合预期大小的CT和TM重组蛋白,间接ELISA检测表明小鼠免疫血清中的CT和TM抗体的效价分别为1∶25600和1∶12800。制备的特异性抗体为检测淋病奈瑟菌WHO-A株细胞内相应Cas蛋白的表达和研究蛋白功能提供了实验材料。
  三、淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的表达分析
  为检测淋病奈瑟菌WHO-A株中Cas基因的转录和表达情况,我们用RT-PCR法、ELISA法和免疫荧光法3种方法分别检测了细菌细胞内的Cas-mRNA和Cas蛋白。
  (1)提取该菌总RNA为模板,通过RT-PCR法转录获得cDNA,用Cas基因引物对cDNA进行PCR扩增,产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析;
  (2)对WHO-A株细菌作超声裂解处理,取裂解液为抗原,以制备的Cas抗体为第一抗体,棋盘滴定法检测裂解菌液中Cas蛋白的存在情况;
  (3)将WHO-A株细胞用4%多聚甲醛固定于载玻片上,以CT(TM)血清抗体作为一抗,以FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行免疫荧光实验,荧光显微镜下检测样品的发光情况。结果表明,从WHO-A株总RNA中用RT-PCR可扩增出与CT或TM基因大小一致的DNA条带;WHO-A株细菌超声裂解液包被量为200μg/ml时,以1∶12800的CT多抗和1∶800的TM多抗可以检测到相应Cas蛋白表达的明显信号;WHO-A株细菌细胞固定后用CT或TM抗体可检测到特异性荧光。以上结果提示Cas基因在淋病奈瑟菌WHO-A株细胞中可进行有效转录与表达,淋病奈瑟菌的CRISPR系统可能是一个具有活性的完整系统,为此需进一步研究Cas蛋白的结构与功能。
  四、淋病奈瑟菌WHO-A株Cas蛋白功能的初步研究
  实验室前期已构建pCas9-KRn重组载体,即一种靶向卡那霉素抗性基因的CRISPR简化系统,可作为Cas蛋白核酸酶活性的研究工具。为探究CT或TM蛋白是否发挥核酸酶活性,将pCas9-KRn中的Cas9基因替换为CT或TM基因。以pCas9-KRn中Cas9以外的部分为模板设计引物并进行PCR扩增,扩增产物两端分别添加了PstⅠ、KpnⅠ酶切位点,双酶切并纯化后与相同酶切处理的CT或TM基因连接,获得重组质粒pCT(TM)-KRn,转化宿主大肠埃希菌后分别用RT-PCR和ELISA两种方法检测到WHO-Cas基因的表达。pCT(TM)-KRn转化至含pET-30a的DH5α大肠埃希菌,用LB培养液对重组菌进行传代。每代菌液分别在卡那霉素和氯霉素LB平板上的活菌计数结果表明,二者的CFU值没有明显差异,提示未发现WHO-Cas蛋白的核酸酶活性,其作用机制可能与Cas9蛋白的核酸酶活性具有较大差别。
[硕士论文] 张静
社会医学与卫生事业管理 福建医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:本研究立足于福建省省情,分析梅毒的流行现状、母婴传播相关影响因素、不良妊娠结局及阻断效果,探讨目前我省在梅毒母婴传播防控工作中存在的问题及原因,并提出相应的防控策略和政策建议,为进一步推动梅毒母婴防治工作的深入开展提供科学依据。
  方法:本研究根据国家妇幼卫生信息平台预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播管理信息系统、福建省妇幼保健院和福建省疾病预防控制中心数据,运用定量与定性相结合的方法。选取福建省2015年确诊梅毒感染孕产妇1068例和新生儿1082例(其中1054例产妇分娩单胎,14例分娩双胎)作为研究对象,按照梅毒感染孕产妇妊娠结局采用不匹配病例对照研究,全面分析母婴传播的相关影响因素,采用比值比(OR)和95%置信区间(95%CI)衡量不同影响因素与妊娠结局的关联强度。此外,通过访谈法了解卫生计生行政部门负责人及相关医务人员对预防母婴传播项目开展的意见和建议等。
  计数资料采用率、构成比进行描述,推断采用?2检验;计量资料采用均数、中位数、标准差进行描述,推断采用t检验。单因素分析有统计学意义的变量纳入多因素非条件Logistic回归分析。所有检验采用双尾和P<0.05为差异有统计学意义。
  结果:
  (1)2004-2014年全省梅毒发病率呈逐年上升趋势;男、女性报告病例数逐年增加,总体上男性略低于女性,但二者差距在缩小。
  (2)2012-2015年4年间住院分娩产妇数和孕期接受梅毒检测产妇数逐年增加,梅毒感染产妇数和感染率呈上升趋势,但各设区市间感染率存在一定差异。
  (3)单因素分析显示孕次、产次、现有子女数、既往诊断为梅毒感染、本次诊断梅毒感染时期、初检孕周、分娩孕周、药物应用和治疗药物是发生先天梅毒的影响因素;孕次、既往诊断梅毒感染、本次诊断梅毒感染时期、初检孕周、分娩孕周、分娩方式、药物应用和治疗药物是发生其他不良妊娠结局的影响因素。
  (4)多因素分析显示本次诊断梅毒感染时期、分娩孕周、治疗药物与先天梅毒发生密切相关;既往诊断梅毒感染、分娩孕周与其他不良妊娠结局发生密切相关。
  (5)梅毒公共卫生意义被严重低估,政府缺乏足够重视;梅毒母婴传播药物阻断成效好,但需加强使用监督;个别医疗机构和医务人员认识不足,服务意识不强;母婴阻断项目覆盖面有限,干预和随访工作难度大。
  结论:福建省预防梅毒母婴传播项目自开展以来已取得一定成效,但各设区市在贯彻落实过程中还存在一些问题。建议健全工作机制,加强指导和支持;提升整体水平,提高服务可及性;加大宣传力度,规范引导社会舆论;加强追踪和随访,确保干预见实效。
[硕士论文] 阚波
免疫学 延边大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨自2013年1月至2015年12月于吉林大学第二医院诊疗的梅毒患者的流行病学特征以及影响梅毒预后的相关因素,为梅毒的防治提供依据。
  方法:以自2013年1月至2015年12月在吉林大学第二医院诊疗且规范驱梅治疗两年的梅毒患者共294人为研究对象,采集患者的流行病学特征、临床特点,进行RPR滴度、TP检测,对于TP及RPR阳性的患者,确定其临床诊断与分期。建立EXCEL随访数据库,对随访资料完整的患者进行相关因素对患者病情及预后的影响研究。
  结果:2013年1月~2015年12月,于吉林大学第二医院进行规范驱梅且定期随访的患者共计294例。其中(1)男性118例,占就诊患者的40.14%,女性患者176例,占就诊患者的59.86%,男女之比0.67∶1,女性患者约为男性患者的1.5倍。文盲28例,占就诊患者的9.52%,小学文化8例(占2.72%),初中文化128例(占43.54%),高中、职中70例(占23.81%),大学45例(占15.31%),硕士及以上15例(占5.10%)。文化程度为初中及初中以下病患共计164例,占到总患者量的55.78%。(2)以异性性传播为主(占总数的91.84%),其次为同性性传播(占总数的1.36%),医源性传播占总数的0.68%,母婴途径传播占总数的3.40%,途径未知者占到总数的2.72%。(3)一期梅毒9例(3.06%),二期梅毒141例(47.96%),三期梅毒2例(0.68%),潜伏梅毒132例(44.90%),胎传梅毒10例(3.40%)。(4)合并HIV、生殖器疱疹者共19例,其中合并HIV感染者3例(男性2例、女性1例),占1.02%;合并生殖器疱疹者15例(男性10例、女性5例),占5.10%,同时合并HIV、生殖器疱疹者1例(男性),占0.34%。(5)以苄星青霉素为药物进行治疗的为278例(占总患者数的94.56%),利用阿奇霉素进行驱梅治疗的共计12例(占总患者数的4.08%),使用头孢曲松钠进行治疗的为4例(占总患者数的1.36%)。经规范治疗,苄星青霉素方案治疗后RPR转阴率为90.28%,其他方案治疗后,转阴率为62.50%。苄星青霉素方案治疗后,一期梅毒转阴率达100%,远超过二期梅毒的转阴率90.84%,潜伏期梅毒90.63%、和胎传梅毒转阴率87.50%,而三期梅毒转阴率为0%。
  结论:
  (1)吉林省长春地区梅毒患者男女发病比例为0.67∶1,女性患者约为男性患者的1.5倍;
  (2)吉林省长春地区梅毒发病人群中以初中及初中以下文化程度为主,青年人与低文化人群是重点关注的对象;
  (3)吉林省长春地区梅毒的传播途径以异性性传播为主;
  (4)吉林省长春地区梅毒的临床分期以二期梅毒和潜伏梅毒为主;
  (5)吉林省长春地区利用苄星青霉素方案进行驱梅的患者,转阴率达90.29%,明显超过其他方案(62.50%)。
  (6)吉林省长春地区一期梅毒患者RPR转阴率最高,100%的一期梅毒患者RPR滴度转阴,显著高于二期梅毒90.84%及潜伏梅毒90.63%的转阴率。而三期梅毒转阴率为0。
[硕士论文] 刘潇
神经病学 青岛大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  分析2000年-2016年于青岛大学附属医院及中山大学一附院住院治疗的53例神经梅毒患者的临床特点,为临床医生提供参考。
  方法:
  参考2010年美国疾病控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)神经梅毒诊断标准,回顾分析2000年-2016年于青岛大学附属医院及中山大学一附院住院治疗的53例神经梅毒患者的临床资料,包括患者性别、年龄、冶游史等病史情况,也包括神经梅毒患者的临床症状与体征、实验室检查、影像学检查结果。
  结果:
  ①共有53例患者符合入组标准,包括46例男性及7例女性,除了一例为越南人外,均为中国人。发病年龄范围为20岁-80岁(平均发病年龄为48.51岁)。②最常见的临床类型是脑膜血管型神经梅毒(35.85%),其次是麻痹性痴呆(28.30%),脑膜型神经梅毒(11.32%)、脊髓痨(7.55%)、梅毒性脊髓脊膜炎(9.43%)、无症状神经梅毒(7.55%)。最常见的首发症状为肢体乏力(34%)。③入组神经梅毒患者进行了血清梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum particleagglutination,TPPA)检查及血清人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体检查,53例患者均为血清TPPA阳性及HIV阴性。53例神经梅毒患者进行了脑脊液(Cerebrospinal Fluid,CSF)常规检查,20例出现CSF白细胞升高,出现33例CSF蛋白升高,同时出现CSF白细胞升高及蛋白升高者19例;④40例神经梅毒患者行颅脑颅脑核磁共振检查磁共振成像(Nuclear Magnetic Resonance Imaging,MRI)其中7例颅脑MRI无异常表现,33例神经梅毒患者(包括脑膜型神经梅毒1例脊髓脊膜型神经梅毒3例脑膜血管型神经梅毒17例麻痹性痴呆11例脊髓痨1例)颅脑MRI出现异常表现,包括卒中样表现、脑萎缩表现及白质异常信号等,最主要的影像学改变为梗死灶改变,共有20例。5例神经梅毒患者进行了脑电图检查,2例出现异常的脑电图改变,一例表现为癫痫样放电,一例表现为背景慢波活动,2名患者均为麻痹性痴呆患者。
  结论:
  1.53例神经梅毒患者中,最常见的神经梅毒临床分型为脑膜血管型神经梅毒,临床模式已出现明显改变。
  2.53例神经梅毒患者中出现了较多的漏诊、误诊现象,血清学检查、脑脊液检查、影像学检查均无特异性。临床诊断神经梅毒时,需综合流行病学、临床表现、实验室检查及影像学检查进行综合判断。
  3.每个具有神经精神症状但没有明确原因的患者均应进行梅毒血清学检查。当梅毒血清学检查阳性时,患者应进行脑脊液检查,以免漏诊、误诊,影响预后。
[硕士论文] 曾丹
临床医学(临床检验诊断学) 南华大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过基因芯片筛选糖尿病合并梅毒兔肾组织脂肪代谢异常基因,检测候选异常基因在肾组织中表达情况及病理病变,初步探讨糖尿病合并梅毒兔肾组织脂肪沉积机制。
  方法:
  1、动物分组及建模:随机分组,小剂量四氧嘧啶诱导糖尿病兔模型,梅毒螺旋体睾丸接种构建梅毒兔模型,四氧嘧啶构建糖尿病模型后接种梅毒螺旋体构建糖尿病合并梅毒兔模型。建模之后每周通过抽取耳缘静脉检测尿素氮(urea nitrogen, BUN)与肌酐(creatinine,Cr)的变化了解各组兔之间是否有肾功能的损伤及区别。
  2、HE染色:常规取材固定,脱水透明,浸蜡包埋,切片烤片,脱蜡水化,苏木精浸染,盐酸酒精分化,弱氨水返蓝,乙醇及二甲苯脱水,中性树胶封片,了解各组实验兔的肾组织的病理病变情况。
  3、油红O染色:兔肾组织置于福尔马林中固定冰冻切片,异丙醇30秒,浸入油红 O稀释液染色后蒸馏水速洗,苏木素染色后,普通水洗,甘油明胶封片。
  4、基因芯片:对各组兔的肾组织进行基因芯片筛选,了解脂肪代谢基因在各组兔之间的表达状况,选出脂肪代谢有显著差异的基因。
  5、实时定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-PCR):每只兔肾组织进行RNA抽提、两相分离、RNA沉淀,使用样品的RNA进行cDNA合成,利用合成的cDNA再进行RT-PCR,计算出候选基因在各组兔肾组织中表达的相对含量。
  6、WB检测:提取总蛋白,测定浓度,上样跑胶,蛋白转印至PVDF膜,脱脂牛奶封闭,孵一抗过夜,TBST溶液漂洗后孵二抗,再次TBST溶液漂洗后曝光显影。了解肾组织细胞中候选基因的蛋白水平的表达情况。
  7、免疫组化:切片、烤片后脱蜡及水化,3%H2O2去离子水孵育后PBS冲洗,滴加一抗过夜后PBS冲洗,滴加聚合物增强剂孵育后PBS冲洗,滴加二抗孵育后 PBS冲洗,显色后用水洗、然后复染、脱水、透明、最后封片。免疫组化可直观了解在各组兔之间组织中筛选基因表达部位及区别。
  结果:
  1、糖尿病组(DM组)兔模型成功6只;梅毒组(TP组)兔模型成功7只,梅毒合并梅毒组(H组)兔模型成功5只,正常对照组(C组)存活5只。随着疾病的发展,各实验组均发生肾功能损害且呈越来越重的趋势,而H组与其它组同期相比肾损害则更明显。
  2、HE染色显示:C组兔未见明显异常改变,和实验组兔肾小球均可见明显肾小球毛细血管扩张,近曲小管肿胀,DM组兔肾髓质区、集合管内见蛋白管型、间质粘液样变、水泡样变。H组肾小球毛细血管扩张,近曲小管肿胀更为严重,肾组织内还出现了明显的钙盐沉积。
  3、油红O染色显示:H、DM组肾组织可见明显脂滴沉积,H组相对DM组更密集,TP组肾组织可见少量脂滴沉积,C组偶见脂滴存在。
  4、基因芯片结果显示:ACOX1基因、ACADM基因、SCP2基因在各组实验兔具有显著差异,与正常组相比,这3个基因在TP、DM、H组表达均下调,在TP组少量下调,DM组下调明显,H组下调最低。
  5、ACOX1、ACADM、SCP2基因RT-PCR结果显示:这3个基因表达趋势在各组兔之间的表达变化趋势一致,与正常组相比,这3个基因在TP、DM、H组表达均下调,在DM、H组比TP组表达量低,DM组则更低,H组表达最低(3个基因在各组实验兔之间任意两组比较其差异均具有统计学意义),其结果趋势与基因芯片结果相符。
  6、WB检测:ACOX1、ACADM、SCP2条带趋势与RT-PCR结果相符。
  7、免疫组化结果显示:与C组相比,TP组、DM组、H组的阳性细胞有明显减少的现象;TP组比C组阳性细胞少,却比DM组、H组的阳性细胞多;其次为DM组的阳性细胞更少;H组则只有少量的表达,阳性细胞与其他组相比表达量最少。
  结论:
  1、糖尿病合并梅毒组与单纯疾病组相比,其肾损伤明显更严重。
  2、糖尿病合并梅毒组与单纯疾病组相比,脂肪沉积更加严重,肾损伤可能与脂肪沉积有关。
  3、糖尿病合并梅毒组脂肪沉积可能与ACOX1、ACADM、SCP2表达下调有关。
[硕士论文] 孔维萍
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  第一部分
  1.通过临床对照试验,比较口服米诺环素与肌注苄星青霉素两种方法治疗早期梅毒的临床疗效;
  2.验证米诺环素作为一种青霉素替代疗法治疗早期梅毒的安全性和有效性;
  3.为口服米诺环素治疗早期梅毒提供临床依据。
  第二部分
  1.通过临床对照试验比较口服米诺环素与静脉滴注青霉素两种方法治疗神经梅毒的临床疗效;
  2.验证米诺环素作为一种青霉素替代疗法治疗神经梅毒的安全性和有效性;
  3.为口服米诺环素治疗神经梅毒提供临床依据。
  研究方法:
  第一部分
  通过临床对照研究比较早期梅毒病例口服米诺环素与肌注苄星青霉素两种方法治疗的血清学疗效。采用病例对照方法,将106例早期梅毒患者分为治疗组和对照组两组,两组患者的性别、年龄、各期梅毒例数无显著性差异(P>0.05),具有可比性。治疗组42例患者给予米诺环素100mg2次/天饭后口服,疗程15天。对照组64例患者给予苄星青霉素240万 IU分两侧臀部肌肉注射,每周1次,连续3周,同时给予小剂量泼尼松口服预防吉海反应。疗程结束后随访2年,记录所有患者的皮损消退时间,分别于治疗结束后的3、6、9、12、18、24个月随访其临床及血清TRUST(甲苯胺红血清不需加热试验)情况。采用SPSS17.0 for windows统计软件,计量资料以均数±标准差(x?s)表示,采用t检验,计数资料采用?2检验,P<0.05视为差异有统计学意义
  第二部分
  回顾性分析比较安徽省省立医院皮肤性病科于2010年1月至2015年1月病房收治的神经梅毒病例71例的临床资料。将采用米诺环素治疗的病例设为治疗组,采用青霉素治疗的病例设为对照组。治疗组14例患者给予口服米诺环素100mg,每日两次,连续服用30天。对照组57例患者给予静脉滴注青霉素钠400万IU次,6次/日,每4小时一次,连续14天,继以苄星青霉素240万IU肌内注射,每周一次,共3次。为预防发生吉海反应,所有患者在接受治疗的前一天均给予口服泼尼松10毫克/次,2次/日,连服3天。疗程结束后随访18个月,记录患者临床症状改善情况,分别于治疗后6个月,12个月,18个月随访脑脊液甲苯胺红血清不需加热试验(TRUST)、WBC、蛋白定量情况。采用SPSS17.0 for windows统计软件,计量资料以均数±标准差(x?s)表示,计数资料采用?2检验, P<0.05视为差异有统计学意义。
  研究结果:
  第一部分
  米诺环素组患者的血清学治愈率为95.24%(40/42),苄星青霉素组患者的血清学治愈率为96.87%(62/64),两组治愈率差异无统计学意义(P>0.05),治疗组和对照组分别有2例患者治疗失败。米诺环素组患者皮损的消退时间稍晚于苄星青霉素组,但差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者血清固定的发生率分别为19.05%(8/42)和20.31%(13/64),差异无统计学意义(P>0.05)。
  第二部分
  米诺环素组和青霉素组脑脊液 TRUST转阴率分别为92.9%(13/14)、94.7%(54/57),两组转阴率相当,无统计学意义(P>0.05)。两组均有患者血清学及脑脊液TRUST值未转阴。两组的脑脊液白细胞计数均降至5×106/L以下,其蛋白定量分别为治疗组5例(35.7%)、对照组20例(35.1%)降至500mg/L或以下。治疗组和对照组分别有1个和3个患者的脑脊液TRUST滴度降为1:1之后始终不能转阴。两组梅毒性脑膜炎及麻痹性痴呆患者临床症状均得以改善。脑膜血管梅毒患者预后均欠佳。米诺环素组与青霉素组都有非常高的好转率,两组疗效无显著性差异(?2=0.01,P>0.05)。
  结论:
  第一部分米诺环素治疗早期梅毒效果显著,患者接受程度高,给药途经方便、毒副作用小,是苄星青霉素治疗梅毒可靠的替代药物。
  第二部分米诺环素治疗神经梅毒疗效与青霉素相当,且使用方便,患者接受程度高,可以作为青霉素治疗神经梅毒的替代药物。
[硕士论文] 刘雅慧
皮肤病与性病学 广东医科大学 2017(学位年度)
摘要:[目的]
  1.通过分子克隆技术表达和纯化2种不同梅毒螺旋体株来源TP0136重组蛋白。
  2.评价2种TP0136重组蛋白在梅毒分期诊断中的意义。
  [方法]
  1. TP0136原核表达载体的构建及鉴定
  从GenBank获取梅毒螺旋体Nichols Seattle株TP0136(NST)和Nichols Houston株TP0136(NHT)基因序列,用Primer5.0设计序列引物,高保真酶扩增全长基因。将PCR产物分别与载体连接,构建TP0136重组蛋白原核表达载体pEXP-5-CT-TOPO-TP0136,转化到TOP10 E.coli中诱导目的蛋白表达。利用SDS-PAGE、Western blot对表达产物进行分析、鉴定;Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,BCA法测定蛋白浓度。
  2.不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平测定
  将NST和NHT株重组蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法分别检测不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平差异。
  [结果]
  1. TP0136原核表达载体的构建和鉴定
  通过PCR得到NST和NHT全基因片段,分别为1260 bp和1389 bp。将pEXP-5-CT-TOPO-TP0136重组表达载体测序分析证实分别含有NST和NHT基因序列。
  2. TP0136蛋白表达与纯化
  含TP0136表达载体的TOP10 E.coli在IPTG浓度为1 mM,诱导时间为10 h时,成功表达相对分子量约50 kDa可溶性目的蛋白;从包涵体中获得的蛋白纯度在90%以上;BCA法测得NST、NHT重组蛋白浓度分别为1.2 mg/ml、0.7 mg/ml。
  3.不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平
  以NST和NHT重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA法检测发现:早期梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于晚期梅毒(NST:t=8.171,P=0.001;NHT:t=8.965,P=0.001),有症状梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于隐性梅毒(NST:t=4.989,P=0.001;NHT:t=3.810,P=0.001);未治疗梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于治疗后患者(NST:t=5.040,P=0.001;NHT:t=2.288, P=0.001);治疗后非血清固定患者血清中TP0136抗体水平明显高于血清固定患者(NST:t=10.315,P=0.001;NHT:t=6.342,P=0.001)。
  非神经梅毒患者血清中NHT株TP0136抗体水平明显高于神经梅毒患者(t=2.555,P=0.012),而NST株TP0136抗体水平在神经梅毒和非神经梅毒患者间差异无统计学意义(t=0.239,P=0.811)。
  [结论]
  1.成功表达和纯化了NST和NHT株TP0136重组蛋白。
  2.不同病期梅毒患者血清中NST和NHT株TP0136抗体水平存在差异,可能具有潜在的临床诊断价值。
[硕士论文] 左桐
公共卫生与预防医学 天津医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:了解性病门诊男性就诊者中人类免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒螺旋体(TP)的感染状况及相关因素,为在该人群中制定和实施相关防治措施提供依据。
  方法:对2012年、2013年、2014年4~6月份主动到天津市某性病门诊就诊的男性开展问卷调查,同时采集静脉血开展HIV抗体和TP抗体检测。采用χ2检验进行 HIV、TP感染单因素分析,然后将单因素分析有统计学意义的变量,纳入Logistic回归分析对 HIV/TP感染情况的影响因素进行多因素分析,检验水准为α=0.05。
  结果:2012年至2014年共调查1179例性病门诊男性就诊者,平均年龄为(30.7±8.9)岁,艾滋病(AIDS)知识的总知晓率为92.0%(1085/1179),HIV抗体阳性率为4.4%(52/1179),TP抗体阳性率为5.9%(69/1179)。HIV感染者与非HIV感染者比较,在户籍(χ2=5.008,P<0.05)、近3个月发生商业性行为(χ2=4.830,P<0.05)、注射毒品(χ2=3.928,P<0.05)、近3个月发生同性的肛交性行为(χ2=79.358,P<0.05)以及感染梅毒(χ2=29.292,P<0.05)方面的差异具有统计学意义;单因素logistic回归分析表明,最近3个月与同伴发生过肛交性行为以及有梅毒感染为HIV感染的危险因素。TP感染者与非TP感染者比较在年龄(χ2=16.492,P<0.05)、近3个月发生商业性行为(χ2=5.528,P<0.05)、近3个月与临时性伴发生过性行为(χ2=6.072,P<0.05)、近3个月发生同性的肛交性行为(χ2=8.042,P<0.05)以及HIV感染(χ2=29.292,P<0.05)方面的差异具有统计学意义;单因素logistic回归分析表明,年龄、最近3个月与同伴发生过肛交性行为以及有 HIV感染与 TP感染有关。多因素 logistic回归分析表明, HIV感染的主要危险因素是肛交性行为(OR=8.827,95%CI=4.828~16.141)和TP感染(OR=4.678,95%CI=2.200~9.950)。TP感染的主要与低龄(OR=0.265,95%CI=0.117~0.601)、临时性行为(OR=2.063,95%CI=1.160~3.669)、同性肛交性行为(OR=2.317,95%CI=1.095~4.905)、HIV感染(OR=4.431,95%CI=2.043~9.611)有关。
  结论:性病门诊男性就诊者HIV、TP感染率较高,分别与肛交性行为和临时性行为有关,且互为感染的危险因素,因此应依托性病门诊开展有效的AIDS性病宣传干预工作,尤其应加强警示性教育宣传。
[博士论文] 吴凡
皮肤病与性病学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 梅毒螺旋体粘附于人脑微血管内皮细胞的实验研究
  目的:观察梅毒螺旋体与体外培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的粘附方式和粘附规律。
  方法:将HBMEC接种于含细胞爬片的24孔细胞培养板中,加入8×106条/ml的梅毒螺旋体悬液共培养,分别于0.5、2、4h后使用扫描电镜分析梅毒螺旋体与HBMEC的粘附方式;加不同浓度(4×106条/ml、8×106条/ml、1.6×107条/ml)梅毒螺旋体悬液共培养,分别于2、4、6、16h后运用暗视野显微镜计数单个HBMEC上粘附的梅毒螺旋体数量。实验数据用重复测量资料的方差分析进行分析。
  结果:扫描电镜结果显示梅毒螺旋体集中粘附于HBMEC膜表面的某些区域,两者在粘附的部位可发生融合。时间与浓度间存在交互作用(F=98.74,P<0.001),在各浓度组,不同时间点细胞上粘附的螺旋体数目间的差异均有统计学意义(F=387.72,P<0.001),粘附的螺旋体数量随着共培养时间的延长而逐渐增多,4h时达到高峰,然后逐渐降低。在4h时,不同浓度组间细胞上粘附的螺旋体数目间的差异也具有统计学意义(F=593.23,P<0.001)。
  结论:梅毒螺旋体可以粘附于体外培养的HBMEC,梅毒螺旋体可能是通过菌体尖端与细胞膜溶解的方式与HBMEC粘附;1.6×107条/ml和共培养4h分别是梅毒螺旋体与HBMEC粘附的最佳浓度和时间。
  第二部分 梅毒螺旋体刺激后人脑微血管内皮细胞基因表达谱分析及差异表达基因的功能分析
  目的:探讨梅毒螺旋体粘附对人脑微血管内皮细胞(HBMEC)基因表达谱的影响,分析差异表达基因的功能,从mRNA水平了解HBMEC对梅毒螺旋体的反应。
  方法:构建HBMEC单层模型,加入1.6×107条/ml的梅毒螺旋体悬液,以未加螺旋体的HBMEC作为对照,4h后提取细胞RNA,利用Agilent SurePrint G3Human Gene Expression Microarray(8×60K)基因芯片检测HBMEC的基因表达谱,筛选差异表达基因。利用GO和KEGG富集法分析差异表达基因的功能,利用qRT-PCR对7个感兴趣的差异表达基因进行验证。
  结果:基因芯片共筛选出249个差异表达的基因,包括218个上调表达的基因和31个下调表达的基因。GO富集分析结果显示差异表达基因共参与38个GOterms,其中生物学过程、分子功能、细胞成分的terms数目分别为27、6和5,内皮细胞活化、宿主细胞免疫反应和细菌粘附等多个生物学过程。KEGG富集分析结果显示差异表达基因富集于12条信号通路中,两者相互作用过程可能涉及Th17 cell differentiation通路和Cell adhesion molecules通路。qRT-PCR结果显示RARRES2、ADAMTS5、F3、MACF1和DCN表达上调,CLDN4和LDLR表达下调,与基因芯片结果基本一致。
  结论:梅毒螺旋体可改变HBMEC的基因表达谱,差异表达基因广泛参与多个生物学过程。梅毒螺旋体粘附后的HBMEC被激活,同时发起一系列免疫防御对抗螺旋体的侵袭。该基因芯片分析结果为进一步研究人脑微血管内皮细胞在神经梅毒发病机制中的作用提供新的平台和研究方向。
  第三部分 梅毒螺旋体对人脑微血管内皮细胞中多个趋化因子配体表达的影响
  目的:探索梅毒螺旋体对HBMEC中趋化因子配体(CXCL)表达的影响。
  方法:将HBMEC接种于6孔或96孔细胞培养板中,分为梅毒螺旋体组、灭活梅毒螺旋体、脂多糖组和空白对照组,分别加入梅毒螺旋体、灭活的梅毒螺旋体、脂多糖和细胞培养液培养,于6、12、24h后分别用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验检测细胞中CXCL-6、CXCL-8、CXCL-10和CXCL-13的基因表达水平和蛋白表达水平。利用Transwell小室细胞迁移实验检测梅毒螺旋体刺激后HBMEC对人早幼粒细胞白血病细胞(HL-60)的趋化作用。
  结果:在各时间点,梅毒螺旋体组中CXCL-6、CXCL-8和CXCL-10的mRNA表达水平均显著高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05),而灭活梅毒螺旋体组与空白对照组之间的差异无统计学意义(均P>0.05)。各组细胞中CXCL-13的mRNA表达差异无统计学意义。在各时间点,梅毒螺旋体组中CXCL-6和CXCL-8的含量均高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05),而灭活梅毒螺旋体组与空白对照组间差异无统计学意义(均P>0.05);在各时间点,梅毒螺旋体组细胞培养上清液中CXCL-10的含量与空白对照组和灭活梅毒螺旋体组间差异无统计学意义(均P>0.05)。在各时间点,梅毒螺旋体组的吸光值均高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05)。
  结论:梅毒螺旋体可上调HBMEC中CXCL-6、CXCL-8和CXCL-10的基因表达水平,增加CXCL-6和CXCL-8的分泌,增强HBMEC对HL-60细胞的趋化作用。
[博士论文] 余茜
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分CXCL13/CXCR5在神经梅毒中枢神经系统中对B细胞的招募作用
  研究背景:
  梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种性传播疾病,神经梅毒可以发生在梅毒螺旋体感染机体后的始终。越来越多的证据表明免疫应答参与了神经梅毒中枢神经损伤,其中体液免疫发挥了重要的作用。而迄今为止神经梅毒患者中枢神经系统中体液免疫的启动和维持机制尚不明确。
  研究方法:
  使用流式细胞术分析111个梅毒患者脑脊液样本中的B细胞及B细胞亚群的分布情况。样本包括23个无症状神经梅毒、43个有症状神经梅毒和45个非神经梅毒,其中分别有36个和17个随访病人符合随访要求。使用ELISA法检测脑脊液中免疫球蛋白(IgM, IgA和 IgG)、CXCL13的浓度。使用改良后的24孔小室进行趋化实验和中和实验,分析不同组别梅毒患者的脑脊液对B细胞的趋化作用;CXCL13中和抗体抑制神经梅毒患者脑脊液样本中的CXCL13后,分析趋化后B细胞比例和B细胞亚群的变化情况。使用免疫组化法检测鞘内梅毒瘤病变组织的中 spirochete、CXCR5、CD20+B细胞、CD3+T细胞、CD138+浆细胞,和CD35+滤泡状树突状细胞及其分泌的趋化因子CXCL13的表达情况。
  研究结果:
  我们发现:相较于非神经梅毒,神经梅毒患者脑脊液中 B细胞的比例显著升高(P<0.001),并且 B细胞处于激活状态。在未治疗的神经梅毒患者免疫球蛋白指数(IgM, IgA和 IgG指数)显著高于非神经梅毒,并且与疾病的进展有相关性。神经梅毒患者脑脊液中的CXCL13的表达水平显著升高(P<0.001)。此外,脑脊液中高水平的CXCL13可以在体内和体外介导B细胞向中枢的迁移。更重要的是,神经梅毒患者脑脊液中的 B细胞、免疫球蛋白指数以及 CXCL13的水平三者之间均呈显著的正相关(P值均<0.05)。最后,神经梅毒患者脑脊液对于B细胞的趋化指数显著高于非神经梅毒;脑脊液预先使用CXCL13中和抗体孵育后,可以阻止其对 B细胞的趋化作用。脑实质梅毒瘤病变组织中含有滤泡样结构,其包含大量的B细胞、T细胞和浆细胞,以及在淋巴细胞间网状排列的滤泡状树突状细胞,并且表达CXCL13。
  研究结论:
  神经梅毒患者中枢神经系统中CXCL13/CXCR5可以介导外周血B细胞的聚集,通过形成异位生发中心促进体液免疫应答。这些结果为阐明神经梅毒的中枢神经损伤机制以及免疫治疗提供了新的线索。
  第二部分Th1/Th2相关细胞因子对IgG亚类在神经梅毒患者脑脊液中分布的调控研究
  研究背景:
  神经梅毒中枢神经系统中存在激活的体液免疫应答,在局部产生大量的免疫球蛋白,不仅有利于梅毒螺旋体在局部的清除作用,同时也可能参与中枢神经系统的损伤作用。由于免疫球蛋白的产生以及抗体型别和类别转换依赖细胞因子的微环境,而IgG不同的亚类的功能也有所不同,所以我们检测神经梅毒患者脑脊液中IgG亚类的分布情况以及细胞因子对其的调控作用。
  研究方法:
  采用超敏多因子电化学发光技术检测126例脑脊液样本中的固有免疫细胞因子(IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α),Th1细胞相关的细胞因子(IFN-γ, IL-2, IL-12p70)和Th2细胞相关的细胞因子(IL-4, IL-10, IL-13);这126例样本包括15个正常对照,无症状神经梅毒23例,有症状神经梅毒43例,非神经梅毒45例。其中符合第一次随访和第二次随访要求的神经梅毒病人各有31例和15例。使用ELISA法检测脑脊液样本中IgG1, IgG2, IgG3和IgG4的浓度。
  研究结果:
  我们发现相较于非神经梅毒和正常对照组,神经梅毒患者脑脊液中的固有免疫细胞因子(IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α),Th1细胞相关的细胞因子(IFN-γ, IL-2, IL-12p70)和Th2细胞相关的细胞因子(IL-4, IL-10, IL-13)均显著高于正常对照(P<0.05)和非神经梅毒(P<0.05)。神经梅毒患者脑脊液中 IgG1, IgG2, IgG3和IgG4的浓度显著高于非神经梅毒(P<0.05)和正常对照组(P<0.001),然而非神经梅毒和正常对照组之间IgG1, IgG2, IgG3和IgG4的浓度无显著差异。神经梅毒患者中枢神经系统中Th1和Th2呈现协同共存作用,分别分泌IFN-γ和IL-13,并且这两种细胞因子与免疫球蛋白亚类(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)呈正相关,特别是IgG1和IgG3。在随访中发现,神经梅毒患者脑脊液中IgG1,IgG2和IgG3在第一次治疗后(P<0.05)显著下降,然而在第二次随访中IgG3的水平较治疗前无显著差异(P=0.147)。
  研究结论:
  神经梅毒患者脑脊液中的IFN-γ和IL-13参与脑脊液中IgG亚类的调控,主要是 IgG1和 IgG3的类别转换;IgG3,作为一个保护性免疫球蛋白,可能可以作为评估神经梅毒患者临床治疗效果评判指标。
[硕士论文] 成媛媛
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分:各期梅毒外周血中梅毒螺旋体核酸检出率的研究
  目的:利用巢式PCR技术探究各期梅毒患者外周血中梅毒螺旋体DNA的检出率。
  方法:临床收集192例梅毒患者外周血样本,其中包括37例一期梅毒,92例二期梅毒,63例潜伏梅毒,利用TP0105和TP0574基因片段特异的内外引物,行巢式PCR技术对样本进行检测。
  结果:一期梅毒患者外周血中梅毒螺旋体的检出率为45.9%(TP0105)和40.5%(TP0574),两基因的总检出率为48.6%;二期梅毒患者外周血中梅毒螺旋体的检出率为52.2%(TP0105)和52.2%(TP0574),两基因的总检出率为62.0%;潜伏梅毒患者外周血中梅毒螺旋体的检出率为6.3%(TP0105)和4.8%(TP0574),两基因的总检出率为7.9%。两基因的检出率在统计学上没有差异(P<0.05),Kappa值为0.714。
  结论:梅毒螺旋体基因可以在螺旋体感染的各个阶段的梅毒患者外周血中检测到,其中在一期梅毒和二期梅毒中的检出率最高。巢式PCR技术在早期梅毒的诊断中起到了重要的作用,可以在临床上用于暗视野镜检和血清学检测的补充诊断标准。
  第二部分:基于微滴式数字 PCR技术的梅毒螺旋体核酸绝对定量方法的建立及应用
  微滴式数字PCR技术是近年来迅速发展起来的一项基于单分子PCR方法来进行计数的核酸分子绝对定量技术,目前基于该技术的梅毒螺旋体绝对定量方法还未有文献报道。本研究建立了微滴式数字PCR梅毒螺旋体核酸绝对定量检测平台,从特异性、灵敏度、可信度、重复性几个方面对平台进行评估,又将建立好的ddPCR检测平台应用于TP感染兔模型外周血的核酸检测,确定该技术的可行性。
  本研究设计了针对基因分别为TP0105和TP0574的特异性探针,利用ddPCR技术检测了健康人、非梅毒病人、正常兔、鼠血浆中的目的基因片段,确定了该技术的空白下限值(LOB)为3.2copies(TP0105)和1.4copies(TP0574),为后续对于临床样本的检测确定了cut-off值。用ddPCR技术对各稀释梯度的质粒进行核酸定量检测,确定该检测技术的高灵敏度,最低检测下限(LOD)为单拷贝。将每个梯度质粒经ddPCR检测出的实际拷贝数与计算出的理论拷贝数进行相关分析,发现二者呈高度相关性,说明 ddPCR技术的检测结果是可信的。为了评估ddPCR的重复性,我们对各稀释梯度兔睾丸悬液的检测均进行了三次重复,对三次拷贝数结果进行分析研究发现每个稀释梯度的RSD值均在可接受的范围内,表明 ddPCR具有很好的可重复性。在ddPCR与qPCR的对比研究中我们发现ddPCR具有比qPCR更低的检测下限,灵敏度更高,且ddPCR具有比qPCR更好的重复性,特别是在目的基因处于低拷贝的情况下。
  本研究利用ddPCR技术动态监测了兔模型对TP的感染情况,发现感染兔外周血中核酸水平的出现早于血清学水平,证实了ddPCR技术的可行性,为后续对于临床样本的核酸绝对定量研究奠定了基础,对指导用于极早期梅毒、胎传梅毒、神经梅毒等早期诊断具有重要意义。
[博士论文] 邵丽丽
临床医学 天津医科大学 2017(学位年度)
摘要:沙眼衣原体泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见的性传播疾病,绝大部分患者症状隐匿,不易被发现,导致沙眼衣原体在宿主体内持续感染,引起一系列严重的并发症和后遗症。因沙眼衣原体的小鼠动物模型不稳定,而鼠衣原体与沙眼衣原体的生物学性状相似,感染后引起的病程及临床症状、病理改变等均和沙眼衣原体相同,故本课题以鼠衣原体作为研究菌株,小鼠作为动物模型,来进一步研究沙眼衣原体在人类的致病机制。
  新近的研究提示衣原体除了能感染泌尿生殖道外还能够感染胃肠道并且持续存在,其携带的隐蔽性质粒可能对生殖道的致病和慢性纤维化的严重程度有重要影响。然而,衣原体在胃肠道感染定植的机制及生物学医学意义仍不清楚,质粒在胃肠道衣原体感染中所起的作用也不清楚,各种质粒编码基因在衣原体胃肠道感染中都起着什么作用也不清楚。对这些问题的深入研究和探讨,对阐明衣原体在胃肠道和生殖道感染的相互关联与影响有着重要作用。
  目的:
  研究衣原体质粒及质粒编码基因在衣原体胃肠道感染定植的作用及其对生殖道致病性的影响。
  方法:
  构建小鼠动物模型,C57BL/6J(n=70)和CBA/J(n=35)小鼠,阴道、静脉、直接胃肠感染接种含有质粒和质粒缺失的鼠衣原体,间接免疫荧光法检测阴道及直肠拭子中脱落细胞中的排菌量,观察不同的接种途径下,含有质粒的或者不含质粒的鼠衣原体在鼠生殖道和胃肠道的感染传播情况及入血后的感染情况;感染56天处死老鼠,观察生殖道的大体和显微镜下组织病理,观察肠道及肠外的组织病理变化;用Wilcoxon rank sum test比较含有质粒和不含质粒衣原体感染小鼠后各个时间点拭子中病原菌数量(IFUs),基因拷贝数及感染率“曲线下面积”,用Fisher’s exact test分析两组之间致病的严重性。
  纯化实验室前期已经构建好的不同质粒编码基因缺失的衣原体EBs,CBA/J(n=35)小鼠阴道感染接种及 C57BL/6J(n=35)小鼠直接灌胃接种,检测阴道及直肠拭子中脱落细胞的排菌量,感染56天或者63天处死老鼠,观察生殖道的大体和显微镜下组织病理,比较不同质粒编码基因在生殖道的致病性作用及胃肠道衣原体感染与生殖道致病的相关性,明确这些质粒编码基因在生殖道和胃肠道的感染定植作用。质粒编码基因pgp3缺失的鼠衣原体CM-pgp3S在 C57BL/6J(n=20)小鼠宫颈内、卵巢囊内感染及联合胃肠道感染,感染56天后处死小鼠观察生殖道输卵管积水的严重程度。
  在C57BL/6J(n=10)和MyD88基因敲除(MyD88 KO,n=10)小鼠宫颈内和卵巢囊内感染接种鼠衣原体,感染后3天及14天处死小鼠,生殖道组织分段匀浆,间接免疫荧光法检测各组织中带菌量,进一步证明宫颈及子宫输卵管结合部在衣原体上行感染过程中屏障作用。pgp3作为衣原体致病性的毒力因子,质粒编码基因pgp3缺失的鼠衣原体CM-pgp3S阴道内及灌胃感染 MyD88-/-(n=15)、CRAMP-/-(n=8)基因敲除小鼠,间接免疫荧光法检测阴道及直肠拭子中脱落细胞中的排菌量,观察这些基因敲除小鼠能否恢复pgp3缺失的鼠衣原体在胃肠道及生殖道的定植。生殖道及胃肠道组织分段匀浆,间接免疫荧光法检测各组织中带菌量,检测衣原体在生殖道及胃肠道的分布情况,进一步明确MyD88及CRAMP在抗病原微生物感染中的作用。
  结果:
  1.含有质粒的鼠衣原体能够从生殖道传播至胃肠道,并且能够在胃肠道爆发性生长,在生殖道引起了严重的输卵管积水;而质粒缺失的鼠衣原体从鼠生殖道传播到胃肠道显著延迟并降低,不能像含有质粒的衣原体一样,在胃肠道很容易感染定植,同时不能引起生殖道输卵管积水(p<0.05)。即使通过静脉内感染或胃内直接感染接种,质粒缺失的鼠衣原体也明显不易或不能定植胃肠道。这些发现显示衣原体质粒对衣原体在胃肠道的适应和生存有重要作用,同时也显示衣原体阴道感染后,衣原体质粒在促进其在生殖道上行感染的重要作用。
  2.在鼠衣原体质粒编码基因中,pgp3与pgp4起着主要作用:质粒编码基因pgp3或者pgp4缺失的鼠衣原体不能在胃肠道定植,在生殖道不致病,也不能引起严重的输卵管积水。质粒编码基因pgp3缺失的鼠衣原体CM-pgp3S卵巢囊内感染接种后,同时与胃肠道给予含有质粒的衣原体感染后,增加了CM-pgp3S生殖道的致病性,提示衣原体所造成的生殖道慢性纤维化的致病性,不仅需要病原体上行感染于输卵管/卵巢造成足够的破坏,还可能依赖与胃肠道提供给生殖道致病的第二信号,即肠道依赖的致病性。pgp3缺失的鼠衣原体不能在胃肠道定植,也可能与其处于持续感染状态有关。
  质粒编码基因pgp5、pgp7、pgp8没有显示出与pgp3和pgp4的重要作用:质粒编码基因pgp5、pgp7、pgp8缺失的鼠衣原体在胃肠道的感染没有明显减弱,与含有质粒的鼠衣原体类似,相对应的它们在生殖道的致病性同它们在胃肠道感染能力强弱一致。
  3.鼠衣原体在MyD88基因敲除小鼠无论是生殖道还是胃肠道的感染都是增强的,即使是pgp3缺失的鼠衣原体在胃肠道定植和生殖道的感染也是增加的。MyD88的作用是维持宫颈及子宫输卵管结合部正常屏障作用,由此证实了固有免疫在宿主防御衣原体入侵的作用,宫颈及子宫输卵管结合部屏障作用降低了衣原体在生殖道的上行感染。
  结论:
  衣原体携带的隐蔽性质粒在衣原体胃肠道的定植中有重要作用,甚至比在生殖道更重要,不仅能促进在生殖道的致病性,而且通过定植产生的病理性免疫促使衣原体生殖道感染所致的慢性纤维化。其中pgp3是衣原体质粒编码基因最重要的毒力因子,不仅在衣原体胃肠道的感染定植和生殖道的致病上有重要作用,而且可破坏MyD88所起到的天然屏障作用进而使得衣原体在生殖道上行感染,并且能够在胃肠道定植,从另一个层面也反映了肠道微环境对机体的重要作用。
[硕士论文] 杜丽枝
临床检验诊断学 广州医科大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景:
  丙型肝炎和梅毒是常见血液传播性疾病。丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)感染可造成急性或慢性肝炎,会发展为肝硬化或肝癌。梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,TP)感染可损害人体多系统多器官,导致组织破坏、功能丧失,甚至危及生命,并能母婴传播,威胁下一代健康。世界卫生组织(World HealthOrganization,WHO)报告,丙肝和梅毒发病率呈逐年上升趋势,现已成为严重的公共卫生问题。目前尚无能预防HCV和TP感染的有效疫苗。这两种疾病感染初期往往无明显的临床症状和体征,易造成漏诊,延迟治疗。实验室结果作为主要临床诊断指标,结果准确对临床诊疗与阻断疾病的传播具有重要意义。
  近年来,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和化学发光免疫分析(Chemiluminescent immunoassay,CLIA)因其通量大、自动化程度高、易于标准化等优点,已广泛应用于无症状人群的筛查和疾病诊断。但许多研究表明,ELIA和CLIA两种筛查试验均存在一定比例的假阳性,尤其在低感染流行人群中会出现较高的假阳性。假阳性结果会带给受检者不必要的就医和心理伤害,需要引起重视。影响产生假阳性的因素目前尚不明确。不同检测方法的假阳性率不同,这可能与方法使用的反应体系、抗原成分和抗原表位等有关。TP47蛋白是梅毒螺旋体中丰度最高、抗原性强和特异性高的抗原,是用于检测梅毒特异性抗体的主要抗原之一。研究报道,TP47中有一段与人纤维连接蛋白有较高的同源性的序列,这可能和某些自身免疫性病人血清与梅毒检测试剂发生交叉反应有关。利用生物信息学技术预测特异性抗原表位,去掉特异性差的片段,降低引起交叉反应的可能性。这种抗原表位的应用可能会降低假阳性反应,提高检测方法的特异性。
  研究目的:
  1.探讨Architect i2000和HISCL5000两种化学发光方法检测抗HCV抗体(Hepatitis C virus antibody,Anti-HCV)和抗TP抗体(Treponema Pallidum antibody,Anti-TP)灰区标本的假阳性结果情况,为HCV和TP的诊断和治疗提供应用参考。
  2.建立TP47E抗原表位蛋白和TP47全蛋白的双抗原夹心ELISA,比较两方法检测梅毒抗体的敏感性和特异性,探索利用抗原表位解决假阳性问题方案的可行性。
  研究方法:
  1.收集本院Architect i2000检测Anti-HCV筛查阳性结果(1≤S/CO≤5)的样本161例。全部样本均进行HISCL5000检测。以高敏HCV核酸(Ribonucleic acid,RNA)定量和重组免疫印迹试验(Recombinant immuneblot assay,RIBA)的结果为标准确定真、假阳性。采用SPSS21.0统计软件进行单因素方差分析和LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
  2.收集本院Architect i2000检测Anti-TP筛查阳性结果(1≤S/CO≤10)的样本334例。全部样本均进行HISCL5000检测和梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(Treponema Pallidum particle agglutination assay,TPPA)检测。两种化学发光方法检测结果不一致的标本进行RIBA检测。以TPPA和RIBA的结果为标准确定真、假阳性。采用SPSS21.0统计软件进行单因素方差分析和LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
  3.利用EMBOSS、Bepipred和IEDB预测软件进行B细胞表位预测。根据上述预测软件的结果,选取TP47的81-120的氨基酸序列作为优势抗原表位,应用基因工程技术,构建原核表达载体pET28b-TP47E,重组质粒经酶切和测序鉴定,并转化至E.coli BL21中,IPTG诱导表达、镍离子亲和层析柱纯化和免疫印迹法(Western Blot, WB)鉴定。
  4.采用过碘酸钠法标记重组蛋白作酶标抗原,以重组蛋白作包被抗原,建立双抗原夹心ELISA,优化抗原包被浓度、包被方式、封闭条件、血清稀释倍数、血清反应时间、酶标抗原浓度、酶标抗原反应时间和底物反应时间等条件,并检测46份TPPA阴性血清和91份Architect i2000检测结果处于灰区的标本(1≤S/CO≤10),比较TP47E抗原表位蛋白和TP47全蛋白的双抗原夹心ELISA的敏感性和特异性。
  研究结果:
  1. HISCL检测Anti-HCV结果阳性的标本有23例,阴性的有138例,两化学发光法的Anti-HCV结果一致率为14.3%(23/161)。所有标本的HCV RNA定量检测结果均阴性。RIBA检测13例结果阳性,45例不确定,103例阴性。Architect和HISCL与RIBA的总一致率分别为8.1%(13/161)和69.6%(112/161), Architect假阳性标本占其总阳性标本的91.9%(148/161);HISCL假阳性标本占其总阳性标本的52.2%(12/23)。HISCL方法检测的标本RIBA阳性组、不确定组和阴性组的平均COI值分别为3.0、1.0和0.2,三组间的COI值差异有统计学意义(P=0.000<0.01);Architect方法检测的标本RIBA阳性组、不确定组和阴性组的平均COI值分别2.8、2.2和2.0,三组间的S/CO值差异有统计学意义(P=0.027<0.05)。
  2.HISCL检测Anti-TP结果阳性的标本有209例,阴性的有125例,两化学发光法的Anti-TP结果一致率为62.6%(209/334)。以TPPA为标准,Architect和 HISCL的结果与TPPA的总一致率分别为61.7%(206/334)和85.3%(285/334)。Architect假阳性标本占其总阳性标本的38.3%(128/334);HISCL假阳性标本占其总阳性标本的12.4%(26/209)。TPPA阳性组和阴性组的Architect平均S/CO值、HISCL平均COI值分别为4.8和2.5、3.9和0.8,两组间的S/CO值或 COI值差异均有统计学意义(均为 P=0.000<0.01)。Architect阳性而HISCL阴性的125例标本经RIBA检测,6.4%标本阳性(8/125),26.4%不确定(33/125),67.2%阴性(84/125)。
  3.综合分析B细胞表位预测结果,选取TP47位于81-120的氨基酸序列作为优势抗原表位,标记为TP47E,其氨基酸序列为AFRQQFQYAVEVLGEK VLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSV。PCR扩增获得编码TP47E蛋白的基因序列,构建的原核表达载体pET28b-TP47E,测序结果表明,其碱基序列与GenBank中的基因序列一致,经IPTG诱导表达、镍离子亲和层析柱纯化和免疫印迹法获得了重组TP47E抗原表位蛋白。
  4.采用过碘酸钠法标记重组蛋白,获得酶标抗原。基于TP47E抗原表位蛋白和 TP47全蛋白建立的双抗原夹心 ELISA,其最佳抗原包被浓度分别为1μg/mL和0.5μg/mL、最佳包被方式为37℃2h后4℃过夜,最佳封闭条件为1%BSA和4℃过夜,最佳血清稀释度为血清原液,最佳血清反应时间为90min,最佳酶标抗原浓度为1μg/mL,最佳酶标抗原反应时间为30min,最佳底物反应时间为10min。TP47E的ELISA法的敏感性和特异性为81.3%(47/58)和94.0%(31/33),TP47的ELISA法的敏感性和特异性为93.2%(55/59)和78.8%(26/33)。
  结论:
  1.Architect i2000和 HISCL5000两种化学发光法检测 Anti-HCV和Anti-TP的灰区标本均出现较高假阳性,假阳性原因还需进一步深入研究,迫切需要研发特异性更高的Anti-HCV和Anti-TP的实验室筛查方法。
  2.本文成功建立了TP47E抗原表位和TP47全蛋白的双抗原夹心ELISA方法并比较两者的敏感性和特异性。TP47E抗原表位ELISA方法的敏感性不足,但与 TP47全蛋白比较,明显提高了检测的特异性,初步显示通过优化抗原能提高检测特异性。
[硕士论文] 赵乐
皮肤性病学 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对LCH皮损组织炎症反应模式进行分析,探讨其病理特征与临床表现、预后的关系。
  方法:选择有皮损表现的25例LCH患者作为研究对象,分析患者皮损组织炎症反应模式,通过免疫组化技术检测患者皮损组织中ki-67、CD163的表达情况,采集分析患者临床资料,电话随访患者治疗情况以及预后。所得数据用SPSS15.0统计软件进行统计学分析。
  结果:
  (1)LCH皮损组织中有两种炎症反应模式,一种为表现为朗格汉斯组织细胞周围多量组织细胞、淋巴细胞浸润模式,另一种表现为朗格汉斯组织细胞周围稀疏组织细胞、淋巴细胞浸润模式。
  (2)25例LCH皮损组织中ki-67阳性密度平均为16.99%±12.02%,浸润炎细胞CD163阳性密度为16.71%±12.17%。在仅累及皮肤的SS-LCH中,ki-67及CD163阳性密度均值分别为14.13%±8.47%和24.64%±13.91%;累及皮肤和内脏器官的MS-LCH中ki-67及CD163阳性密度均值分别为17.94%±13.02%和14.06%±10.61%。SS-LCH与MS-LCH比较,ki-67阳性细胞浸润密度差异无统计学意义(P>0.05),CD163阳性细胞浸润密度差异具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  (1)LCH皮损组织中朗格汉斯组织细胞增殖指数水平较低,增殖指数水平与患者内脏是否累及无相关性。
  (2)CD163阳性炎性细胞浸润密度可能与LCH侵袭进展相关。
[硕士论文] 顾静
流行病学 苏州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  了解2006-2015年无锡市梅毒流行特征及其影响因素,探索梅毒的预防控制对策,为科学制定梅毒防治策略提供理论依据。
  资料与方法:
  对无锡市2006-2015年梅毒报告情况进行汇总、整理分析,采用Excel2007录入数据,使用SPSS20.0对数据进行统计分析,包括报告发病率、构成比、年均增长率或减少率、趋势卡方检验等,所有统计学检验的显著性水平定义为P<0.05。
  结果:
  1、2006-2015年无锡市累计报告梅毒患者23212例,年均报告发病率为49.55/10万。2006年至2009年发病率呈上升趋势,由2006年的29.79/10万上升至2009年的68.06/10万;之后呈下降趋势,由2009年的68.06/10万下降到2014年的38.79/10万。
  2、一期、二期、三期、隐性和胎传梅毒报告发病率分别为13.79/10万、17.74/10万、0.18/10万、16.79/10万和1.05/10万,一期、二期和隐性梅毒报告发病率较高。十年间,各期梅毒报告发病率变化趋势不同。一期、二期和胎传梅毒报告发病率均呈现先上升后下降的趋势。2006-2015年隐性梅毒报告数年均增长率为16.72%,呈逐年上升趋势(P<0.001)。
  3、全市各个市县、(区)均有发病。梅毒报告发病率居前三位的分别是崇安(76.26/10万)、北塘(58.98/10万)和锡山(58.93/10万)。城市发病率高于农村发病率,差异有统计学意义(P<0.001)。
  4、2006-2015年梅毒总报告发病率男性和女性分别为50.39/10万和48.73/10万,男性高于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。各期梅毒发病率的比较中,一期梅毒和胎传梅毒男性报告发病率高于女性(P值均<0.05)),隐性梅毒女性报告发病率高于男性(P<0.05);二期梅毒和三期梅毒男女报告发病率无统计学差异。
  5、2006-2015年梅毒报告年龄集中在15-64周岁占到报告总数的89.33%,55~64岁组和65~组,梅毒报告病例数构成比逐年升高,分别由2006年的7.84%和5.35%上升到2015年的13.22%和17.22%。55岁以上年龄组近十年来发病构成比呈上升趋势(P<0.001)。
  6、2006-2015年无锡市梅毒的报告病例中发病数以农民最高,共5525例(占23.80%),其次为家务及待业5076例(占21.87%)和工人3362例(占14.48%)。初中及以下文化程度发病构成高于初中以上文化程度。
  7、对无锡市2006-2015年梅毒报告病例数进行季节性分解的季节性因素分析,梅毒发病季节性周期为一年,一年四季均有病例出现,其中1、2、4、10、11、12月份发病例数较低,3、5、6、7、8、9月梅毒发病数较高,季节性特征较明显,每年2月份左右为发病最低谷,然后开始上升,上升过程中的3月份出现一次微小波动,在6-8月份到达第一次发病高峰,其后病例数开始下降到发病低谷。
  结论:
  十年间无锡市梅毒报告发病率呈先上升后下降的趋势,且男性高于女性,城市高于农村,老年人群病例报告数逐年增多。无锡市梅毒防治的重点人群是青壮年和外地来务工人员,艾滋病的高危人群也是梅毒防治的重点人群,继续在医疗机构加强梅毒筛查是当前梅毒防控工作的重要手段。无锡市需加强孕产妇梅毒筛查,做好母婴阻断工作,有效降低胎传梅毒发病率。
[硕士论文] 马博雅
神经病学 宁夏医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:总结并分析宁夏地区神经梅毒患者的流行病学资料、临床表现、实验室检查及影像学表现,提高临床医师对该病的认识,争取早期诊断、早期治疗,减少漏诊、误诊。
  方法:对2003年至2016年期间就诊于宁夏医科大学总医院及心脑血管病医院诊断为神经梅毒的22例患者病历资料进行回顾性分析,并根据2014年中国梅毒诊疗指南提出的神经梅毒诊断标准对病例资料进行再判断。
  结果:1、本组资料中男性患者19例,女性患者3例,以中年组41-65岁居多,2009年后发病例数明显增加;2、1例患者承认冶游史,1例合并HIV感染,1例两者均有;3、临床分型中以麻痹性痴呆最多见(31.8%),其余依次为脑膜、脊髓膜血管梅毒(27.3%)、脑膜神经梅毒(22.7%)、脊髓痨(9.1%)、先天性神经梅毒(9.1%);4、22例患者均完善了血清梅毒联检,梅毒螺旋体特异性抗体检测(TPPA或 TP-CLI)及梅毒螺旋体非特异性抗体检测(RPR或TRUST)均为阳性;5、脑脊液检查中颅内压5例>180mmH20,占23.8%(5/21),22例患者CSF白细胞计数均≥5个/mm3,在5-330个/mm3之间,均数为37个/mm3,细胞学分类大多以淋巴细胞为主,CSF生化检查中蛋白含量均>0.5g/L,在0.74-11.96g/L之间,均数为1.207g/L,葡萄糖或氯化物含量正常或稍降低;6、22例患者中2例未行脑脊液梅毒检查,1例脑脊液TPPA及TRUST检查均为阴性,其余19例患者中梅毒螺旋体特异性抗体检测(TPPA或 TP-CLI)均为阳性,梅毒螺旋体非特异性抗体检测(RPR或TRUST)中5例TRUST检测为阴性,14例阳性;7、头颅影像学检查无明显特异性,可表现为急性脑梗死、脑室扩大、脑萎缩、脑膜强化、脱髓鞘改变等;8、患者在接受青霉素或头孢曲松治疗后,症状较前明显改善。
  结论:1、神经梅毒发病率逐年增高,起病隐匿且临床表现不典型,初诊诊断率低,易被误诊。2、临床工作中应对颅内感染、认知功能减退、精神类疾病及不明原因癫痫发作、脑梗死(特别是成年人首发癫痫及青年脑梗死)等患者警惕神经梅毒的可能,必要时完善梅毒相关检查以减少漏诊、误诊。3、早期、足剂量、足疗程的抗梅毒治疗可以改善预后,应争取早期诊断、早期治疗。
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