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[硕士论文] 乜豪
养殖 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:本试验研究了水貂育成期和冬毛期饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对其生产性能、消化代谢及免疫功能的影响。通过测定其对生长性能、营养物质利用、血清生化指标、肠道形态和毛皮品质等指标的影响,筛选出育成期和冬毛期水貂饲粮中的适宜添加水平,为实际生产应用提供理论依据。
  本研究包括三部分:
  第一部分:饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对育成期水貂生长性能、消化代谢及血清生化指标的影响
  试验采用单因素完全随机试验设计,选取60日龄平均体重为(957.37±9396)g的健康雄性水貂70只,将其随机分成7组,每组10个重复,每个重复1只。Ⅰ组饲喂基础饲粮为对照组;Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组为枯草芽孢杆菌处理组,在基础饲粮中添加枯草芽孢杆菌,浓度分别为109、1010和1011CFU/kg;Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组为粪肠球菌处理组,在基础饲粮中添加粪肠球菌,浓度分别为108、109和1010CFU/kg。预饲期7天,试验期60天。
  结果表明:与对照组相比,枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组末重显著提高(P<0.05),枯草芽孢杆菌1011CFU/kg处理组的平均日采食量显著降低(P<005)。枯草芽孢杆菌109、1010CFU/kg处理组和粪肠球菌108CFU/kg处理组干物质消化率显著高于对照组(P<005),粪肠球菌108CFU/kg处理组干物质消化率显著高于枯草芽孢杆菌1011CFU/kg处理组和其他粪肠球菌处理组(P<005);粪肠球菌108CFU/kg处理组的蛋白质消化率显著高于对照组和粪肠球菌1010CFU/kg处理组(P<005)。枯草芽孢杆菌1011CFU/kg处理组和粪肠球菌108、109CFU/kg处理组粪氮显著低于对照组(P<0.05);粪肠球菌108和109CFU/kg处理组的尿氮显著低于对照组(P<0.05);枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组和粪肠球菌108CFU/kg处理组净蛋白利用率显著高于对照组(P<0.05);枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组的蛋白质生物价值显著高于对照组(P<0.05)。粪肠球菌109CFU/kg处理组血清中免疫球蛋白M浓度显著高于对照组(P<0.05)。
  由此得出,水貂育成期饲粮中添加1010CFU/kg枯草芽孢杆菌或108CFU/kg粪肠球菌,可更好地提高水貂的生长性能、营养物质消化率、净蛋白质利用率和蛋白质生物价值。
  第二部分:饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对冬毛期水貂生长性能、消化代谢及毛皮品质的影响
  试验采用单因素完全随机试验设计,选取135日龄平均体重为(1767.94±174.2)g健康雄性水貂70只,将其随机分成7组,每组10个重复,每个重复1只。Ⅰ组饲喂基础饲粮为对照组;Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组为枯草芽孢杆菌处理组,在基础饲粮中添加枯草芽孢杆菌,浓度分别为108、109和1010CFU/kg;Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组为粪肠球菌处理组,在基础饲粮中添加粪肠球菌,浓度分别为108、109和1010CFU/kg。预饲期5天,试验期70天。
  结果表明:与对照组相比,枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组终末体重得到显著提高(P<0.05);枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组和粪肠球菌109、1010CFU/kg处理组平均日增重显著提高(P<0.05);枯草芽孢杆菌109、1010CFU/kg处理组和所有粪肠球菌处理组料重比显著降低(P<005)。粪肠球菌1010CFU/kg处理组蛋白质消化率显著高于对照组、枯草芽孢杆菌108CFU/kg处理组和粪肠球菌109CFU/kg处理组(P<0.05);所有枯草芽孢杆菌和粪肠球菌处理组脂肪消化率均显著提高(P<005)。枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组和粪肠球菌109CFU/kg处理组氮沉积显著高于对照组(P<005)。
  由此得出,水貂冬毛期饲粮中添加1010CFU/kg枯草芽孢杆菌或109CFU/kg粪肠球菌,可更好地提高水貂的生长性能、脂肪消化率和氮沉积。
  第三部分:饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对冬毛期水貂血清生化指标、免疫器官指数及肠道形态的影响
  试验设计与第二部分相同。
  结果表明:枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组血清中总蛋白浓度显著高于对照组(P<005),枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组白蛋白浓度显著高于其他处理组(P<0.05);枯草芽孢杆菌108CFU/kg处理组丙氨酸氨基转移酶浓度低于对照组,但差异不显著(P>0.05),显著低于粪肠球菌109CFU/kg处理组(P<005);对照组和枯草芽孢杆菌处理组总胆固醇浓度显著低于粪肠球菌1010CFU/kg处理组(P<0.05);枯草芽孢杆菌108CFU/kg处理组血清中免疫球蛋白A浓度显著高于其他组(P<005)。枯草芽孢杆菌108CFU/kg处理组脾脏指数显著高于对照组(P<0.05)。枯草芽孢杆菌1010CFU/kg处理组和粪肠球菌109CFU/kg处理组隐窝深度与对照组相比显著降低(P<0.05),绒毛高度/隐窝深度显著增加(P<0.05)。
  由此得出,饲粮中添加1×109CFU/kg粪肠球菌时可显著提高冬毛期水貂血清中总蛋白和白蛋白的含量,添加108CFU/kg枯草芽孢杆菌时可显著提高IgA的含量。水貂冬毛期饲粮中添加1010CFU/kg枯草芽孢杆菌或109CFU/kg粪肠球菌可显著促进肠道发育。
[博士论文] 崔虎
动物营养与饲料科学 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:果胶寡糖螯合锌是一种新的有机锌源。本论文通过四个试验研究了饲粮中添加果胶寡糖螯合锌对水貂生长性能、营养物质消化率、血清生化指标、组织锌含量及毛皮品质的影响,并利用转录组学分析果胶寡糖螯合锌的作用机理。
  本研究包括四个试验:
  试验一,水貂对果胶寡糖螯合锌相对生物学利用率的研究。选取120只体重相近,健康的16周龄母貂,随机分成10个处理,每个处理12个重复,每个重复1只。预试期7天,试验期14天。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加100,300和900mg Zn/kg的硫酸锌,甘氨酸锌和果胶寡糖螯合锌的饲粮。试验结果:脂肪消化率随着饲粮中锌剂量增加而呈线性增加(P<0.05)。添加900mg Zn/kg组水貂的血清ALP活性显著高于对照组(P<0.05)。以铜-锌超氧化物歧化酶的活性为指标,以硫酸锌为参比标准物(100%),果胶寡糖螯合锌的相对生物学利用率为173%。
  试验二,果胶寡糖螫合锌对育成期水貂生产性能、营养物质消化率及血清生化指标的影响。采用3+1试验设计,将水貂随机分成10个处理组,每个处理组15个重复,每个重复1只。预饲7天,正式试验60天。对照组饲喂不添加锌的基础饲粮,试验组分别饲喂添加100,300和900mgZn/kg的硫酸锌,甘氨酸锌和果胶寡糖螯合锌的饲粮。试验结果:Zn-900组水貂料肉比显著低于Zn-300组(P<0.05)。饲粮中添加果胶寡糖螯合锌组和甘氨酸锌组水貂粗蛋白消化率显著高于硫酸锌组(P<0.05)。饲粮中添加果胶寡糖螯合锌显著提高血清中5'-核苷酸酶的活性(P<0.05),同时可显著提高血清免疫球蛋白含量(P<0.05)。
  试验三,果胶寡糖螯合锌对冬毛期水貂生产性能、营养物质消化率、组织锌代谢及水貂毛皮品质的影响。选取300只体重相近、健康的15周龄的水貂,采用3+1试验设计,将水貂随机分成10个处理组(公母各半),每个处理组30个重复,每个重复1只。预饲期7天,试验期60天。对照组饲喂不添加锌的基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加100,300和900mg Zn/kg的硫酸锌、甘氨酸锌和果胶寡糖螯合锌的饲粮。结果表明:在公貂方面,饲粮中添加果胶寡糖螯合锌可显著提高公貂日增重(P<0.05)。粗蛋白质和粗脂肪的消化率随饲粮中锌剂量的增加而增加(P<0.05)。饲粮中添加锌可显著改善毛皮密度及毛皮色泽度(P<0.05)。以胫骨锌和胰脏锌含量为指标,以硫酸锌为参比标准误(100%),果胶寡糖螯合锌的相对生物学利用率分别为152%和142%。在母貂方面:饲粮中添加果胶寡糖螯合锌可显著提高水貂日增重(P<0.05)。相对于对照组,饲粮中添加锌可显著提高胰脏锌含量(P<0.05),同时可显著提高水貂毛皮长度(P<0.05)。
  试验四,果胶寡糖螯合锌对水貂肝脏转录组差异分析。选取30只体重相近、15周龄的健康公貂,将水貂随机分成2个处理组,每个处理组15个重复,每个重复1只。对照组饲喂不添加锌的基础饲粮,试验组饲喂添加900mg Zn/kg果胶寡糖螯合锌的饲粮。试验结束后,进行屠宰试验,取肝脏组织进行转录组学分析。本试验完成6个样品的转录组测序,共获得42.36Gb CleanData,各样品Clean Date均达到7.06Gb,Q30碱基百分比在89.23%及以上。果胶寡糖螯合锌组与对照组共有差异基因1124个,其中上调表达基因有608,下调表达基因有516个。饲粮中添加果胶寡糖螯合锌上调了部分与碳水化合物代谢、氨基酸代谢和脂类代谢相关的差异基因,且与脂肪代谢相关的差异基因得到显著富集。试验结果表明,果胶寡糖螯合锌可通过调节相关基因来增强机体的营养物质代谢能力。
  综上所述,饲料中添加900mg/kg果胶寡糖螯合锌可提高育成期及冬毛期水貂生长性能,改善冬毛期水貂毛皮品质。饲粮中添加果胶寡糖螯合锌可调节蛋白质代谢和脂肪代谢基因表达量。
[硕士论文] 王静
养殖 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:本论文以生长期(育成期和冬毛期)水貂为研究对象,通过固定钙磷比,配制不同维生素D和钙水平的水貂饲粮,研究饲粮不同维生素D和钙水平对生长期水貂生产性能的影响,以筛选出水貂育成期和冬毛期适宜饲粮维生素D和钙水平,为指导实际生产提供理论依据。
  本研究包括两部分:
  第一部分:育成期水貂饲粮适宜维生素D及钙水平的研究
  随机选取(60±5)日龄健康短毛黑公貂117只,随机分成9组,每组13个重复,每个重复1只。试验采用3×3双因素随机试验设计,基础饲粮中维生素D水平为2100IU/kg,钙水平为2.3%,钙磷比固定为2:1。设3个维生素D(以维生素D3形式)添加水平(0IU/kg、2000IU/kg、4000IU/kg)和3个钙添加水平(0%、0.4%和0.8%)。九组饲粮维生素D和钙水平分别为:Ⅰ组(2100IU/kg×2.3%)、Ⅱ组(4100IU/kg×2.3%)、Ⅲ组(6100IU/kg×2.3%)、Ⅳ组(2100IU/kg×2.7%)、Ⅴ组(4100IU/kg×2.7%)、Ⅵ组(6100IU/kg×2.7%)、Ⅶ组(2100IU/kg×3.1%)、Ⅷ组(4100IU/kg×3.1%)、Ⅸ组(6100IU/kg×3.1%),预试期13d,正试期60d。
  结果表明:
  1)饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂的末重、平均日增重、料重比均有极显著影响(P<0.01),末重、平均日增重均以Ⅷ组最高,Ⅰ组最低;料重比Ⅷ组最低,Ⅰ组最高。
  2)育成期水貂脂肪消化率Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组极显著高于Ⅶ、Ⅷ组(P<0.01)。0.8%钙添加水平的干物质排出量显著高于(P<0.05)、脂肪消化率极显著低于(P<0.01)另两个水平。2000IU/kg维生素D添加水平的干物质排出量极显著低于(P<0.01)、干物质消化率和脂肪消化率显著高于(P<0.05)另两个水平。
  3)氮沉积随饲粮钙水平的升高而增加,以钙添加水平为0.8%时最高(P<0.05)。维生素D添加水平为2000IU/kg时育成期水貂的净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值显著高于另两个水平(P<0.05)。
  4)粪钙、粪磷随着钙水平的升高而显著增加(P<0.05)。维生素D添加水平为2000IU/kg时,钙、磷消化率最高(P<0.05)。
  5)维生素D添加水平为2000IU/kg时,血清总蛋白浓度、25-羟维生素D浓度显著高于4000IU/kg维生素D添加水平(P<0.05)。0%钙添加水平的血清25-羟维生素D浓度显著低于另两个水平(P<0.05)。
  结论:综合各项指标,在本试验条件下,配制维生素D和钙不同梯度的日粮,通过生长性能、营养物质消化率、氮代谢、钙磷代谢、血清生化等指标,得出当日粮中钙磷比为2∶1时,育成期水貂饲粮维生素D水平为4100IU/kg,钙水平为3.1%时,水貂能获得较好的生产性能。
  第二部分:冬毛期水貂饲粮适宜维生素D及钙水平的研究
  随机选取(135±5)日龄健康短毛黑公貂117只,随机分成9组,每组13个重复,每个重复1只。试验采用3×3双因素随机试验设计,基础饲粮维生素D水平为2300IU/kg,钙水平为2.0%,钙磷比固定为1.7∶1。设3个维生素D(以维生素D3形式)添加水平(0IU/kg、2000IU/kg、4000IU/kg)和3个钙添加水平(0%、0.4%和0.8%)。九组饲粮维生素D和钙水平分别为:Ⅰ组(2300IU/kg×2.0%)、Ⅱ组(4300IU/kg×2.0%)、Ⅲ组(6300IU/kg×2.0%)、Ⅳ组(2300IU/kg×2.4%)、Ⅴ组(4300IU/kg×2.4%)、Ⅵ组(6300IU/kg×2.4%)、Ⅶ组(2300IU/kg×2.8%)、Ⅷ组(4300IU/kg×2.8%)、Ⅸ组(6300IU/kg×2.8%),预试期13d,正试期60d。
  结果表明:
  1)水貂料重比组间存在极显著差异(P<0.01),Ⅱ组最低。维生素D和钙水平分别对料重比有显著(P<0.05)和极显著的影响(P<0.01)。
  2)钙水平对脂肪消化率有极显著的影响(P<0.01),0.8%钙添加水平极显著低于另两个水平(P<0.01)。
  3)饲粮维生素D和钙水平对水貂氮代谢指标无显著影响(P>0.05)。
  4)0%钙添加水平极显著降低粪钙、粪磷含量(P<0.01),提高钙磷消化率(P<0.01)。0~2000IU/kg维生素添加D水平显著提高钙消化率(P<0.05),极显著降低粪磷含量(P<0.01),提高磷消化率(P<0.01)。
  5)维生素D添加水平为2000IU/kg时,血清总蛋白浓度显著提高(P<0.05),甘油三酯浓度显著降低(P<0.05)。钙添加水平为0.8%时,血清高密度脂蛋白浓度显著提高(P<0.05),低密度脂蛋白浓度极显著降低(P<0.01)。
  6)钙添加水平为0%时,水貂皮长显著增加(P<0.05)。
  7)0.8%钙添加水平显著提高水貂心脏指数、肝脏指数、脾脏指数(P<0.05),0~2000IU/kg维生素D添加水平极显著提高水貂肾脏指数(P<0.01)。
  8)当维生素D添加水平为2000IU/kg时,水貂十二指肠维生素D受体蛋白和维生素D结合蛋白基因表达量最高。
  结论:综合各项指标,在本试验条件下,配制维生素D和钙不同梯度的日粮,通过生长性能、营养物质消化率、氮代谢、钙磷代谢、血清生化、脏器指数等指标,得出当日粮中钙磷比为1.7∶1时,冬毛期水貂饲粮维生素D水平为2300~4300IU/kg,钙水平为2.0%时,水貂能获得较好的生产性能。
[硕士论文] 张雪蕾
特种经济动物饲养 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:本论文以色氨酸为试验材料,以白水貂为研究对象,采用饲养试验、消化代谢试验、屠宰试验、分子生物学试验等研究方法,探索饲粮色氨酸水平对生长期白水貂生长性能、营养物质消化代谢规律、血清生化指标、免疫因子水平、血清中氨基酸的含量、毛皮品质等的影响,确定白水貂饲料中色氨酸的适宜添加量,结合白水貂空肠转录组试验,初步研究色氨酸的调控机制,为完善白水貂理想氨基酸模型奠定基础。
  试验一:饲粮色氨酸水平对育成期白水貂生长性能、营养物质消化率和血清指标的影响
  本试验采用单因素随机试验设计,选取120只健康、日龄相近(60d±5d)、体重相近的白水貂,随机分成6个组,每组20只,公母各半,单笼饲养。在基础饲粮蛋白质水平为34%的基础上,负对照组不添加色氨酸(Ⅰ组),试验组添加色氨酸量分别为0.1%(Ⅱ组)、0.3%(Ⅲ组)、0.5%(Ⅳ组)、0.7%(Ⅴ组),正对照组的基础蛋白质水平为36%和不添加色氨酸(Ⅵ组)。本试验预试期7天,试验期60天。其试验结果如下:
  饲粮色氨酸水平对育成期白水貂采食量、日增重均无显著差异(P>0.05),公貂Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅵ组平均日增重略高于其他各组,母貂Ⅱ组平均日增重略高于其他组。公貂Ⅲ组氮沉积最高,显著高于Ⅳ组(P<0.05),母貂Ⅱ组氮沉积最高。Ⅱ组、Ⅲ组母貂血清生化指标胆固醇、谷草转氨酶、谷丙转氨酶显著或极显著低于Ⅳ组(P<0.01或P<0.05)。Ⅲ组公貂IgM水平极显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ组、Ⅱ组IgA、IgG水平极显著高于Ⅴ组、Ⅵ组(P<0.01)。Ⅱ组母貂IgG极显著高于Ⅲ组(P<0.01),Ⅱ组、Ⅲ组IgM水平极显著高于Ⅳ组、Ⅵ组(P<0.01)。
  小结:(1)对于生长性能和蛋白质、脂肪、干物质消化率等的影响结果表明,育成期公貂饲粮色氨酸添加水平为0.3%(饲粮色氨酸水平0.52%)时比较理想,母貂饲粮色氨酸添加水平为0.1%(饲粮色氨酸水平0.32%)可以获得最好的生长性能。(2)对于氨基酸消化率的影响结果表明,育成期公母貂饲粮色氨酸添加水平为0.1%(饲粮色氨酸水平0.32%)可以获得最好的氨基酸沉积。(3)对于血清生化指标的影响结果表明,育成期公母饲粮色氨酸添加水平达到0.5%(饲粮色氨酸水平0.72%)时,对其肝脏功能造成损伤,导致胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平显著升高,并且影响水貂免疫功能。育成期水貂饲粮中色氨酸适宜水平为0.32%~0.52%。
  试验二:饲粮色氨酸水平对冬毛期白水貂生长性能、营养物质消化率、血清指标和毛皮品质的影响
  选取体重相近、日龄相近(120d±5d)的试验白水貂120只,试验设计同试验一,预试期5d,正试期70d。试验结果表明:
  Ⅰ组公貂血清IGF-1含量最高,Ⅰ组母貂血清IGF-1含量极显著高于其他组(P<0.01),各组平均日增重和平均日采食量差异不显著(P>0.05),公貂随着饲粮色氨酸添加量的增多,平均日采食量有下降的趋势;母貂Ⅱ组氮沉积最高。公貂高蛋白组各氨基酸消化率最高,除半胱氨酸、色氨酸外,Ⅵ组氨基酸消化率极显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ组半胱氨酸和色氨酸消化率与Ⅵ组无显著差异(P>0.05),母貂高蛋白组各氨基酸消化率也是最高。Ⅱ组公貂谷丙转氨酶最低,胆固醇水平Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组极显著低于Ⅵ组(P<0.01),母貂Ⅰ组、Ⅵ组甘油三酯水平显著低于Ⅱ组(P<0.05),血清谷草转氨酶含量Ⅳ组显著高于Ⅵ组(P<0.05)。公貂Ⅳ组免疫指标和免疫器官指数均达到最高,母貂IgA水平Ⅰ组显著高于Ⅱ组、Ⅳ组、Ⅴ组(P<0.05),IgG、IgM及免疫器官指数Ⅲ组、Ⅳ组最高。比较各组冬毛期毛皮品质,Ⅱ组综合品质最好。
  小结:饲粮色氨酸水平达到0.26%时,可以满足冬毛期白水貂色氨酸营养的基本需要,获得较理想的生长性能、营养物质消化率,冬毛期饲粮色氨酸水平在0.26%~0.36%比较适宜。饲粮色氨酸水平达到0.76%时,氨基酸代谢失去平衡,肝脏受到损伤。
  试验三:饲喂不同色氨酸水平饲粮冬毛期公貂空肠组织的转录组学研究
  给白水貂饲喂不同水平色氨酸饲粮,在冬毛期结束后,Ⅰ组~Ⅴ组每组选取5只公貂进行屠宰试验获得空肠组织,对空肠组织进行RNA提取、测序及序列组装,获得Unigene组装总数97332条,总长度124017345nt,首次建立白水貂空肠组织转录组数据库。
  通过与NR、Swiss-Prot、GO、COG、KOG、eggNOG4.5、KEGG数据库比对获得Unigene注释,饲粮添加色氨酸试验组(Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组)注释的Unigene分别与无添加色氨酸组(Ⅰ组)进行比较。Ⅰ组与Ⅱ组比较,共获得65个差异基因,Ⅰ组与Ⅲ组比较,共获得122个差异基因,Ⅰ组与Ⅳ组比较,共获得132个差异基因,Ⅰ组与Ⅴ组比较,共获得55个差异基因。由此发现,Ⅳ组与对照组比较差异基因最多,与试验二相结合,Ⅳ组色氨酸含量过高对空肠组织基因组产生影响。
  在GO分类下差异基因比对,三大功能分类中免疫系统过程、繁殖过程、生长功能、信号功能、生物附着、胞外区域及受体活动功能等存在较大差异,从以上功能分类中筛选,总共找到9条相关基因,分别为HSPA8(Heat shock71kDa Protein)、Heat shock70kDa Protein1、rpl22、rpl13a、48s ribosomal protein SA、人基质/内质网钙ATP酶(ATP2A)、RBP4(Retinol-binding protein4)、ACTB、FGA1。与试验二结果相结合,FGA1基因影响补体系统,从而影响免疫调节功能。
[博士论文] 朱昊俊
特种经济动物饲养 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:转Bt基因作物的种植可以使Bt蛋白经由根系分泌物、花粉、以及作物残体、雨水径流等途径进入其周围的水环境中,实现从陆地生态系统到水生生态系统的转移。因而,评估Bt蛋白对水生生态系统的潜在风险显得十分重要,但是目前有关转Bt基因作物对水生生物的研究很缺乏。本研究以转cry1Ab/1Ac基因水稻(华恢1号,HH1)作为转基因水稻材料,以代表水生生物——爪蟾(Xenopus laevis)作为研究对象,研究转Bt基因水稻对不同发育历期爪蟾(胚胎期,变态期以及成年期)生长发育的影响。主要研究内容和结果如下:
  (1)基于爪蟾胚胎致畸(Frog Embryo Teratogenesis Assay Xenopus,FETAX)试验,在培养液内分别添加Cry1Ab和Cry1Ac纯蛋白,设置10 mg/L、1 mg/L、0.1 mg/L三个浓度,同时设立毒死蜱阳性对照组(480μg/L、240μg/L)和空白对照组,每24h观察并且记录胚胎发育状况和畸形情况,并且更换一次培养液,待试验结束后对蝌蚪体内酶活性进行检测。结果显示:经过96h试验,未观察到Bt蛋白的暴露对爪蟾胚胎产生不利影响,其存活率、畸形率、体重、体长以及酶活力均和对照组一致,差异不显著。
  (2)在蝌蚪饲养水体内添加Cry1Ab和CryAc纯蛋白,以及水稻秸秆浸出液对爪蟾蝌蚪(孵出后7d)进行长期暴露,每天投喂两次并且观察蝌蚪存活情况和日常行为,试验期间每48h更换一次饲养用水,完成变态后立即对幼蛙进行麻醉处理,然后称重解剖,记录下各脏器重量。试验共设置7个处理:(1)100μg/L Cry1Ab纯蛋白组;(2)100μg/L Cry1Ac纯蛋白组;(3)50μg/LCry1Ab+50μg/L Cry1Ac纯蛋白组;(4) HH1水稻秸秆浸出液组;(5) HH1亲本对照(明恢63,MH63)水稻秸秆浸出液组,(6)空白对照组;(7)阳性对照组:100μg/L毒死蜱。通过检测蝌蚪完全变态时间、发育情况、体内酶活力等指标,研究转Bt基因水稻对爪蟾蝌蚪变态期发育的影响。结果显示:Bt蛋白的暴露不会对爪蟾变态期完成变态时间、变态完结时的体重体长、各脏器重量等生长发育指标产生影响,组织切片观察各脏器组织未见明显差异;同时,对肝功能、肾功能以及脂肪代谢进行检测,也未发现显著差异。由此,我们认为Cry1Ab和CryAc纯蛋白的暴露不会影响爪蟾蝌蚪变态期的正常生长发育。
  (3)对变态完成后爪蟾肠道内微生物进行16S rDNA V4区测序,探究其肠道微生物组成,发现爪蟾肠道具有丰富的微生物多样性,总共获得56个门496个属的微生物信息,其中仍有大量未被鉴定微生物。从多样性分析可以看出,不同的肠道分段,微生物种类和组成差异显著;而在同一个分段内,不同的处理(Bt蛋白、秸秆浸出液、毒死蜱)对肠道微生物影响较小。由此,我们推断Cry1Ab和CryAc纯蛋白的暴露未对不同处理组爪蟾肠道微生物产生明显影响。
  (4)根据爪蟾营养需求,使用HH1和MH63稻谷粉(稻谷粉添加比例30%)制作试验用颗粒饲料,通过90d饲喂试验对爪蟾成蛙进行Bt蛋白暴露。每隔15d测量一次体重和体长,在试验结束后,进行一系列生理生化、组织病理学检测。结果显示:取食HH1稻谷粉的爪蟾和对照组相比,其体重、体长、动物行为、各器官重量、肝功能、肾功能等均没有显著差异。这表明,取食含有Bt蛋白的饲料并未对爪蟾幼体产生可观察的影响。
  由以上各结论,我们认为种植转cry1Ab/Ac基因水稻(华恢1号,HH1)不会影响蛙类的生长发育。
[硕士论文] 朱万超
生物学 曲阜师范大学 2017(学位年度)
摘要:紫貂是典型的寒带、亚寒带哺乳动物,曾是一种分布广泛的物种。在我国,共有4种紫貂亚种,主要分布于东北和西北地区人口稀少、气候寒冷的针叶林地带。由于紫貂皮毛异常珍贵,所以该物种经常受到盗猎者的捕杀。再加上人类活动导致的栖息地破碎化,使得紫貂生存面临严峻的挑战。
  本研究通过传统方法(磁珠富集),开发出紫貂基因组多态性微卫星位点22个。同时利用紫貂基因组高通量测序数据,开发了16个四碱基多态性微卫星位点。并且利用这16个四碱基位点,对来自中国东北地区的三个紫貂种群(牡丹江-尚志种群、漠河种群、根河种群)49个个体进行了遗传多样性和种群结构分析。主要研究结果如下:
  1.通过构建基因组文库,共挑取了2252个克隆,经过阳性克隆筛选(获343个)、测序(测序200个阳性克隆)及引物检测(共设计100对),获得26对可以扩增出清晰、单一,且与预期大小相符条带的引物。利用22个紫貂样品对以上引物进行毛细管电泳检测,最终获得22个多态性微卫星位点。其等位基因数范围是3~11个,除了位点Mz24和Mz26的多态信息含量较低(0.250.5)。
  2.通过本实验组已经获得的紫貂基因组数据(高通量测序),共设计了124对引物,随机挑选30对引物进行扩增效率检测,结果得到16对可以扩增出清晰、单一,且与预计长度相符条带的引物。运用这16对引物直接对49个样品基因分型(毛细管电泳),并做个体识别,结果表明16个位点均表现出较高的多态性,个体识别显示无样品重复。
  (1)种群遗传多样性。三个紫貂种群经16个多态性位点检测,共得到105个等位基因,平均每个位点为6.563个。平均观测杂合度为0.5893,平均多态信息含量为0.672,说明16个位点具有较高的多态性,紫貂种群遗传多样性较高。
  (2)群体遗传分化。三个种群所有位点的F-statistics分析结果显示,就整个群体而言,平均遗传分化指数(FST)为0.060,群体内的近交系数为0.103,存在近交现象与杂合子缺失现象;两两种群间遗传分化指数显示,牡丹江-尚志种群与漠河种群、根河种群遗传分化均较为明显(FST值分别为0.056与0.051),而漠河种群与根河种群遗传分化水平较低(FST=0.031),表明各种群间存在不同程度的遗传分化现象。
  (3)群体遗传结构。根据微卫星数据Nei遗传距离进行种群UPGMA聚类分析,结果显示来自大兴安岭地区的漠河种群与根河种群聚为一支,来自小兴安岭、张广才岭一带的牡丹江-尚志种群自成一支。基于微卫星数据个体间遗传距离的NJ聚类分析将三个种群的所有个体分为两大类群,其结果与 UPGMA聚类分析、主坐标分析(PCoA)及STRUCTURE遗传结构分析结果一致。结合遗传分化指数(FST>0.05),说明大兴安岭地区紫貂种群与小兴安岭、张广才岭一带紫貂种群存在中等程度的遗传分化。
[硕士论文] 赵永峰
预防兽医学 山东农业大学 2017(学位年度)
摘要:H9N2亚型流感病毒可引起人以及各种动物低致病性呼吸道疾病。水貂对其易感,由于我国水貂养殖特点为狐狸、貉子与其混合饲养,从而加大了狐狸、貉子感染H9N2亚型流感病毒的机会。
  为研究H9N2流感病毒在水貂群中的流行及进化情况,以及是否在狐狸和貉子种群中造成感染。2015年本实验室从山东省中东部地区收集到105份水貂、32份狐狸和20份貉子的肺组织,并从水貂肺组织中分离到六株 H9N2亚型流感病毒,A/Mink/Shandong/Z1/2015,A/Mink/Shandong/Z2/2015,A/Mink/Shandong/Z3/2015,A/Mink/Shandong/Z4/2015,A/Mink/Shandong/Z5/2015和A/Mink/Shandong/Z6/2015。而在狐狸和貉子的肺组织中没有分离到流感病毒。
  将六株分离毒株的核苷酸序列与GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的核苷酸序列进行比对发现,该六株分离毒株的八个基因片段同源性为99.2%~100%;其PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS基因与A/mink/Shangdong/F10/2013(H9N2)(Mk/SD/F10/13)毒株的相应片段同源性最高,都在97.0%以上,而PB2基因与A/environment/Suzhou/14/2013(H7N9)同源性最高,为99.4%。
  为进一步揭示六株分离毒株的分子特征,用DNASTAR软件分别推导其各基因片段的氨基酸序列,并与参考毒株进行比较分析。分析结果表明,该六株分离毒株八段氨基酸序列的同源性为98.2-100%。六株分离毒株的HA蛋白第226位氨基酸均为亮氨酸(Leu),具有SAα-2,6-Gal的受体结合特性;其裂解位点处氨基酸序列为RSSR,表明六株病毒均是低致病性的毒株;HA蛋白有8个潜在糖基化位点,与参考毒株相比,在218位氨基酸处丢失了一个潜在的糖基化位点,在313位氨基酸处增加了一个潜在的糖基化位点;六株分离毒株PB2蛋白的氨基酸序列在627位编码谷氨酸Glu,第701位编码天冬酰胺 Asn,第627位符合禽源流感的特点,但第701位的天冬酰胺 Asn可以补偿第627位突变产生的影响,增强其在哺乳动物体内的复制能力。
  为了进一步分析六株分离毒株的基因片段的起源,用GeneBank中的H9N2亚型流感病毒的序列作为参考序列,进行系统发生分析。HA基因的系统发生树分析得出:六株分离毒株属于欧亚Ⅲ系的Y280亚系分支, NA基因与内部基因PB1、PA、NP、NS的系统发生树分析表明:六株分离毒株属于欧亚Ⅱ系的Shanghai/F/98亚系分支,M基因的系统发生树表明:六株分离毒株属欧亚Ⅱ系的Hong Kong/G1/97亚系分支。且以上7个片段与Mk/SD/F10/13毒株具有最近的亲缘关系;PB2基因的系统发生树分析表明:六株分离毒株属于欧亚Ⅰ系的Korea/38349-p96323/96亚系分支,且与A/environment/Suzhou/14/2013(H7N9)有很近的亲缘关系。
  为研究貂源H9N2亚型流感病毒能否在水貂种群中水平传播,是否可以跨种传播给狐狸、貉子。本研究用实验室保存的Mk/SD/F10/13毒株进行动物实验。动物实验结果,发现在接种后的第4-8天,哨兵水貂出现了精神沉郁、食欲减退、流清亮鼻涕、流眼泪、轻微的咳嗽等症状,最后攻毒水貂和哨兵水貂都恢复健康,没有造成死亡。排毒检测发现哨兵水貂在第4~6天内能够通过鼻腔向外界排毒。剖检能发现肺脏出血、气管环出血、脾脏肿大出血等病理学变化。组织病理学观察发现肺脏表现出血性间质性肺炎,且肺泡壁充血增厚。第14天采集水貂血液样本分离血清进行HI抗体检测发现HI抗体均为阳性。哨兵狐狸和貉子没有表现临床症状,也没检测到排毒,但第14天采集狐狸和貉子血清检测发现HI抗体均为阳性。同时进行了狐狸和貉子的致病性实验,攻毒狐狸和貉子没有表现临床症状,也没检测到排毒,而第14天采集狐狸和貉子血清检测发现HI抗体也为阳性。这些结果表明:在实验条件下,貂源H9N2亚型流感病毒可以在水貂种群中水平传播,并可以跨种传播给狐狸、貉子。此外,为进一步研究H9N2亚型流感病毒在水貂、狐狸和貉子种群中的流行情况,进行了血清学调查。调查结果:水貂血清中抗H9N2亚型流感病毒的抗体阳性率达为31%(97/313),高于2013年的20%。狐狸血清中抗H9N2亚型流感病毒的抗体阳性率为59.4%(76/128),貉子血清中抗H9N2亚型流感病毒的抗体阳性率为41.4%(106/256)。该结果表明H9N2亚型流感病毒在水貂群中的流行越来越广泛,并在狐狸和貉子群中流行。
  本研究证实了貂源H9N2亚型流感病毒可以在水貂种群中水平传播,并可以跨种传播给狐狸、貉子。而且在毛皮动物种群中广泛流行。此外,貂源H9N2亚型流感病毒在水貂体内持续进化。这可能会对毛皮动物养殖业造成危害,而且毛皮动物也可能作为H9N2流感病毒的中间宿主而感染其他动物,甚至可能感染人类。本研究对做好H9N2流感病毒的防制和监测工作提供了重要的分子流行病学资料,因而具有重要的公共卫生学意义。
[硕士论文] 于新生
临床兽医学 东北农业大学 2017(学位年度)
摘要:蓝狐作为一种新型的经济动物被广泛的养殖在我国黑龙江省大兴安岭市,并已成为该地区继木材减产后的重要支柱产业。微孢子虫病是以肾脏肿大为特征,表现为分窝后生长受阻,机体逐渐消瘦死亡,多伴随着腹泻的一种急性传染病,即使耐过,幼兽生长也会受到严重影响,并导致蓝狐的毛皮质量降低,给蓝狐养殖业带来严重的经济损失。现已确认引起蓝狐发生微孢子虫病的主要病原是兔脑炎原虫,并且大多伴随隐性感染。因此,进行微孢子虫病分子流行病学调查对预防及治疗该病具有重要意义。同时,对患微孢子虫病狐肠道内微生物菌群的研究也为寻找新型治疗药物奠定基础。
  本研究通过对2014-2015年间大兴安岭地区10个规模化养殖场共12143只蓝狐血清样本进行微孢子虫病胶体金试纸条法检测,并进行流行病学分析。在群体中随机抽选30只健康蓝狐和30只患病明显的病狐,以Real-time PCR检测技术分别对两组动物肠道内的乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、拟杆菌(Bacteroides)、肠球菌(Enterococcus)、梭菌(Clostridium)、韦荣球菌(Veillonella)进行检测和差异性显著分析。在2015-2016年间,应用阿苯达唑抗虫剂联合乳酸菌调节法对以上10所养殖场开展微孢子虫病治疗试验。
  流行病学调查结果显示,共检测出阳性感染病例705只,感染率为5.80%;其中带有腹泻症状533例,腹泻率为75.6%;阳性感染病例中死亡病例211个,死亡率为30.0%;剖检典型肾部症状的189个,比率为89.5%。real-time PCR检测结果显示,对照组蓝狐的肠道菌群中,乳酸杆菌(Lactobacillus)和双歧杆菌(Bifidobacterium)的菌群浓度与患病组菌群浓度相比差异性显著(P<0.05),而健康组的拟杆菌(Bacteroides)、肠球菌(Enterococcus)、梭菌(Clostridium)、韦荣球菌(Veillonella)菌群数量与患病组菌群浓度相比差异不显著(P>0.05)。自2015年起,对大兴安岭地区10个养殖场采用阿苯达唑抗虫药联合乳酸菌调肠道菌群的方法对微孢子虫病进行控制,实验数据统计分析表明,检测感染病例111只,其中有腹泻32例,阳性感染病例中死亡病例24个,剖检典型肾部症状的17例,感染病例由种群规模的5.8%下降到0.9%,此方法效果显著。
  研究表明微孢子虫病已成为我国大兴安岭地区致蓝狐死亡的主要传染病之一,且患病动物的死亡率较高,微孢子虫病除了具有泌尿系的病变之外,还主要引起动物肠道菌群的改变,进而使蓝狐出现消化道症状。联合应用阿苯达唑抗虫药与乳酸菌,可显著降低该病的发病率和死亡率,本研究明确了影响大兴安岭地区蓝狐大肾病的病因及致病机制,为深入开展机理研究提供了依据。
[硕士论文] 陈嫦青
动物营养与饲料科学 华中农业大学 2017(学位年度)
摘要:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1,mammalian target of rapamycincomplex1)的激活不仅能促进蛋白质的合成,还能抑制自噬等蛋白质的降解途径的发生。氨基酸尤其是亮氨酸不仅是蛋白质合成的原料,也能作为信号分子参与mTORC1的激活过程。近年来,越来越多的蛋白被发现参与氨基酸激活mTORC1的过程。然而,关于氨基酸在细胞内的感应机制尚不明确,细胞中还可能存在其它未知的蛋白质分子参与氨基酸激活mTORC1的过程。
  本研究通过构建用于研究mTORC1信号通路的无细胞体系(Cell-freesystem),结合同位素标记相对和绝对定量iTRAQ(isobaric tags for relative andabsolute quantification)技术及生物信息学分析,初步筛选参与亮氨酸调节mTORC1信号通路的关键差异候选蛋白质。本研究的无细胞体系由溶酶体粗提物(包括P20(+)和P20(-))、胞浆蛋白(包括S100(+)和S100(-))、纯化的标签蛋白HA-raptor(mTORC1的组分之一)组成。无细胞体系结果表明,在由胞浆蛋白S100(-)和溶酶体粗提物P20(-)组成的无细胞体系中,亮氨酸能促进Raptor与溶酶体P20(-)的结合。无细胞体系反应完成后,我们将对照组的上清和沉淀(S1,P1)与亮氨酸组的上清和沉淀(S2,P2)进行iTRAQ试验。本次iTRAQ试验共鉴定到6292个蛋白,以变化倍数(Fold change)>1.2或<0.83和Q值(Q-value)<0.05两个条件进行差异蛋白的筛选。在P2-VS-P1组中,上调差异蛋白数(Up-regulated proteins)为208个,下调差异蛋白数(Down-regulatedproteins)为190个;在S2-VS-S1组中,上调差异蛋白数(Up-regulated proteins)为12个,下调差异蛋白数(Down-regulated proteins)为3个。对上述差异蛋白进行生物信息学分析(包括GO、COG注释、Pathway注释分析)后发现,差异蛋白主要为细胞器上参与代谢过程的蛋白,且参与脂质代谢和与神经退行性疾病相关的蛋白也可能参与亮氨酸对mTORC1的激活过程。
  参与亮氨酸激活mTORC1信号通路的关键差异候选蛋白需要综合考虑上清和沉淀中的差异蛋白。其中,在上清中下调且在沉淀中上调的蛋白数为0,而在上清中上调且在沉淀中下调的蛋白有6个,因而我们初步将这6个蛋白(APOA1、CFH、FGA、ERH、CANX、F2)定义为参与亮氨酸激活mTORC1信号通路的关键差异候选蛋白。对CANX进行初步验证后发现,无细胞体系样品中该蛋白的分布规律与iTRAQ数据一致,且CANX与溶酶体上的标志性蛋白Lamp2的共定位结果也说明亮氨酸能促进CANX向细胞质中迁移。
  综上所述,(1)本研究首次成功构建了用于研究亮氨酸调节mTORC1信号通路的无细胞体系,且该体系有效性好,稳定性高。(2) iTRAQ数据与生物信息学分析结果表明,APOA1、CFH、FGA、ERH、CANX、F2可能参与亮氨酸对于mTORC1信号通路的调节。
[博士论文] 谭静
动物营养与饲料科学 河南农业大学 2017(学位年度)
摘要:DDK综合症是一种以小鼠早期胚胎死亡为表型的繁殖现象,其主要表现为:当DDK品系雌鼠与同亚种内其他品系雄鼠杂交时,胚胎因形成胚泡障碍不能着床而死亡;而DDK雄鼠与其他品系雌鼠杂交时胚胎则均能正常发育。小鼠卵子突变基因(Ovum mutant,Om)被认为是导致该综合症的突变基因,然而该基因序列及作用机制目前仍不清楚。本研究旨在通过在小鼠日粮中添加不同浓度的精氨酸观察其对DDK综合症胚胎的影响,以及精氨酸代谢与DDK综合症间的关系;同时研究中通过寻找DDK综合症的修饰基因,以揭示Om基因位点杂合雌鼠与C57BL/6(B6)回交后胚胎死亡率偏离半数致死的原因。本研究通过营养和基因两个方面共同探讨对DDK综合症胚胎的影响,为最终解释DDK综合症的机理奠定基础。本研究共分三部分进行:
  第一部分研究小鼠日粮中添加不同浓度精氨酸对DDK综合症的影响。实验采用单因素完全随机设计,选用120只F1(B6♀×DDK♂)代雌鼠,随机分为3组,分别饲喂精氨酸含量为1.10%、1.34%和1.59%的日粮。妊娠12天解剖,观察存活胎子数和着床数,检测子宫胎盘内一氧化氮含量。实验结果表明,饲喂1.34%的精氨酸组其着床数显著高于1.10%和1.59%组(P<0.05)。同时,1.34%组的存活胎子数最高,但与其他两组相比,均未达到显著性差异(P>0.05)。子宫胎盘内一氧化氮检测结果显示,小鼠日粮中添加1.34%和1.59%的精氨酸其一氧化氮含量均显著高于1.10%组(P<0.05)。该实验结果表明,小鼠日粮中添加1.34%精氨酸对提高DDK综合症胚胎的成活率有一定帮助,但差异不显著;子宫胎盘内一氧化氮的检出,表明DDK综合症胚胎死亡和精氨酸缺乏及一氧化氮代谢障碍间无直接关系。
  第二部分初步定位DDK综合症的修饰基因。实验利用与Om基因紧密连锁的D11Mit36、D11Mit66和D11Mit247三个微卫星分子标记,筛选杂合型N2雌鼠构建修饰基因定位群体。同时,采用凝胶电泳法筛选在DDK和B6品系间具有多态性的微卫星分子标记,利用筛选到的分子标记对作图全体进行全基因扫描。收集杂合型N2雌鼠妊娠12天的存活胎仔数和胚胎着床数作为表型数据。最后采用WinQTLCart2.5软件中的复合区间作图法结合全基因扫描结果和表型数据进行QTL定位分析,初步寻找加重DDK综合症的修饰基因。实验结果显示,本研究共筛选到289只N2杂合型雌鼠构建作图群体,其筛选比例为23.94%。筛选到67条具有多态性的微卫星引物,筛选比例为25.97%,平均每条染色体上有3.53个标记,标记间平均距离为18.56cM。收集到的表型数据显示存活胎子数平均为2.57只,而着床数平均为3.59只,且均符合正态分布。结合19363个全基因扫描结果和表型数据进行QTL分析后发现,存活胎子数在第几号染色体上有一个明显高峰,其最大LOD值为3.5,超过了2.9的显著性LOD值,因此认为该位点是一个主效修饰基因位点,并将其命名为Amom1,该位点位于小鼠第几号染色体上的38.9-51.9cM区间。而着床数虽然也在第九号染色体上也有一个高峰,但其最大LOD值为2.3,未达到显著性LOD值2.5的水平,因此,认为该位点不是一个显著性修饰基因位点。该实验结果表明,在B6品系遗传背景中定位到一个主效修饰基因位点,该位点可以加重DDK综合症,使得胚胎成活率进一步降低。该实验结果解释了Om位点杂合雌鼠与B6品系回交胚胎死亡偏离半数致死的原因。
  第三部分对Amom1修饰基因位点进行精细定位。本研究在初步定位的基础上通过扩大定位群体,增加高密度分子标记等方法,以进一步精细定位Amom1位点。在精细定位后,结合小鼠资源库及生物信息学方法,寻找Amom1位点内的候选基因,为最终克隆DDK综合症修饰基因奠定基础。实验结果显示,本研究在小鼠第九号染色体上筛选到高密度分子标记28个,筛选率为21.88%,Amom1位点内分子标记间距为0.93cM。增加了56个有效样本,使作图群体达到了345只。利用作图群体的存活胎子数表型数据进行QTL分析,并采用1.5LOD-drop的方法进行置信区间估测。QTL分析结果表明,Amom1位点置信区间为47.7-49.1cM间,大约1.4cM。该位点的贡献率为10.56%,加性效应为-1.46,显性效应为12.72。通过NCBI和MGI数据库分析该区间对应90700-94500Mb,包含有效基因19个,其中12个为未知基因,4个为Plscr家族基因,2个为Zic家族基因和1个Plod家族基因。下一步的研究需要对19个基因进行更进一步的筛选,并对筛选出来的候选基因进行功能性验证。
  综合以上研究结果,小鼠日粮中添加1.34%的精氨酸对DDK综合症略有缓解,DDK综合症胚胎死亡与日粮中精氨酸代谢无直接关系,而与B6品系遗传背景中的修饰基因位点Amom1有直接关系。该修饰基因位点通过对Om基因的调节,可促进DDK胚胎死亡的进一步增加,即加重DDK综合症。该研究揭示了日粮中精氨酸与DDK综合症胚胎死亡间的关系,同时定位到的加重DDK综合症的修饰基因为全面解释DDK综合症的机理奠定了基础。
[硕士论文] 刘帅
养殖 中国农业科学院 2017(学位年度)
摘要:本论文以生长期(分为育成期和冬毛期)的水貂为研究对象,通过配制不同钙、磷水平的水貂饲粮,研究饲粮不同磷水平和钙磷比对生长期水貂生长性能、营养物质消化率、血清生化指标、胫骨指标及氮、钙磷代谢的影响,以筛选出水貂育成期和冬毛期适宜饲粮钙磷水平,为指导实际生产提供理论依据。
  本研究包括二部分:
  第一部分:育成期水貂饲粮适宜钙磷水平的研究
  选取(70±10)日龄体重相近的雌性水貂90只,采用3×3双因子试验设计,随机分为9组,每组10个重复,每个重复1只。确定3个磷水平分别为1%,1.4%,1.8%,钙磷比值为1,1.5,2,分别饲喂Ⅰ组(1.02% Ca,0.96%P)、Ⅱ组(1.49% Ca,1.00% P)、Ⅲ组(1.98%Ca,1.01%P)、Ⅳ组(1.47% Ca,1.35% P)、Ⅴ组(2.11% Ca,1.40% P)、Ⅵ组(2.81%Ca,1.40%P)、Ⅶ组(1.83% Ca,1.73%P)、Ⅷ组(2.70% Ca,1.80% P)、Ⅸ组(3.59% Ca,1.80%P)的试验饲粮,正试期60天。
  结果表明:
  1)磷水平对育成期水貂末重、平均日增重影响极显著(P<0.01),对平均采食量、料重比影响差异显著(P<0.05)。钙磷比只对育成期水貂平均日增重影响极显著(P<0.01),对末重、料重比影响不显著(P>0.05)。磷与钙磷比对水貂平均日增重交互作用极显著(P<0.01)。Ⅴ组(2.11% Ca,1.40%P)末重、平均日增重最大,料重比最小。
  2)育成期水貂不同组间蛋白质消化率差异显著,Ⅴ组(2.11%Ca,1.40%P)、Ⅵ组(2.81%Ca,1.40% P)显著高于其他组,Ⅰ组(1.02% Ca,0.96%P)最低(P<0.05)。不同磷水平极显著影响蛋白质消化率(P<0.01),钙磷比对育成期水貂营养物质消化率影响不显著(P>0.05)。脂肪消化率有随钙磷比的升高呈先增加后降低的二次变化趋势。
  3)各组间食入氮、粪氮、尿氮差异不显著(P>0.05),氮沉积差异显著(P<0.05),净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值差异极显著(P<0.01)。粪氮含量有随磷水平的增加而下降的趋势。Ⅵ组(2.81% Ca,1.40%P)氮沉积、净蛋白质利用率最高。钙磷比对净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值影响极显著(P<0.01)。净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值有随磷水平的升高而增加的趋势。
  4)各组间粪钙含量、粪磷含量、钙消化率、磷消化率差异极显著(P<0.01),磷水平、钙磷比对育成期水貂粪钙、粪磷、钙消化率、磷消化率影响极显著(P<0.01)。磷水平与钙磷比交互作用显著(P<0.05)。Ⅸ组(3.59%Ca,1.80%P)粪钙、粪磷含量极显著高于其他组(P<001)。Ⅵ组(2.81%Ca,1.40% P)钙消化率极显著高于其他组,Ⅶ组(1.83% Ca,1.73%P)磷消化率极显著高于其他组(P<0.01)。
  5)钙、磷水平升高,血钙含量随之升高(P<0.01),血磷含量随之升高(P<0.01)。磷水平、钙磷比对育成期水貂碱性磷酸酶含量影响极显著(P<0.01)。随着磷水平升高,碱性磷酸酶含量先下降后上升,差异极显著(P<0.01)。随着钙磷比水平升高,碱性磷酸酶含量先上升后下降,差异极显著(P<0.01)。
  结论:从生长性能和氮代谢方面考虑,育成期水貂饲粮磷水平在1.4%~1.8%,钙磷比在1.5~2之间较为适宜。
  第二部分:冬毛期水貂饲粮适宜钙磷水平的研究
  选取(130±10)日龄体重相近的健康雌性水貂90只,采用3×3双因子试验设计,随机分为9组,每组10个重复,每个重复1只,3个磷水平分别为1%,1.4%,1.8%,钙磷比值为1,1.5,2,分别饲喂Ⅰ组(1.03% Ca,0.97%P)、Ⅱ组(1.47% Ca,0.98%P)、Ⅲ组(1.98%Ca,0.99% P)、Ⅳ组(1.45% Ca,1.37%P)、Ⅴ组(2.08% Ca,1.38%P)、Ⅵ组(2.79% Ca,1.38%P)、Ⅶ组(1.81% Ca,1.75%P)、Ⅷ组(2.70% Ca,1.79% P)、Ⅸ组(3.59% Ca,1.80%P)的试验饲粮,正试期77天。
  结果表明:1)饲粮不同磷水平和钙磷比极显著影响末重、平均日增重,交互作用极显著(P<0.01)。Ⅴ组(208% Ca,1.38%P)末重、平均日增重极显著高于其他组(P<0.01)。
  2)干物质、蛋白质、脂肪消化率有随着钙磷比和磷水平的升高而增加的趋势,都在Ⅲ组(1.98% Ca,0.99% P)达到最大后开始降低。
  3)饲粮不同磷水平和钙磷比对冬毛期水貂食入氮、尿氮、粪氮、氮沉积、净蛋白利用率、蛋白质生物学价值影响不显著(P>0.05)。
  4)随着饲粮中磷水平的增加,粪钙含量随之增加,组间差异极显著(P<0.01);Ⅷ组(2.70%Ca,1.79%P)、Ⅸ组(3.59% Ca,1.80%P)粪钙含量极显著高于其他组(P<0.01);饲粮磷水平极显著提高粪磷排出量(P<0.01);钙磷比为2时粪磷含量最少(P<0.01)。Ⅷ组(2.70%Ca,1.79% P)粪磷含量极显著高于其他组(P<0.01);Ⅲ组(1.98% Ca,0.99%P)粪磷含量极显著低于其他组(P<0.01)。饲粮不同钙磷比极显著影响钙消化率(P<0.01),钙磷比升高,钙消化率升高。Ⅲ组(1.98%Ca,0.99%P)钙消化率极显著高于其他组(P<001)。饲粮不同磷水平和钙磷比对磷消化率影响不显著(P>0.05)。
  5)随着磷水平升高,血钙含量随之升高,差异极显著(P<0.01)。随着钙水平升高,血钙含量先下降后上升,差异极显著(P<0.01)。随着磷水平升高,血磷含量随之升高,差异极显著(P<0.01)。随着钙水平升高,血磷含量先下降后上升。随着钙磷比水平升高,碱性磷酸酶含量先上升后下降,差异极显著(P<0.01)。磷水平对冬毛期水貂碱性磷酸酶含量影响不显著,但是有随着磷水平升高,碱性磷酸酶含量先下降后上升的变化趋势。
  6)组间骨长差异显著(P<0.05)。钙磷比对水貂骨长影响显著(P<0.05),随着钙水平升高,骨重有下降趋势。磷水平、钙磷比对水貂胫骨灰分含量影响不显著(P>0.05)。骨钙含量组间差异极显著(P<0.01),Ⅱ组(1.47% Ca,0.98% P)含量显著高于其他组,Ⅰ组(1.03%Ca,0.97%P)、Ⅸ(3.59% Ca,1.80%P)组含量显著低于其他组。磷水平、钙磷比对水貂骨钙含量影响不显著,但是交互作用极显著(P<0.01)。磷水平、钙磷比对水貂骨磷含量交互作用极显著(P<0.01)。磷水平对水貂骨磷含量影响不显著,钙磷比对水貂骨磷含量影响极显著(P<0.01),随着钙水平升高,骨磷含量有下降趋势。
  7)饲粮不同磷水平和钙磷比对冬毛期水貂体长、绒长和上楦皮长影响不显著(P>0.05)。饲粮不同磷水平对针长影响不显著(P>0.05),饲粮不同钙磷比对针长影响极显著(P<0.01),钙磷比为1时针长最短。饲粮不同磷水平对针绒比影响不显著(P>0.05),饲粮不同钙磷比对针绒比影响显著(P<005)。不同组间针绒比差异显著(P<0.05),Ⅳ组(1.45% Ca,1.37%P)显著低于其他组(P<0.05)。
  结论:综合各项指标,从冬毛期水貂生产性能和胫骨指标出发,饲粮磷水平在1%~1.4%,钙磷比在1.5~2之间较为适宜。
[硕士论文] 邢敬亚
野生动植物保护与利用 中国农业科学院 2017(学位年度)
摘要:本论文研究了饲粮亚油酸水平对生长期蓝狐生产性能和脂质代谢的影响。通过饲养试验、消化代谢试验、屠宰试验及分子生物学试验对生长期蓝狐各项指标的测定,全面系统的阐述了饲粮亚油酸水平对蓝狐生长性能、脂肪酸组成及相关基因表达量的影响,探讨了脂肪酸在体内的消化吸收及代谢规律,确定了蓝狐干粉混合饲料中亚油酸的适宜水平,为研究蓝狐脂肪酸代谢规律奠定基础。
  试验一:饲粮亚油酸水平对育成期蓝狐生长性能、营养物质消化率及氮代谢的影响
  选(90±5)日龄体重相近的健康雄性蓝狐60只,采用单因子试验设计,随机分成6组,每组10个重复,每个重复1只蓝狐。分别饲喂亚油酸含量为0.11%(Ⅰ组)、0.52%(Ⅱ组)、0.92%(Ⅲ组)、1.33%(Ⅳ组)、2.14%(Ⅴ组)和3.36%(Ⅵ组)的试验饲粮。正式期63d。结果表明:
  (1)饲粮亚油酸水平极显著影响育成期蓝狐平均日增重(ADG)和料重比(F/G)(P<0.01),随饲粮亚油酸水平的升高ADG逐渐升高,F/G逐渐降低,对干物质采食量无显著影响(P>0.05)。Ⅵ组(3.36%) ADG最高, F/G最小。(2)饲粮亚油酸水平极显著影响蓝狐脂肪(EE)、碳水化合物(CC)及干物质(DM)的消化率(P<0.01),随饲粮亚油酸水平的升高,EE和CC消化率逐渐升高,DM消化率呈先降低后升高的趋势,对CP消化率无显著影响(P>0.05)。EE和CC消化率均以Ⅵ组(3.36%)最高,Ⅰ组(0.11%)最低;(3)饲粮亚油酸水平对食入氮(IN)、氮沉积(RN)和挣蛋白利用率(NPU)无显著影响(P>0.05),显著影响粪氮(FN)、尿氮(UN)和蛋白质生物学价值(PBV)(P<001或P<0.05)。其中FN以Ⅵ组(3.36%)最高,Ⅰ组(0.11%)最低,组间差异显著(P<0.05);RN、NPU和PBV均以Ⅵ组(3.36%)最高,Ⅱ组(0.52%)最低。
  试验二:饲粮亚油酸水平对冬毛期蓝狐生产性能、营养物质消化率及氮代谢的影响
  蓝狐进入冬毛期,改喂冬毛期饲粮。各组蓝狐分别饲喂0.10%(Ⅰ组)、1.32%(Ⅱ组)、2.13%(Ⅲ组)、2.94%(Ⅳ组)、3.76%(Ⅴ组)和4.97%(Ⅵ组)不同亚油酸水平的试验饲粮。正式期67d。结果表明:
  (1)饲粮亚油酸水平极显著影响冬毛期蓝狐ADG(P<0.01),随饲粮亚油酸水平的升高,ADG逐渐升高, F/G呈降低趋势;对干物质采食量和F/G无显著影响(P>0.05);鲜皮长Ⅵ组(4.97%)均显著高于其他组(P<0.05),对其他毛皮性能指标无显著影响(P>0.05)。(2)饲粮亚油酸水平极显著影响冬毛期蓝狐EE、CC和DM消化率(P<0.01),随饲粮亚油酸水平的升高,EE、CC和DM消化率呈升高的趋势,对CP消化率无显著影响(P>0.05)。EE消化率以Ⅴ组(3.76%)最高,Ⅰ组(010%)最低。(3)饲粮中亚油酸水平对IN、FN、UN、RN、NPU和PBV均影响不显著(P>0.05)。然而,氮沉积随饲粮中亚油酸水平的升高呈上升趋势,Ⅰ组(0.10%)最低,Ⅵ组(4.97%)最高,NPU和PBV价值均以Ⅴ组(3.76%)最高。
  试验三:饲粮亚油酸水平对生长期蓝狐血清生化指标及冬毛期消化道酶活的的影响
  (1)饲粮亚油酸水平极显著的影响生长期血清甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平(P<0.01),生长期血清TG随亚油酸水平的升高呈降低趋势,育成期TP和ALB均以Ⅵ(4.97%)组最高;冬毛期TP以Ⅰ组(0.10%)最高,ALB以Ⅱ组(1.32%)最高。(2)饲粮亚油酸水平极显著影响冬毛期蓝狐空肠食糜中淀粉酶(AMS)的活性(P<0.01),对脂肪酶(LPS)和胰蛋白酶活性无显著影响(P>0.05),但LPS活性随亚油酸水平升高有上升趋势,AMS活性以Ⅲ组(2.13%)最高。
  试验四:饲粮亚油酸水平对冬毛期蓝狐不同组织中脂肪酸组成及相关基因表达量的影响
  (1)饲粮亚油酸水平极显著影响冬毛期蓝狐皮下脂肪中饱和脂肪酸(SFA)比例(如C16∶0、C18∶0)和多不饱和脂肪酸(PUFA)比例(如C18∶2n-6、C20∶2n-6:)(P<0.01),极显著影响肌肉中SFA比例(P<0.01),对PUFA无显著影响(P>0.05)。随饲粮亚油酸水平的升高,SFA比例逐渐降低,PUFA则呈上升趋势,但对单不饱和脂肪酸(MUFA)比例没有显著影响(P>0.05)。
  (2)饲粮亚油酸水平极显著影响冬毛期蓝狐肝脏和肌肉中肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)基因表达量(P<0.01),随亚油酸水平的升高,CPT-Ⅰ基因表达量逐渐升高,均以4.97%亚油酸水平最高,但对脂肪酸合成酶(FAS)基因无显著影响(P>0.05)。
  综上所述,蓝狐处于不同的生长时期对亚油酸的需要量不同,在本试验条件下,从降低环境污染以及保证蓝狐生长性能的角度出发,育成期蓝狐饲粮中亚油酸添加水平应当维持在1.33%~2.14%之间较适宜,冬毛期蓝狐干粉料中亚油酸水平应当维持在3.76%比较适宜。此外,饲粮中添加亚油酸不仅对血清生化指标、脂肪酶活性有调节作用,还可以影响肌肉和皮下脂肪中脂肪酸的组成,并且对体内脂肪酸合成与代谢起调控作用。
[硕士论文] 许冠
药用动物资源开发 西北农林科技大学 2017(学位年度)
摘要:林麝(Moschus berezovskii)是我国重要的经济动物,因其所产麝香有极高的经济价值而被大量捕杀,导致种群数量锐减,2002年被列为我国Ⅰ级重点保护的珍稀濒危野生动物。目前,开展人工养麝是保护林麝野生资源的重要手段之一,但圈养林麝又带来了新的问题,遗传相关问题尤为突出。因林麝保护级别高,分布区域有限,样品获取较难,目前有关林麝的研究报道较少。为丰富林麝遗传学有关数据,同时为麝场的养殖管理提供资料,本文开展了以下研究:运用磁珠富集法构建林麝微卫星富集文库,从文库中筛选多态微卫星位点;用8个林麝多态微卫星位点分析陕西某麝场圈养林麝群体的遗传多样性,并对所采40个林麝样进行UPGMA聚类分析。所得主要结果如下:
  1.采用磁珠富集法构建林麝(AC)n微卫星文库,获得16个微卫星位点,其中完全型微卫星8个,占50%,不完全型微卫星7个,占43.75%,复合型微卫星1个,占6.25%。
  2.设计14个林麝微卫星位点引物,经筛选发现3个多态的林麝微卫星位点,可用于林麝群体遗传多样性分析;1个林麝和马麝的种间鉴别位点。
  3.圈养林麝种群的遗传多样性分析结果显示,8个林麝微卫星位点的多态信息含量在0.679~0.870之间,平均多态信息含量为0.798;共检测到68个等位基因,平均等位基因数为8.5,平均有效等位基因数为5.8770;圈养林麝种群的平均观测杂合度为0.5428,平均期望杂合度为0.8337,平均Shannon's信息指数为1.8971。卡方检验结果显示,除Mber76C位点外,其余7个微卫星位点偏离Hardy-Weinberg平衡,其中2个位点杂合子过剩,5个位点杂合子缺失。8个微卫星位点共检测到14个稀有等位基因,占等位基因总数的20.59%。
  4.40个圈养林麝样品的聚类分析结果表明,群体的相似系数在0.72~0.97之间,整个群体可分为9类,同一类群个体数最多为22个,最少为1个。
  本研究丰富了林麝微卫星标记数据,分析发现陕西麝场圈养林麝群体的遗传多样水平较高,但为了麝场长远的发展,仍需不断提高麝场的养殖管理水平,建立完善的群体遗传谱系,实时进行群体遗传监测,避免种群退化的风险。
[硕士论文] 刘宜敏
动物学 湖南师范大学 2017(学位年度)
摘要:于2015年1月2日至8月30日,在全国第二次陆生野生脊椎动物资源调查的湖南省洞庭湖(186)单元和长江中游平原·湖南(184)单元过程中使用样线法对洞庭湖陆生野生脊椎动物资源和多样性进行了比较全面的调查,在调查区域内随机均布设24个边长为10km的样方,在样方中共调查了205条样线,样线总长约有1025km。
  此次调查记录到陆生野生脊椎动物总计49373只,229种,27目71科。其中记录到的两栖动物12种,占此次调查陆生野生脊椎动物种数的5.24%;记录到爬行动物18种,占此次调查陆生野生脊椎动物种数的7.86%;鸟类180种,占此次调查陆生野生脊椎动物种数的78.60%;兽类19种,占此次调查陆生野生脊椎动物种数的8.30%。
  两爬部分共记录两栖纲动物4科12种,均属无尾目,其中东洞庭湖调查区域记录到虎纹蛙Hoplobatrachus chinensis为国家二级保护动物。东洞庭湖调查区域和南洞庭调查区域调查到的两栖纲物种相对丰富。记录到爬行纲动物3目5科18种,南洞庭湖和大通湖调查区域的调查结果相对丰富。
  鸟类部分调查到雀形目鸟类有84种,个体数为32875只,种类数占鸟类种数46.67%,个体数占鸟类个体总数67.11%。非雀形目鸟类共计96种,占鸟类物种数53.33%。其中雁鸭类共记录18种,占总数10%。共记录有留鸟67种,占总数37.22%;夏候鸟33种,占总数18.33%;冬候鸟52种,占总数28.89%;共有28种鸟类在洞庭湖是旅鸟,占总数的15.56%。
  此次洞庭湖陆生野生脊椎动物调查共记录哺乳纲动物7目12科19种,均为国家级或省级重点保护动物,其中在IUCN被列为EN(濒危)级别的有猪獾Arctonyx collaris、林麝Moschus berezovskii、穿山甲Manis pentadactyla和江豚Neophocaena phocaenoides,列为VU(易危)的有小灵猫Viverricula indica等6种。
  此次洞庭湖陆生野生脊椎动物资源调查记录到国家一级重点保护动物3种,国家二级重点保护动物21种。记录到的物种有30种被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅰ和附录Ⅱ。
[硕士论文] 陈明帅
养殖 中国农业科学院 2017(学位年度)
摘要:貉作为毛皮经济动物,毛色类型和毛皮色彩决定了经济价值,近年来,在貉的品种培育过程中,发现了黑色突变个体(简称黑貉),作为一种新的突变资源,被毛纯净、色彩鲜亮,有着极高的科研和利用价值。黑貉的基础研究还较为薄弱,明确黑貉的生物学特性,了解其毛色突变机理对加快黑貉新品种的培育具有重要的理论意义。本研究对黑貉繁殖性能、生长性能、毛皮品质及血液生理生化等指标进行测定,选取影响黑貉毛色的潜在基因TYR、DCT进行SNP分析,在分子水平上揭示黑色突变的原因。主要研究结果如下:
  1.本研究以乌苏里貉为对照,对黑貉繁殖性能、生长性能、毛皮性能、血液生理生化指标进行了测定。结果表明,在相同的饲养和管理条件下,黑貉和乌苏里貉窝产仔数都在5~6.5只,分窝成活率都在80%以上,两种毛色间差异不显著(P>0.05);不同毛色个体在出生45-210日龄体重和体高差异不显著(P>0.05);黑貉背部针绒毛长度显著高于乌苏里貉(P<0.05);生理指标结果显示,PLT在黑貉中公母差异显著(P<0.05);W-SCR在黑色公貉和乌苏里公貉的之间差异显著(P<0.05);其他指标WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、W-SCC、RDW-SD、RDW-CV、PDW、MPV、P-LCR等在品种和性别间差异不显著。生化指标中,TG在乌苏里貉中公母差异显著(P<0.05);Alb、TP、CHO在两种貉间有差异,但差异不显著(P>0.05); ALT、AST、Glu、Urea、TP、D-HDL-C、LDH、CHO、ALP等指标在种间和性别上没有差异(P>0.05)。
  2.通过PCR、克隆测序技术获得黑貉和乌苏里貉TYR、DCT基因的完整编码区序列,通过比较基因组学对这两个基因进行鉴定和生物信息学分析。最终结果显示,貉TYR基因编码序列长1593bp,编码530个氨基酸。貉DCT基因的完整编码区序列长1650bp,编码549个氨基酸。
  3.通过分析测序结果,对获得的TYR、DCT基因编码区开展SNPs检测,将基因突变位点形成的基因型和貉毛色表型进行关联分析。测序和比对结果表明,貉TYR基因在两种毛色间存在一个突变位点c.1497C>G,该突变位点只在黑貉中存在且为CG基因型,乌苏里貉为CC基因型,该突变与与黑貉毛色形成有关;DCT基因编码区在黑貉和乌苏里貉两种毛色之间没有突变。
[博士论文] 陶大勇
临床兽医学 华中农业大学 2016(学位年度)
摘要:鹿茸是一种名贵的中药材,具有温肾壮阳、生精益血、强筋补髓的功效。它是鹿科动物特有的组织,具有很强的再生能力,在自然生长情况下每年都要经历发生、生长、骨化、脱落等过程。塔里木马鹿是单位体重产茸量晟高的鹿科亚种,在生茸期鹿茸生长迅速,鹿茸角的生长的本质就是在软骨骨架上的成骨过程,期间大量的矿物质元素尤其是钙将沉积在鹿茸角中。钙离子的沉积需要多种因素调控,关系比较密切的因素有钙敏感受体(CaSR)、甲状旁腺素(PTH)、雄激素(ADG)、降钙素(CT)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨唾液酸糖蛋白(BSP)、骨钙素(BGP)等激素。为了明确钙离子在鹿茸中的沉积规律、以及鹿茸骨化与调控因素之间的关系,本试验通过测定生茸期鹿茸钙、血钙、骨钙、血液中ADG、PTH、CT、BALP、BGP及BSP等激素的含量和变化规律,对塔里木马鹿鹿茸间充质细胞、前成软骨细胞、软骨细胞、骨膜细胞进行体外培养,采用激光共聚焦显微技术观察细胞外钙离子向胞内流动以及测定胞内钙离子浓度,采用Real-time PCR、WesternBlot等方法,分析CaSR、BSP、Runx2、GAPDH等基因表达情况,分析研究鹿茸角骨化机制。通过试验研究,取得如下成果:
  1、塔里木马鹿鹿茸生长状况,及鹿茸钙、血钙、骨钙变化规律。
  青年组塔里木马鹿鹿茸角的生长速度在鹿茸角开始生长的第84天达到最大值,血Ca2+含量在鹿茸角开始生长的第70天出现下降趋势,而后升高,于鹿茸角开始生长的第84天达到最高值。中年组、老年组马鹿在鹿茸角开始生长的第70天鹿茸角生长速度达到最大值,血液中Ca2+含量子鹿茸角开始生长的第57天达到最高值,在鹿茸角开始生长的第70天出现降低态势,此后Ca2+含量又缓慢攀升。塔里木马鹿鹿茸生长期约有100天(从春分至夏至),年龄大的鹿只其鹿茸角先开始生长、先进入骨化阶段。鹿茸钙含量是不断增加的,鹿茸骨化过程是分阶段进行的,在生长期表现为钙在软骨内沉积,在骨化期则是软骨组织迅速钙化。马鹿主要骨骼均存在脱钙现象,鹿茸角中的钙主要来源于肋骨,其次是骨盆骨,而小腿骨与肩胛骨脱钙程度最轻。
  2、鹿茸骨化与血液中相关激素之间的关系。
  在鹿茸角的不同生长阶段,塔里木马鹿外周血中血清ADG、PTH、CT、BALP、 BGP及BSP的含量存在着不断的变化,尤其是骨化阶段变化最为明显。血清ADG水平的变化最明显的是在锯茸后,在此之前都一直处于低水平状态,然后迅速升高,达到显著性差异(P<0.01)。血清PTH在鹿茸角生长阶段变化一直不明显,骨化期之前一直处于低水平状态,但在进入骨化后期,各组马鹿血清PTH含量显著增高(P<0.01)。各组马鹿血清BALP含量在生茸初期至快速生长期均有下降趋势,快速生长期至骨化后期,各组马鹿血清BALP含量均增加,在鹿茸收获以后,明显下降。血清BGP、BSP均是随着鹿茸角的生长而在升高,进入骨化期后开始下降,鹿茸角收获后就一直在下调,与鹿茸角的生长速度呈正相关。各组血清CT的浓度变化趋势与鹿茸角生长率相同,但滞后于鹿茸角生长速度的变化,在生茸初期、茸快速生长期均缓慢升高,到骨化后期达到最高,然后开始下降。说明血液中ADG、BALP、BGP、BSP等激素与鹿茸角快速骨化有着密切关系。血液中PTH、CT等激素与脱钙的骨骼重建有着密切关系。
  3、鹿茸细胞培养及与钙调节相关基因的关系。
  采集处于生长期鹿茸顶端部分进行细胞培养,实验结果表明:前软骨细胞(ACC)、间充质细胞(MSC)易培养,而软骨细胞(CC)生长较慢。用激光共聚焦方法检测[Ca2+]i的变化,结果发现MSC的[Ca2+]i高于ACC、CC,补充外源性钙时,胞外Ca2+流入胞内,MSC、ACC细胞需要的时间较短,而CC细胞则需要的时间较长。说明越临近骨化期,鹿茸角中软骨细胞的数量越多,需要的钙量也越来越多。用实时荧光定量PCR扩增CaSR、BSP、Runx2等基因,前软骨细胞的BSP、CaSR、Runx2等基因mRNA表达水平明显高于间充质细胞,而软骨细胞中只有Runx2基因的mRNA表达水平高于间充质细胞、前软骨细胞。Western Blot检测得到了相同的结果。说明鹿茸的生长与MSC、ACC的分化能力有关,鹿茸的钙化与CC的数量、胞外钙的浓度有关。在鹿茸生长期内,BSP调节Ca2+进入到软骨细胞形成骨小梁的过程中起到重要作用;Ca2+将通过CaSR介导在软骨细胞中沉积;Runx2在软骨成熟中可以起到一定的作用。
[硕士论文] 焦钰
动物学 内蒙古大学 2016(学位年度)
摘要:转基因小鼠(Mus musculus)的制备方法多种多样,包括原核显微注射、精子介导转基因、体细胞核移植和使用慢病毒载体等。但目前为止,生产转基因小鼠最为有效的方法仍然是原核注射技术。单从效果来看,原核注射技术是最为理想的。但此项技术也存在着不足:很多研究人员在实验室中得到的转基因效率并不一致,并且转基因效率低。为此,本文从注射针直径、外源基因浓度、单/双核注射等原核注射环节入手,对原核注射技术进行优化,并采用优化后的技术制备转基因小鼠。试验结果,注射针的直径大约为0.5μm时是最合适的,相比直径1μm的阳性率(12.5%),其阳性率(47.7%)要高出35%(P<0.01)。外源性基因的浓度,是影响转基因小鼠阳性率的重要因素。外源基因浓度为1.00μg/mL、2.50μg/mL、3.00μg/mL和4.0μg/mL时,转基因小鼠阳性率分别0.67%、14.9%、30.6%和21.4%。当外源性基因浓度为3.00μg/mL时,阳性率远高于其他组(P<0.01)。使用浓度为3.00μg/mL的外源基因浓度,分别统计并比较单原核注射与双原核注射的阳性率,结果表明双原核注射组的阳性率(24.3%)比单原核注射组(18.3%)明显要高(P<0.01)。在显微技术辅助作用下,将2-细胞时期胚胎分别移入到0.5d、1.5d、2.5d假孕母鼠输卵管内,19.5d后代孕母鼠产仔,产仔率分别为68.6%、67.6%和40.1%,经检测,转基因阳性率为17.4%、22.5%和10.1%。组间对比结果表明,在产仔率指标方面,0.5d和1.5d组间对比差异不具有统计学意义,不过在转基因阳性率方面,1.5d代孕组(22.5%)显著高于其他两组。使用注射针直径小(≈0.5μm);DNA载体浓度为3μg/mL;采用双原核注射;1.5d代孕母鼠孕母鼠;可以高效获得转基因转基因小鼠。本实验经过对原核注射过程中主要关键步骤的优化组合,形成了一套高效的转基因小鼠标准化操作流程。
[博士论文] 石全华
野生动植物保护和利用 东北林业大学 2016(学位年度)
摘要:猎物不足是威胁中国野生东北虎生存和恢复的主要限制因素之一。鉴于在中国东北的野生东北虎分布区内,其主要猎物梅花鹿密度极低,不足0.1只/km2,该项目采用猎物重引入的方式帮助梅花鹿在野外建立稳定的基础种群。2012-2013年,作者在吉林省汪清国家级自然保护区,重引入人工饲养梅花鹿63只,置于建立在野外的过渡场内驯化1个月,而后就地释放。2012年6月到8月,以及2013年6月到8月,项目通过对重引入梅花鹿种群的监测,进行了其在重引入初期的适应性研究,以对未来在东北虎栖息地开展猎物重引入计划,及其它鹿类的重引入计划提供基础信息和技术指导。其研究主要结论如下:
  1、利用粪便分析法,对重引入梅花鹿在过渡场期间的食物组成变化进行研究,发现其采食的主要植物12科31属,其中柳属、杨属、栎属、桦木属和蒿属为其主要食物,占总采食量的46.48%。而重引入梅花鹿在过渡场的最初5天,食物组成与野外植物的可获得相关性高,而后经过一段时间的波动,最终在10天后,形成稳定的食物选择。将其稳定期的食物组成与当地同期野生梅花鹿的食物组成相比较,结果显示总体差异不显著。
  2、提取测定重引入梅花鹿粪便中皮质醇激素的含量,结果显示重引入梅花鹿种群到达过渡场的最初10天,其粪便中皮质醇含量较高且不稳定(588.3±93.4)ng/g,表明其应激反应强烈。然而,其含量整体呈下降趋势,10天后其含量逐渐平稳在约355.10±63.1 ng/g。将其与当地同期野生梅花鹿比较,同期粪便中的皮质醇含量相似。本研究没有发现10日内因应激反应而产生的梅花鹿由于健康问题或死亡,因此认为,种群在非捕食动物刺激的情况下,在10日之内将重引入梅花鹿的应激反应消除是可靠的。
  3、从行为学角度,利用瞬间扫描法来研究重引入梅花鹿在过渡场期间的行为变化,结果显示在其到达过渡场最初10日内,其行为时间分配波动较大,存在一定的日活动节律,但并不稳定。而在到达过渡场10天后,逐步形成稳定的时间分配和日活动节律。其稳定后,日活动节律基本与野生梅花鹿相似。值得注意的是,重引入梅花鹿到达过渡场前10天,采食行为所占比例很低,而观望行为的比例很高,这也是高应激反应的一个表现。而后,即使在采食逐渐增多的第5天左右,其观望行为的比例仍然很高,而反刍行为所占比例却较低,这个阶段对于鹿群的适应是一个关键时间,在应激反应的影响下,反刍受到波动而采食开始逐渐增多,如果没有及时消除应激反应,很有可能对梅花鹿的代谢产生影响,甚至出现健康问题。
  4、在过渡场驯化1个月后,重引入梅花鹿就地释放。项目利用无线电项圈对其跟踪监测,并对其释放后的生境选择进行研究。同时,辅助利用自动相机对当地野生梅花鹿的生境选择进行研究。结果显示释放后的重引入梅花鹿偏爱选择位于坡度小于25°,灌木密度小而乔木密度适中的区域,同时其对水源依赖,会倾向选择距离水源较近(<500m)的生境。其与同域分布的梅花鹿存在一定的一致性,如两者均倾向于选择坡度较小的区域,均倾向于选择乔木密度较适中的区域。然而,野生梅花鹿在生境选择上更注重回避捕食,如倾向于选择上坡位,距离隐蔽较近的地方活动,以及远离人为干扰区域。此外,主成分分析的结果显示对于重引入梅花鹿,其绝对值较大的权系数出现在坡度、坡位、距水源距离和郁闭度上,说明在重引入地的选择上,以上生境因子应优先考虑。
  5、总的来讲,重引入的梅花鹿在采食、应激和行为上的适应,都会在最初的10天完成,表现为初期的波动和逐渐稳定、适应的规律。因此,在管理方面,更严格的监测和可能需要的人工干预都会出现在这个阶段,应安排相应的人力和做好准备工作。而对于释放后的梅花鹿群,其与野生梅花鹿群仍存在一定的差异,特别是在回避捕食上,释放后管理人员应该尽可能地促进重引入的梅花鹿与野生梅花鹿尽早合群,以使其更快完成生境选择上的适应过程。
[硕士论文] 孟庆博
生理学 东北林业大学 2016(学位年度)
摘要:随着野生动物饲养业的蓬勃发展,野生动物的野外资源却呈下降趋势,甚至有些物种已达到濒危程度。国家法律禁止捕猎和利用濒危的野外资源,但鼓励人工饲养种群的商业化利用。这引起一个重要问题:从野外猎取非法的野生动物,会假借人工驯养繁殖的名义进入合法市场。面对此种情况,执法部门必须能够准确地鉴别野外和人工饲养的个体或其产品,才能有效地打击盗猎,保护合法产业。但是,目前只有基于骨密度的方法和头骨形态计量学的策略,还不够能满足需要。本研究以野外水貂(n=25)和人工驯养水貂(n=38)为实验材料,探究了新的鉴定方法及其应用潜力。
  下颌骨与咬肌构成一个杠杆系统,以髁状突为支点,以前臼齿和臼齿的齿尖为阻力点,齿尖到髁状突的距离即为阻力力臂。我们推测,野生食肉动物的食物质地较硬,而人工饲养的动物食物柔软,在发育过程中很可能产生阻力臂的而差异。如果这种差异能够足够明显,就可以据此建立来源判别指标。
  首先,测定髁状突到前臼齿第三齿尖以及臼齿上的下原尖和下前尖的阻力臂、齿冠长及齿尖高等,然后建立了14判别指标(L1/L、L2/L、L3/L、L1/M1、L2/M1、L3/M2、H1/L1、H2/L2、H3/L3、H1·L1/L2、H2·L2m2、H3·L3/L2、H4·L4/L2、CosA),利用这些判别指标分析野生饲养间的差异、性别之间的差异,并进行判别分析,以已知来源个体正确回判率来评价其有效性。主要结果如下:
  1、野生水貂与人工饲养水貂的咬合杠杆系统发生了结构性改变,与野生组相比,饲养组的杠杆阻力臂变长。
  2、判别指标H2/L2和CosA无性别差异,组合使用正确回判率达到91.2%,具有很高的鉴别能力。
  3、在已知性别的条件下,L2/M1对雄性个体具有最高的判别能力(78.8%),L1/M1对雌性个体具有较强的鉴别能力(87.9%)。
  4、一些具有性别差异的指标可用来判别性别,指标L1/L和L2/M1联合判别力(CC)达到87.3%,L1/M1和L2/M1联合判别力达到85.7%。
  上述结果表明,下颌骨的咬合杠杆的结构在野生和人工饲养的水貂之间存在差异,基于阻力臂的指标可以用来判别动物的来源。水貂是典型的小型食肉动物,本研究的结果对其他食肉动物具有重要的参考意义。
[博士论文] 金光耀
野生动植物保护和利用 东北林业大学 2016(学位年度)
摘要:2013年~2015年冬季,作者在黑龙江省长白山地的张广才岭地区和大兴安岭地区对紫貂(Marteszibellina)进行了调查研究,基于野外收集的冬季紫貂生境数据,运用Kolmogorov-Smirnov Test的检验方法、资源选择函数模型及最大熵生境评价模型等数据处理方法对我国长白山地和大兴安岭的紫貂冬季生境选择和生境适宜性进行比较研究,获得如下主要结果:
  1、通过长白山地和大兴安岭紫貂冬季对海拔、坡度、坡向、距水源距离、距道路距离、距针叶林距离、距阔叶林距离、距混交林距离、距灌木距离、距沼泽距离、距居民点距离、隐蔽级、郁闭度、雪深、植被类型、优势乔木等16种生境因子的选择差异比较,结果显示:海拔、距水源距离和距道路距离均为影响两地紫貂生境选择的主要因子;而距阔叶林距离、隐蔽级仅为影响长白山地紫貂生境选择的主要因子;距混交林距离、距居民点距离和郁闭度仅为影响大兴安岭紫貂生境选泽的主要因子。
  2、通过对生境因子进行逻辑斯蒂回归筛选,建立紫貂生境选择的资源选择函数模型为:长白山地大海林林区:P=ez/(1+ez),其中z=1.041+1.313×海拔+0.907×距道路距离-1.003×距水源距离-2.040×距阔叶林距离+0.553×隐蔽级;大兴安岭新林林区:P=ez/(1+ez),其中z=2.041+1.040×海拔+1.907×距道路距离-1.303×距水源距离;大兴安岭双河国家级自然保护区:P=ez/(1+ez),其中z=0.265-1.305×距水源距离+0.927×距混交林距离+1.060×距沼泽距离-0.061×雪深。在资源选择函数的变量选取上,只有距水源距离是3个研究地点共有的生境因子,其余被筛选进资源选择函数模型的生境因子均不相同。
  3、运用最大熵(MAXENT)模型对影响紫貂分布的海拔、坡度、坡向、距河流距离、距道路距离、距居民点距离、距针叶林距离、距针阔混交林距离、距阔叶林距离,距灌丛距离及距沼泽距离11个生境变量的重要性进行分析:长白山地大海林林区距阔叶林距离(46.62%)、海拔(18.16%)、距河流距离(12.82%)、坡向(11.94%)这4个环境变量的累积贡献率达90.0%。大兴安岭新林林区距道路距离(46.87%)、距河流距离(13.27%)、距针叶林距离(11.13%)、坡度(5.48%)这5个生境变量的累积贡献率达76.8%。大兴安岭双河自然保护区距河流的距离(20.46%)、距沼泽的距离(16.73%)、距道路的距离(15.85%)、距针阔混交林的距离(13.01%)、距针叶林距离(10.01%)这5个生境变量的累积贡献率达82%。
  4、运用MAXENT模型评价长白山地和大兴安岭紫貂的生境适宜性;概率切断点的概率值由模型敏感性(Sensitivity)和特异性(Specificity)值的和最大时确定。长白山地大海林林区的适宜生境呈现连续性分布,主要分布在中部和西南部,适宜生境的面积为107.1km2,约占林区总面积的33.7%;不适宜生境面积为210.9km2,约占林区面积的66.3%。大兴安岭新林林区的适宜生境呈现聚集分布,并有一定的连续性,适宜生境面积为326.8km2,约占林区总面积的25.6%;不适宜生境面积为950.5km2,约占林区域总面积的74.4%。大兴安岭双河国家级保护区的适宜生境呈现斑块分布,并有一定的连续性,适宜生境的面积为227.8km2,约占保护区总面积的26.2%;不适宜生境面积为641.7 km2,约占保护区面积的73.8%。
  5、长白山地和大兴安岭地区紫貂的生境适宜性均呈现出随着距阔叶林距离的增加,或随着距针叶林距离和距水源距离的减少而增加趋势。这表明紫貂回避阔叶林并偏爱在针叶林中和距水源较近的地区生活。此外,由于长白山地张广才岭林区海拔起伏相对较大,海拔因子成为该地紫貂生境适宜性评价特有的因子;因大兴安岭部分地区山地崎岖陡峭,坡度为紫貂生境适宜性评价特有的因子。这两个特有因子分别对长白山地和大兴安岭的紫貂的生境适宜性产生较大影响。
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