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[博士论文] 王钢
生理学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 主要围绕11β-HSD2在子痫前期发病机制中的作用进行研究。
  子痫前期是妊娠期特有的疾病,严重影响着母体和胎儿的健康,是导致孕产妇和胎儿发病死亡的主要原因之一。目前,针对子痫前期并没有有效的诊断和治疗措施,临床上最有效的治疗方法仍然是提前终止妊娠。胎盘被认为在子痫前期发病过程中起着至关重要的作用,因为随着胎盘的娩出,子痫前期的相关症状也会随之消失。但是,胎盘是通过何种机制参与到子痫前期的发病过程中,尚未完全阐明。近年来,子痫前期二元发病理论被广泛接受,即在子痫前期发病机制的第一阶段,由于胎盘发育不良滋养层细胞侵入能力受损,使胎盘滋养层细胞无法侵入子宫肌蜕膜和子宫螺旋动脉,从而子宫螺旋动脉无法从高阻力,低容量的血管转变为低阻力,高容量的血管。由于子宫螺旋动脉重构障碍,胎盘无法得到充足的氧气和血液供应致使胎盘处于缺血缺氧的不良状态。之后,在子痫前期发病机制的第二阶段,胎盘处于缺氧缺血的状态下会释放大量有害的细胞因子进入到母体循环中,造成母体广泛的内皮功能紊乱,继而造成母体出现高血压,蛋白尿等症状。
  糖皮质激素在妊娠期间很多过程如胚胎着床,胎盘胎儿的生长发育以及胎儿的分娩中都发挥着重要的调节作用。糖皮质激素可以作用到胎盘、胎儿、胎膜等妊娠期组织。随着妊娠期的进行,母体和胎儿血液循环中的糖皮质激素水平都会随之升高,但母体循环中的糖皮质激素升高水平是胎儿侧的数倍。如果胎儿暴露在母体过量的糖皮质激素水平之下,会导致胎儿生长发育不良。胎盘中的11β-HSD2可以将有活性的糖皮质激素转变为无活性的糖皮质激素,从而可以阻止母体过量的糖皮质激素进入胎儿循环中。有研究显示,子痫前期产妇胎盘中的11β-HSD2表达是降低的,糖皮质激素水平是升高的。也有研究发现,妊娠期SD大鼠皮下注射地塞米松会导致大鼠出现高血压,蛋白尿等子痫前期相关症状。这些研究提示11β-HSD2可能参与到子痫前期的发病机制当中,但是11β-HSD2是通过何种机制参与到子痫前期的发病过程中,尚未阐明。由于子痫前期二元发病理论被广泛认可,那么,胎盘中11β-HSD2表达异常是否是通过抑制胎盘滋养层细胞侵入功能和促进胎盘释放有害细胞因子进入母体等过程参与到子痫前期发病过程中呢?因此,为了探究11β-HSD2在子痫前期发病机制中的作用,分别在整体动物和离体细胞水平上,进行了相关实验探索。
  结果:
  1、妊娠期间抑制11β-HSD2活性可以导致大鼠产生子痫前期相关症状。在大鼠妊娠期间(GD7.5-19.5)皮下注射11β-HSD2抑制剂CBX180μg/d、360μg/d、720μg/d,3种剂量观察抑制11β-HSD2之后是否会直接导致大鼠出现子痫前期的相关症状。结果显示:(1)CBX皮下注射给药之后360μg/d和720μg/d两组胎盘中11β-HSD2蛋白表达减少并且活性受到抑制。(2)CBX皮下注射给药之后360μg/d和720μg/d两组妊娠期大鼠出现高血压、蛋白尿、肾损害和胎儿生长受限等子痫前期相关症状。
  2、胎盘特异性抑制11β-HSD2活性导致妊娠期大鼠产生子痫前期相关症状。由于胎盘在子痫前期的发病过程中起着至关重要的作用,建立了胎盘特异性抑制11β-HSD2活性的妊娠期大鼠模型。动物实验分为五组:空白对照组(CON)、CBX180μg/2d、CBX-NPs、CBX-SRC、CBX-CSA。从GD7.5开始尾静脉给药处理,每两天1次持续到GD19.5。结果显示:(1)只有带有胎盘靶向多肽标签的CBX-CSA组大鼠胎盘中11β-HSD2的蛋白表达和酶活性是减少的。(2)胎盘特异性抑制11β-HSD2之后妊娠期大鼠出现高血压、蛋白尿、肾损害和胎儿生长受限等子痫前期相关症状。
  3、妊娠期(GD7.5-19.5)皮下注射地塞米松(DEX)导致大鼠产生高血压、蛋白尿、肾损害等子痫前期相关症状。
  4、胎盘中11β-HSD2表达及其活性的异常可以抑制胎盘滋养层细胞的侵入。PAS、α-actin、CK免疫组化染色结果显示,360μg/d和720μg/d两组全身给药动物模型和CBX-CSA组靶向给药动物模型胎盘中,滋养层细胞侵入子宫肌蜕膜和子宫螺旋动脉功能受损。
  5、胎盘中11β-HSD2表达及其活性的异常可以导致子宫胎盘血流灌注不足。多普勒超声结果显示,全身给药模型中360μg/d和720μg/d两组妊娠期大鼠中子宫螺旋动脉,胎盘中母体通道,胎儿侧脐动脉内血流速度均受到抑制。
  结论:
  动物模型和离体细胞实验结果都表明,胎盘中11β-HSD2表达异常可以导致胎盘滋养层细胞侵入功能受损和血管生成因子与抗血管生成因子表达失衡,进而参与到子痫前期的发生发展当中。
  第二部分 主要围绕H2S对红细胞携氧功能的调节作用进行研究。
  H2S是继NO、CO之后被发现的第三类气体信号分子,可以参与调节人体很多生理和病理过程。H2S可以参与调节血管舒张,血管形成,炎症反应以及氧化应激等过程。机体是在L-半胱氨酸的相关代谢通路中产生H2S,其介导H2S产生的两种酶分别是胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)。CSE和CBS两种酶可以将同型半胱氨酸和胱硫脒代谢产生L-半胱氨酸,在产生L-半胱氨酸的过程中会伴随着H2S的释放。CSE与CBS两种酶在人体心血管系统,呼吸系统,神经系统之中广泛表达。有研究显示,在缺氧应激的环境下,机体很多组织和细胞如脑、肺、内皮细胞、心肌细胞等都会出现H2S生成减少的现象。课题组前期的研究也显示,胎盘在缺氧的状态下,CBS和CSE的蛋白表达降低,H2S的生成也随之减少。
  红细胞是人体血液中最常见的细胞,其主要的生理功能是负责氧气的运输。红细胞可以在肺脏中结合氧气使细胞内血红蛋白转变为氧合血红蛋白,之后红细胞随血液流经外周组织将血红蛋白携带的氧气释放到外周组织之中。氧气与血红蛋白的亲和性和氧分压的关系可以用氧离曲线表示。氧气与血红蛋白结合为50%时的氧分压称之为P50,其可以反应血红蛋白与氧气的亲和能力。血红蛋白与氧气的结合和释放受到很多因素如pH、温度、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-BPG)的调节。2,3-BPG可以变构调节血红蛋白的构象,使其与氧气亲和性降低,利于氧气的释放。2,3-BPG是通过红细胞内糖酵解通路产生的1,3-BPG在2,3-二磷酸甘油酸变构酶(bisphosphoglycerate mutase,BPGM)的作用下生成的。2,3-BPG可以被2,3-二磷酸甘油酸磷酸酶降解,但是由于磷酸酶的活性较低,因此2,3-BPG在红细胞内蓄积并发挥作用。有研究显示,人体在缺氧的环境下,红细胞内的2,3-BPG表达升高,使血液在流经外周组织时释放更多的氧气。也有研究显示,人体在高海拔缺氧的环境下,随着缺氧时间的增加,血清中H2S的水平也随之减少。那么,H2S是否可以调节红细胞中2,3-BPG的表达进而调节红细胞的携氧功能呢?为了解决上述问题,设计了相关实验。
  结果:
  1、首先建立了Cse-/-基因敲除小鼠模型,之后收集野生型小鼠和Cse-/-小鼠的红细胞进行代谢组学的分析,结果显示,两组红细胞有30种差异代谢物,其中Cse-/-小鼠红细胞中的2,3-BPG水平明显升高。代谢组的结果提示,H2S的减少可以导致红细胞中2,3-BPG表达升高。
  2、为了进一步验证H2S对红细胞携氧功能的调节,采用2,3-BPG检测试剂盒检测红细胞中2,3-BPG水平,结果与代谢组分析一致,Cse-/-小鼠红细胞中的2,3-BPG水平明显升高。之后,外源性的注射H2S供体GYY4137之后可以逆转这一现象。同时,通过血气分析检测了红细胞的携氧功能指标氧离曲线和P50。结果显示,H2S减少同样会导致红细胞氧离曲线右移和P50升高。GYY4317处理Cse-/-小鼠之后可以逆转这一现象。
  3、为了探究血清中H2S的来源,建立了Cse-/-基因敲除小鼠与野生型小鼠骨髓移植模型,分为3组:野生型小鼠骨髓移植到野生型小鼠(WT-WT),野生型小鼠骨髓移植到Cse-/-小鼠(WT-Cse-/-)以及Cse-/-小鼠骨髓移植到野生型小鼠(Cse-/-WT)。结果显示,红细胞本身H2S的减少不会导致血清中H2S的改变,然而,外周组织H2S的减少会影响血清中的H2S水平。同时,红细胞携氧能力检测显示,外周组织H2S减少会导致红细胞2,3-BPG以及P50升高。GYY4317处理WT-Cse-/-组小鼠之后,可以逆转2,3-BPG以及P50的升高。
  4、为了探究H2S对红细胞的直接作用,离体培养了人和小鼠的红细胞,应用GYY4137(250μM,500μM)处理之后,检测红细胞携氧功能,结果显示,H2S可以抑制红细胞2,3-BPG和P50的水平并导致氧离曲线左移。
  5、为了探究H2S是通过何种机制调节2,3-BPG的水平,在整体动物模型和离体细胞水平检测了红细胞中BPGM酶活性的变化,结果显示,Cse-/-基因敲除小鼠红细胞中BPGM的酶活性升高,GYY4137注射处理之后可以逆转这一现象。人和小鼠离体细胞GYY4137处理之后,同样可以抑制红细胞中BPGM的酶活性。
  结论:
  H2S通过影响红细胞中BPGM的活性进而改变2,3-BPG的表达导致红细胞携氧功能的改变。
[硕士论文] 盛菲
妇产科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:背景及目的:
  早期自然流产是妊娠常见不良结局之一,在临床确诊的妊娠中自然流产的发生率达15%左右,目前已知的造成自然流产的病因有很多,包括胚胎染色异常、感染、免疫缺陷等等;而其中仍然有约50%为以上是病因不明的自然流产。胎盘的正常发育是维持妊娠中胚胎存活和生长的必要条件之一,其生长和发育由一系列精密复杂的因素调控,当胎盘的生长发育中任一环节发生异常时常会导致妊娠相关疾病的发生。其中,滋养层细胞作为胎盘的主要组成部分,在胎盘发育过程中扮演重要角色,它参与了胚胎着床、启动胎盘形成、调控血管分化、内分泌以及免疫保护等过程,从而维持妊娠顺利进行。当滋养层细胞的发育或功能异常,则会导致胎盘的发育或功能的缺陷,引起早期妊娠失败等妊娠相关疾病的发生。因此,深入了解调控胎盘滋养层细胞的发育和功能的相关调节机制,阐明造成不明原因流产的因素以及可能参与不明原因流产发生的机制是非常有必要的,这将为解释妊娠相关疾病的发生提供重要理论支持。
  自lncRNA被发现以来,越来越多的研究证实长链非编码RNA通过不同的分子机制参与调控多种基本生物过程,例如X染色体激活,基因组印记,细胞分化与增殖,细胞迁移以及细胞凋亡等。近年有关lncRNA与肿瘤形成及胚胎发育中的作用被广泛关注,目前已有的研究表明长链非编码RNA与妊娠相关疾病的发生密切相关,例如长链非编码RNA MEG3、MALAT、SPRY4-IT11等通过调控滋养层细胞功能参与子痫、胎儿宫内生长受限,流产等妊娠相关疾病的发生,由此可见长链非编码RNA可能是参与胎盘或滋养层细胞生长发育的重要调控因素。
  因此,本课题采用长链非编码RNA芯片技术,以小鼠胎盘发育为模型,进行芯片检测和分析,筛选出在胎盘发育过程中差异表达的长链非编码RNA。通过芯片分析和筛选,本课题选取随胎盘发育时间逐渐高表达的lncRNA MEG8(Rian)为目标分子,进一步探讨其在人不明原因自然流产中以及胎盘滋养层细胞中的作用及机制。
  方法:
  1、以小鼠胎盘发育为模型,取小鼠胎盘发育的第6.5d,14.5d和19.5d的组织各3例,进行lncRNA和mRNA芯片检测。差异基因筛选条件为Fold change>2.0,P<0.05,初步筛选胎盘发育过程相关的差异表达基因。
  2、对筛选出来的差异表达基因进行连续性趋势分析(STC),进一步筛选出胎盘发育过程中连续性上调表达和下调表达的基因,基于差异基因进行基因功能(GO)和信号通路(KEGG Pathway)分析,筛选胎盘发育过程中差异表达的GO-Term和信号通路以及其包含的基因。为了进一步筛选出胎盘发育相关的重要lncRNA,本课题结合基因组印记区,筛选出位于基因印记区的并且人鼠同源性较高的lncRNAs Rian(MEG8)为初步研究对象。
  3、在人不明原因自然流产和人工流产绒毛组织中运用RT-PCR方法检测lncRNAMEG8(Rian)表达水平。以人早期滋养层细胞系HTR-8/Soven为研究对象,分别转染过表达质粒和小干扰RNA,探讨lncRNA MEG8对滋养层细胞的功能的影响。
  4、运用DNA甲基化质谱方法,检测4对人绒毛样本(不明原因自然流产组VS人工流产组)中lncRNA MEG8启动子区甲基化水平,探讨其调控滋养层细胞的可能机制。
  结果:
  1、芯片结果显示胎盘发育过程中存在大量动态表达lncRNAs,经过筛选和分析发现胎盘发育过程中上调表达的lncRNA有2,407条,下调表达的有1,550条;上调表达的mRNA有1,396条,下调表达的有1,800条。
  2、通过筛选和分析发现lncRNA Rian在胎盘发育过程中随胎盘发育时间表达量逐渐升高。其人的同源序列lncRNA MEG8(RIAN)在人不明原因自然流产绒毛组织中异常高表达。
  3、在滋养层细胞系中上调表达MEG8发现细胞增殖和侵袭能力减弱,在滋养层细胞系中下调表达MEG8则结果相反。DNA甲基化检测结果显示,在不明原因自然流产绒毛组织中MEG8的启动子区存在异常甲基化。
  结论:
  1、胎盘发育过程中lncRNAs呈现动态的时空表达,lncRNAs在胎盘发育过程中起重要作用;
  2、lncRNA MEG8参与调控早期滋养层细胞功能,其启动子区甲基化异常会造成滋养层细胞的功能缺陷,可能是早期不明原因自然流产发生的因素之一。
[硕士论文] 张颖
公共卫生 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  对南京鼓楼医院妇产科妊娠妇女的甲状腺功能异常情况进行流行病学调查分析。分析亚临床甲状腺功能减退及单纯抗体阳性对妊娠结局的影响。评估临床现有左旋甲状腺素纠正SCH及单纯TPOAb异常治疗方案对妊娠并发症及妊娠结局的影响。
  方法:
  收集2015年1月到2016年2月在南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科建围产保健卡并在本院分娩的中孕期妇女的资料,首先分析本地区妊娠期临床甲减、单纯低T4血症、及其他甲状腺疾病(妊娠期甲状腺结节、妊娠合并甲状腺功能亢进症(甲亢)、妊娠期甲状腺毒症)的发病率。比较对照组及不同分组SCH患者(SCH+TPOAb阳性组、SCH+TPOAb阴性组、单纯TPOAb阳性组)的妊娠结局情况。
  将SCH+TPOAb阳性组分成临界值(2.5-3.0mIU/L)治疗组与符合治疗组,比较以上两组与对照组的妊娠结局情况。将单纯TPOAb阳性分为治疗组与未治疗组,再对两组与对照组的妊娠结局进行比较。
  结果:
  总共有3450例孕妇被纳入统计分析,其中临床甲减69例(2.0%),单纯低T4血症38例(1.1%),SCH为389例(11.3%)(其中合并TPOAb(+)组为160例(4.6%),TPOAb阴性组为229例(6.6%)),单纯TPOAb(+)322例(9.3%),甲亢28例(0.8%),其他(妊娠期甲状腺结节、妊娠期甲状腺毒症等)5例(0.1%),健康孕妇2599例(75.3%)。
  SCH+TPOAb(+)组、SCH+TPOAb(-)组、单纯TPPAb+)组和对照组四组孕妇的妊娠期并发症进行比较,结果发现:妊娠期高血压、妊娠期糖尿病的发生率、自发性流产、早产、足月低体重儿、Apgar评分<7、新生儿体重在四组间的差别有统计学意义。而子痫前期、未足月胎膜早破、产后出血的发生率、胎儿窘迫发生率在四组间的差别无统计学意义。进一步采用Bonferroni两两比较分析发现:对于妊娠期高血压,SCH+TPOAb(+)组、单纯TPPAb(+)组与对照组的差异均有统计学意义;对于妊娠期糖尿病,SCH+TPOAb(+)组与单纯TPPAb(+)组、对照组的差异均有统计学意义。对于自发流产,SCH+TPOAb(+)组、单纯TPPAb(+)组与对照组的差异均有统计学意义;对于早产,SCH+TPOAb(+)组、SCH+TPOAb(-)组、单纯TPPAb(+)组与对照组的差异均有统计学意义;对于Apgar评分<7的比例,SCH+TPOAb(-)组与对照组的差异有统计学意义。
  SCH+TPOAb阳性临界值治疗组、符合治疗组与对照组比较结果表明:妊娠期高血压、糖尿病、自发性流产、早产、足月低体重儿、Apgar评分<7的发生率在三组间的差别有统计学意义。进一步采用Bonferroni两两比较分析发现:SCH+TPOAb(+)2组的妊娠期高血压、糖尿病、自发性流产、早产的发生率与对照组的差别均有统计学意义。SCH+TPOAb(+)1组和2组之间无统计学差异。
  单纯TPOAb阳性接受LT-4治疗组、未治疗组与对照组的比较结果表明:三组不同时间点、不同组别的TSH、FT4差别均有统计学意义。接受治疗组的单纯TPOAb(+)孕妇与对照组FT4水平均明显高于未接受治疗组的单纯TPOAb(+)孕妇。对三组的妊娠不良事件和妊娠结局进行分析得出:娠期高血压、自发性流产、早产的发生率在三组间的差别有统计学意义,其中对照组发生率低于LT-4治疗组,两组均低于未接受LT-4治疗组。
  结论:
  SCH和/或TPOAb阳性均可导致妊娠期糖尿病、妊娠期高血压及早产、自发性流产、足月低体重儿等妊娠并发症及不良妊娠结局的出现。SCH和/或TPOAb阳性均可导致妊娠期糖尿病、妊娠期高血压及早产、自发性流产、足月低体重儿等妊娠并发症及不良妊娠结局的出现。对甲状腺功能正常但单纯TPOAb(+)的孕妇应中期补充LT4,可降低流产及早产发生率。
[硕士论文] 侯海燕
影像医学与核医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  本研究的目的是在妊娠妇女人群中,通过对比出生时实际记录体重和出生前三周超声预测体重,评估超声在胎儿体重估测的精确度及其影响因素,以为临床决策提供更为准确的依据,减少母婴产伤,提高产科管理目标。
  研究方法:
  选取自2015年7月至2016年6月在我院住院分娩的480例孕妇进行队列研究。采用三星WS80A彩色多普勒诊断仪进行测量,并使用Hadlock公式(BPD/AC/FL)计算作测量结果,绝对百分比误差作为测量精度。BMI和超声性能之间的关系通过线性回归评估。
  研究结果:
  1.假设超声估测出生体重的总体比例随孕周在10%的出生体重内呈显著下降。超声精确度的逐渐恶化对正常体重妇女无显著统计学意义(P=.272),但是对超重/肥胖妇女有显著意义(P=.044)。单变量分析提示,绝对百分比误差和绝对误差与BMI呈正相关。
  2.糖耐量阳性组胎儿平均出生体重差(g)是235.93±189.40、体重差比例(g)6.68±5.61,高于糖耐量阴性组胎儿出生体重差(g)226.45±185.43、6.19±5.26(P<0.05)。阳性组胎儿体重差比例小于10%的比例明显低于阴性组,差异有显著性差异(P<0.05)。
  3.羊水过多、羊水过少组胎儿体重差、体重差比例,体重差比例小于10%的比例差异无统计学差异。羊水过多、羊水过少组体重差、体重差比例显著高于羊水正常组,体重差比例小于10%的比例显著低于羊水正常组,差异具有统计学差异(P<0.05)。
  研究结论:
  1.精确度与超过时间的逐渐增大的超声扫描周数有关,且随超声时间和出生时间的距离天数增加而变差,对BMI≥25的差异更大。
  2.糖耐量异常影响超声评估胎儿体重的准确性。
  3.羊水过多、羊水过少降低超声评估胎儿体重精确度。
[博士论文] 顾永忠
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文分为以下几个章节进行探讨:
  第一章 胎盘植入中microRNA-125a,microRNA-29a/b/c和MCL1表达水平分析
  目的:
  1.检测并分析miR-125a和miR-29a/b/c在胎盘植入部分与自身邻近非植入组织中的表达是否存在差异。
  2.检测并分析植入和自身邻近非植入组织中MCL1基因mRNA水平的表达及差异,并分析MCL1与miR-125a和miR-29a/b/c表达相关性。
  3.探讨MCL1是否作为miR-125a和miR-29a/b/c的靶基因在胎盘植入中发挥作用。
  方法:
  1.采用自身对照的配对设计,收集新鲜未经任何干预处理的母体面胎盘绒毛、类纤维蛋白层及基板层,植入部分还包括基板子宫肌层纤维。
  2.提取组织中总RNA,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链(RT-qPCR)反应检测胎盘植入部分及自身邻近非植入部分组织中miR-125a,miR-29a/b/c和MCL1的表达。
  3.应用载体(pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector,pmirGLO)构建野生型MCL1-miR-125a-pmirGLO质粒(WT-125)和野生型MCL1-miR-29a/b/c-pmirGLO质粒(WT-29)。突变野生型质粒中的种子区序列部分碱基成为突变型MCL1-miR-125a-pmirGLO质粒(MUT-125)和突变型MCL1-miR-29a/b/c-pmirGLO质粒(MUT-29)。用化学合成方法以miR-125a或miR-29a/b/c成熟核苷酸序列为模板分别合成microRNA模拟物,通过脂质体Lipofectamine3000将miR-125a模拟物与WT-125或者MUT-125共转染入293T细胞,将miR-29a/b/c与WT-29或者MUT-29共转染入293T细胞。
  4.双荧光素酶报告基因检测探讨MCL1与miR-125a和miR-29a/b/c的靶基因关系。
  结果:
  1.MiR-125a和miR-29a/b/c在胎盘植入部分组织中的表达水平明显低于自身邻近非植入部分组织,对应的表达倍数分别是0.64;0.63;0.64;0.75(p=0.005;0.018;0.041;0.022)。
  2.MCL1基因的mRNA在胎盘植入部分组织中表达水平明显高于自身邻近非植入部分组织,表达倍数为1.32(p=0.039)。
  3.Pearson相关分析表明,胎盘植入组织中miR-125a和miR-29a/b/c的相对表达量与MCL1的相对表达量呈显著负相关性(Pearson correlation=-0.701,-0.543,-0.876,-0.767, p<0.05)。
  4.双荧光素酶报告基因检测(luciferase activity assays)证实MCL1是miR-125a和miR-29a/b/c的靶基因(p=0.043,0.006,0.009,0.010)。
  结论:
  MiR-125a和miR-29a/b/c在胎盘植入组织较自身邻近非植入组织表达水平显著降低,相反MCL1 mRNA在胎盘植入部分组织中表达显著增高,两者在胎盘植入中的相对表达量呈明显的负相关性。双荧光素酶报告基因检测证实MCL1是miR-125a和miR-29a/b/c的靶基因,推测miR-125a,miR-29a/b/c通过调控靶基因MCL1表达参与胎盘植入发生。
  第二章 胎盘植入中microRNA-125a和microRNA-29a/b/c调控滋养细胞生物学行为的研究
  目的:
  1.体外转染滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,进一步验证miR-125a和miR-29a/b/c对靶基因MCL1的负性调节作用。
  2.探讨miR-125a和miR-29a/b/c异常表达对滋养细胞凋亡生物学行为的影响。
  3.确定抗凋亡滋养细胞的类型,初步探讨miR-125a和miR-29a/b/c在胎盘植入中的病理作用机制。
  方法:
  1.以miR-125a和miR-29a/b/c成熟核苷酸序列为模板,用化学合成方法分别合成microRNA的模拟物(miR-125a mimic,miR-29a/b/c mimics),反义的microRNA抑制物(miR-125a inhibitor, miR-29a/b/c inhibitors)以及各自对应的阴性对照序列(negative control,NC,inhibitor negative control,INC)。通过脂质体Lipofectamine3000分别将模拟物、抑制物及各自对应的阴性对照序列转染滋养细胞系HTR-8/SVneo。
  2.应用RT-qPCR反应检测microRNAs转染后HTR-8/SVneo细胞中MCL1 mRNA水平表达量的变化。应用Western Blot方法检测转染后HTR-8/SVneo细胞中Mcl1蛋白水平表达量的变化。
  3.应用AnnexinⅤ/PI对转染后的HTR-8/SVneo细胞进行双染,应用流式细胞仪检测HTR-8/SVneo细胞凋亡率。
  4.对切除的子宫和胎盘组织进行组织病理切片,免疫组化染色病理组织切片定位Mcl1表达细胞类型,结合H&E染色观察细胞形态、数量。
  结果:
  1.转染HTR-8/SVneo细胞后,miR-125a和miR-29a/b/c模拟物转染组中MCL1 mRNA表达水平较阴性对照组明显下降,表达倍数为0.60,0.42,0.58,0.43(p=0.0497,0.002,0.008,0.013);模拟物转染组中MCL1的蛋白表达水平也明显降低。
  2.MiR-125a和miR-29a/b/c模拟物转染后,HTR-8/SVneo细胞凋亡率较阴性对照组呈现增长趋势。
  3.H&E染色和免疫组化染色病理切片均观察到种植部位中间型滋养细胞(ISIT)数量在植入部分基板子宫肌层纤维间隙明显增多,免疫组化染色显示MCL1主要在ISIT中表达。显微镜下发现,相比于非植入部分,植入部分中间型滋养细胞细胞迁移至深部肌层内血管壁内现象更常见。
  结论:
  MiR-125a或miR-29a/b/c的过表达可显著降低MCL1基因mRNA和蛋白的表达并促进HTR-8/SVneo细胞的凋亡。植入部分基板子宫肌层纤维间隙中主要表达MCL1的ISIT数量明显增多。以上结果提示植入胎盘组织中miR-125a和miR-29a/b/c对靶基因MCL1异常调控导致植入部分基板子宫肌层纤维间隙中ISIT数量明显增多进而参与胎盘植入的发生。
[硕士论文] 朱新全
生殖医学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:异位妊娠作为一种育龄女性常见的妇科急腹症,指的是受精卵在宫腔以外的部位着床,其发病率大概为1.5%-2.0%。且全球发病率逐年增加,严重威胁女性的生育甚至生命健康。其诊断主要依靠手术病理结果及超声检查,血HCG值对于异位妊娠的诊疗具有一定价值,但是不适用早期患者,诊断率较低,血清联合检测技术开始成为关注的热点,并尝试用于诊断早期异位妊娠。
  研究目的:
  探讨异位妊娠患者血清孕酮及雌二醇水平在诊疗及判断预后中的应用。为异位妊娠药物保守诊疗及临床预后评估提供参考依据。
  研究方法:
  选取2014年8月~2016年8月期间在我院生殖医学科接收的符合药物保守治疗的异位妊娠患者150例为观察组,选取同时期在我院进行产检的正常妊娠者150例作为对照组。进行回顾性分析,入院后行常规专科检查,并在入院就诊时以及入院后48小时测定血清P、E2、β-HCG表达水平;针对成功流产及流产失败异位妊娠患者在妊娠7周时采集外周静脉血进行血清P、E2、β-HCG测定。并予以异位妊娠患者临床治疗,比较入院时及入院后48h血清P、E2及β-hCG水平变化情况,观察异位妊娠组继续妊娠和流产患者血清P及E2变化。数据的处理采用统计学软件SPSS19.00。
  研究结果:
  1.异位妊娠组患者伴有盆腔炎史、下腹部手术史、以及异位妊娠史和流产史比正常妊娠组女性明显升高,差异有统计学意义。
  2.当患者血清P=5.96ng/ml时,ROC曲线下面积=0.869,此时用于异位妊娠诊断敏感度为79.33%,特异度为83.26%;当血清E2=603.56pmol/L时,ROC曲线下面积=0.871,此时血清E2检测用于异位妊娠诊断灵敏度为83.33%,特异度为86.00%;两者联合检测诊断有异位妊娠时,曲线下面积为0.925,此时灵敏度高达92.67%,特异度为78.67%。
  3.两组入院时、入院48小时血P、E2、β-HCG表达水平比较,异位妊娠组上述指标表达量均明显低于正常妊娠女性,组间差异显著(P<0.05);正常妊娠者在入院48小时β-hCG水平呈现显著上升趋势,和入院时比较存在统计学差异(P<0.05);而异位妊娠组入院48小时与入院时组内血清孕酮及雌二醇含量无统计学差异(P>0.05)。
  4.分析异位妊娠患者治疗前初始血清孕酮水平和临床疗效相关性发现:当患者入院时血清P<10pmol/L时,具有较高的临床总有效率(84.27%),明显较P水平处于10~15ng/L组和P>15ng/L组高(55.17%、40.63%)。P<10ng/L与P在10~15ng/L组临床总有效率经统计学分析x2=10.495,P=0.0012.604,P<0.05,组间统计差异显著;P在10~15ng/L组和P>15ng/L组比较,统计学分析,x2=1.291,P=0.256,组间未见统计学差异。异位妊娠组患者治疗结果,其中104例患者成功流产,剩余46例治疗失败。比较成功流产和治疗失败两组患者血清P、E2水平发现,治疗失败组[(7.09±4.56)ng/ml、(825.80±148.96)pmol/L]P和E2含量明显高于成功流产组[(3.41±1.27)ng/ml、(682.23±152.44)pmol/L]患者,组间统计t=7.617,5.356,均P<0.05,具有统计学差异。
  研究结论:
  1.血清P、E2表达水平有助于正常妊娠和异位妊娠鉴别诊断,其可作为异位妊娠患者临床诊断辅助观察指标。
  2.血清孕酮表达量有助于异位妊娠患者临床疗效进行预估。
[博士论文] 庄丽丽
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景:自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)是一种由T细胞介导的较常见的自身免疫性疾病,该疾病均伴有甲状腺自身抗体的产生和甲状腺内淋巴细胞浸润。其中最常见的甲状腺自身抗体包括甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab),统称为抗甲状腺自身抗体(anti-thyroid autoantibodies,ATA),其中任何一种抗体阳性,都可以被诊断为AITD。在正常育龄期妇女中AITD的患病率大约为5%~20%,而在患有不孕不育的妇女中AITD的患病率则显著高于生育力正常的妇女。大量的临床研究发现患有AITD的妇女常常伴有月经异常、排卵障碍、复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)、胚胎停止发育、早产和胎儿发育异常等妊娠不良结局。大多数学者的报道指出会导致胚胎着床失败,对IVF-ET妊娠结局产生不利影响,导致流产率增加,更有研究显示ATA是导致IVF-ET不能妊娠的独立的因素。但Muller等的研究却发现TPO-Ab并不导致IVF-ET患者流产率增加。关于AITD是否对IVF-ET妊娠结局产生不良影响以及它产生影响的具体机制目前尚存在争议。人类卵巢经常作为器官特异性或非特异性自身免疫性疾病的靶器官,那么ATA是否也通过作用到卵巢进而影响到卵巢功能?目前尚无定论。一些研究发现ATA与卵巢功能减退存在关联,又有一些研究提示促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)可能较ATA更能影响卵巢功能,但是仍缺乏强有力的证据。Monteleone等研究发现ATA可以通过“血-卵泡”屏障,在卵泡液中表达,且ATA阳性患者卵子受精率、优质胚胎率和妊娠率均显著低于ATA阴性患者,因此推测ATA在卵泡液中通过免疫反应对卵泡的发育产生损伤,从而使卵子的质量和发育潜力下降。控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)是IVF-ET治疗过程中的重要部分,COH后会使多个卵泡同步发育导致机体产生高水平的雌激素,升高的雌激素是否对甲状腺功能产生不良影响,目前也存在争议,有学者指出高水平的雌激素将导致肝脏产生较多的甲状腺素结合球蛋白(thyroid binding globulin,TBG),使血液中游离状态的甲状腺素水平降低,从而通过负反馈机制使垂体产生更多的TSH,即使COH之前甲状腺功能是正常的,在COH后也可能会出现一过性甲状腺功能减退。但也有些研究发现COH并未对甲状腺功能产生明显的影响。追其原因考虑可能与患者入组标准、COH方案、检测时间等等存在差异有关,那么AITD对甲状腺功能正常的不孕患者IVF-ET妊娠结局是否有不良影响及其影响具体机制仍有待于继续深入研究。
  研究目的:首先进行回顾性资料分析,探查AITD对甲状腺功能正常伴不孕患者IVF-ET妊娠结局的影响;又对AITD患者AMH水平及卵泡液中ATA水平进行检测,以观察ATA及TSH对AMH及IVF-ET临床指标的影响;然后从三个时间点(进入周期前、HCG日及胚胎移植术后14天)动态观察COH对甲状腺激素及ATA的影响,并观察AITD患者与正常对照组患者间是否存在差异;最后对全胚冷冻后融胚移植的AITD患者与新鲜周期移植的AITD患者进行临床资料及妊娠结局比较。以此来探讨AITD对甲状腺功能正常的不孕患者IVF-ET妊娠结局的影响以及其可能的影响机制。
  研究方法:首先对2011年3月至2013年10月在本中心进行第一周期标准长方案的1129例IVF-ET患者进行回顾性研究,入组标准:①双侧卵巢均存在。②月经第三天基础FSH<10IU/L,E2<80pg/ml,垂体泌乳素(PRL)在正常范围内(6.0ng/ml~29.9ng/ml)。③子宫形态正常,无子宫畸形、无子宫腔粘连。④基础TSH在正常范围内(0.27mlU/L~4.2mlU/L)。⑤既往无甲状腺疾病史及用药史。⑧不孕原因为盆腔输卵管因素。严格选取符合入组条件的病人,对其IVF-ET临床资料进行统计分析。然后又对2014年10月至2016年6月在我中心进行第一个周期标准长方案的350例患者进行研究,其中AITD患者140例,正常对照组患者210例。入组标准同前,同时排除影响卵巢功能的各种因素,按是否伴有ATA分成两组。每组患者入周期前留取外周血,取卵日留取患者卵泡液,标本离心后-80℃保存,进行AMH及ATA的检测,同时对IVF-ET过程中的相关数据进行比较,包括Gn时间、Gn用量、获卵数、受精率、优质胚胎率、妊娠率、流产率及早产率等等。最后共有94例ATA阳性患者及110例ATA阴性患者完成了胚胎移植并在三个时间点留取外周血,离心血清后-80℃保存,进行甲状腺激素及ATA的检测,最终又对全胚冷冻后融胚移植的AITD患者与新鲜周期移植AITD患者进行妊娠结局的比对分析。
  研究结果:①回顾性临床资料研究发现,ATA并未明显改变IVF-ET的妊娠率,但是ATA阳性同时伴TSH>2.5mIU/L的妇女行IVF-ET治疗后早期流产率明显增加(p=0.03),同时还发现不管是否伴有ATA,TSH>2.5mIU/L组患者优质胚胎率明显降低,差异具有统计学意义。②不论伴有何种ATA,ATA阳性组患者AMH水平较ATA阴性组均无明显差异,而TSH>2.5mIU/L患者AMH水平明显低于TSH≤2.5mIU/L组(p=0.004)。③卵泡液中ATA浓度与血液中的浓度呈正比,且大约为血液浓度的2/3,AITD患者Gn用药时间、Gn用药量及早产率均明显增高(p<0.05)。同样也发现不论是否伴有ATA,TSH≤2.5mIU/L组患者优质胚胎率明显高于TSH>2.5mIU/L组(p<0.05),且AITD伴TSH>2.5mIU/L的患者早产率最高(p=0.04)。④COH后所有患者的TSH呈升高趋势,且在移植后14天增高明显,AITD患者较ATA阴性组TSH升高更显著(p<0.05);AITD伴TSH≤2.5mIU/L的患者经过COH后有40%的患者TSH水平会超过2.5mIU/L,而在ATA阴性组中这一比率仅为28.33%(p>0.05);AITD妊娠患者较未妊娠者在移植后14天TSH升高更明显(p<0.05),ATA阴性的妊娠患者则无这一明显变化;COH后fT4浓度及ATA浓度均略呈下降趋势,但无统计学差异。⑤全胚冷冻后融胚移植的AITD患者较新鲜周期移植患者妊娠率明显增高(p=0.003),且早产率呈下降趋势但未达统计学差异(p>0.05)。
  研究结论:TSH>2.5mIU/L的甲状腺功能正常的AITD患者进行IVF-ET后可能会导致优质胚胎率降低、流产率及早产率增加。即使甲状腺功能在正常范围内,较高水平的TSH已经对卵巢功能产生不良影响,导致其AMH水平下降。ATA并未明显改变正常育龄期妇女的AMH水平,但会通过在卵泡液中表达导致Gn时间、Gn用量及早产率增加。甲状腺功能在正常范围的患者COH后其TSH水平均会逐渐上升,在移植后14天升高最明显,尤其是AITD患者其TSH升高幅度更大,另外发现AITD妊娠患者较未妊娠者TSH升高更明显。对于AITD患者进行全胚冷冻后融胚移植可提高妊娠率降低早产率。因此推测ATA及TSH可能通过不同途径、不同方面对IVF-ET结局产生不良影响,而COH过程又会对甲状腺功能产生复杂的影响,全胚冷冻后融胚移植可避免COH对甲状腺功能的影响从而使妊娠率增高、流产率降低,这其中的具体机制仍有待进一步深入研究。建议在IVF-ET助孕前应常规检查甲状腺功能,对于AITD患者助孕前应将TSH值控制在2.5mIU/L以下,在移植后14天应复查TSH水平(尤其是AITD妊娠的患者),以便及时发现问题并尽早给予药物干预治疗,或者建议AITD患者进行全胚冷冻后融胚移植,以改善IVF-ET妊娠结局,降低早产率。
[硕士论文] 朱晓霞
公共卫生 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  在分析妊娠期糖尿病患者日常饮食特点、习惯的基础上,制定合理、科学的营养膳食标准,观察个体化营养膳食指导对妊娠期糖尿病孕妇的血糖控制及妊娠结局的影响。
  方法:
  1、回顾性分析本院2014年5月~2016年2月收治的妊娠期糖尿病孕妇108例,设置为GDM组,另抽取本院同期门诊检查的健康孕妇50例作为健康对照组,通过食物频率法和24小时膳食调查法,了解孕妇饮食习惯与营养摄入结构等情况,探讨影响孕妇妊娠周期内并发妊娠期糖尿病的相关因素。
  2、将108例妊娠期糖尿病孕妇随机分成两组,其中干预组54例,给予专业全面的营养膳食指导,结合患者饮食情况制定针对性膳食摄入方案,加强营养控制管理,直至完成分娩,对照组54例,未开展营养膳食指导,仅做常规性妊娠期糖尿病护理,对比观察两组患者血糖指标变化、胰岛素水平、孕妇体重改善情况,以及分娩方式、新生儿结局、并发症等情况。
  结果:
  1、孕妇的饮食及营养素摄入情况:
  1)饮食习惯:GDM组日常饮食中食用油每天超过25g。GDM组饮料、精糖类食物、夜宵等摄入率显著高于健康对照组,两组饭后运动、油腻食物摄入无显著性差异。
  2)膳食结构:GDM组谷薯类、蔬菜、蛋类、鱼虾、奶类的摄入量相对推荐摄入量明显不足,而畜禽、大豆及坚果摄入量比推荐摄入量要高。水果基本满足推荐摄入量。GDM组坚果、畜肉类、薯类、蛋、水果等食物的摄入量显著高于健康对照组;GDM组孕妇深海鱼类、禽肉、粗杂粮、豆浆等食物的摄入量显著低于健康对照组。
  3)三大热能营养素摄入方面:GDM组膳食总能量、蛋白质以及脂肪的摄入量均显著高于健康对照组;碳水化合物供能比低于健康对照组。
  4)三大营养素食物来源分析:
  碳水化合物:GDM组孕妇从水果、薯类食物摄入的碳水化合物量显著多于健康对照组;GDM组孕妇从粗杂粮中摄入的碳水化合物量显著低于健康对照组。
  脂肪:GDM组孕妇从畜肉类摄入的脂肪总量显著高于健康对照组,而从鱼类摄入的脂肪总量显著低于健康对照组。
  蛋白质:GDM组孕妇从畜肉类摄入的蛋白质显著高于健康对照组,同时从深海鱼类、禽肉类、大豆类食物中摄取的蛋白质量显著低于健康对照组。
  2、营养膳食指导对于妊娠期糖尿病患者的临床效果:
  1)血糖:GDM干预组营养膳食指导1周、6周、12周、以及分娩前期自身空腹血糖,餐后1h、2h血糖控制效果显著。
  2)血脂水平:GDM干预组营养膳食指导6周后血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等血脂水平改善幅度显著优于对照组,差异有统计学意义。
  3)胰岛素指标:GDM干预组营养膳食指导6周后血清空腹胰岛素,餐后1h、2h、3h胰岛素水平均显著低于对照组,差异有统计学意义;干预组妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗指数IRI与胰岛素分泌指数IFI改善幅度显著优于对照组,差异有统计学意义。
  4)自身体重及新生儿出生体重:GDM干预组营养膳食指导后,孕期体重增加幅度显著优于对照组;干预组新生儿出生体重符合健康标准体重的比例显著优于对照组。
  5)妊娠结局:GDM干预组营养膳食指导后,巨大儿、剖宫产率均显著低于对照组,差异有统计学意义。
  结论:
  1、妊娠期糖尿病孕妇个人饮食习惯、膳食结构以及三大热能营养素摄入方面均存在不合理性。对此孕妇在怀孕期间应调整不合理的饮食结构,预防妊娠期糖尿病的发生。
  2、孕期内对妊娠期糖尿病孕妇开展营养膳食指导干预之后,孕妇血糖水平、血清胰岛素抵抗改善效果显著;妊娠期糖尿病孕妇血糖的合理控制有利于胎儿生长发育,减少后期胎儿发育过大现象的发生,避免产妇剖宫产,改善妊娠结局。
[博士论文] 冯浩
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:子痫前期(Preeclampsia,PE)是妊娠期特有的临床综合征,以妊娠20周后出现新发高血压和蛋白尿为主要特点,其发病率约为2-9.4%。PE是发展中国家产妇死亡和发病的主要原因之一,但是PE发生发展的病理机制尚不清楚。目前,PE发展进程可分为以下两个阶段:第一阶段是胚胎滋养层入侵到母体子宫肌层,导致子宫螺旋动脉重塑不足,从而使胎盘陷入缺血和缺氧环境,引发胎盘释放多种促炎细胞因子和血管生成因子等,引起母体全身炎症。第二阶段,全身炎症反应所导致的母体血管系统的内皮功能障碍与肾功能下降引起的血压升高为此阶段的主要特征,最终引起以母体高血压和蛋白尿为主要表现的临床综合征。缓解母体症状的唯一有效途径是胎盘和胎儿的娩出。既往研究表明,PE患者的胎盘氧化应激反应失衡,并且胎盘局部氧化应激过度,可诱发滋养细胞生物学功能损伤,导致滋养细胞凋亡增加和侵袭能力下降,引起母亲系统性血管内皮功能失调和白细胞激活;而Keap1/Nrf2信号通路则在PE的氧化应激损伤中发挥保护作用,但是其作用机制尚不清楚。因此,深入探讨PE的氧化应激发生机制,寻求有效的治疗靶点,对缓解PE患者症状、延长胎儿在母体时间、降低PE患者死亡率具有重要临床意义。
  氧化应激(Oxidative Stress,OS)是机体的应激反应,即体内的活性氧族(Reactive Oxygen Species,ROS)及活性氮族(Reactive Nitrogen Species,RNS)产生过多,清除过少,最终导致氧化/抗氧化体系失衡,倾向于氧化,引起组织损伤。与非妊娠状态相比,正常妊娠期间母体活性氧生成量增加。随着胎盘成熟,血管形成,胎盘被变成富氧环境,活性氧的增加刺激妊娠期间抗氧化系统的增强。增强的抗氧化系统有效补偿了OS的氧化作用。与正常妊娠相比,PE患者OS表达增加和抗氧化系统的表达增强,其特征在于活性氧(ROS)在循环和组织中表达增加。
  既往研究结果显示Keap1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1)/Nrf2(nuclear factor-E2-related factor2)信号通路在抗氧化、抗炎方面扮演了重要的角色。正常状态下,细胞质中的Nrf2与其负调控因子Keap1结合形成Keap1/Nrf2复合物,大部分Nrf2被Keap1介导的泛素化降解,因此其处于活性相对抑制状态;而应激的状态会引起Keap1构象的改变,或者由高度活性的氧化物直接促使Nrf2磷酸化,导致Nrf2与Keap1解离而活化,活化的Nrf2进入细胞核,形成下一步连锁反应,从而与抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)的结构相结合,激活下游的多种抗氧化基因。因此Keap1/Nrf2信号调节通路在PE的发病过程中有着重要的作用,研究该机制具有重要临床意义。
  目的:
  1.明确不同分组氧化应激水平的变化及Nrf2对于氧化应激水平的抑制作用。通过检测不同分组HTR8/SVneo细胞内CAT、GSH-Px、SOD酶活性,进一步明确Nrf2对于氧化应激相关活性酶作用的机制。
  2.在前期实验工作基础上,进一步从细胞水平-临床水平,采用蛋白印迹杂交、qRT-PCR、siRNA、ELISA等相关技术手段的,明确Keap1/Nrf2通路对PE细胞模型中滋养细胞HTR8/SVneo生物学功能以及PE患者氧化应激水平的影响。
  方法:
  对于人早孕期绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo进行细胞培养、复苏、传代。通过活性氧及氧化应激相关酶CAT、GSH-Px及SOD酶活性的测定,以明确不同分组HTR8/Svneo及胎盘组织氧化应激水平;并通过检测血浆MMPs预测子痫前期的发病风险。应用RNAi方法设计siRNA-Nrf2,对靶基因进行基因沉默实验,以明确靶基因的功能;应用qRT-PCR方法确认Keap1/Nrf2通路与氧化应激相关分子的转录水平的差异,Western blot方法确认Keap1/Nrf2通路与氧化应激相关分子蛋白的表达差异。采用SPSS21.0统计软件,计量资料以均数土标准差(Means±SD)表示,两组间均数的比较采用t检验,多组间的比较用单因素方差分析(one-way ANOVA),P<0.05、P<0.01或P<0.001均为有统计学意义。
  结果:
  1.qRT-PCR检测转染慢病毒后Nrf2mRNA表达结果示:Si-Nrf2组较Si-NC组Nrf2mRNA的表达量明显减低(P<0.001);蛋白免疫印迹法检测Nrf2蛋白的表达量,结果显示:Si-Nrf2组较Si-NC组明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.001)。
  2.HTR8/SVneo细胞H/R组ROS水平与Non-treated组相比明显升高(p<0.01);对Nrf2进行基因沉默后,Nrf2siRNA+H/R组ROS水平与H/R组相比明显增高(p<0.01)。
  3.HTR8/SVneo细胞在缺氧/复氧条件下,氧化应激相关酶(CAT、GSH-Px、SOD)活性显著低于处理前,这体现在H/R组氧化应激酶水平较正常对照组明显降低(P<0.01)。SiRNA+H/R组HTR8/SVneo细胞内CAT、GSH-Px、SOD活性下降显著(P<0.01)。
  4.缺氧复氧后HTR8/SVneo细胞Keap1mRNA表达轻度低于正常对照(P<0.05);HTR8/SVneo细胞缺氧复氧后Nrf2mRNA表达明显高于正常对照组(P<0.001);HTR8/SVneo细胞缺氧复氧后HO-1mRNA表达水平明显高于正常细胞(P<0.001)。
  5.HTR8/SVneo细胞缺氧复氧后Keap1蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05);而缺氧复氧后HTR8/SVneo细胞Nrf2蛋白表达水平明显高于正常细胞(P<0.001);HO-1蛋白表达水平在缺氧复氧后也明显高于正常细胞(P<0.001)。
  6.正常孕妇和重度子痫前期患者的孕周、收缩压、舒张压以及新生儿体重均存在统计学差异。
  7.孕中期PE患者的MMP-2水平高于正常参与者,但没有统计学意义(P>0.05)。另一方面,PE患者MMP-9血浆水平略低于正常怀孕组,差异有统计学意义(P<0.05)。比较MMP-2/MMP-9比率,发现PE组的比率明显高于正常妊娠组,差异有显著统计学意义(P<0.001)。
  MMP-2用于预测PE的ROC曲线下面积仅为0.563,95%置信区间(CI)为0.497-0.629(P>0.05)。而MMP-9的预测PE的ROC曲线下面积为0.587,95%CI为0.522-0.652,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线下使用MMP-2/MMP-9比率预测PE的曲线下面积为0.841,95%CI为0.797-0.886(P<0.001)。
  8.重度子痫前期患者胎盘组织CAT(P<0.001)、GSH-Px(P<0.01)、SOD(P<0.01)酶活性均低于正常胎盘组织。
  9.重度子痫前期患者胎盘组织Keap1mRNA表达水平稍低于与正常胎盘组织(P<0.05);重度子痫前期患者胎盘组织Nrf2mRNA表达水平明显高于与正常胎盘组织(P<0.001);重度子痫前期患者胎盘组织HO-1mRNA表达水平明显高于与正常胎盘组织(P<0.001)。
  10.重度子痫前期患者胎盘组织Keap1蛋白表达水平稍低于与正常胎盘组织(P<0.05);重度子痫前期患者胎盘组织Nrf2蛋白表达水平明显高于与正常胎盘组织(P<0.01);重度子痫前期患者胎盘组织HO-1蛋白表达水平明显高于与正常胎盘组织(P<0.01)。
  结论:
  本研究通过检测不同类型HTR8/SVneo细胞内活性氧、CAT、GSH-Px、SOD酶活性,进一步明确氧化应激时活性氧水平上升、其相关酶活性下降及Nrf2对于氧化应激相关活性酶作用的机制;在mRNA及蛋白水平,Keap1/Nrf2信号通路在缺氧复氧状态下表达水平明显改变,提示可通过调节Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激的水平。孕中期患者血浆MMPs水平对子痫前期有重要的预测意义。不同样本的氧化应激相关活性酶因临床状态不同而有明显差异;重度子痫前期患者胎盘组织Nrf2,HO-1mRNA及蛋白表达水平明显高于与正常胎盘组织,而Keap1低于正常,提示Keap1/Nrf2信号通路在重度子痫前期患者表达水平发生明显变化,所以调节Keap1/Nrf2信号通路可减缓子痫前期的发病。
[硕士论文] 陈小伟
临床检验诊断学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:回顾本地区健康孕妇在孕24~28周进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的血糖结果,分析其与妊娠分娩结局关系。
  方法:选取2014年1月至2015年10月期间在南京市六合区人民医院产检并分娩的孕妇,排除孕前糖尿病病史者、合并心肝肾等内科疾病者以及双(多)胎妊娠,共选取3098例符合标准的孕妇。应用实验室信息管理系统(LIS)导出其在孕24~28周时检测OGTT3个时间点的血糖值:空腹、服糖后1小时和服糖后2小时(FPG、1hPG和2hPG)。根据妊娠分娩结局分为结局正常组2227例和不良分娩组871例,比较其OGTT3个时间点血糖值;按孕妇有无妊娠期糖尿病分为:妊娠期糖尿病(GDM,384例)组和对照(非GDM,2714例)组,进行OGTT血糖和妊娠分娩并发症的比较;根据孕妇年龄分为3组:18~29岁年龄组(A组,2656例)、30~34岁年龄组(B组,327例)和35~45岁年龄组(C组,115例),进行OGTT血糖和妊娠分娩并发症的比较。采用Logistic回归分析3个年龄组及所有孕妇OGTT3个时间点血糖值,分别得到一个预测概率绘制ROC曲线,以判断OGTT所测得的血糖对分娩结局的诊断效率。
  结果:(1)3098例孕妇所测OGTT的空腹、服糖后1小时和2小时的血糖值均经正态性检验(W检验)为非正态分布,各组数据描述用中位数M(P25,P75)表示。不良分娩结局组孕妇的OGTT3个时间点的血糖值(mmol/L)分别为:4.58(4.33,4.87)、7.48(6.36,8.95)和6.41(5.69,7.42),均高于分娩结局正常组:4.47(4.25,4.73)、7.05(5.93,8.12)和6.15(5.41,6.91),两组间不同时间点血糖值比较采用Mann-Whitney U检验,Z值分别为-7.471,-7.801和-7.045,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(2)GDM组孕妇的OGTT3个时间点的血糖值(mmol/L)分别为:5.10(4.69,5.31)、9.76(8.14,10.40)和7.73(6.56,8.78),均高于对照组:4.46(4.25,4.70)、6.96(5.89,7.97)和6.10(5.41,6.81),采用Mann-Whitney U检验,Z值分别为-21.057、-22.721和-19.207,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(3)GDM组孕妇妊娠期高血压疾病、胎膜早破、早产、胎儿窘迫、产后出血、巨大儿发生率及剖宫产率分别为:7.0%(27/384)、13.3%(51/384)、3.1%(12/384)、4.7%(18/384)、10.4%(40/384)、29.9%(115/384)和50.0%(192/384),均高于对照组:0.8%(21/2714)、7.8%(211/2714)、1.0%(27/2714)、1.2%(33/2714)、7.4%(200/2714)、8.9%(242/2714)和32.6(884/2714),采用卡方检验比较各组发生率,x2值分别为:86.354、13.177、9.265、25.040、4.371、145.940和45.075,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(4)A组孕妇OGTT3个时间点血糖值(mmol/L)分别为:4.54(4.29,4.78)、7.32(6.16,8.11)和6.28(5.6,6.84),B组孕妇OGTT3个时间点血糖值(mmol/L)分别为:4.73(4.49,4.91)、7.85(7.38,8.57)和6.78(6.35,7.20),C组孕妇OGTT3个时间点血糖值(mmol/L)分别为:4.83(4.67,4.99)、8.53(7.82,8.97)和7.34(6.66,7.87),3个年龄组孕妇不同时间点OGTT血糖值为:C组>B组>A组,差异均有统计学意义(采用Mann-Whtney U检验,P值均<0.05)。(5)A组、B组和C组3个年龄组孕妇GDM发生率分别为:10.3%(273/2656)、22.6%(74/327)和32.2%(37/115),GDM发生率为C组>B组>A组,差异均有统计学意义(卡方检验,P值均<0.05)。A组孕妇妊娠期高血压疾病、胎膜早破、早产、胎儿窘迫、产后出血、巨大儿发生率及剖宫产率分别为:1.1%(30/2656)、8.3%(220/2656)、0.9%(26/2656)、1.2%(33/2656)、7.8%(206/2656)、10.6%(282/2656)和31.6%(838/2656),B组孕妇妊娠期高血压疾病、胎膜早破、早产、胎儿窘迫、产后出血、巨大儿发生率及剖宫产率分别为:2.8%(9/327)、6.7%(22/327)、2.8%(9/327)、6.7%(22/327)、7.0%(23/327)、14.5%(48/327)和50.5%(165/327),C组孕妇妊娠期高血压疾病、胎膜早破、早产、胎儿窘迫、产后出血、巨大儿发生率及剖宫产率分别为:7.8%(9/115)、17.4%(20/115)、3.5%(4/115)、7.8%(9/115)、9.6%(11/115)、23.5%(27/115)和63.5%(73/115),3个年龄组孕妇的剖宫产、巨大儿和妊娠期高血压疾病发生率为C>B>A,差异均有统计学意义(卡方检验,P值均<0.05);A组与B组孕妇的胎膜早破和胎儿窘迫发生率差异均无统计学意义(卡方检验,P值均>0.05),C组孕妇的胎膜早破和胎儿窘迫发生率均高于A、B组,差异有统计学意义(卡方检验,P值均<0.05);B组与C组孕妇的早产发生率差异无统计学意义(卡方检验,P值>0.05),B组与C组孕妇的早产发生率均高于A组孕妇,差异均有统计学意义(P<0.05);3个年龄组孕妇的产后出血发生率差异无统计学意义(卡方检验,P值均>0.05)。(6)各年龄组(A组、B组和C组)内GDM组与对照组(非GDM)孕妇分娩方式及妊娠分娩并发症比较:A组中GDM组孕妇胎膜早破、妊娠期高血压疾病、巨大儿发生率和剖宫产率均高于对照组,差异均有统计学差异(P值均<0.05),两组孕妇产后出血、早产和胎儿窘迫发生率差异无统计学差异(P值均>0.05);B组中GDM组孕妇妊娠期高血压疾病、早产、胎儿窘迫和巨大儿发生率均高于对照组,差异均有统计学差异(P值均<0.05),两组孕妇产后出血、胎膜早破和剖宫产率差异无统计学差异(P值均>0.05);C组中GDM组孕妇胎膜早破、妊娠期高血压疾病、早产和巨大儿发生率均高于对照组,差异均有统计学差异(P值均<0.05),两组孕妇产后出血、胎儿窘迫和剖宫产率差异无统计学差异(P值均>0.05)。(7)采用Logistic回归分析3个年龄组(A组、B组和C组)和所有孕妇OGTT3个时间点血糖值得到预测概率,以此绘制出妊娠结局的ROC工作曲线,曲线下面积(AUC)分别为0.592、0.665、0.865和0.611。
  结论:(1)妊娠期糖尿病高血糖水平与妊娠期多种并发症关系密切,不良分娩结局也随之增加,对孕期糖耐量异常者应积极干预以降低母婴并发症的发生,改善妊娠结局。(2)GDM的发生率随孕妇年龄增加而增加,剖宫产、巨大儿和妊娠期高血压疾病等并发症发生率也随孕妇年龄增加而增加,胎膜早破、胎儿窘迫和早产等并发症的发生率在高龄孕妇中表现得更为明显,因此要加强高龄产妇的产前检查和产时监护,减少并发症发生。(3)孕中期孕妇所做的口服葡萄糖耐量试验简单易行,且OGTT血糖值对妊娠分娩结局有一定的预示作用,建议所有孕妇都能按照要求进行OGTT筛查。
[博士论文] 刘群英
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 IL-10基因的多态性与早发型子痫前期发病风险相关性研究
  目的:研究IL-10基因多态性(-592A/C、-819T/C、-1082A/G)与早发型子痫前期发病的关系.
  方法:行病例对照研究。选择177例早发型子痫前期患者和182例正常妊娠对照组孕妇,留取其外周静脉血2ml,行EDTA抗凝,使用外周血基因组提取试剂盒(德国Qiagen)获得所有研究对象基因组DNA,检验DNA浓度及纯度合格,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法(PCR-RFLP)检验-592A/C(rs1800872)、-819T/C (rs1800871)、IL-10-1082A/G(rs1800896)的多态性,设计IL-10的SNP位点正反向引物如下:IL-10-1082A/G F: 5 '-TGATTGTATCTCGTCCAGATCC-3';-1082A/G R: 5'-TCCGGCAAGTGCCTAAGTGA-3'。IL-10-819T/C F: 5 '-TGATTGTATGTGCTCCAGATCC-3' ;-819T/C R: 5'-TGGGCCAAGTGCCTAAGAGT-3' ;IL-10-592A/C F: 5'-GGTCAGCAGTACCTGAGTAGC-3';-592A/C R: 5-GGTAGGACTCTGTGACGTCC-3'。以PCR扩增目标条带,DNA的产物先在3.5%琼脂糖凝胶电泳,然后用溴化乙啶(EB)染色,用凝胶成像仪观察结果。
  结果:卡方检验结果显示IL-10的-1082A/G,-819T/C以及-592A/C的基因多态性位点在研究组与对照组之间无显著的基因频率变化,其哈迪-温柏格平衡检验(HWE)的P值分别为0.46, 0.17和0.18。最小等位基因频率(Minor allele frequencies,MAF)也同dbSNP数据库的显示结果相同。证实达到了遗传平衡,意味着本次群体调查的数据是可信的。通过非条件Logistic回归分析结果,发现携带IL-10-819T的CC基因型的孕妇相比于TT基因型孕妇有更大的发生早发型子痫前期的风险比例1.71(1.07-3.27),而-1082A/G和-592A/C基因型则无显著相关性。
  结论:在中国东部沿海地区妊娠女性中,IL-10-819T/C多态性可能增加子痫前期的发病风险。
  第二部分 低分子肝素治疗早发型重度子痫前期的研究
  目的:研究低分子肝素治疗早发型重度子痫前期患者的临床疗效以及对血清激活素A与抑制素A的影响。
  方法:以120例同期住院正常妊娠妇女做对照,选取早发型重度子痫前期患者116例,60例用常规治疗方案的患者组成常规治疗组,56例患者在常规治疗同时,加用低分子肝素5000IU皮下注射,即为研究组;比较两组患者的血凝情况、血压变化、尿蛋白量、自觉症状、孕周延长时间、分娩方式、产后出血量、肝肾功能指标、子宫动脉、脐动脉血流阻力、新生儿情况。观察早发型重度子痫前期患者短期治疗后的激活素A、抑制素A的水平变化。
  结果:子痫前期组患者的血压、尿蛋白量、低蛋白血症发生率、子宫动脉、脐动脉血流阻力、新生儿窒息率均较正常妊娠组高。早发型重度子痫前期患者中低分子肝素治疗组较常规治疗组凝血情况有所改善;血压有所降低;尿蛋白量下降;总体自觉症状好转;分娩孕周有所延后;分娩方式无区别;产后出血量无增加;肝肾功能指标无差异;子宫动脉、脐动脉血流阻力下降;新生儿窒息发生率降低。但低分子肝素应用与否,两组子痫前期患者的血清抑制素A、激活素A浓度无显著差别。
  结论:低分子肝素用于短期早发型重度子痫前期的治疗,可提升母儿临床治疗效果,但未影响抑制素A、激活素A的分泌。
[硕士论文] 陈丹丹
妇产科学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的
  未足月胎膜早破(pretern premature rupture of membrane,PPROM)与宫内感染(intrauterine infection,IAI),即绒毛膜羊膜炎(chorioamnionitis,CAM)互为因果。肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factors6,TRAF6)参与调节炎症通路,在宫内感染发病起到重要作用,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(mammalian ste20-1ikekinase4,MST4)可作用于TRAF6,抑制TRAF6的泛素化,从而发挥抑炎作用。本实验通过检测PPROM患者胎盘组织中TRAF6及MST4的表达,探讨两者相互作用及其在PPROM合并宫内感染的发病机制及临床意义,同时分析TARF6及MST4在PPROM组胎盘中的表达与妊娠结局的关系,探讨TRAF6、MST4对母儿妊娠结局的预测性。
  方法
  1.选取2015年5月-2016年5月于苏北人民医院产科住院分娩的孕妇90例,其中未足月胎膜早破60例,正常对照组30例。纳入标准:所有孕妇本次妊娠为单胎头位,均排除高血压、糖尿病、自身免疫性疾病、急慢性炎症疾病、传染病及其他内外科合并症。收集研究对象的基本资料,包括孕周、孕产次、体温、分娩前体温、外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、降钙素原值、产后产妇体温及围产儿合并症如肺炎及病理性黄疸、败血症、围产儿死亡率。
  2.研究对象胎膜组织行苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色,依据HE染色结果分为宫内感染组及非宫内感染组。同时利用免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)及蛋白质印记法(western blot,WB)检测所有胎盘组织中TRAF6及MST4的表达。用Image-pro-plus6.0软件检测阳性细胞数目及光密度值。并将60例PPROM患者按胎盘组织中TRAF6及MST4的表达强度分成四组,分别比较相应的母儿妊娠结局,并利用SPSS23.0软件进行统计学分析。
  结果
  1.胎膜组织病理结果:正常对照组中有3例合并宫内感染,占总例数的10%(3/30),27例未合并宫内感染。PPROM组中有43例合并宫内感染,占总例数的71.66%(43/60),17例未合并宫内感染。
  2.利用单因素方差ANOVA进行三组之间一般资料的分析,其中正常对照组30例,PPROM未合并宫内感染组17例,PPROM合并宫内感染组43例。三组研究对象的年龄、孕次、产次、BMI、体温、母体外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、降钙素原值、Apgar评分均无统计学差异。PPROM组的孕周均小于正常对照组(F=46.41,P<0.05),相应的PPROM组的新生儿体重低于足月儿体重(F=31.73,P<0.05)。但PPROM合并宫内感染与PPROM未合并宫内感染中孕周及新生儿体重无统计学差异。
  3.期待时间与宫内感染的关系分析:60例PPROM中的破膜至新生儿出生的时间间隔,在宫内感染组中小于12小时的有11例,12-24小时有10例,超过24小时的有22例。无宫内感染组中小于12小时有7例,12-24小时有5例,超过24小时有5例。两组的破膜时长无统计学差异(x2=2.45,P=0.29)。
  4.免疫组化结果:
  (1) TRAF6的表达主要定位于滋养层细胞核中,其中43例胎膜早破合并宫内感染组中,TRAF6阳性表达有42例(97.67%),其中21例为强阳性表达(48.84%),12例为中度阳性表达(27.91%),9例为弱阳性表达(20.93%);在17例PPROM为合并宫内感染组中,TRAF6阳性表达的有7例(41.18%),其中1例为中度阳性表达(5.88%),6例为弱阳性表达的(35.29%);30例正常对照组中,TRAF6阳性表达有12例(40.00%),其中2例为中度阳性表达(6.67%)、10例为弱阳性表达(33.33%)。PPROM合并宫内感染组胎盘TRAF6的表达明显强于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(x2=47.84,p<0.05;x2=32.87,P<0.05),PPROM未合并宫内感染与正常对照组无统计学异常(x2=0.29,P=0.58)。
  (2) MST4在正常胎盘组织中细胞核及细胞质均有表达。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组MOD值分别为0.03336±0.011,0.03393±0.012,0.05630±0.012。MST4在PPROM合并宫内感染的胎盘组织中表达显著高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=42.69,P<0.05)。
  (3)利用Spearman等级相关资料分析不同胎盘组织中TRAF6及MST4表达的相关性。结果显示在胎盘组织中TRAF6的表达与MST4的表达存在正相关性(rs=0.69,P<0.05),即TRAF6表达越强,MST4表达越强。
  5.Western blot结果:
  利用western blot蛋白印迹法检测正常对照组、PPROM未合并宫内感染组及PPROM合并宫内感染组中TRAF6及MST4的表达。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组中TRAF6的相对灰度表达水平为2.02±0.25,1.94±0.18,3.34±0.34,PPROM合并宫内感染组中的TRAF6相对灰度表达水平明显高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=256.01,P<0.05)。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组中MST4的相对灰度表达水平为0.29±0.04,0.27±0.03,1.55±0.25,PPROM合并宫内感染组中的MST4相对灰度表达水平明显高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=568.53,P<0.05),正常对照组与PPROM未合并宫内感染组无明显差异。
  6.TRAF6及MST4与妊娠结局的关系
  TRAF6与MST4的表达程度与破膜孕周、产妇产后发热、新生儿败血症及围产期死亡率无关(P>0.05),而与新生儿入NICU率、新生儿肺部感染及病理性黄疸发生率存在相关性(P<0.05)。
  结论
  1.TRAF6与MST4参与了PPROM合并宫内感染的发生,但具体作用机制尚未明确。
  2.TRAF6及MST4升高预示着新生儿出现肺部感染、病理性黄疸的可能性更高。
[硕士论文] 孔艳
妇产科学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过检测妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者以及正常妊娠妇女血清以及胎盘组织中不同成熟状态的树突细胞(CD83、CD1a)表达的数量以及IL-17和IL-35的表达水平的变化,分析其相关性及与疾病严重程度的相关性,探讨妊娠期肝内胆汁淤积症的免疫发病机制,有助于临床诊疗工作的进展。
  方法:
  采用病例对照研究方法,选取2015年1月至2016年7月在苏北人民医院及扬州市妇幼保健院产科分娩的正常妊娠孕妇30例为对照组,以及30例轻度ICP组和25例重度ICP组,均以剖宫产方式终止妊娠,三组在年龄、民族、孕产次等方面均无统计学差异,并排除其他内外科合并症,ICP的诊断标准依据中华医学会发表的《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南(2015)》。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化SP法分别检测血清和胎盘组织中CD83、CD1a、 IL-17以及IL-35的表达,采用SPSS17.0对结果进行统计学分析,P<0.05为有统计学差异。
  结果:
  (1)通过酶联免疫吸附试验的结果发现,CD83+DCs、CD1a+DCs在正常对照组、轻度ICP组及重度ICP组孕妇血清中的表达无显著性差异(P>0.05)。
  (2)ICP患者血清中的IL-17的表达水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),重度ICP组血清中IL-17的水平显著高于轻度ICP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ICP患者血清中的IL-35的表达水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),重度ICP患者血清中IL-35的水平显著低于轻度ICP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  (3)IL-17、IL-35在正常对照组、轻度ICP组及重度ICP组孕妇血清中的表达存在负相关性(P<0.05),而其与其他因子之间无相关性(P>0.05)。
  (4)CD83+DCs主要分布于蜕膜组织中靠近腺体上皮的间质中。三组间CD83+DCs的形态和分布无明显区别,但数量在三组间的差异具有统计学意义。ICP组胎盘组织中CD83+DCs表达水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度ICP患者胎盘组织中的CD83+DCs表达强度高于对照组(P<0.05);重度ICP组胎盘组织中CD83+DCs的表达强度显著高于轻度ICP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  (5)CD1a+DCs主要分布于蜕膜组织中靠近腺体上皮的间质中。三组间CD1 a+DCs的形态和分布部位无明显区别,数量具有统计学差异。ICP组胎盘组织中CD1a+DCs表达水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度ICP患者胎盘组织中的CD1a+DCs表达强度低于对照组(P<0.05);重度ICP组胎盘组织中CD1a+DCs的表达强度显著低于轻度ICP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  (6)IL-17在胎盘组织中的滋养层细胞及蜕膜均有表达,三组间的表达水平存在统计学差异,ICP组表达水平明显高于对照组,其在重度ICP组胎盘组织中的表达水平高于轻度ICP组,在轻度ICP组胎盘组织中的表达水平高于对照组(P<0.05)。
  (7)IL-35在胎盘组织中的滋养层细胞及蜕膜均有表达,三组间的表达水平差异具有统计学意义,ICP组表达水平明显低于对照组,其在重度ICP组胎盘组织中的表达水平低于轻度ICP组,在轻度ICP组胎盘组织中的表达水平低于对照组(P<0.05)。
  (8)CD83+DCs与CD1a+DCs、IL-35在正常对照组、轻度ICP组及重度ICP组孕妇胎盘组织中的表达存在负相关性;CD83+DCs与IL-17的表达成正相关;CD1a+DCs与IL-17的表达存在负相关性;CD1a+DCs与IL-35的表达成正相关;IL-17与IL-35的表达成负相关(P<0.05)。
  (9)血清和胎盘中CD83+DCs与CD1a+DCs的表达不存在相关性(P>0.05);血清中IL-17的表达和和胎盘中IL-17的表达成正相关(P<0.05);血清中IL-35的表达和胎盘中IL-35的表达成正相关(P<0.05)。
  结论:
  (1)CD83+DCs在ICP患者体内表达上升,CD1a+DCs在ICP患者体内表达下降。
  (2)IL-17在ICP患者体内表达加强,IL-35在ICP患者体内表达减弱。
  (3)四个因子在ICP患者体内的表达存在一定的相关性,表明免疫炎症因素参与ICP的发生。
[硕士论文] 张方圆
妇产科学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:总结分析妊娠晚期胎盘植入的危险因素、诊断方法、分娩时机、治疗方法及麻醉方式,进一步探索妊娠晚期胎盘植入的诊疗方法以改善患者预后。
  方法:回顾性研究分析江苏省苏北人民医院产科2013年1月~2016年12月收治的75例妊娠晚期胎盘植入患者的诊断及治疗。根据胎盘植入的类型将75例患者分为粘连性胎盘植入组、植入性胎盘植入组和穿透性胎盘植入组,分析不同类型的妊娠晚期胎盘植入对患者治疗方法的选择、麻醉方式的选择、术中出血量、产后出血量、输血量、血红蛋白、凝血功能、泌尿系损伤、感染、转至重症监护室监护及住院天数的影响。
  结果:1.江苏省苏北人民医院产科在2013年1月~2016年12月住院孕产妇总数为13068例,胎盘植入患者共77例(包括2例妊娠中期胎盘植入患者和75例妊娠晚期胎盘植入患者),胎盘植入的总发生率为5.89‰,其中2013年~2016年胎盘植入每年的发生率分别为3.20‰、3.90‰、5.40‰、10.30‰,呈逐年上升趋势。2.剖宫产史、瘢痕子宫、流产刮宫史、前置胎盘、年龄≥35岁及经产妇是妊娠晚期胎盘植入发生的危险因素(P<0.05),其中剖宫产史、瘢痕子宫、流产刮宫史及前置胎盘是妊娠晚期胎盘植入最重要的危险因素(P<0.001)。剖宫产史(P=0.004)、流产刮宫史(P=0.007)、前置胎盘(P=0.001)在粘连性胎盘植入组、植入性胎盘植入组、穿透性胎盘植入组三组间的差异有统计学意义,流产刮宫次数及剖宫产次数越多,胎盘植入程度越深,且合并前置胎盘的患者多倾向于发生植入性胎盘植入和穿透性胎盘植入。3.75例患者产前均进行至少一次的超声检查,产前超声诊断12例,检出率为16%(12/75),漏诊率为84%(63/75);产前超声联合磁共振成像诊断7例,检出率为100%(7/7);临床诊断47例;病理诊断9例。4.药物保守治疗有效率71.43%(5/7);保守性手术治疗有效率96.83%(61/63),其中清宫治疗有效率100%(10/10)、宫腔电切术有效率100%(4/4)、子宫动脉栓塞术有效率85.71%(6/7)、髂内动脉栓塞术有效率100%(3/3)、髂内动脉球囊阻塞术有效率100%(4/4)、髂内动脉球囊阻塞术+子宫动脉栓塞术有效率100%(9/9)、双侧子宫动脉上行支结扎术有效率100%(8/8)、B-Lynch缝合术有效率94.44%(17/18);子宫切除有效率100%(9/9);无孕产妇死亡。5.比较粘连性胎盘植入组、植入性胎盘植入组和穿透性胎盘植入组三组间产后出血量、产后血红蛋白、输血量、输血成分、泌尿系损伤发生率、感染发生率、子宫破裂发生率、子宫切除率、转至重症监护室监护率及住院天数,差异有统计学意义(P<0.05)。将择期手术术中出血量和急诊手术术中出血量在三组间进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。6.统计不同类型妊娠晚期胎盘植入患者麻醉方式发现粘连性胎盘植入以腰麻为主(72.7%),植入性胎盘植入以腰硬联合麻醉为主(66.7%),穿透性胎盘植入因植入程度深、术中出血多、手术时间长、患者不能耐受在腰硬联合转全身麻醉的比例最高(42.8%)。7.围产儿早产率29.33%(22/75),转至新生儿重症监护室监护率25.33%(19/75)。
  结论:1.2013年1月~2016年12月胎盘植入的发生率且呈逐年上升的趋势。2.剖宫产史、瘢痕子宫、流产刮宫史、前置胎盘、年龄≥35岁及经产妇是妊娠晚期胎盘植入发生的危险因素,其中剖宫产史、瘢痕子宫、流产刮宫史及前置胎盘是妊娠晚期胎盘植入最重要的危险因素,且剖宫产次数及流产刮宫次数越多,胎盘植入的程度越深。此外,合并前置胎盘的患者多倾向于发生植入性胎盘植入和穿透性胎盘植入。3.影像学检查水平的提高有助于提高胎盘植入的产前诊断率,为临床医师提供机会,制订合理的处理措施。4.保守性手术治疗在妊娠晚期胎盘植入的治疗中效果明显,但应掌握保守性手术治疗的指征,对于胎盘植入深、植入面积大、伴失血性休克的患者,应果断及时地切除子宫,以挽救患者生命。原位保留胎盘的前提下行子宫切除,可有效减少术中出血量。5.介入治疗在妊娠晚期胎盘植入保守治疗中疗效显著,因其微创、手术时间短、止血效果好、不良反应少且能保留子宫及生育功能,值得在临床上推广。6.腰硬联合麻醉是术前评估植入程度深的胎盘植入患者(特别是穿透型胎盘植入患者)的首选麻醉方式,如术中出血多,可随时转全身麻醉以便扩大手术范围及延长手术时间。
[硕士论文] 荆晓
妇产科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  探讨人类冻融胚胎质量对早期临床妊娠结局的影响。
  方法:
  回顾性分析了2012年3月至2015年6月期间,在我院生殖中心进行玻璃化冷冻的人类冻融胚胎移植(Frozen-thawed Embryos Transfer,FET)的738个周期的患者的相关资料,分别按照移植优质胚胎的数量、卵裂球损伤的程度、移植胚胎中是否含8细胞胚胎以及含8细胞胚胎的数目,将其分为4类组,分别比较各分类组间的早期临床妊娠率和多胎妊娠率之间的差异。
  结果:
  ①移植2枚优质胚胎组早期临床妊娠率均高于移植0枚优质胚胎组和移植1枚优质胚胎组(P<0.05),并且与移植3枚优质胚胎组是早期临床妊娠率基本相同;各组间的多胎妊娠率无统计学差异;
  ②移植胚胎完整组、损伤组、损伤混合组各组间的早期临床妊娠率、多胎妊娠率均无统计学差异;
  ③移植8细胞胚胎组的早期临床妊娠率显著高于移植6-7或9-13细胞胚胎组(P<0.05),且各组间的多胎妊娠率无统计学差异。
  ④移植2枚8细胞胚胎组的种植率、早期临床妊娠率显著高于移植0枚8细胞胚胎组和移植1枚8细胞胚胎组(P<0.05);移植3枚8细胞胚胎组的多胎妊娠率显著高于移植0枚8细胞胚胎组(P<0.05),其余组间差异无统计学意义。
  结论:
  FET中移植的优质胚胎数目和8细胞胚胎数目是影响早期临床妊娠率和多胎妊娠率的重要因素;胚胎损伤对早期临床妊娠率和多胎妊娠率无明显影响。因此,FET时移植至少1枚优质胚胎或1枚8细胞胚胎,既可以保证其早期临床妊娠率,同时又可以降低多胎妊娠率。
[硕士论文] 倪筱静
妇产科学(产科学) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景
  凶险性前置胎盘(pernicious placenta previa)属前置胎盘的一部分。为曾经有剖宫产史的妇女,再次妊娠时并发前置胎盘,且此次胎盘附着于既往剖宫产手术瘢痕部位。凶险性前置胎盘容易并发胎盘植入。胎盘植入(placenta accreta)是胎盘与子宫之间的蜕膜海绵层生理性间隙消失,一个或多个胎盘母体叶与蜕膜基底层紧密粘连或者侵入子宫肌层甚至穿透子宫肌层。
  凶险性前置胎盘的发病率逐年升高,且由于剖宫产时往往会出现短时间内大量失血,因此成为目前孕产妇产后出血、子宫切除甚至死亡的重要原因。
  胎盘植入的产前诊断对于术中处理至关重要。常用的产前影像学诊断方式为B超及MRI。其诊断准确性各家报道不一。
  腹主动脉球囊阻断术(Intraoperative aorta balloon occlusion,IABO)系通过介入方法,临时阻断大部分供给盆腔及下肢的供血,从而达到开始阻断时术中出血减少的目的,增加了严重胎盘植入患者保留子宫的可能性。近年来该介入操作在盆腔部位的手术处置中陆续开始应用。
  目的
  本研究通过回顾性分析凶险性前置胎盘及并发胎盘植入患者的影像学产前诊断方法的敏感性和特异性,旨在发现较好的产前诊断方法。同时分析腹主动脉球囊阻断术在凶险性前置胎盘并胎盘植入患者剖宫产中的应用价值,比较各种治疗方式短期术后的并发症,以期得到对于凶险性前置胎盘及并发胎盘植入患者较好的手术治疗方式,为临床提供参考。
  方法
  选择山东大学附属省立医院产科2013年3月至2016年3月住院并手术的凶险性前置胎盘病例114例。依据剖宫产术中所见并结合术后病理确定是否并发胎盘植入及植入范围和深浅,并将植入达浆膜层及穿透性植入视为深植入,其它植入均视为浅植入。分析B超和MRI两种方法各自的产前诊断准确性。同时比较是否并发胎盘植入两组患者的剖宫产术中出血量、输血量、平均住院时间及新生儿情况等。根据凶险性前置胎盘并植入患者剖宫产术中是否行腹主动脉球囊阻断分为阻断组和非阻断组,比较两组术中出血量、输血量、平均住院时间及新生儿情况等。P<0.05认为比较差异有统计学意义。
  结果
  114例凶险性前置胎盘病例中,术后证实合并胎盘植入者89例。其中114例病例均行B超检查。B超产前诊断为胎盘植入87例,诊断敏感性为97.75%,特异性为92%;行MRI检查85例,MRI产前诊断为胎盘植入70例,诊断敏感性为97.18%,特异性为92.86%。
  凶险性前置胎盘合并胎盘植入组89例患者,平均术中出血量1867ml,输红细胞量7.66U,输血浆量648ml。平均住院时间11.8天;非植入组病例25例,平均术中出血量650ml,输红细胞量2.5U,输血浆量164ml,平均住院时间7.8天。两组之间的差异具有统计学意义(p<0.05)。114例凶险性前置胎盘病例中,剖宫产术中同时行子宫切除29例,膀胱损伤修补10例,均来自胎盘植入组。
  凶险性前置胎盘合并胎盘植入89例患者,59例行腹主动脉球囊阻断术,阻断组剖宫产术中平均出血量为1759ml,非阻断组剖宫产术中平均出血量2080ml,但两组比较差异尚无统计学意义(p>0.05)。另外两组间在术后并发症的比较差异无统计学意义(p>0.05)。但两组在胎盘植入的程度比较中有统计学差异意义,阻断组患者的胎盘深植入病例数明显多于非阻断组(p<0.05)。
  胎盘植入与非植入组的新生儿转新生儿重症监护病房(Neonatal IntensiveCare Unit NICU)情况差异无统计学意义(P>0.05),阻断组与非阻断组的新生儿NICU转入情况差异亦无统计学意义(P>0.05)。
  结论
  本研究表明B超和MRI对凶险性前置胎盘并胎盘植入的产前诊断中准确性较高,其中B超可作为首选检查方法,MRI可作为B超的补充检查手段。
  凶险性前置胎盘合并胎盘植入对患者的住院天数、术中出血、输血量等有明显影响。对产前诊断为胎盘植入,特别是深植入的患者剖宫产时行腹主动脉球囊阻断术,可以减少术中出血,减少术中输血量,减少住院时间,大大有利于这类患者的术后恢复,因此具有较好的临床应用价值。同时,球囊阻断术并不会增加患者术后并发症的可能,该治疗方法安全有效。
  新生儿的出生情况与其胎龄有关,与胎盘植入程度及是否行腹主动脉球囊阻断术无关。
[硕士论文] 曲翌敏
流行病与卫生统计学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过对“免费孕前优生健康检查”项目收集的数据进行整理分析,探讨我国农村地区死胎的相关危险因素。
  数据来源为“国家免费孕前优生健康检查”项目自2010年1月至2012年12月收集的数据。该项目在全国31个省、市、自治区,220个区县进行多阶段分层抽样。
  方法:
  来自全国的248501对计划在半年内怀孕的夫妻被纳入研究。通过问卷调查收集了夫妻怀孕前的社会人口学特征、孕产史、行为习惯、危险因素接触情况等暴露信息以及妻子怀孕后的相关暴露信息。妊娠结局通过医生填写记录。
  采用巢式病例对照研究,通过倾向值评分匹配的方法对于病例和对照进行1∶8配对,校正混杂因素在病例组与对照组间的分布情况。
  主要采用t检验、卡方检验、多水平logistic回归分析对数据进行比较分析。
  结果:
  母亲年龄、教育程度、父亲职业、地域因素在病例组与对照组分布不均衡,且在各其他危险因素的暴露组与对照组间分布也有显著性差异,分析结果显示可能是暴露与结局间的潜在混杂因素,应在为病例匹配对照时予以校正。经过倾向值评分匹配后,病例组与对照组在匹配的因素上分布均衡。
  单因素分析结果显示,孕前母亲厌食蔬菜(OR=2.25,95%CI(1.16~4.39)),被动吸烟(OR=1.56,95%CI(1.01~2.41)),接触农药(OR=2.24,95%CI(1.26~3.97)),母亲感觉有生活/工作压力(OR=1.37,95%CI(1.06~1.78))、与亲友同事关系紧张(OR=1.58,95%CI(0.99~2.53))、高血压(OR=1.73,95%CI(1.17~2.56));父亲吸烟(OR=1.28,95%CI(1.09~1.5)),饮酒(OR=1.22,95%CI(1.03~1.43)),接触有机溶剂(OR=1.71,95%CI(1.05~2.77)),父亲有生活/工作压力较大(OR=2.41,95%CI(1.37~4.23))均为死胎发生的危险因素。
  母亲补充叶酸为死胎的保护因素,与不补充叶酸相比,停经前至少3个月便开始补充叶酸OR=0.70(95%CI:0.58~0.85),停经前1-2月开始补充叶酸OR=0.71(95%CI:0.56~0.9),停经后补充叶酸的OR=0.78(95%CI:0.63~0.96),差异均有统计学意义。
  多水平logistic回归结果与单因素分析结果基本一致,在控制了水平二,省份的影响之后,个体水平的暴露因素中,母亲农药接触(OR=1.9,95%CI(1.06~3.39)),高血压(OR=1.58,95%CI(1.07~2.34)),厌食蔬菜(OR=1.99,95%CI(1.00~3.93)),服用叶酸及开始时间(与不服用叶酸相比,停经前至少3个月便开始补充叶酸OR=0.72(95%CI:(0.59~0.89),停经前1-2月开始补充叶酸OR=0.71(95%CI(0.55~0.92),停经后补充叶酸OR=0.81,95%CI:(0.65~1.02)),压力(与无压力相比,感觉有一点压力组OR=1.34,95%CI(1.02~1.76)),均有统计学意义;父亲吸烟(OR=1.22,95%CI(1.02~1.46))、接触有机溶剂(OR=1.64,95%CI(1.01~2.69))有统计学意义。
  结论:
  母亲农药接触、厌食蔬菜、高血压、父亲吸烟、接触有机溶剂均为死胎的危险因素,母亲服用叶酸是死胎的保护因素。
[硕士论文] 郭燕玲
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  调查2011-2015年长治市某三甲医院胎儿先天畸形(congenital malformation,CM)的患病情况;阐明超声学产前筛查的必要性;对引起胎儿CM的主要危险因素展开分析,从而在孕前的咨询、保健等方面提供可靠依据。
  方法:
  对长治市某三甲医院2011-2015年的胎儿CM情况进行登记。2011年~2015年医院终止妊娠产妇(包括正常生产和其他原因的终止妊娠)是9783例,其中胎儿CM是245例。胎儿CM类型按照国际疾病编码(ICD10)进行归类,分析长治市某三甲医院近五年来胎儿CM的现状及特征,以及超声显像技术诊断胎儿CM的基本情况。采用1:2病例对照研究,选取病例组114例,对照组228例,调查产妇的基本信息,包括:孕妇年龄、文化程度、居住地区、孕期是否上感,孕期是否有微生物感染(血清弓形虫、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒及风疹病毒感染)、服药史、工作环境、有害物质接触(包括工业毒物、农药、吸烟、饮酒等)、是否服用叶酸、异常生育史、家族史、近亲婚配史,严格筛选胎儿CM的影响因素,通过多因素logistic回归分析来计算这些危险因素的比值比(OR值)。
  结果:
  1.长治市某三甲医院2011-2015年胎儿CM现状分析
  1)终止妊娠的孕妇9783例,胎儿CM245例,胎儿CM率2.50%;经统计学分析,5年间在此医院胎儿CM的发生率差异比较无统计学意义(?2=2.116,P=0.191)。
  2)按照国际疾病分类的系统分类法,胎儿CM排在前五位的依次是中枢神经系统(36.73%)、头面部(18.38%)、心血管系统(16.73%)、骨骼肌肉系统(8.98%)、泌尿生殖系统(6.53%)。按照发生部位分类,胎儿CM排在前5位的分别是是先心病(16.7%)、脊柱裂(12.2%)、脑积水(12.2%)、唇腭裂(11.8%)、无脑畸形(6.5%)。
  3)男女胎儿CM的发生率分别为2.38%和2.68%;胎儿CM男女性别发生率之比为0.89:1,胎儿CM在性别之间的差异无统计学意义(χ2=0.881,P=0.348);
  4)城镇和农村胎儿CM的发生率分别为1.62%和3.51%,胎儿CM在城乡间的差异有统计学意义(χ2=55.730, P?0.05);
  5)母亲年龄在<25岁、25岁-29岁、30岁-34岁、≧35岁的胎儿CM发生率分别为为2.61%,1.90%,5.43%,7.90%,各年龄组之间胎儿CM发生率差异有统计学意义(χ2=66.033,P?0.05)。25-29岁年龄段是胎儿CM的低发年龄,≥35年龄段是胎儿CM高发年龄。
  6)小学及小学以下产妇所生胎儿CM发生率为5.73%,不同文化程度产妇所生产胎儿CM发生率之间差异有统计学意义(χ2=18.421,P<0.05)。
  7)从确诊时间上来看,在245例胎儿CM儿中,产前确诊167例,占68.16%;产后确诊78例,占31.84%,产前诊断的比例由2011年的52.63%增加至2015年的75.81%。
  8)从胎儿CM确诊依据上来看,2011年至2015年产前超声检查胎儿CM的检出率为2.10%(194/9219)。在由超声诊断的畸形儿中,在28周前超声检出的畸形儿比例由2011年的35%增加至2015年的63.64%。
  2.胎儿CM的1:2病例对照研究展开对比分析,得出以下结果:引起胎儿畸形的危险因素主要有:孕期感冒发热(OR=2.163,95%CI:1.025-4.563)、病毒感染(0R=3.285,95%CI:1.146-9.411)、孕期服用药物(OR=2.603,95%CI:1.061-6.386)、孕期接触有害物质(OR=6.264,95%CI:2.211-7.755)、不良孕产史(OR=1.97,95%CI:1.058-3.667)、居住农村地区(OR=2.526,95%CI:1.498-4.26)、丈夫喝酒(OR=2.195,95%CI:1.052-4.582)、吸烟(OR=2.017,95%CI:1.067-3.811),而增补叶酸(OR=0.324,95%CI:0.136-0.772)为保护性因素。
  结论:
  2011-2015年长治市某三甲医院胎儿CM发生率2.50%;按照发生部位胎儿CM前5位的分别是先心病、脊柱裂、脑积水、唇腭裂、无脑畸形。产前超声检查对胎儿畸形检出率为2.10%,在28周前由超声诊断出的胎儿CM占据了越来越高的比例,也就是说,接受产前超声诊断的孕妇越来越多。孕期感冒发热、丈夫喝酒、吸烟等是胎儿CM发生的高危因素。尽快为孕妇补充叶酸,增强孕期保健质量,积极开展产前筛查,通过及早诊断从而尽可能减少CM出生。
[硕士论文] 李亚宁
控制科学与工程 广东工业大学 2017(学位年度)
摘要:胎儿心电监护一直是产程中胎儿健康监护的重要手段。目前常用的采集方法为母亲腹壁心电采集法,该方法采集到的是胎儿心电、母亲心电、工频干扰、基线漂移、肌电干扰以及一些其他噪声的混合信号。由于胎儿信号具有微弱、低频、非平稳、随机等特性,从采集到的混合信号中提取出相对干净的胎儿心电信号一直是该领域的研究热点。非负矩阵分解(NMF)简单、速度快、能有效处理大规模数据,且其方法的优化模型建立在混合信号的内在可分离性和与源信号之间的代数结构上,符合从诸多混合信号中提取胎儿心电信号的模型。本文在总结优秀经验的前提下,展开一种基于非负矩阵分解的胎儿心电信号的提取方法的研究。
  本文在实验阶段基于一种欧式空间距离模型的加稀疏性约束的非负矩阵分解,对多通道混合心电信号和单通道混合心电信号进行模拟数据实验和临床数据实验。本文实验平台为MATLAB仿真平台。
  实验的模拟数据是在了解母亲心电、胎儿心电以及噪声信号的时频、幅频特性基础上模拟产生的较理想信号。多通道的临床数据来源于实验室自主研发设计的胎儿心电采集处理系统,单通道的临床数据来源于MIT-BIT病理数据库,都是诸多噪声的混合信号,故在分离算法之前需进行适当的去噪处理,本文提出了中值滤波和梳状滤波两种信号预处理方法。多通道混合心电符合NMF的模型,预处理之后便可进行分离算法。单通道混合心电不符合NMF分解的高维数据模型,预处理之后需进行短时傅里叶变换,转换到频域上的功率谱,之后进行分离算法。
  实验证明,基于稀疏性约束的NMF算法可以提取出较清晰的母亲和胎儿心电信号特征波形图。对提取出的特征信号进行峰值检测,便可计算出瞬时心率,之后依据算法评价指标对结果做出分析。该实验的最终结果可作为被检测对象胎儿是否存在窘迫现象的一种参考依据。
[博士论文] 赵皓琦
细胞生物学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 CHN1在宫颈癌中的表达与机制的研究
  背景:宫颈癌是全球第二大妇科恶性肿瘤,同时也是中国致死率排名第八的癌症,宫颈癌的浸润和转移是导致患者死亡最重要的原因。上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)是当前用以解释实体肿瘤转移机制的一大学说,EMT和其调节因子在肿瘤的生长、凋亡抵抗、转移等方面产生一定的作用。α-嵌合蛋白(α-chimaerin,CHN1)是一种ras相关蛋白,在信号信息调控和发育中发挥着重要的作用。本课题就CHN1在宫颈癌发生发展中的机制展开研究,初步探讨了CHN1、EMT以及相关信号通路的作用关系以及所涉及的调控机制。
  目的:探讨CHN1的表达与宫颈癌临床病理学的关系,明确CHN1的差异表达对肿瘤在体外、体内环境中生物学行为的影响,探索CHN1参与肿瘤信号通路的分子机制。
  方法:为验证临床样本中CHN1与肿瘤之间的关系,首先,使用免疫组织化学技术对宫颈癌及其配对的癌旁组织中CHN1的表达进行检测,并同时对病理类型和相关参数进行分析,明确CHN1作为肿瘤标志物的临床意义。然后,在宫颈癌细胞系中分别转染shRNA干扰质粒和全长cDNA克隆表达质粒,经筛选获得稳转细胞株,建立CHN1干扰和高表达的宫颈癌细胞株,并同时对构建成功的细胞进行增殖、侵袭和迁移能力的检测。第三,分别从mRNA水平和蛋白水平对CHN1差异表达细胞株中EMT标志物的表达进行检测。第四,利用裸鼠移植瘤实验检测CHN1的表达对裸鼠致瘤性的影响,并用免疫组化的方法对CHN1相关蛋白的表达进行检测;最后,利用Western Blotting和免疫荧光技术明确CHN1可能参与的肿瘤信号转导通路的分子机制。
  结果:免疫组织化学结果显示,CHN1表达于宫颈癌组织,主要定位于癌组织的胞浆区域;与宫颈癌癌旁组织相比,CHN1在癌组织中的阳性率为85.5%,在癌旁组织中的阳性率为43.4%,差异具有统计学意义(P<0.01)。CHN1的表达情况与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.05),与宫颈鳞癌患者的年龄、肿瘤病理分期、分化程度无关(P>0.05)。生存曲线单因素分析显示,CHN1表达强阳性/阳性的宫颈癌患者,其生存时间低于CHN1阴性的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。体外CCK-8实验结果显示,高表达CHN1时,细胞增殖速度明显加快,而CHN1的表达被干扰后,细胞的增殖能力明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.01);克隆形成结果显示,高表达CHN1时,细胞克隆形成能力显著提高,而干扰CHN1表达时,宫颈癌细胞的克隆形成能力明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.01)。侵袭和迁移实验结果显示,当干扰宫颈癌SiHa细胞CHN1表达时,宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力受到明显的抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.01)。在裸鼠成瘤实验中,利用CHN1高表达细胞株和CHN1干扰细胞株成功构建了裸鼠移植瘤,经H&E检测其为肿瘤,且CHN1高表达细胞株所形成的肿瘤体积更大,经免疫组化验证,该肿瘤中CHN1的表达量更高。Western Blotting结果显示,高表达CHN1可以诱导宫颈癌细胞发生EMT,同时伴随上皮来源标志物表达的降低,以及间质来源标志物表达的提高,并诱导EMT相关转录因子的表达。在宫颈癌细胞系中,高表达CHN1可以激活Akt/GSK-3β信号通路,而使用该信号通路特异性抑制剂LY294002时,该通路的活化受到抑制。
  结论:在宫颈癌中CHN1的高表达与宫颈癌的远期预后不良相关。CHN1能够在细胞水平促进肿瘤生物学行为的发生。CHN1可以通过对Akt/GSK-3β对EMT产生激活作用,并通过EMT促进宫颈癌的转移。
  第二部分 miR-205/CHN1在先兆子痫胎盘中的表达与作用机制研究
  背景:先兆子痫(Preeclampsia,PE)是一种妊娠20周后出现的特发性高血压综合征,是导致孕妇前出血、流产、早产以及胎儿和孕产妇死亡的主要原因之一。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码小RNA,miRNAs可以通过基因转录后调节机制参与调控细胞的增殖、周期调控、细胞分化及凋亡等一系列过程。microRNA-205(miR-205)是新近发现高表达于先兆子痫患者胎盘和血浆中的miRNA,其参与调节先兆子痫的具体机制尚不清楚。在本研究中,我们证实miR-205可以靶向调控CHN1的表达,而在第一部分的研究中CHN1已被证明可以调控细胞的侵袭迁移,所以,我们着重在临床胎盘样本和细胞系中对miR-205及其靶基因的表达以及二者间的直接靶向调控关系进行了检测,初步对miR-205靶向CHN1调节绒毛滋养层细胞的生物学功能的影响进行了探索。
  目的:在临床样本和绒毛滋养层细胞水平上研究miR-205对先兆子痫的具体作用机制,以及miR-205对CHN1的靶向调控作用。探索miR-205/CHN1对滋养层细胞功能的影响,以及参与调节先兆子痫发生的具体机制。
  方法:利用real-time PCR技术以及免疫组织化学手段检测miR-205以及CHN1在先兆子痫样本中的表达情况;生物信息学预测miR-205与CHN1的可能结合位点;构建双荧光素酶报告载体,利用双荧光素酶报告系统检测miR-205对其靶基因CHN1-3'UTR区域的靶向结合作用;real-time PCR和Western Blotting方法进一步验证miR-205与CHN1之间的直接靶向作用;利用CCK-8、transwell、划痕实验研究miR-205以及miR-205与其靶基因的相互作用对绒毛滋养层细胞生物学功能的影响。
  结果:real-time PCR检测miR-205和CHN1在正常胎盘和先兆子痫临床标本中的表达,结果表明miR-205在先兆子痫样本中的表达量显著高于正常对照组,而CHN1在先兆子痫患者组中的相对表达量则明显低于正常对照组,结果均有统计学意义(P<0.05);先兆子痫患者和正常产妇胎盘石蜡切片的免疫组织化学染色结果显示,CHN1在先兆子痫患者的胎盘中低表达。根据生物信息学的预测,CHN1-3'UTR区域有两个miR-205的保守性结合位点,利用pmirGLO-Vector成功构建CHN1-3'UTR的野生型和突变型载体后,双荧光素酶报告系统检测miR-205和CHN1的直接靶向结合情况,结果显示,miR-205仅和CHN1的第一个结合位点具有靶向结合效应。real-time PCR对使用模拟物和抑制物处理后的滋养层细胞中CHN1的表达检测结果显示,miR-205对CHN1的表达具有负调控的作用;Western Blotting检测同样证实,当高表达miR-205时,CHN1的表达明显下调。体外增殖实验结果表明,绒毛滋养层细胞高表达miR-205时,细胞的增殖能力显著减弱;侵袭、迁移实验结果证实,miR-205高表达的绒毛滋养层细胞具有相对减弱的侵袭、迁移能力,而同时转染CHN1可以逆转侵袭能力减弱这一结果。
  结论:与正常组相比,miR-205在先兆子痫患者的胎盘组织中高表达。miR-205和CHN1-3'UTR区域结合,对CHN1在mRNA和蛋白水平上的表达具有靶向调节作用。miR-205可以调控CHN1对滋养层细胞的侵袭、迁移能力产生影响。
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