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[硕士论文] 薛昊
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过检测糖尿病肾病(DKD)患者尿液中小球损伤、小管损伤以及炎症的相关生物标志物,研究在DKD疾病进展各阶段这些生物标志物的变化规律,以及其与传统肾功能评价指标之间的相关性,探讨其在评价肾功能进展、评估DKD预后中的意义。
  方法:本研究为观察性横断面研究。选取自2014年4月至2017年6月期间住院或门诊随访的DKD患者。采集病史,记录一般情况及实验室检查结果。按照准入标准,符合准入条件的患者纳入该研究。收集其空腹清洁中段晨尿标本。应用酶联免疫吸附测定(ELISA)、散射比浊法、透射比浊法等,检测各尿生物标志物的浓度。从健康体检中心匹配相应的正常人作为对照。研究的尿生物标志物包括三类。小球损伤标志物:尿白蛋白、尿转铁蛋白(TRF)、尿免疫球蛋白G(IgG);小管损伤标志物:尿肾脏损伤分子(KIM-1)、尿肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿α1-微球蛋白(α1-MG);炎症指标:尿单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1);补体指标:尿补体B因子(CFB);统计分析时采用以尿肌酐值标化。标化即采用相关参数/尿肌酐。
  结果:在DKD患者中,尿TRF、IgG、KIM-1、L-FABP、NGAL、RBP、α1-MG、MCP-1、CFB的水平与传统肾脏评价指标eGFR、ACR之间存在显著的相关性,p值均小于0.001,有统计学意义。这些指标与eGFR呈现负相关,即随着eGFR的下降,其呈现升高趋势,其中以NGAL、α1-MG、标化α1-MG相关系数绝对值较大,分别为-0.707、-0.728、-0.707;与ACR呈现正相关,即随着ACR的升高,其呈现同向升高趋势,其中以IgG、TRF相关系数绝对值较大,分别为0.841、0.883、0.824、0.812。尿TRF、IgG、KIM-1、L-FABP、NGAL、RBP、α1-MG、MCP-1、CFB等指标与传统危险度分层之间存在显著相关性,p值均小于0.001,有统计学意义。其中以TRF、IgG、α1-MG、L-FABP、CFB相关性更为显著。这些没有在DKD组中升高最显著且与其它组有显著差异,故尚不足以用来疾病鉴别。
  结论:在DKD患者中,尿TRF、IgG、KIM-1、L-FABP、NGAL、RBP、α1-MG、MCP-1、CFB与传统肾脏评价指标eGFR、ACR有显著相关性;TRF、IgG、α1-MG、L-FABP、CFB与传统的危险度分层之间相关显著;因些,这些尿蛋白标志物在协助传统指标判断糖尿病进程中肾脏是否受累、肾脏病变程度的评估以及预后预测方面有应用价值。这些标志物没有在DKD组中升高最显著且与其它组有显著差异,故尚不足以用来进行肾脏损害的不同病因的鉴别。TRF对于MN、MCP-1对于LN组有病因判断的价值。
[硕士论文] 张红军
眼科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  探讨2型糖尿病性视网膜病变的相关影响因素,为糖尿病性视网膜病变的早期诊断、预防及治疗提供理论依据。
  方法:
  1.回顾性分析2016年1月至2017年1月我院收治的2型糖尿病(T2DM)患者120例(240眼),根据糖尿病性视网膜病变新的国际临床分级标准(2002年)分为无糖尿病性视网膜病变组(NDR)40例(80眼)、轻中度非增殖性糖尿病性视网膜病变组(轻中度NPDR)40例(80眼)、重度非增殖性糖尿病性视网膜病变组(重度NPDR)40例(80眼),同时选取健康体检者作为对照组40例(80眼)。收集各组临床资料包括:年龄、性别、体重指数(BMI)、糖尿病病程、血压。生化指标:空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、总胆固醇(TC)、载脂蛋白A1(apoA1)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白B(apoB)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肾小球滤过率(GFR)、血肌酐(Scr)、纤维蛋白原(FIB)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及尿微量白蛋白与肌酐比值(UACR)。同时收集患者眼科资料:裸眼视力、矫正视力、眼压、眼部检查、眼底照相、黄斑OCT、视盘神经纤维层厚度、眼底荧光血管造影、眼部疾病病史等资料。对于连续性变量,若数据服从正态分布,统计描述采用(x)±s表示,多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验。若不符合正态分布,则选择基于秩次的非参数检验。采用Spearman秩相关分析及线性有序Logistic回归分析糖尿病性视网膜严重程度与其他临床参数的关系。
  2.回顾性分析2017年1月至2017年12月在我院收治的2型糖尿病(T2DM)患者90例(180眼),根据糖尿病性视网膜病变新的国际临床分级标准(2002年)分为无糖尿病性视网膜病变组(NDR)30例(60眼)、轻中度非增殖性糖尿病性视网膜病变组(轻中度NPDR)30例(60眼)、重度非增殖性糖尿病性视网膜病变组(重度NPDR)30例(60眼),同时选取健康体检者作为对照组30例(60眼)。收集各组患者临床资料包括:年龄、性别、糖尿病病程、血压、体重指数(BMI)。生化指标:空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、尿微量白蛋白与肌酐比值(UACR)。同时收集患者眼部资料,裸眼视力、矫正视力、眼压、眼部检查、眼底照相、黄斑区神经节细胞复合体厚度(mGCC)、视网膜神经纤维层厚度(RNFL)、眼底荧光血管造影(FFA)、眼部疾病史等资料。统计方法同前。
  结果:
  1.随着DR严重程度增加,糖尿病病程、FPG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、UACR、Scr、FIB呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),GFR呈递减趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。年龄、BMI、apoaA1、apoaB、APTT变化不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。Spearman秩相关分析显示:DR严重程度与糖尿病病程、FPG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、UACR、Scr、FIB呈正相关,且与糖尿病病程、HbA1c、FPG及UACR的相关性最强,与GFR呈负相关。与其他项目检验均无明显相关性(P>0.05)。线性有序Logistic回归分析结果显示:2型糖尿病患者的DR严重程度与患者的糖尿病病程、HbA1c、UACR、Scr水平有关。无糖尿病性视网膜病变组、轻中度NPDR组与重度NPDR组相比,糖尿病病程、HbA1c、UACR、Scr水平低至少一个等级的可能性分别为0.631(P=0.003)、0.383(P=0.001)、0.931(P=0.000)、0.935(P=0.016)倍。
  2.NDR组、轻中度NPDR组、重度NPDR组与对照组比较,随着DR严重程度增加,糖尿病病程、FPG、HbA1c、UACR水平在呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。随DR严重程度增加,各组mGCC厚度均变薄,差异有统计学意义(P<0.05)。DR严重程度与各组mGCC厚度Spearman秩相关分析显示:DR严重程度与mGCC厚度呈负相关,且与平均、上方、鼻上及鼻下方mGCC厚度的相关性最强。线性有序Logistic回归分析结果显示:2型糖尿病患者的DR严重程度与患者的4:00区mGCC厚度有关。无糖尿病性视网膜病变组、轻中度NPDR组与重度NPDR组相比,4:00区mGCC厚度水平低至少一个等级的可能性为1.28倍。
  结论:
  1、糖尿病病程、FPG、HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoB、UACR、GFR、FIB和APTT是2型糖尿病患者DR的相关影响因素,进一步表明DR是多因素综合作用的结果。
  2、糖尿病患者应早期行UACR及mGCC厚度检测。UACR的水平越高及mGCC厚度变薄越明显则发生DR的可能性越大。
  3、UACR、mGCC厚度可作为2型糖尿病患者DR的临床预测指标,指导临床及时防治,以阻止DR的发生、发展。
[硕士论文] 张星星
内科学(内分泌与代谢病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:糖尿病目前已经成为全球公共卫生问题,流行范围非常广泛、患病率迅速增加。全球糖尿病患者总量从1980年的1亿8百万增加到2014的4亿2千2百万;在大于18岁的人群中,糖尿病患病率从1980年的4.7%增加到了2014年的8.5%。中国是一个人口基数庞大的发展中国家,2017年中国成人最新糖尿病患病率为10.9%。上海作为中国大型城市,糖尿病患病率更是迅猛增加,据上海市市卫生局2006年11月12日公布,其糖尿病患病率为8.6%,而1980年仅为1.01%,20多年来增加了8倍,目前有糖尿病患者120万人。来自上海CDC的最新数据显示,上海35岁以上人群糖尿病患病率达到17.6%。据此,本研究通过对上海全市进行流行病学调查,分析上海的糖尿病流行与控制现状,进一步明确上海外来居民糖代谢状况,研究糖尿病及糖尿病前期的危险因素,为上海市糖尿病预防及控制提供流行病学依据。
  方法:本研究是横断面研究,研究队列来自于上海市卫计委公共卫生三年行动计划《上海市成人自身免疫性甲状腺疾病(AITD)筛查及评估系统》重点项目。调查对象抽取方法:抽样方法为随机抽样,先抽取10个社区为调查点,其中长桥、宜川、彭浦、天平属于城区,南桥、方松、赵巷属于郊区,航头、长江路、江桥属于城乡结合部,每个社区随机抽取10个居委会,每个居委会每户随机抽取一名调查对象,选择生日离调查日期最近的家庭成员。共计抽取了4024名18岁至65岁居民为研究对象,并排除了自身免疫性疾病、怀孕,合并多囊卵巢综合症等可能影响血糖水平的疾病,合并有肝炎、结核病、艾滋病或其他传染病、卧床、骨折、严重精神障碍或痴呆症、以及其他严重心、肝、肾、肺等疾病。外来居民定义为出生地不在上海、但在上海居住超过6个月的居民。于2016年12月至2017年4月期间收集资料及相关调查,采集受试者基本信息,包括姓名、性别、出生地、糖尿病家族史、居住上海时间、职业、收入、教育程度、每天静坐时间、目前使用药物等,测量身高、体重、腰围,检测血胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、空腹血糖、餐后后2小时血糖、糖化血红蛋白、血尿酸。
  结果:1.上海各社区4024名受试者中,根据2010年ADA糖尿病及糖尿病前期诊断标准,糖尿病患病率为8.5%,其中男性患病率为9.6%,女性患病率7.9%,糖尿病前期患病率为34.3%,其中男性患病率为36.4%,女性患病率32.6%;总人群糖尿病知晓率、治疗率、控制率分别为:57.0%、47.1%、50.3%,其中女性糖尿病知晓率、治疗率、控制率分别为60.8%、50.0%、53.5%,男性糖尿病知晓率、治疗率、控制率分别为53.4%、44.4%、47.4%;郊区、城郊结合部以及城区糖尿病患病率分别为8.0%、9.9%、7.7%,糖尿病前期患病率分别为32.0%、33.5%、37.3%,郊区的知晓率(47.4%)及控制率(47.5%)均较城区及城郊结合部低;外来居民糖尿病及糖尿病前期患病率分别为6.0%、30.5%,外来居民与本地居民有相似的糖尿病知晓率,但外来居民糖尿病控制率(41.9%)明显低于本地居民(51.2%)。
  2.糖尿病危险因素包括性别、年龄、糖尿病家族史、居住区域、吸烟、超重、肥胖、腹型肥胖、高血压、甘油三酯、职业;糖尿病前期危险因素为年龄、职业、超重、肥胖、腹型肥胖、甘油三酯、低密度脂蛋白、高血压、尿酸。高密度脂蛋白为糖尿病及糖尿病前期的共同保护因素。
  结论:上海总人群18-65岁糖尿病患病率比较高;城市、郊区、城郊结合部三个区域中,城郊结合部糖尿病患病率较高,而郊区糖尿病知晓率及控制率较低;与本地居民相比,外来居民糖尿病控制率明显低于本地居民。分析上海市糖尿病流行状况,进一步分析上海本地居民与外来居民糖代谢状况,对不同危险因素制定综合预防控制措施,及早对糖尿病进行预防和控制,减少糖尿病造成的医疗保险负担。
[硕士论文] 潘云
内科学(内分泌与代谢病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  1、探索在空腹血糖及糖化血红蛋白水平均正常的慢性胰腺炎(CP)患者中通过口服葡萄糖耐量试验(O GTT)早期发现糖尿病和糖耐量减低的情况,提高CP相关性糖尿病的早期诊断率,以便尽早开展干预措施。2、比较慢性胰腺炎患者OGTT-胰岛素/C肽释放试验的血糖、胰岛素、C肽的曲线特点,分析与临床特征及其他检验指标的相关性,分析CP相关性糖耐量异常发生的危险因素。
  方法:
  根据纳入和排除标准,纳入2017年6月至2018年2月在长海医院消化内科就诊并收治入院的慢性胰腺炎患者,通过基本病史和本次入院OGTT试验结果,将所有慢性胰腺炎患者分为慢性胰腺炎合并糖耐量正常组、慢性胰腺炎合并糖耐量减低组、慢性胰腺炎合并新诊断的糖尿病组及慢性胰腺炎合并既往糖尿病组。分析比较四组间糖代谢的特点,描绘OGTT血糖、胰岛素、C肽释放曲线,分析曲线的特点,及其与临床特征及其他检验资料的相关性,分析发生糖耐量异常的危险因素。根据基本病史资料,按是否酗酒,是否抽烟,性别将慢性胰腺炎分组,比较不同组间的代谢特点及临床特征差异。
  结果:
  共纳入慢性胰腺炎患者60例,其中糖耐量正常组13例,糖耐量减低组15例,新诊断的糖尿病组15例,既往糖尿病组17例。1、在慢性胰腺炎患者中发现仅通过空腹或糖化血红蛋白水平筛查新发现糖尿病4例,空腹血糖受损2例,糖耐量异常的检出率为14.0%,而通过OGTT试验发现糖耐量减低15例,新诊断的糖尿病组15例,糖耐量异常的检出率高达69.8%。2、四组间糖代谢特点比较:慢性胰腺炎合并既往糖尿病组的OGTT0min、30min、60min、120minC肽水平均较其他三组低,胰岛素曲线下面积、C肽曲线下面积(C-PAUC)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)也小于其他三组;慢性胰腺炎合并新诊断的糖尿病组的胰岛素早期分泌指数(ΔI30/ΔG30)和胰岛素分泌敏感性指数(ISSI-2)低于慢性胰腺炎合并糖耐量正常组;四组间胰岛素敏感性指数(ISIcomp)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)差异没有统计学意义。3、OGTT-胰岛素/C肽释放试验的血糖、胰岛素、C肽分泌曲线特点:慢性胰腺炎合并既往糖尿病组血糖、胰岛素、C肽的分泌高峰均在120min,C肽的变化(峰值-基线,峰值/基线)在四组间存在显著差异(p<0.001),慢性胰腺炎合并既往糖尿病组C肽升高的幅度和倍数较其余三组均低;慢性胰腺炎合并新诊断的糖尿病组血糖高峰在60min,而胰岛素、C肽分泌高峰在120min;慢性胰腺炎合并糖耐量减低组血糖、胰岛素分泌高峰在60min,而C肽分泌高峰在120min;慢性胰腺炎合并糖耐量正常组血糖、胰岛素、C肽分泌高峰均在60min。4、酒精性慢性胰腺炎和非酒精性慢性胰腺炎患者OGTT-胰岛素/C肽释放试验不同时间点的血糖、胰岛素、C肽水平及HOMA-β、HOMA-IR、ISIcomp、ΔI30/ΔG30差异均无统计学意义。酒精性慢性胰腺炎组患者男性患者比例、吸烟患者比例、胆总管狭窄比例大于非酒精性CP组患者。
  结论:
  1、本研究提示在慢性胰腺炎患者中常规行OGTT试验可以提高糖代谢异常的检出率(55.8%),具有较好的糖尿病早期诊断价值。
  2、慢性胰腺炎合并既往糖尿病组OGTT-胰岛素/C肽释放试验的血糖、胰岛素、C肽的分泌高峰均在120min,C肽的变化(峰值-基线,峰值/基线)较其余3组均低,存在胰岛素/C肽分泌不足。
  3、慢性胰腺炎合并新诊断的糖尿病组、糖耐量减低组血糖高峰在60min,而C肽高峰在120min,早期胰岛素分泌指数(ΔI30/ΔG30)也较慢性胰腺炎合并糖代谢正常组偏低,提示CP相关性糖尿病病程早期即存在胰岛素/C肽早期时相的分泌不足。
[硕士论文] 丁涛
内科学(肾病) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:糖尿病肾病是终末期肾脏病的主要病因之一,是心血管疾病的独立危险因素,目前缺少积极有效的治疗手段。二氢槲皮素(dihydroquercetin,DHQ)作为重要的二氢黄酮类化合物,具有显著的抗氧化、抗炎和抗纤维化生物活性,其对糖尿病肾病的作用尚无研究。
  目的:
  本研究目的在于通过体内外实验探讨二氢槲皮素对糖尿病肾病肾脏保护作用及机制。
  方法:
  利用高脂饮食/链脲佐菌素腹腔注射大鼠构建糖尿病肾病动物模型:采用ELISA法检测尿微量白蛋白和空腹血清胰岛素水平;运用生化试剂盒测定血清肌酐、血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇水平;肾脏组织切片进行苏木精-伊红和过碘酸希夫染色评价肾脏病理损害;利用免疫组化检测肾脏炎性因子IL-1β表达,从而探讨二氢槲皮素对糖尿病肾病大鼠的治疗作用。利用高浓度葡萄糖刺激大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1和人近端肾小管上皮细胞HK2构建糖尿病肾病细胞模型:采用MTT法测定细胞增殖;采用DCFH-DA法和激光共聚焦显微镜检测细胞内和线粒体活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成;利用免疫印迹法检测NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-1β、Fibronectin和CollagenⅣ等蛋白表达,从而研究二氢槲皮素对糖尿病肾病肾脏细胞的作用及机制。
  结果:
  1.高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠表现24h尿微量白蛋白水平、血清肌酐、空腹血清葡萄糖、空腹血清胰岛素水平、低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇水平明显升高,胰岛素敏感性指数明显降低,肾组织病理学损害明显,肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多,肾小球IL-1β表达水平增加。给予高剂量的二氢槲皮素(100mg/kg/day)治疗12周后,糖尿病肾病大鼠的24h尿微量白蛋白水平降低,血清肌酐、低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇水平明显下降,肾组织病理学损害减轻,肾小球系膜细胞增生和系膜基质扩张减轻,肾小球IL-1β表达水平较前降低,而胰岛素水平及胰岛素敏感性指数无明显变化。
  2.HBZY-1和HK2细胞经高浓度葡萄糖刺激后,细胞增殖明显,细胞内和线粒体ROS生成增多,NLRP3炎性小体相关蛋白NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-1β和肾纤维化相关细胞外基质蛋白Fibronectin和CollagenⅣ过表达。给予二氢槲皮素处理后,细胞增殖显著被抑制,ROS生成减弱,NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-1β、Fibronectin和CollagenⅣ等蛋白表达较前下调。
  结论:
  二氢槲皮素能够通过减轻尿微量白蛋白排泄、改善脂质代谢紊乱、减轻肾脏组织病理损害和肾脏炎性因子分泌等发挥肾脏保护作用,其可能的机制是抑制细胞增殖、降低ROS的生成、抑制NLRP3炎性小体的激活和抑制肾脏纤维化。
[硕士论文] 郑仕清
外科学(烧伤外科) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:在过去的三十年中,糖尿病在全世界范围内已成为一种新型“流行病”,目前我国的糖尿病患者已超过1亿,居全球第一位。对于糖尿病患者而言,任何创面均有可能发展形成严重感染的慢性创面,甚至造成截肢,严重影响愈合及患者生存质量。在控制血糖的前提下,对于创面彻底清创、避免感染,促进创面愈合是糖尿病创面主要的治疗方式。但是传统方法存在治疗时间长、次数多、复发率高的问题,临床对于新型有效的治疗方法需求极大。
  羊膜位于胎盘最内层,厚度约为8-12um,不含神经及血管。研究表明羊膜具有促进细胞迁移及扩增、免疫源性低、减轻炎症、含有大量的生长因子和细胞因子等特点。自1910年羊膜首次作为敷料用以创面治疗以来,随着保存技术的发展,使羊膜在眼科疾病、烧伤救治、整形修复、口腔疾病及神经外科等领域都有广泛的应用。羊膜上皮层是由单层立方上皮细胞构成,称之为羊膜上皮细胞。多项研究表明,人羊膜上皮细胞表达多种干细胞标志物,并具有向三个胚层分化的能力,而且能够分泌多种生长因子。同时因其来源广泛和便于分离,无免疫源性和致瘤性,使羊膜上皮细胞成为移植和再生医学潜在的细胞来源。羊膜上皮细胞在组织修复中的应用已有诸多报道,目前羊膜上皮细胞已在肝、神经、肺、心肌甚至肿瘤治疗中都有一定的优势,但是尚少有羊膜上皮细胞应用于糖尿病创面的研究。因此在本课题中,我们通过提取培养羊膜上皮细胞,应用于糖尿病创面中以观察其对于创面愈合的作用并对其机制进行初步探索。
  第一部分 人羊膜上皮细胞体外分离培养鉴定及生物学特性检测
  目的:分离培养人原代羊膜上皮细胞并检测鉴定。
  方法:收集剖宫产胎盘分离羊膜,通过酶消化法提取羊膜上皮细胞体外培养。流式细胞计数检测羊膜上皮细胞表型,免疫荧光法及RT-PCR法检测羊膜上皮细胞干性标志物,最后对其进行三胚层诱导检测其分化潜能。
  结果:体外人羊膜上皮细胞镜下观察可见细胞成鹅卵石样成团生长,核圆,居中,细胞呈多边形,边界清楚,轮廓分明。通过流式细胞仪检测显示培养细胞表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105,但是不表达CD45、CD34。通过免疫荧光检测发现,羊膜上皮细胞表达SSEA-3、SSEA-4、OCT4。RT-PCR结果显示羊膜上皮细胞表达OCT-4、Sox-2、NANOG等干性基因。诱导分化实验证明羊膜上皮细胞具有向三胚层分化潜能。
  结论:采用酶消化法成功分离培养羊膜上皮细胞,其可以表达多种干细胞标志物,并能够向三胚层分化,在组织修复中具有很大的潜力。
  第二部分 羊膜上皮细胞促进糖尿病创面愈合作用的研究
  目的:研究羊膜上皮细胞对于糖尿病创面愈合的作用。
  方法:将原代提取的羊膜上皮细胞局部注射糖尿病创面,观察创面愈合情况。收集创面标本行病理学以观察创面愈合情况;行CD31免疫组化检测创面血管化;行CD68、iNOS、CD206免疫荧光检测巨噬细胞极化;行促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和促进愈合因子(VEGF、TGF-β1、IGF-1)的ELISA检测炎症反应的改变。通过标记羊膜上皮细胞,观察羊膜上皮细胞在创面的转归情况。
  结果:(1)与空白组相比,羊膜上皮细胞组在创面笫10、14天创面愈合率明显升高(P<0.01)。(2)通过病理检测显示创面第10天羊膜上皮细胞组新生肉芽组织厚度较PBS组明显增加(P<0.01);CD31免疫组化显示创面羊膜上皮细胞组创面新生毛细血管密度较PBS组明显增多(P<0.01);羊膜上皮细胞组创面M1型巨噬细胞密度明显低于PBS组(P<0.01),M2型巨噬细胞密度明显增对高(P<0.05),M1/M2比例也明显降低(P<0.01);羊膜上皮细胞组创面组织中VEGF、TGF-β1、IGF-1的表达量明显高于PBS组的表达量(P<0.01),而IL-1β、IL-6、TNF-α表达量明显较空白组低(P<0.01)。(3)羊膜上皮细胞植入创面第5天,可观察到创面有大量羊膜上皮细胞存活;在创面第10天,可观察到创面少量羊膜上皮细胞存活。
  结论:羊膜上皮细胞通过调控巨噬细胞极化、减轻创面炎症反应、促进创面血管新生以促进糖尿病创面愈合;同时其在创面存留时间较短,旁分泌作用可能在促进糖尿病创面愈合过程中起主要作用。
  第三部分 羊膜上皮细胞促进糖尿病创面愈合机制的初步探讨
  目的:探索羊膜上皮细胞对于糖尿病创面愈合作用的机制
  方法:(1)体外分离培养巨噬细胞,通过IFN-γ、TNF-α刺激模拟创面M0型巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化情况,观察羊膜上皮细胞条件培养基对于巨噬细胞极化的作用,同时收集细胞行RT-PCR检测其基因表达,实验分组为:含10%胎牛血清的DMEM培养基+IFN-γTNF-α阳性对照组,含10%胎牛血清的DMEM培养基+羊膜上皮细胞条件培养基+IFN-γTNF-α组,含10%胎牛血清的DMEM培养基空白对照组。(2)体外培养人脐静脉内皮细胞,通过CCK-8试剂盒、Transwell小室以及成管试验来观察羊膜上皮细胞条件培养对于人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响,实验设计分为3组:含10%胎牛血清的DMEM培养基阳性对照组,羊膜上皮细胞条件培养基组,高糖DMEM阴性对照组。
  结果:(1)应用羊膜上皮细胞条件培养基对于TNF-α和IFN-γ刺激的巨噬细胞可以减少细胞周围的细短树突状突起;羊膜上皮细胞条件培养基处理组巨噬细胞CD206(M2型巨噬细胞标志物)的表达量较空白对照组(P<0.01)和阳性对照组明显升高(P<0.01);而iNOS(M1型巨噬细胞标志物)的表达量较空白组(P<0.05)和阳性对照组明显降低(P<0.01)。(2)CCK-8试剂盒检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性显示,应用羊膜上皮细胞条件培养基处理组较阴性对照组能够明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖(P<0.01);Transwell小室检测迁移能力结果表明羊膜上皮细胞条件培养基处理组细胞个数较阴性对照组明显增多(P<0.01);通过成管实验检测细胞成管能力,结果显示羊膜上皮细胞条件培养基处理组成管个数较阴性对照组明显增多(P<0.01)。
  结论:羊膜上皮细胞可以明显提高人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力,还可以逆转巨噬细胞向M1型转化,同时可以促进M1型巨噬细胞向M2型细胞转化,并以此促进糖尿病创面的愈合。
[博士论文] 刘淦
病理学与病理生理学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:随着物质生活水平的提高,代谢综合征如非酒精性脂肪肝、糖尿病、高脂血症、动脉粥样硬化等在人群中普遍流行。流行病学统计显示,在人群中非酒精性脂肪肝呈高发趋势,平均每100个人中就有20~30个人肝脏发生不同程度的脂肪变性。非酒精性脂肪肝不仅与肝纤维化、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的进展密切相关;临床研究指出,非酒精性脂肪肝的进展,与高血压、高脂血症、糖尿病、动脉粥样硬化等的发生、发展呈正相关。
  肝脏作为脂代谢的重要器官,参与全身脂质稳态的调控。考虑到非酒精性脂肪肝在人群中的流行度,以及其与代谢综合征间的相关性,对非酒精性脂肪肝发病机制的研究,迫切而有意义。研究发现,肝脏脂质从头合成速率增加会导致非酒精性脂肪肝。而转录因子ChREBP通过调控糖酵解、脂质从头合成相关代谢酶,调节肝脏脂质从头合成速率。近年来,ChREBP的功能研究逐渐成为热点,然而什么因子参与调控ChREBP活性及其调控ChREBP的分子机制,仍有待进一步明确。
  同时,肝脏通过脂质分泌、脂质摄取和血脂清除三个途径,参与血浆脂质稳态的维持。血浆脂质代谢异常导致的血脂紊乱,与一系列代谢综合征如动脉粥样硬化等密切相关。血浆脂质代谢是个多器官、多环节的复杂过程,其中“血浆脂质清除过程”作为中心代谢环节,受到广泛关注。而血浆载脂蛋白脂肪酶LPL作为血脂清除代谢的关键酶,被广泛地研究。对于LPL的结构、代谢模式以及LPL在其高表达组织如脂肪组织、心脏等的功能在过去几十年中已经相继被揭示,然而对于LPL在其低表达组织,如肝脏LPL的功能及代谢意义,相关的研究仍旧很少。
  我们实验室长期致力于锌指蛋白ZBTB20在发育、代谢中的功能研究。实验室前期对Alb-Cre介导的肝脏ZBTB20敲除(LZB20KO)小鼠的研究发现,敲除小鼠具有低肝脏甘油三酯、低血脂等表型;且肝脏脂质从头合成速率下降、肝脏脂质分泌能力减弱;相应的靶基因分析发现,肝脏ChREBP及下游脂质从头合成相关代谢基因低表达,高度提示ZBTB20可能通过ChREBP介导的信号通路参与脂代谢稳态的调控。本研究课题通过在LZB20KO小鼠中探究ZBTB20调控肝脏、血脂代谢的分子机制;并通过构建、分析Mx1-Cre介导的肝脏ZBTB20成年诱导敲除小鼠脂代谢表型,来验证ZBTB20在维持成年小鼠脂代谢稳态过程中所发挥的作用。我的研究主要包括以下三个部分:
  一、ZBTB20通过ChREBP调控肝脏脂质从头合成代谢:前期的研究结果提示,ZBTB20对机体脂代谢稳态的调控作用很可能与ChREBP相关。通过腺病毒介导的回补实验,发现在不存在ChREBP时,ZBTB20过表达不能上调脂质从头合成相关基因的表达;而不存在ZBTB20时,ChREBP的过表达能够上调DNL相关基因的表达;同时,ChREBP的过表达能够完全回补肝脏甘油三酯下降的表型,仅能部分回补血浆甘油三酯下降的表型;这些结果提示ZBTB20通过ChREBP介导的代谢通路调控肝脏甘油三酯代谢,存在非ChREBP信号通路来调控血脂代谢。同时,ChIP和Luciferase结果提示ZBTB20能够结合并激活ChREBP-α启动子的转录,再由ChREBP-α进一步激活下游DNL相关靶基因的表达。
  二、ZBTB20对血脂清除的调节作用:血浆脂质清除是血脂代谢的中心环节,而LPL是血脂清除代谢的关键酶。在前期研究的基础上,系统性地验证了LZB20KO小鼠血脂代谢表型,发现LZB20KO小鼠血脂含量降低,而血浆脂质清除能力增强,主要是肝脏LPL特异性过表达,血浆LPL活性升高造成的;同时,免疫荧光检测发现肝脏LPL蛋白过表达。为了明确肝脏LPL高表达在LZB20KO小鼠中的代谢作用,构建了肝脏ZBTB20、LPL双基因敲除(LDKO)小鼠。研究发现双敲小鼠血浆甘油三酯水平与野生型小鼠相同,提示在LZB20KO中肝脏LPL高表达主要参与血浆甘油三酯代谢。为了明确ZBTB20对LPL的调控机制,进行了经典的转录调控研究,ChIP和EMSA实验结果提示ZBTB20能够直接结合肝脏LPL启动子;而Luciferase实验结果提示ZBTB20能够抑制LPL启动子的转录,提示ZBTB20直接结合并抑制肝脏LPL表达来调控血浆甘油三酯水平。
  三、肝脏ZBTB20参与成年脂质稳态的调控:为了排除发育对代谢表型的影响,构建了Mx1-Cre介导的肝脏ZBTB20成年诱导敲除小鼠模型(Al-ZB20KO)。在成年小鼠肝脏诱导敲除ZBTB20后,表型分析发现,该小鼠肝脏甘油三酯含量、血浆脂质含量下降;靶基因分析发现,肝脏脂质从头合成相关基因ChREBP及其下游靶基因包括Pklr、Fasn、Elovl6、Scd1等表达下降,肝脏LPL基因表达升高。表型与靶基因结果与LZB20KO小鼠一致,提示ZBTB20的确参与脂代谢稳态的调控。
  综上,我们提出了如下学术观点:ZBTB20参与全身脂质代谢稳态的调控;ZBTB20通过激活肝脏ChREBP转录来调控肝脏脂质从头合成代谢,从而影响非酒精性脂肪肝的发生发展;同时,ZBTB20通过抑制肝脏LPL转录来调控血浆甘油三酯清除代谢,从而影响高脂血症的发生发展。对ZBTB20调控脂代谢机制的深入研究,丰富了脂代谢相关知识,为临床治疗非酒精性脂肪肝、高脂血症等代谢性综合征提供新思路;同时ZBTB20有望成为临床治疗非酒精性脂肪肝,高脂血症的药物靶标。
[硕士论文] 李新
数学 黑龙江大学 2018(学位年度)
摘要:糖尿病已经成为目前危害人体健康的主要疾病之一,为了预防糖尿病的发生并且有效地控制病人血糖浓度,本文主要研究了控制糖尿病病人血糖浓度的几种控制方法.
  在已有文献启发下,构建一型糖尿病的数学模型,用几种控制方法控制血糖浓度,并且观测人体血糖浓度是否在正常范围内.下面介绍本文的主要内容:
  第一,本文通过对已有文献的研读,建立了一型糖尿病的数学模型,简单介绍了该模型中每个子系统中变量的物理意义.
  第二,通过对模型的分析和变换,使用鲁棒增益调度的方法控制血糖浓度,使得血糖浓度达到稳定,并保持在正常的范围内.鲁棒增益调度控制器的设计是通过构造Lyapunov-Krasovskii泛函来实现.最后通过实际数据仿真模拟,验证了方法的有效性.
  第三,研究一型糖尿病模型的基于观测器的H∞控制器设计问题.首先,将葡萄糖-胰岛素动力系统建模为有输入约束和外部干扰的线性连续系统.然后,当系统状态不可测量时,给出了基于观测器的H∞控制器的存在条件(一组线性矩阵不等式),该条件使得闭环系统是渐近稳定的,并且满足H∞性能和输入约束条件.观测器和控制器增益矩阵可通过求解线性矩阵不等式获得.最后,通过一个实际的例子解释了所使用方法的有效性.
[硕士论文] 余建华
公共卫生 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目前2型糖尿病(T2DM)病因炎症学说已经成为主流学术观点。近年来出现了众多针对炎症因子与糖尿病相关性的研究,其中多项研究发现,局部的过度炎症在糖尿病足(diabetic foot,DF)的发生发展中起着决定性作用。在DF的发展过程中,局部的炎症将诱导一些炎症介质的生成,这些炎症介质一方面使自身的炎症反应加重,另一方面可以显著地激活NF-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和NF-κB受体激活因子,导致破骨细胞形成增多,最终引起进行性骨溶解、骨断裂的发生,形成DF。脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)是具有血管特异性的炎症标志物,研究发现LP-PLA2是冠心病和缺血性卒中的独立危险因素。近期有学者发现LP-PLA2在2型糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)的患者中含量明显升高,提示LP-PLA2与CKD有明显的相关性。由于糖尿病在其自身发展进程中,血管炎症从中扮演及其重要的角色,而LP-PLA2也被证实与糖尿病密切相关,因此,我们推测其很可能参与了DF的发生发展。白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)于1995年发现,其在炎症和免疫反应中发挥着十分重要的作用。IL-18可诱导一些促炎的细胞因子,如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的生成。而糖尿病足患者血清TNF-α和IL-1β水平显著高于正常人,出现该现象的原因可能与IL-18在炎症级联反应中处于中心地位有关,推测其可能通过促进炎症反应而参与胰岛素抵抗(IR)相关疾病。目前有关LP-PLA2和IL-18与DF的相关性研究很少,基于以上原因,我们选择LP-PLA2和IL-18作为检测指标,研究LP-PLA2、IL-18及其他炎症介质与DF的相关性。
  研究目的:探讨LP-PLA2、IL-18、TNF-α、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)等炎症检测指标与糖尿病足发生的相关性,寻找参与DF发生发展过程的新促炎因子,为临床诊疗提供依据。
  研究方法:入组自2016年4月至2016年8月期间在解放军454医院内分泌科住院治疗的120例DF患者(DF组)及120例无足部溃疡的T2DM患者(T2DM组)。收集所有入组患者的临床资料,包括入组患者的年龄、性别、糖尿病病程、既往史、BMI、临床症状及足溃疡的Wagner分级。根据Wagner分级将DF组分为Wagner0~3级(56例),Wagner4级(54例),Wagner5级(10例)。所有研究对象被采集空腹血,检测LP-PLA2、IL-18、TNF-α、IL-6、FIB、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白细胞(white blood cell count,WBC)等指标。统计学分析采用两独立样本t检验,相关分析采用Pearson或Spearman相关分析,风险因素分析采用单因素及多因素Logistic回归分析模型。
  研究结果:DF组患者年龄、病程均高于T2DM组患者,差异有统计学意义(P<0.01),而性别构成、BMI、FBG和HbA1c(%)等反映糖代谢及血糖控制状况的指标均无统计学意义(P>0.05)。与T2DM组相比,DF组TG、HDL-C水平显著降低(P<0.01)。DF组LP-PLA2、FIB、IL-6、TNF-α、IL-18、NEU及WBC等炎症指标水平均明显高于T2DM组,差异具有统计学意义(P<005)。Wagner5级组LP-PLA2、FIB、IL-6、TNF-α和IL-18浓度均显著高于Wagner4级组和Wagner0~3级组,差异具有统计学意义(P<0.05),而其他指标在DF组Wagner分级间无明显差异(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示LP-PLA2(OR=3.683,P=0.009)、FIB(OR=9.444,P=0.000)、IL-6(OR=8.145,P=0.000)、TNF-α(OR=9.951,P=0.000)、IL-18(OR=4.342,P=0.003)是DF发生的独立危险因素。
  研究结论:LP-PLA2和IL-18与DF具有明显相关性,检测血清中LP-PLA2和IL-18的水平变化有助于DF的早期诊断和早期预防。
[博士论文] 王锋
公共卫生与预防医学;营养与食品卫生学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:糖尿病已成为当前威胁全球人类健康最重要的慢性非传染性疾病之一。2型糖尿病(Type2diabetes mellitus,T2DM)患者不仅存在糖代谢紊乱,还多伴有血脂异常。近年来,ω-3多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)对心血管疾病的保护效应成为医学及营养学界关注的热点。膳食中ω-3PUFA分为动物性来源和植物性来源。动物性来源以二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexenoic acid,DHA)为代表。植物性来源ω-3PUFA的研究相对较少,需要深入开展不同来源ω-3PUEA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢影响的研究,并探讨其可能的作用机制。
  本研究采用动物性来源ω-3PUFA(鱼油)、植物性来源ω-3PUFA(紫苏油)、动植物性来源兼有的ω-3PUF A(鱼油+亚麻油),对T2DM合并血脂异常人群进行为期6个月的干预,综合比较不同来源ω-3PUFA对其糖脂代谢的影响。同时通过高脂饲料喂养C57BL/6小鼠和MyD88-/-小鼠构建胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)模型,分别研究动物性来源ω-3PUFA(鱼油)、植物性来源ω-3PUFA(紫苏油)经TLR4/MyD88依赖性途径与TLR4/MyD88非依赖途径调控IR的机制。本文主要分为以下几个部分:
  第一部分:不同来源ω-3PUFA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢的影响
  目的:探讨不同来源ω-3PUFA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢的影响。
  方法:于2017年2月~2017年3月在江苏省宜兴市官林医院糖尿病专科门诊招募180例T2DM合并血脂异常患者,随机分为鱼油组、紫苏油组和鱼油+亚麻油组,每组60人,每日分别给予3g鱼油胶囊(含EPA1.14g,DHA1.44g)、3g紫苏油胶囊(含ALA2.04g)和3g鱼油+亚麻油胶囊(含EPA0.63g,DHA0.36g,ALA0.84g),持续时间6个月。在基线、干预3个月、干预6个月时采集空腹血,使用MindrayBS-800全自动生化分析仪测定血糖、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、载脂蛋白A1(ApolipoproteinA1,Apo Al)、载脂蛋白B(Apolipoprotein B,Apo B)、脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]、游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、尿酸、尿素氮、总蛋白、白蛋白和球蛋白,使用Audicom AC6601全自动糖化血红蛋白分析仪测定糖化血红蛋白(Glycated haemoglobin,HbAlc),使用Roche cobas e602电化学发光分析仪测定C肽和胰岛素。
  结果:共有156人完成6个月的干预研究,其中鱼油组54人,紫苏油组52人,鱼油+亚麻油组50人。与基线相比,鱼油组、紫苏油组和鱼油+亚麻油组C肽、胰岛素、稳态模型评估胰岛素抵抗指数、TG、TC、非HDL-C、ApoA1均降低(P<0.05),鱼油组HDL-C升高(P<0.05),紫苏油组和鱼油+亚麻油组血糖、HbAlc、ApoB、Lp(a)均降低(P<0.05),鱼油+亚麻油组FFA降低(P<0.05)。与紫苏油组和鱼油+亚麻油组相比,鱼油组干预3个月TG下降较为明显(P<0.05),HDL-C升高接近有统计学差异(P=0.055)。
  结论:动物性来源ω-3PUF A、植物性来源ω-3PUFA和动植物性来源兼有的ω-3PUF A在改善T2DM合并血脂异常人群糖代谢方面的作用相似,动物性来源ω-3PUFA降低T2DM合并血脂异常人群TG的作用优于植物性来源ω-3PUFA和动植物性来源兼有的ω-3PUF A。
  第二部分:不同来源ω-3PUFA经TLR4/MyD88依赖性途径调控IR的机制研究
  目的:探讨不同来源ω-3PUFA经TLR4/MyD88依赖性途径调控IR的机制。
  方法:将6周龄无特定病原体(Specified pathogens free,SPF)级健康雄性C57BL/6小鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组,每组10只。正常对照组给予AIN-93M普通饲料喂养,模型对照组、鱼油组和紫苏油组给予D12451高脂饲料喂养。鱼油组和紫苏油组每日按0.5g/kg bw分别给予鱼油(每100g鱼油含EPA38g、DHA48g)和紫苏油(每100g紫苏油含ALA68g)灌胃,持续4周。实验结束时,小鼠禁食不禁水12h~14h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死,分离附睾白色脂肪组织。使用Beckman DxC800全自动生化分析仪测定血糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C,使用Merck Millipore MILLIPLEX(@)map kits测定胰岛素、单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、瘦素和抵抗素。采用RT-PCR和Western Blot方法检测白色脂肪组织TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κB p65、RIP1、IRF3的mRNA和蛋白表达水平,同时对白色脂肪组织进行苏木精-伊红染色。
  结果:与正常对照组相比,模型对照组血糖、胰岛素、TG、TC、HDL-C、LDL-C、非HDL-C、LDL-C/HDL-C、IL-6、TNF-α和瘦素均上升(P<0.05),而且200倍光镜下、25mm2内白色脂肪细胞数减少(P<0.05),白色脂肪细胞间质炎细胞浸润程度加深。经鱼油和紫苏油干预后,血糖、胰岛素、TG、TC、HDL-C、LDL-C、非HDL-C和IL-6均下降(P<0.05),而且200倍光镜下、25mm2内白色脂肪细胞数增多(P<0.05),鱼油组LDL-C低于紫苏油组(P<0.05)。由RT-PCR结果与WesternBlot结果可见,模型对照组较正常对照组TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κB p65、RIP1、IRF3的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),经鱼油和紫苏油干预后,TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达均较模型对照组下降(P<0.05)。鱼油组MyD88、IKKβ相对mRNA和蛋白表达均低于紫苏油组(P<0.05)。
  结论:动物性来源ω-3PUFA和植物性来源ω-3PUFA均可以改善高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠IR和血脂异常,其机制涉及TLR4/MyD88依赖性途径。
  第三部分:不同来源ω-3PUFA经TLR4/MyD88非依赖性途径调控IR的机制研究
  目的:探讨不同来源ω-3PUFA经TLR4/MyD88非依赖性途径调控IR的机制。
  方法:将8周龄SPF级健康雄性MyD88-/-小鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组,每组6只。正常对照组给予AIN-93M普通饲料喂养,模型对照组、鱼油组和紫苏油组给予D12451高脂饲料喂养。鱼油组和紫苏油组每日按0.5g/kg bw分别给予鱼油(每100g鱼油含EPA38g、DHA48g)和紫苏油(每100g紫苏油含ALA68g)灌胃,持续4周。实验结束时,小鼠禁食不禁水12h~14h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死,分离附睾白色脂肪组织。使用Beckman DxC800全自动生化分析仪测定血糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C,使用Merck Millipore MILLIPLEX(@)map kits测定胰岛素、MCP-1、IL-6、TNF-α、瘦素和抵抗素。采用RT-PCR和Western Blot方法检测白色脂肪组织TLR4、RIP1、IRF3、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达水平,同时对白色脂肪组织进行苏木精-伊红染色。
  结果:与正常对照组相比,模型对照组血糖、胰岛素、TC、HDL-C、瘦素和抵抗素均上升(P<0.05)。模型对照组、鱼油组和紫苏油组血糖、胰岛素、TC、HDL-C、MCP-1、IL-6、TNF-α、瘦素和抵抗素无统计学差异。正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组200倍光镜下、25mm2内白色脂肪细胞数无统计学差异。由RT-PCR结果与Western Blot结果可见,模型对照组较正常对照组TLR4、RIP1、IRF3、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),经鱼油和紫苏油干预后,RIP1、IRF3、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达均无明显变化。
  结论:动物性来源ω-3PUFA与植物性来源ω-3PUFA均不能通过TLR4/MyD88非依赖性途径改善高脂饮食诱导的MyD88-/-小鼠IR和血脂异常。
[博士论文] 刘绍生
体育教育训练学 河北师范大学 2017(学位年度)
摘要:体脂增多或减少时伴有脂肪细胞体积显著肥大或缩小,但脂肪细胞数目是否也会相应地发生变化并不确定,然而脂肪细胞却是终身均在不断地更新变化。前脂肪细胞增殖分化在脂肪细胞数目变化及脂肪细胞更新中发挥着重要的作用,并与脂肪细胞形态及功能密切相关。因此,从细胞动力学角度来分析前脂肪细胞增殖分化对脂肪细胞形态与功能的影响,可能是肥胖及肥胖相关并发症研究的一个突破口。本研究以SD大鼠为研究对象,通过高脂膳食诱导大鼠肥胖形成,并采用运动和/或膳食干预进行减脂实验,从而模拟现实人体肥胖形成及运动防治肥胖的过程。通过在体与离体实验,观察体脂增多或减少过程中前脂肪细胞增殖分化能力的变化,并结合在体脂肪细胞体积与数目的变化情况,从细胞层面分析前脂肪细胞增殖分化对脂肪细胞数目及脂肪细胞更新的影响,探讨其在高脂膳食诱导大鼠肥胖形成及运动防治肥胖中的作用;检测相关血液指标及脂肪细胞内脂肪酸代谢相关基因的表达,分析前脂肪细胞增殖分化、细胞更新与脂肪细胞功能之间的关系,为运动防治肥胖及相关并发症提供理论依据。
  实验分为两部分:在体实验与离体实验。
  研究一 前脂肪细胞增殖分化在肥胖形成及运动防治肥胖中的作用
  目的:从细胞层面分析前脂肪细胞增殖分化对脂肪细胞数目及脂肪细胞更新的影响,并探讨其在高脂膳食诱导大鼠肥胖形成及运动防治肥胖中的作用。
  方法:在体实验分为两个阶段:第一阶段为肥胖形成与运动预防肥胖实验研究;第二阶段为运动减脂实验研究。第一阶段实验选用4周龄Sprague-Dawley(SD)纯系雄性大鼠(清洁级)共120只,随机选取30只大鼠分为3组:普通对照组(NC组)、普通运动组(NE组)、高脂运动组(HE组),每组10只,余下90只大鼠被用于复制高脂肥胖模型。12周后,从符合肥胖标准的42只大鼠中随机选取8只作为高脂模型组(HC组,n=8),其余34只肥胖大鼠用于第二阶段实验并被随机分为4组:肥胖普通膳食安静组(HNC组,n=8)、肥胖普通膳食运动组(HNE组,n=8)、肥胖高脂膳食安静组(高HHC组,n=8)及肥胖高脂膳食运动组(HHE组,n=10),并进行10周的实验干预。大鼠喂养分为普通饲料喂养与高脂饲料喂养,运动方式采用跑台运动。各阶段实验结束后,每组随机选取6只大鼠处死取血并检测相关血液指标;组织学方法结合体视学原理检测脂肪细胞的形态与数目;Western Blot检测脂肪组织PPARγ、C/EBPα及Capase-3蛋白的表达;RT-PCR检测脂肪组织LPL mRNA、HSL mRNA和FAS mRNA的表达。
  结果:(1)身体形态学指标
  ①普通大鼠
  各组普通大鼠身长均无显著性差异。HC组大鼠体重、腹腔内总脂肪量及Lee'S指数均显著高于NC组及HE组。体脂百分比NC组显著高于NE组(P<0.01),HC组显著高于HE组(P<0.01)。同时,运动能改变腹腔内不同部位脂肪量构成比。
  ②肥胖大鼠
  各组肥胖大鼠身长均无显著性差异。HHC组大鼠体重显著高于HNC组(P<0.01)及HHE组(P<0.01),且HNC组显著高于HNE组(P<0.01)。Lee'S指数HHC组显著高于HHE组(P<0.05)。腹腔内总脂肪量及体脂百分比HNC组显著高于相应的HNE组,HHC组显著高于相应的HHE组。运动与膳食对腹腔内不同部位脂肪量构成比影响无差异。
  (2)血液指标
  ①普通大鼠
  各组普通大鼠GLU均无显著差异。血清INS、FFA、LDL、TNF-α及IL-6均表现为HC组显著高于NC组及HE组。ISI及HDL则为HC组显著低于NC组及HE组。同时,HE组大鼠血清TC显著高于HC组(P<0.05)。
  ②肥胖大鼠
  各组肥胖大鼠血清GLU均无显著差异。血清INS及FFA表现为HNC组显著高于HNE组(P<0.01),HHC组显著高于HHE组(P<0.01)。TG、TNF-α及IL-6均表现为HHC组显著高于HNC组及HHE组。ISI表现为HNE组显著高于HNC组(P<0.05),HHE组显著高于HHC组(P<0.05)。此外,HNE组HDL显著高于HNC组(P<0.01);HHC组LDL则显著高于HHE组(P<0.05)。
  (3)脂肪细胞数目与平均直径
  ①普通大鼠
  腹腔内脂肪细胞总数目HC组显著高于NC组(P=0.05)。附睾脂肪细胞平均直径HC组显著大于HE组(P<0.01);肾周及腹后壁脂肪细胞平均直径均表现为NC组显著大于NE组(P<0.05)及HE组(P<0.01),HC组显著大于HE组(P<0.01)。
  ②肥胖大鼠
  各组肥胖大鼠附睾、肾周、腹后壁脂肪细胞数目及腹腔内脂肪细胞总数目均无显著性差异,且与HC组相比也无显著性差异。各组肥胖大鼠附睾、肾周及腹后壁脂肪细胞平均直径均表现为HNE组显著小于HNC组,HHE组显著小于HHC组及HNC组。
  (4)蛋白检测结果
  ①普通大鼠
  PPARγ:附睾、肾周、腹后壁脂肪均为NE组及HC组显著高于NC组;且肾周及腹后壁脂肪HC组均显著高于相应的HE组。C/EBPα:附睾脂肪HC组显著高于NC组(P<0.05);肾周脂肪NE组显著高于NC组(P<0.05),HC组显著高于NC组及HE组(P<0.05);腹后壁脂肪NE组显著高于NC组(P<0.05)。Caspase-3:附睾脂肪NE组显著高于NC组(P<0.05),HE组显著高于HC组(P<0.05);肾周脂肪NE组显著高于NC组(P<0.05)。
  ②肥胖大鼠
  PPARγ:附睾及腹后壁脂肪各组间相比均无显著性差异;肾周脂肪组织PPARγ蛋白表达量HHE组显著高于HNC、HNE及HHC组,且HHC组显著高于HNC组。C/EBPα:附睾脂肪HHC组及HNE组显著高于HNC组;肾周脂肪HNC组显著低于HHC组(P<0.01)且HHC组显著低于HHE组(P<0.01);腹后壁脂肪HNC组显著低于HHC组(P<0.05)。Caspase-3:附睾及腹后壁脂肪各组间相比均无显著性差异;肾周脂肪组织Caspase-3蛋白表达量HNE组高于HNC组(P<0.01),HHE组高于HHC组(P<0.01)。
  (5)基因检测结果
  ①普通大鼠
  LPL mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪组织均表现为HC组显著高于相应的NC组,且NC组显著高于相应的NE组。HSL mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪均表现为NE组显著高于NC组,HE组显著高于HC组。FAS mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪均表现为HC组显著高于NC组,且NC组显著高于NE组,且附睾及腹后壁脂肪HC组均显著高于相应的HE组。
  ②肥胖大鼠
  LPL mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪均表现为HNE组显著低于相应的HNC组及HHE组;且腹后壁脂肪HHC组显著高于HNC组。HSL mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪均表现为HNE组显著高于HNC组(P<0.01),HHE组显著高于HHC组(P<0.01),HNE组显著高于HHE组(P<0.01)。FAS mRNA:附睾、肾周及腹后壁脂肪均表现为HNC组显著高于HNE组(P<0.01),HHC组显著高于HHE组(P<0.01),HHC组显著高于HNC组(P<0.01)。
  研究二 高脂或运动干预后大鼠前脂肪细胞增殖分化能力体外研究
  目的:观察从运动或高脂膳食干预后的普通大鼠和肥胖大鼠附睾及腹后壁脂肪库中提取的前脂肪细胞在原代培养中增殖分化能力的变化。
  方法:实验分组同研究一,预处理大鼠每组2只,从附睾及腹后壁脂肪垫中提取前脂肪细胞进行体外原代培养,细胞分组为:普通大鼠(NC组、NE组、HC组、HE组)及肥胖大鼠(HNC组、HNE组、HHC组、HHE组)。上述各组前脂肪细胞传代一次后,用血球计数板进行细胞计数,绘制生长曲线,并计算前脂肪细胞群体倍增时间。
  结果:①普通大鼠
  附睾及腹后壁前脂肪细胞原代培养DT值均表现为NE组及HC组显著低于NC组,且腹后壁前脂肪细胞原代培养DT值HE组显著低于HC组。
  ②肥胖大鼠
  附睾及腹后壁前脂肪细胞原代培养DT值均为HNE组显著低于HNC组,HHE组显著低于HHC组,且附睾前脂肪细胞原代培养DT值HHC组显著低于HNC组。
  全文结论:
  (1)前脂肪细胞增殖分化能力在高脂膳食诱导肥胖形成及运动防治肥胖过程中均表现为增强,但其机制不同。高脂膳食诱导肥胖形成为代偿机制,而运动防治肥胖中则为运动适应机制;
  (2)前脂肪细胞增殖分化主要通过影响脂肪细胞数目与脂肪细胞更新两方面在肥胖形成与运动防治肥胖中发挥作用;
  (3)脂肪细胞增殖分化可能在运动改善皮下/内脏脂肪分布中发挥作用,其机制有待进一步研究;
  (4)高脂与运动干预能显著促进大鼠附睾及腹后壁前脂肪细胞体外原代培养增殖速度,扩大前脂肪细胞库容积,并可能增加肥胖风险;前脂肪细胞增殖分化能力在体外原代培养与在体环境之间存有差异,且易受细胞生存环境因素的影响。
[博士论文] 张璐
流行病与卫生统计学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:2型糖尿病(Type2diabetes mellitus,T2DM)是一种由外周组织胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷,引起的以高血糖为主要特征的的代谢异常综合征。该病病因不明,是一种由遗传和环境因素交互作用引起的复杂性疾病。WNT信号通路作为一条十分保守的信号通路,参与脂质代谢和糖代谢。跨膜受体低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LDL receptor-related protein5,LRP5)由LRP5基因编码,是WNT信号通路的一部分,LRP5基因的突变与骨质疏松、癌症及代谢性疾病的发生有关。
  国内有研究表明,农村人群T2DM的患病率与城市人群的患病率差异无统计学意义,而且农村成年人糖尿病的患病率上升速度高于城市地区。因此,农村地区糖尿病防控已经成为中国慢性病防控工作的重点。大样本队列研究能够有效探讨农村人群T2DM的发生发展情况,为农村地区预防和治疗T2DM提供科学依据。
  目的:
  1.调查河南省某农村地区人群T2DM的流行特征。
  2.探讨河南省某农村地区不同性别人群T2DM潜在危险因素及其交互作用与T2DM的发病关联。
  3.探讨LRP5基因多态性及其与环境因素的交互作用与T2DM发病风险的关联。
  方法:
  本研究采用前瞻性队列研究设计,由基线研究和随访研究两部分组成。选择河南省新安县磁涧镇和铁门镇为流行病学研究现场,采用随机整群抽样的方法,抽取18岁以上的居民20194人作为调查对象,研究内容包括问卷调查、人体测量和实验室检测。2007年-2008年完成基线调查并建立基线数据库,2013年-2014年对研究对象进行随访,共随访到17265人,应答率为85.50%。随访期间队列人群除了进行问卷调查和上述指标检测外,又增加了空腹胰岛素水平的检测。排除基线调查时2型糖尿病患者1302例,1型糖尿病患者13例和缺少空腹血糖测量值的9例。排除随访期间死亡1110例和缺少实验室检测指标、无法判定糖尿病结局2555例,最终12276人被纳入第一部分研究。从基线调查对象中随机抽取空腹血糖正常并且无糖尿病史以及降糖药物服药史的7751人,完成了LRP5基因分型并建立基线数据库。2013年-2014年共随访到6641人,失访1110例,应答率为85.68%。排除随访期间死亡315例,缺少实验室检测指标、无法判定糖尿病结局815例,最终5511人被纳入第二部分研究。利用Cox比例风险回归模型评估潜在危险因素与T2DM发病风险比(Hazard ratio,HR)和95%可信区间(Confidence interval,CI)。计算各种危险因素所致T2DM发病的人群归因危险度(Population attributable risk,PAR)及其95%CI。此外,分析了危险因素之间的交互作用与T2DM发病的关联。两因素之间的交互作用分析选用相加模型。应用Haploview4.2软件评估LRP5基因单倍型与T2DM发病风险的相关性。基因一环境因素之间的高阶交互作用采用多因子降维法(Multifactor dimensionality reduction,MDR)进行分析。
  结果:
  1.该农村地区T2DM标化发病率是7.18/1000人年,男性T2DM标化发病率是8.33/1000人年,女性T2DM标化发病率是6.57/1000人年。男性80岁以上人群T2DM发病率最高(11.55/1000人年),女性60-69岁人群T2DM发病率最高(14.37/1000人年)。此外,男性发病率升高最快的年龄组是30-39岁,女性发病率升高最快的年龄组是50-59岁。
  2.糖尿病家族史,静态活动时间过长,年龄增加,超重/全身性肥胖,腹型肥胖和空腹血糖受损是男性T2DM发病的危险因素。高血压患病史,年龄增加,超重/全身性肥胖,空腹血糖受损和血脂异常是女性T2DM发病的危险因素。人群归因危险度分析显示,超重/月巴胖、年龄增加和空腹血糖受损是该地区居民T2DM的主要危险因素。
  3.T2DM危险因素间存在交互作用,糖尿病家族史和腹型肥胖、糖尿病家族史和超重/全身性肥胖的交互作用可能增加男性T2DM的发病风险,超重/全身性肥胖和空腹血糖受损、超重/全身性肥胖和血脂异常的交互作用可能增加女性T2DM的发病风险。
  4.糖尿病家族史影响子代的发病、胰岛素抵抗和β细胞功能,存在母系遗传效应现象,是T2DM发病的重要危险因素。
  5.高脉压差与中年女性的T2DM发病有关。与正常脉压差人群相比,脉压差在70-76mmHg和年龄在52-59岁之间的女性,其T2DM发病风险明显增加。
  6.基线高脉压差的女性,随访期间HOMA-IR指数高于脉压差正常者,而且β细胞功能明显减弱。
  7.LRP5基因与超重/肥胖的交互作用与T2DM发病有关。
  8.LRP5基因多态性与T2DM患者的β细胞功能和脂质代谢有关。
  结论:
  1.超重/肥胖、年龄增加和空腹血糖受损是该地区居民T2DM的主要危险因素。
  2.环境危险因素之间的交互作用可以增加T2DM的发生。
  3.高脉压差与中年女性的T2DM发病有关。
  4.LRP5基因与超重/肥胖的交互作用与T2DM发病有关。
[硕士论文] 王建华
老年医学(流行病学) 解放军总医院;军医进修学院;中国人民解放军总医院;解放军医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:伴随我国的老龄化进程,糖尿病的社会及医疗负担进一步加重。糖尿病患病率及疾病管理中控制及其变迁情况尚缺乏老年人群的研究证据。本研究旨在观察分析2001年和2010年北京城区老年人糖尿病患病和控制情况及其10年间变化趋势,并探讨其相关的影响因素。
  方法:本研究于2001年和2010年,采用两阶段随机整群抽样的方法,针对北京万寿路地区的同一个60岁以上老年目标人群,进行了两次横断面调查。2001年纳入2277名,男女性分别为943名和1334名,2010年纳入2102名,男女分别是848名和1254名。采用面对面的问卷形式调查研究对象的一般情况、生活方式、家族史、疾病史及治疗等情况,并进行相关的身体测量和血标本采集用于实验室检测。按照糖尿病既往史和空腹血糖的测量值判定糖尿病患病及调查对象的疾病知晓、治疗和血糖控制情况。对比分析10年间研究对象的患病、疾病治疗管理效果的变化趋势,以及相关指标的影响因素。相关数据经EpiData平行双录入核验后建立数据库并进行统计学分析。
  结果:两次调查人群的平均年龄、文化程度、平均腰围、体育锻炼、饮酒比例和糖尿病家族史比例增加,BMI平均值、吸烟者比例显著降低(p<0.01)。2001年,该老年人群糖尿病患病率为21.4%,2010年达到24.5%。患病率显著升高具有统计学差异,尤以70-79岁组增加显著。男性略高于女性人群。2001年患有糖尿病的患者中,知晓率、治疗率、控制率分别为73.4%、68.4%和20.1%,2010年的对应指标分别为77.8%、70.2%、15.4%,其中治疗率明显升高了19.2%,但控制率10年间一直维持在较低水平。对糖尿病的患病危险因素分析发现,2001年糖尿病家族史与BMI和患病正相关,而2010年的危险因素为家族史、BMI和吸烟。其OR值和95%置信区间(95%CI)分别为:3.097(95%CI:2.226-4.310)、1.383(95%CI:1.100-1.738)、3.456(95%CI:2.717-4.396)、1.318(95%CI:1.057-1.643)1.365(95%CI:1.010-1.845)。受教育程度和糖尿病家族史10年间保持和疾病知晓率正相关;治疗率的影响因素从2001年的家族史1.68(95%CI1.18-2.39)和受教育程度1.30(95%CI:1.04-1.67),变化为家族史1.68(95%CI:1.18-2.39)、BMI0.62(95%CI:0.44-0.88)和饮酒0.69(95%CI:0.47-0.99);控制率受文化程度和BMI影响外,2010年饮酒与控制率低相关。其中不良生活方式均为导致疾病管理效果降低的危险因素。
  结论:10年间北京城市社区老年人群的患病率依然较高,且有显著增加的趋势。疾病治疗管理指标除治疗率有所增加外,控制率维持在较低水平,提示该人群中治疗控制效果不理想,疾病管理措施有待加强。糖尿病患病率相关的危险因素除糖尿病除家族史、BMI外,2010年吸烟也成为该人群的患病危险因素。而影响管理率的因素中,生活方式的影响作用较10年前更加突出,提示增强疾病认知教育外,更应该加强糖尿病患者健康生活方式的指导,以提高疾病的管理效果。
[博士论文] 林丛
内科学(心血管病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一章 高同型半胱氨酸血症对冠状动脉病变形态学的影响
  近年来,不少临床和基础研究都表明同型半胱氨酸(Hcy)异常升高可以对人体动脉粥样硬化性疾病的进程产生影响。本研究通过比较HHcy血症患者和非HHcy血症患者冠心病的发病率情况、冠状动脉病变复杂程度以及检测不同种类冠心病和冠状动脉病变之间的外周血Hcy水平的表达,多角度全方位探索HHcy血症与冠状动脉粥样硬化病变程度之间的关系,以期为早期识别冠心病高危患者和开展防治措施思路提供依据。
  目的:
  本文旨在探讨高同型半胱氨酸血症和冠状动脉病变形态学的关联程度。
  研究人群:
  选取2016年03月~2017年06月入住温州医科大学附属第二医院心血管内科拟诊冠心病的患者236例。
  方法:
  本研究一方面通过对比有HHcy血症和无HHcy血症(以血浆同型半胱氨酸10μmoI/L作为分界标准)冠心病发病率、冠状动脉病变情况以及病情的严重程度,另一方面对比不同临床类型冠心病和冠状动脉病变之间的同型半胱氨酸检测结果的差异性来评价高同型半胱氨酸血症对冠状动脉病变形态学的影响。
  结果:
  1.与血浆同型半胱氨酸水平正常组患者相比较,高同型半胱氨酸组患者患冠心病比例显著升高(69.0% vs47.7%,P<0.05),且三支病变的比例更高(24.0% vs7.7%,P<0.05)、Gensini高分组比例更多(19.9% vs6.2%,P<0.05)、急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)患者的比例更高(43.9% vs21.5%,P<0.05)。
  2.血浆同型半胱氨酸水平与冠状动脉造影诊断的冠心病的发生存在显著关联(OR值1.191,95% CI:为1.089~1.302, P<0.001)。
  3.Gensini积分与其他危险因素的Spearman相关分析显示,Gensini积分与年龄(r=0.342,P<0.001)、糖尿病(r=0.315,P<0.001)、高血压(r=0.399,P<0.001)、吸烟史(r=0.489,P<0.001)、慢性肾病史(r=0.448,P<0.001)、高胆固醇史(r=0.229,P<0.001)和同型半胱氨酸(r=0.589,P<0.001)呈正相关,而与体重指数(Body mass index,BMI)超标(r=0.005,P=0.953)和性别(r=0.114,P=0.136)不相关。
  进一步多因素回归分析表明Gensini积分与年龄(β=0.448,95% CI:0.180~0.716,P=0.001)、糖尿病史(β=6.500,95% CI:0.835~12.164,P=0.026)、吸烟史(β=14.182,95% CI:8.021~20.344,P<0.001)、高血压史(β=8.325,95% CI:2.292~14.358,P<0.001)、慢性肾病(β=13.919,95% CI:5.978~21.859,P<0.001)、Hcy(β=1.385,95% CI:1.001~1.768,P<0.001)呈独立正相关。
  4.冠心病组中高同型半胱氨酸血症的人数为118例,占到79.2%;非冠心病组中的高同型半胱氨酸血症的人数仅为53例,占60.9%;冠心病组中高同型半胱氨酸血症检出率要超过对照组,差异有统计学意义(P=0.002,卡方值9.192)。
  5.冠心病组按临床表现不同区分为慢性冠脉病组(61例)、不稳定型心绞痛组(50例)、急性心肌梗死组(38例)。方差分析结果表明各组间的差异有统计学意义(F=26.958,P<0.01),进一步采用LSD法展开均数间两两比较,结果表明除了急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组之间无显著性差异以外,冠心病各不同病情组血浆同型半胱氨酸水平差异均有显著性意义(P<0.05);这意味着随着冠心病病情严重程度的增加,患者血浆同型半胱氨酸水平不断升高。
  6.冠心病组按冠脉病变累及主支血管数量不同又分为单支病变组(61例),双支病变组(42例),三支病变组(46例)。先行单因素方差统计分析,各组间患者血浆同型半胱氨酸水平比较差异有显著性意义(F=35.522,P<0.01),再使用LSD法展开组间两两对比,各组间血浆同型半胱氨酸水平均存在统计学差异(11.2±5.1μmoI/L vs14.8±6.7μ moI/L vs18.8±6.9μ moI/L vs22.7±7.8μ moI/L,P<0.05),即冠脉病变累及主支血管数量越多,血浆同型半胱氨酸水平也随之升高。
  7.冠心病组按Gensini积分不同又分为低分组(52例),中分组(59例),高分组(38例)。先经单因素方差分析,各组间患者血浆同型半胱氨酸水平比较差异有显著性意义(F=32.353,P<0.01),再使用LSD法展开组间两两比较,除了中分组与高分组差异无统计学意义以外,其它各组间同型半胱氨酸水平均存在统计学差异(P<0.05),即冠状动脉造影显示管径狭窄程度越重,血浆同型半胱氨酸水平增加越明显。
  8.列149例冠心病患者的Gensini积分和同型半胱氨酸浓度进行一元线性相关回归分析,结果表明同型半胱氨酸水平和冠状动脉Gensini积分呈正相关(r=0.527,P<0.01)。经F显著性检验,F=56.564,P=0.000,差异有显著性意义,回归方程有意义,建立回归方程为Y=15.474+1.602X。
  结论:
  1.高同型半胱氨酸血症是冠心病和Gensini积分增加的独立危险因子;
  2.冠心病病情越重,冠状动脉病变累及的血管数量越多,Gensini评分越高,血浆同型半胱氨酸水平也随之升高;
  3.血浆同型半胱氨酸水平与冠状动脉病变形态学严重程度密切相关。
  第二章 高同型半胱氨酸血症对冠状动脉微循环功能的影响
  冠状动脉微循环在维持正常人体心脏生理功能方面有着重要的作用,而调控微循环中血管管腔的机制非常复杂,当这种机制出现障碍时我们称之为冠状动脉微循环功能障碍。冠状动脉微循环阻力升高的机制有多种解释,目前尚存在不少争议,其中主要包括血管内皮功能失调、平滑肌细胞功能障碍、自主神经功能障碍、血管结构性改变、血管外压迫、炎症反应等因素,其中炎症反应就能够通过多种方式和途径损害微血管结构和功能。Hofmann等在易感动物体内发现HHcy血症可能激活免疫系统和炎症反应,而超敏C反应蛋白(hs-CRP)是反应机体血管炎症的指标,也是高危心血管事件的预测因子之一,已有学者倡议筛查血浆中的Hcy和hs-CRP浓度可以对冠心病的早期诊断和治疗提供帮助。
  HHcy通过改变心外膜冠状动脉管腔面积来导致心肌缺血已有较多的临床研究,而对于HHcy血症和冠状动脉微循环功能改变之间的关系国内外相关性研究尚未有涉及,而且机制尚未阐明。本研究创新性的引入IMR的概念,通过冠状动脉压力导丝检测技术,让HHcy血症对冠状动脉微循环的影响有了更深层次的理解。
  目的:
  本文旨在探讨在进行选择性冠状动脉造影的高同型半胱氨酸血症患者体内是否存在冠状动脉微循环功能障碍。
  研究人群:
  连续入选2014年5月至2015年12月来温州医科大学附属第二医院就医拟诊冠心病的79例病人,所有病人因病史中有胸闷胸痛等症状而都准备住院行选择性冠状动脉造影术。
  方法:
  对冠脉造影结果提示管腔为临界性狭窄的血管采用压力导丝检测冠状动脉微循环阻力指数,冠状动脉血流储备(Coronary flow reserve,CFR)和血流储备分数(Fractional flow reserve,FFR)。所有入选的患者都抽血化验同型半胱氨酸和高敏C反应蛋白水平,以10μmoI/L作为同型半胱氨酸分界值把所有入选患者分为观察组和对照组。
  结果:
  1.观察组在冠状动脉充血状态下,IMR值明显高于对照组(35±8 vs24±5,P<0.05),FFR值明显低于对照组(0.78±0.13 vs0.84±0.10,P<0.05),CFR值明显低于对照组(1.87±0.38 vs2.09±0.55,P<0.05)。
  2.线性回归分析结果表明两组病人的血浆Hcy水平与IMR呈正相关(r=0.550,P<0.01),而血浆Hcy水平与FFR呈负相关(r=-0.173,P<0.01),血浆Hcy水平和CFR无相关性(r=-0.058,P=0.611)。
  3.线性回归分析显示hs-CRP水平和IMR呈正相关(r=0.699,P<0.01)。
  4.多元线性回归分析结果表明Hcy是IMR升高的独立预测因子(beta coefficient0.50;95% confidence interval,0.16-0.85,P=0.005);另外,hs-CRP也是IMR值的独立预测因子(beta coefficient3.13;95% confidence interval,2.14-4.11,P<0.001)。
  结论:
  高同型半胱氨酸血症可以导致hs-CRP值和IMR值的升高,FFR值的下降,升高的Hcy水平可以造成冠状动脉微循环阻力增加和炎症反应加剧;高同型半胱氨酸血症造成冠状动脉微循环功能障碍的机制之一可能是触发了包括了hs-CRP等因子参与的炎症反应。
[博士论文] 刘敏
药理学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1.探究SIRTs家族各成员在糖尿病肾病中的表达模式,明确Sirt1-7各亚型是否参与糖尿病肾病的发生与发展以及足细胞的损伤。
  2.阐明Sirt6在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用。
  3.探讨Sirt6改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制。
  方法:
  第一部分:SIRTs家族各成员在糖尿病肾病中的表达模式
  1.1 在糖尿病肾病小鼠肾脏皮质中检测SIRTs家族各成员的表达变化:
  通过单肾切除后腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)构建糖尿病肾病小鼠模型模型。利用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测Sirt1-7在糖尿病肾病小鼠肾脏皮质中蛋白表达变化。
  1.2 利用临床标本探究Sirt6在足细胞损伤相关肾病病人肾活检标本中的蛋白表达情况及其与肾小球率过滤(glomerular filtration rate,GFR)、蛋白尿的相关性分析。
  1.3 在体外培养的人源足细胞(human podocyte,HPC)中检测不同刺激下Sirt6的蛋白表达变化:
  体外培养人源足细胞,分别给予高糖(high glucose,HG)和糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)刺激24小时后,抽提细胞内蛋白,进行蛋白免疫印迹分析,检测在不同刺激下Sirt6在HPC中的蛋白表达变化。
  第二部分:Sirt6在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用
  2.1 足细胞特异性敲除Srit6的小鼠的构建及表型观察:
  利用Cre-Loxp系统构建足细胞特异性敲除Srit6的小鼠,通过鼠尾DNA提取后的基因型鉴定确证特异性敲除小鼠的构建成功;接下来利用免疫荧光双标法进一步观察敲除小鼠肾脏石蜡切片中足细胞内Sirt6的蛋白表达水平;另外,利用肾小球分离技术对敲除小鼠进行肾小球分离,然后采用蛋白免疫印迹检测肾小球内Sirt6的蛋白表达水平,进一步在蛋白水平上对Sirt6敲除效率进行评价。
  2.2 敲除足细胞Sirt6对糖尿病肾病小鼠足细胞以及蛋白尿的影响:
  首先取小鼠血清及尿液进行分析,比较糖尿病肾病基因敲除小鼠与野生型小鼠蛋白尿水平的差异。利用过碘酸雪夫氏染色观察不同处理组基因敲除小鼠与野生型小鼠肾小球形态学差异。利用电子显微镜对不同处理组基因敲除小鼠与野生型小鼠足细胞形态进行观察。
  2.3 体外研究Sirt6对高糖(HG)刺激下的足细胞的保护作用:
  体外研究中,利用Sirt6腺病毒转染HPC,实现HPC内Sirt6蛋白高表达。首先通过荧光实时定量RT-PCR检测在HG刺激下,过表达Sirt6对HPC中炎症相关因子IL-1β、IL-6和TNFαmRNA水平的影响。
  第三部分:Sirt6改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制
  3.1 检测足细胞内Sirt6对H3K9位点的乙酰化水平的调控:
  免疫组化方法观察糖尿病肾病病人以及局灶性节段性肾小球硬化症病人的肾活检标本中H3K9乙酰化水平的变化。免疫荧光双标实验继续观察足细胞敲除Sirt6糖尿病肾病小鼠足细胞内H3K9乙酰化水平的变化。体外研究中,利用蛋白免疫印迹方法检测过表达Sirt6后对HG刺激下HPC中H3K9ac的影响。
  3.2 足细胞内Sirt6对Notch1和Notch4及下游靶基因HES1和Snail1表达水平的调控:
  利用基因芯片筛选Sirt6的下游靶基因,通过荧光实时定量RT-PCR进一步确认过表达Sirt6后对HG刺激下HPC中Notch1和Notch4的mRNA水平的调控。利用蛋白免疫印迹的方法观察敲除HPC内的Sirt6后,Notch1和Notch4的蛋白水平是否发生上调。
  3.3 足细胞中Sirt6通过调控H3K9的乙酰化水平影响Notch1和Notch4转录:
  采用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)方法检测Notch1和Notch4启动子是否位于H3K9位点,同时观察过表达Sirt6后对HG刺激下HPC中Notch1和Notch4启动子区域H3K9位点乙酰化水平的调控。利用ChIP方法检测Sirt6与Notch1和Notch4启动子区域是否存在结合以及它们之间的结合在不同刺激下是否发生改变。
  结果:
  第一部分:SIRTs家族各成员在糖尿病肾病中的表达模式
  1.1 在糖尿病肾病小鼠肾脏皮质中Sirt1和Sirt6蛋白水平明显下降:
  蛋白免疫印迹结果表明在糖尿病肾病小鼠肾脏皮质中,Sirt1,Sirt3,Sirt4和Sirt6蛋白表达水平出现不同程度的降低,其中以Sirt1和Sirt6下降最明显。
  1.2 Sirt6在足细胞损伤相关肾病病人肾活检标本中的表达都出现明显下调,并且与肾小球率过滤、蛋白尿的生成密切相关。
  1.3 在不同刺激下的HPC中,Sirt6蛋白表达水平都显著降低:
  蛋白免疫印迹表明,HG与AGE都可以显著诱导HPC中的Sirt6蛋白表达水平显著下调。
  第二部分:Sirt6在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用
  2.1 足细胞特异性敲除Srit6的小鼠的构建及表型观察:
  鼠尾DNA提取后的基因型鉴定确证足细胞特异性敲除小鼠的构建成功;免疫荧光双标实验进一步确认敲除小鼠足细胞内Sirt6的蛋白表达明显降低;蛋白免疫印迹结果发现肾小球内Sirt6的蛋白表达水平显著下调。
  2.2 敲除足细胞内Sirt6加重糖尿病肾病小鼠足细胞损伤:
  敲除足细胞内的Sirt6可以使糖尿病肾病小鼠蛋白尿水平进一步上升,加重肾小球系膜增生、足细胞足突的融合、足突数量的减少及肾小球基底膜的增厚。同时研究发现敲除Sirt6会进一步下调糖尿病肾病小鼠足细胞内Nephrin,Podocin蛋白表达水平,上调uPAR的蛋白表达水平。
  2.3 Sirt6通过多重保护作用改善足细胞损伤:
  体外研究发现过表达Sirt6可以抑制HG刺激足细胞所引起的IL-1β等炎性相关因子水平的升高,降低足细胞凋亡,改善足细胞骨架重排。另外,我们还发现Sirt6可以显著恢复足细胞内的自噬水平,抑制HG刺激所引起的自噬水平的降低。
  第三部分:Sirt6改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制
  3.1 足细胞内Sirt6可以调控H3K9位点的乙酰化水平:
  免疫组化结果发现糖尿病肾病病人以及局灶性节段性肾小球硬化症病人的肾活检标本中H3K9位点乙酰化水平明显升高。免疫荧光实验显示足细胞敲除Sirt6后会进一步上调糖尿病肾病小鼠足细胞内H3K9位点的乙酰化水平。另外,蛋白免疫印迹结果表明过表达Sirt6后可以显著的下调HG刺激足细胞所引起的H3K9ac水平的升高。
  3.2 Sirt6可以反向调控Notch1和Notch4及下游靶基因HES1和Snail1的表达:
  基因芯片结果提示Sirt6蛋白水平的下调可能参与HG刺激的足细胞内Notch信号通路的激活。荧光实时定量RT-PCR进一步确认过表达Sirt6后可以抑制HG刺激HPC中Notch1和Notch4的mRNA水平的上调。体外研究发现敲低HPC内的Sirt6后,Notch1和Notch4的蛋白水平显著上调;体内研究进一步确认足细胞特异性敲除Sirt6后,糖尿病肾病小鼠足细胞内Notch1和Notch4的蛋白水平明显升高。
  3.3 Sirt6通过调控H3K9位点乙酰化水平影响Notch1和Notch4转录:
  首先ChIP结果发现HG刺激下HPC中Notch1和Notch4启动子区域H3K9位点乙酰化水平出现明显升高,过表达Sirt6可以抑制H3K9位点乙酰化水平的上调。其次,我们通过ChIP研究发现Sirt6与Notch1和Notch4启动子区域存在结合,这种结合在HG刺激下明显减少,过表达Sirt6后能够得以恢复。
  结论:
  1.Sirt6的水平在足细胞损伤肾病病人肾脏中出现明显下降,并且相关性分析发现Sirt6的mRNA水平与病人肾小球滤过率呈正相关,与蛋白尿水平呈负相关。
  2.特异性敲除足细胞内的Sirt6后显著加重糖尿病肾病小鼠足细胞的损伤以及蛋白尿的生成,并进一步发现Sirt6可以通过抗炎症、抗凋亡、抑制足细胞骨架重排及提高足细胞自噬水平作用改善HG诱导的足细胞损伤。
  3.在Sirt6足细胞保护作用机制的研究中,发现Sirt6可以通过降低H3K9位点的乙酰化水平,抑制Notch家族中Notch1和Notch4的转录及下游信号通路的激活,继而发挥足细胞保护作用
  4.本实课题首次发现Sirt6可以通过靶向调控Notch信号通路改善糖尿病肾病中足细胞损伤,降低蛋白尿的生成,为Sirt6下游作用机制提供新的思路,同时为寻找糖尿病肾病提供了新的治疗靶点与实验基础。
[硕士论文] 陈暕
公共卫生 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的描述青岛市7-18岁汉族中小学生超重和肥胖的流行现状以及近20年间(1995-2014年)儿童青少年超重和肥胖的变化趋势,为青岛市政府部门制定有效的中小学生超重肥胖干预和防控措施提供理论指导。
  方法本项研究资料来自1995、2000、2010和2014年4次青岛市参与的全国学生体质与健康调研数据,7-18岁汉族儿童青少年共计2万余人,分城市、乡村、男生和女生4个群体,统一使用中国肥胖问题工作组(Working Group on Obesity in China,WGOC)制定的中国学龄儿童青少年超重、肥胖体质量指数筛查分类标准,筛查研究对象在不同年代的超重肥胖率,并分析1995-2014年间青岛市7-18岁儿童青少年超重肥胖的流行趋势。
  结果1)2014年青岛市7-18岁汉族儿童青少年城市男女生超重检出率分别为16.5%和11.3%,肥胖检出率分别为14.2%和6.3%;乡村男女生超重检出率分别为18.4%和12.2%,肥胖检出率分别为14.7%和7.2%;“超重+肥胖”率城市男女生分别为30.7%和17.6%,乡村男女生分别为33.1%和19.4%。男生超重肥胖率均高于女生,乡村高于城市。
  2)1995-2014年,乡村男女生超重肥胖检出率均增长迅速,男生超重率从1995年的5.8%上升到2014年的18.4%,增长了12.6%;肥胖率从1995年的3.4%上升到2014年的14.7%,增长了11.3%。乡村女生超重率1995年的5.8%上升到2014年的12.2%,增长了6.4%;肥胖率从1995年的3.4%上升到2014年的7.2%,上升了3.8%,男生超重肥胖率增长幅度大于女生。
  3)城市男女生超重、肥胖率在1995-2010年期间均呈上升趋势,其中男生超重、肥胖率分别增长了4.4%(14.0%vs18.4%)和8.7%(9.1%vs17.8%),女生超重、肥胖率分别增长了3.5%(9.3%vs12.8%)和3.4%(5.3%vs8.7%),男生超重、肥胖率的增长幅度均大于女生;且城市中小学生超重肥胖率均高于乡村学生。然而从2010年2014年城市男女生超重、肥胖检出率均呈现下降趋势,男生超重、肥胖率分别下降了1.9%和3.6%,女生超重、肥胖率分别下降了1.5%和2.4%,男生超重、肥胖检出率下降幅度大于女生,但该时期内乡村男女学生超重肥胖率仍持续上升,并高于城市学生的超重肥胖率。
  结论青岛市1995-2014年7-18岁汉族中小学生超重、肥胖处于快速增长趋势,男生高于女生,乡村增长幅度高于城市,已达到全国一线大城市水平,流行趋势严峻,将青岛市中小学生超重、肥胖的防治工作作为学校卫生的工作重点并采取积极有效的干预、防控措施已刻不容缓。
[硕士论文] 刘琛
肿瘤学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景及目的:
  随着社会经济的快速发展以及人们饮食结构的多元化,肥胖在全球范围内的发病率呈现着逐年上升的趋势。肥胖会引起2型糖尿病、肿瘤以及心脑血管疾病等,危害公共卫生和人们的生命健康。心脑血管疾病以及肿瘤分别是现在造成人类死亡的第一以及第二位的重要因素。因而,对于肥胖的机制以及干预靶标的研究则显得尤为紧迫以及重要,除此之外还有重要的社会经济价值。
  脂肪组织不仅仅是机体存储脂肪以及能量的器官,更是调节机体代谢以及能量稳态的重要器官,另有学者认为脂肪组织更是一种内分泌器官。随着对于肥胖机制研究的深入,肥胖发生的炎症机制也逐渐被人们所认知,肥胖人群脂肪组织常常伴随着慢性低度炎症以及炎性细胞的浸润。研究发现,生理状态下的脂肪组织有少量的固有免疫细胞存在,并且通过分泌细胞因子招募单核巨噬细胞。基于以上的研究发现,我们也可以认为脂肪组织是免疫系统以及代谢系统的纽带,为两者之间的密切联系提供基础。
  肥胖相关组织的炎症反应会导致相关组织器官的胰岛素敏感性下降,组织器官胰岛素抵抗的产生会进一步加重组织代谢稳态的失衡。代谢稳态与免疫稳态息息相关,相互作用。许多的研究发现,胰岛素信号通路在炎症发生的时候会受到NF-κB信号通路的影响进而被显著抑制。肥胖所致慢性炎症反应相关的炎症信号通路的活化主要出现在胰岛素敏感的靶器官,例如脂肪组织、肝脏、骨骼肌;这也反映了炎症对于系统性胰岛素抵抗的发生有着至关重要的作用。
  但是,具体的代谢如何影响免疫以及免疫又如何影响代谢的机制仍不是很清楚。本研究利用Talen基因敲除技术对小鼠的全身SIRPα进行敲除,构建高脂饮食模型诱导产生肥胖及代谢综合症,从体内体外两个水平对SIRPα通过免疫调节机制影响机体代谢的作用以及机制进行研究。
  研究方法与结果:
  第一部分 SIRPα参与调节正常饮食条件下小鼠代谢稳态
  取8周大小的雄性WT与SIRPα基因敲除小鼠,利用正常饲料连续喂养18周,并且每隔一周记录小鼠体重与摄食量。观察表型,我们发现在正常饮食模型下,SIRPα基因敲除小鼠的体重增长无明显差异,小鼠摄食量亦无显著差异。通过血清生化检测,我们发现WT与SIRPα敲除突变小鼠肝功能相关指标(AST以及ALT)无显著差异。通过饥饿处理,我们观察到SIRPα基因敲除组小鼠空腹血糖水平显著高于WT组小鼠。血清胰岛素的检测发现SIRPα基因敲除小鼠的血清胰岛素含量显著高于WT组。IPGTT实验发现相比于同窝的WT组小鼠,SIRPα基因敲除小鼠在注射葡萄糖后的早期阶段血糖浓度快速升高,并且血糖降低水平明显减缓。ITT实验发现SIRPα基因敲除小鼠胰岛素敏感性低于WT组。
  第二部分 SIRPα敲除减轻高脂诱导的小鼠胰岛素抵抗与代谢异常
  我们利用高脂饮食(HFD)与对照低脂饲料(LFD)喂养WT与SIRPα基因敲除小鼠。我们发现HFD喂养组中WT组小鼠体重增加显著高于SIRPα基因敲除小鼠,表明高脂饮食条件下SIRPα基因敲除小鼠的代谢可能存在一定程度改善。进一步,我们检测HFD与LFD喂养条件下WT组与SIRPα基因敲除组小鼠血清生化以及代谢的相关指标。
  结果:发现HFD组SIRPα基因敲除小鼠ALT、血清甘油三酯(TG)与血清胆固醇(TC)水平显著低于WT组小鼠,AST无显著差别,以上结果提示SIRPα基因敲除组小鼠代谢指标改善。除此之外,通过IPGTT实验发现HFD处理中SIRPα基因敲除组小鼠糖耐量较WT组改善。ITT实验表明SIRPα基因敲除组小鼠胰岛素敏感性优于WT组。通过以上结果,我们发现高脂饮食条件下SIRPα敲除组小鼠糖代谢与胰岛素敏感性有显著改善。
  第三部分 SIRPα影响小鼠的能量以及脂质代谢
  我们通过代谢笼的方法检测正常饮食与高脂饮食条件下WT组与SIRPα基因敲除组小鼠摄食活动以及能量利用率的差异。发现正常饮食条件下WT组小鼠的活动率(Activity)水平高于SIRPα基因敲除组小鼠。同时我们发现WT组小鼠24小时的氧气消耗量与二氧化碳呼出量均较SIRPα基因敲除组小鼠有所增加。高脂喂养组中,WT组小鼠的活动率低于SIRPα基因敲除组。相较于正常饮食组,高脂饮食条件下WT小鼠的整体活动率降低,而SIRPα基因敲除组小鼠无显著差异。同时我们发现高脂喂养条件下组WT小鼠24小时的氧气消耗量与二氧化碳呼出量均较SIRPα基因敲除组小鼠有所减弱。以上结果提示高脂饮食条件下SIRPα敲除组小鼠能量利用率高于WT组,与SIRPα敲除组代谢指标改善的结果一致。
  高脂喂养条件下,WT组肝脏体积明显大于SIRPα基因敲除组,且肉眼可见颜色发白。进一步研究发现WT组肝脏重量、肝体比均显著高于SIRPα基因敲除组。WT组肝脏甘油三酯的水平亦高于SIRPα基因敲除组。通过定量PCR检测发现正常饮食条件下WT组与SIRPα基因敲除组小鼠肝脏脂肪酸合成代谢的相关基因如Acc1、Chrebp、Srebp2、Fasn、Acly、Pparg等水平无显著差异。脂肪组织定量分析发现高脂饮食条件下WT组小鼠脂肪组织重量高于KO组小鼠。将脂肪组织按照部分进行区分发现,高脂饮食条件下WT组小鼠附睾脂肪组织(EAT)、肾周脂肪组织(PAT)、肠系膜脂肪组织(MAT)、皮下脂肪组织(SAT)的重量均高于SIRPα基因敲除组小鼠,而棕色脂肪组织(BAT)的重量与SIRPα基因敲除组无显著差别。通过定量PCR检测发现正常饮食条件下WT组与SIRPα基因敲除组小鼠脂肪酸从头合成关键基因的表达水平无显著差异。高脂饮食条件下,相比于WT组,SIRPα基因敲除组小鼠脂肪酸从头合成基因表达水平降低。检测了高脂饮食条件下小鼠BAT的产热基因表达水平,我们发现SIRPα基因敲除组小鼠BAT相关产热基因Ucp1、Pparg、Prdm16、Cox7a1的表达水平高于WT组,提示SIRPα基因敲除组BAT的产热能力高于WT组。HE染色发现高脂饮食条件下WT组WAT与BAT组织脂肪细胞体积显著高于SIRPα基因敲除组。免疫组化染色发现BAT组织中SIRPα基因敲除组UCP1的表达水平显著高于WT组。以上结果提示SIRPα敲除抵抗高脂诱导的脂类新生,促进BAT组织产热基因的表达。
  糖原PAS染色结果显示,正常饮食条件下,相比于WT组,SIRPα基因敲除组小鼠肝脏内糖原显著累积。Glycogen定量检测试剂盒检测肝脏组织内糖原含量,我们发现相比于WT组小鼠,SIRPα基因敲除组小鼠肝脏内的糖原含量明显增加。定量PCR结果显示,正常饮食条件下SIRPα基因敲除组小鼠的糖原代谢相关基因Gsy、Gbe、GP(glycogen phosphorylase)中Gsy表达水平显著上调。另外,定量PCR检测糖异生通路中关键酶基因的表达,结果显示相比WT组,SIRPα基因敲除组小鼠的糖异生水平显著升高。
  高脂饮食条件下,PCR定量检测的结果显示,WT组以及SIRPα基因敲除组小鼠糖异生通路中关键酶基因的表达量没有显著差异。然而,检测糖原代谢相关的基因的表达,我们发现相较于WT组,SIRPα基因敲除组小鼠的糖原合成以及分解均出现上调。我们发现高脂饮食下的肝脏糖原相较于正常饮食组出现了显著的升高,这与高脂模型所致的糖原累积一致,不过WT组和SIRPα基因敲除组小鼠的肝脏糖原定量差异减小。
  第四部分 SIRPα参与调节正常饮食与高脂饮食条件下的小鼠免疫状态
  HE染色发现SIRPα基因敲除组小鼠肝脏组织存在较多炎性细胞浸润。荧光定量PCR检测发现正常饮食条件下SIRPα基因敲除组小鼠肝脏组织中炎性因子Ifng、Tnfa等表达水平显著高于WT组,而抑炎因子IL4、IL13、IL10等表达水平低于WT组。F4/80染色显示SIRPα基因敲除组小鼠肝脏中巨噬细胞的分布密度显著高于对照组。ELISA检测验证SIRPα基因敲除组肝脏组织中IL6、TNFα表达水平较高。以上结果提示正常饮食条件下敲除SIRPα促进小鼠肝脏炎症。
  同样的检测了高脂模型下小鼠的炎症相关指标,HE染色显示高脂饮食下WT组小鼠肝细胞脂肪变性程度高于SIRPα基因敲除组,这与WT组肝脏脂肪累积增多的结果相一致。免疫组化染色显示WT组F4/80阳性巨噬细胞的分布密度高于SIRPα基因敲除组。定量PCR检测发现WT组小鼠肝脏炎性因子的表达水平高于SIRPα基因敲除组。与此相一致的,SIRPα敲除抵抗高脂诱导的胰岛素抵抗。以上结果提示高脂饮食下SIRPα敲除抑制肝脏炎症状态。
  脂肪组织炎症与脂质代谢与脂肪细胞新生等相关,我们随后检测不同代谢状态下脂肪组织免疫状态。与肝脏组织类似,我们发现正常饮食条件下SIRPα敲除促进脂肪组织髓系细胞浸润与加重脂肪组织炎症,高脂饮食下SIRPα敲除抑制脂肪组织炎症状态。
  研究结论:
  根据以上结果并结合四部分的内容,可以总结得到:
  1、SIRPα敲除会影响正常饮食下小鼠的代谢以及免疫稳态,主要表现为糖代谢的异常以及血清胰岛素水平升高,同时肝脏以及脂肪组织的炎症显著加重表现为促炎因子的表达上调以及抑炎因子的表达下调。
  2、在高脂饮食构建的肥胖模型中,我们观察到截然不同的表型,主要表现为体重的下降、糖代谢的改善、血清胰岛素的下降以及组织炎症的减轻。
  3、代谢笼的结果提示,正常饮食下SIRPα敲除会抑制小鼠的能量利用率。相反的,高脂饮食下SIRPα敲除小鼠的能量利用率反而相较对照组显著升高。
[硕士论文] 王军勋
公共卫生 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过对比分析不同病程的2型糖尿病并发视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者的临床资料及实验室指标,探讨2型糖尿病早期并发DR的危险因素,为指导2型糖尿病患者采取有效措施预防或延缓DR发生提供科学依据。
  方法:
  利用HIS系统,收集某医学院附属医院自2015年1月至2017年1月内分泌科诊断为2型糖尿病并发DR的患者,满足研究对象纳入标准者纳入研究。根据患者并发DR的平均病程,将研究对象分为早期并发病例A组和晚期并发病例B组。收集两组研究对象一般人群特征资料和实验室检查指标,对比分析两组研究对象各项观察指标与DR病程之间的关系。其中一般人群特征资料包括:年龄、性别、民族、糖尿病家族史、发病年龄、吸烟史、饮酒史、收缩压、舒张压、体重指数BMI、胰岛素使用情况、口服药服用规律与否、是否合并高血压、是否合并糖尿病肾病;实验室检查指标包括:空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂各项指标(总胆固醇/TC、甘油三酯/TG、高密度脂蛋白/HDL-c、低密度脂蛋白/LDL-c)、肾功能指标(血肌酐/CR、血尿素氮/BUN)、尿微量蛋白等指标。采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析处理,计数资料数据统计指标计算百分数(%),数据间的比较分析根据检验条件选择进行x2检验;计量资料数据首先进行正态性检验,符合正态分布资料采用((-x)±s)表示,两组均数间的比较分析使用t进行检验。采用非条件Logistic回归模型对2型糖尿病早期并发DR的危险因素进行单因素和多因素分析,计算OR值及其可信区间(95%CI)。以P<0.05为差异具有统计学意义。
  结果:
  1.研究对象人群特征分析结果本次研究符合研究对象纳入标准的共有280例,并发DR平均病程为10年;两组研究对象在年龄、性别、民族、饮酒史、胰岛素使用情况、口服药服用规律与否等指标方面,差异没有统计学意义(P>0.05),但两组研究对象在糖尿病家族史、吸烟史、发病年龄、舒张压、体重指数BMI等指标方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
  2.研究对象实验室检测分析结果两组研究对象在糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮/BUN等指标方面,比较差异无统计学意义,P>0.05;但两组研究对象在FBG、血脂各项指标(总胆固醇/TC、甘油三酯/TG、高密度脂蛋白/HDL-c、低密度脂蛋白/LDL-c)、血肌酐/CR、尿微量蛋白等指标方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  3.2型糖尿病早期并发DR危险因素单因素分析结果对舒张压、BMI、发病年龄、糖尿病家族史、吸烟史、FBG、血脂各项指标(总胆固醇/TC、甘油三酯/TG、高密度脂蛋白/HDL-c、低密度脂蛋白/LDL-c)、CR、尿微量蛋白等指标,进行单因素非条件Logistic回归分析,发现各项指标与DR病程之间关系密切,P<0.05,是诱发DR早期并发的危险因素。
  4.2型糖尿病早期并发DR危险因素多因素分析结果多因素非条件Logistic回归分析结果显示,舒张压(OR=1.152,95%CI:1.015~3.872)、BMI(OR=5.332,95%CI:3.105~8.772)、发病年龄(OR=2.443,95%CI:1.048~6.118)、糖尿病家族史(OR=1.533,95%CI:1.205~5.892)、吸烟史(OR=1.984,95%CI:1.128~7.112)、FBG(OR=1.571,95%CI:1.042~8.466)、TC(OR=1.417,95%CI:1.025~9.547)、TG(OR=1.875,95%CI:1.007~3.667)、HDL-c(OR=1.663,95%CI:1.041~8.547)、LDL-c(OR=1.446,95%CI:1.002~7.815)、CR(OR=1.638,95%CI:1.003~7.325)、尿微量蛋白(OR=1.554,95%CI:1.002~7.815)各项指标与DR病程之间具有明显的关联性,P<0.05,是2型糖尿病患者早期并发DR的独立危险因素。其中,BMI与早期并发DR之间具有强关联关系,2型糖尿病发病年龄、吸烟史和TG水平与早期并发DR之间具有中度关联关系。
  结论与建议:
  1.2型糖尿病患者早期并发DR可控的危险因素是血压、吸烟、BMI、血糖、血脂水平,应加强对2型糖尿病患者管理,控制2型糖尿病患者的体重、血压、血糖、血脂、CR、尿微量蛋白等指标,做好预防2型糖尿病患者DR发生的二级预防工作,渴望降低2型糖尿病患者早期并发DR的风险。
  2.2型糖尿病患者早期并发DR不可控的危险因素有发病年龄、糖尿病家族史,针对有糖尿病家族史的患者,应加强健康教育,定期筛查。使2型糖尿病患者尽早注意DR并发症出现的早期症状,及时就医,促使患者尽早接受治疗,以促进其早日康复。
  重视对DR早发各项危险因素的监测和控制,有助于指导临床采取有效的预防措施,避免或延缓DR的发生,改善患者的生命质量。
[博士论文] 李爱
内科学(血液病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 间充质干细胞治疗2型糖尿病的临床研究
  研究目的:
  研究静脉输注间充质干细胞治疗2型糖尿病患者的安全性及有效性。为了找到一种治疗2型糖尿病的安全有效的治疗方法。
  研究方法:
  本临床试验在提交我院伦理委员会审批通过后,向捐献者详细说明本临床试验的目的、意义,捐献者充分理解并同意后,签署知情同意书,在无菌条件下留取健康产妇的脐带组织,剥离华通氏胶,并剪碎,经过培养及消化处理后,获得原代脐带间充质干细胞,继续在体外培养并扩增间充质干细胞,获得足量的间充质干细胞。这些细胞经过免疫表型鉴定、形态学鉴定、多向分化能力的鉴定和内毒素及病原微生物检测后,以确定培养出了可应用于临床治疗的符合GMP标准的脐带组织来源的间充质干细胞。
  本研究选取了2009年7月-2012年10月18例在我院住院治疗的2型糖尿病患者,签署间充质干细胞输注治疗知情同意书后,给予静脉输注脐带间充质干细胞,每名患者输注2-3次,每次间隔2周,详细记录治疗前、治疗后第1、第3、第6个月患者的空腹血糖、餐后血糖、糖化血红蛋白、C肽和T细胞亚群等指标变化,并记录出现的不良反应。总结试验数据,并做统计学分析。
  研究结果:
  1.由脐带成功分离、培养及扩增出脐带间充质干细胞,经过免疫表型鉴定、形态学鉴定、多向分化潜能的鉴定和内毒素及病原微生物检测后确定培育出的脐带间充质干细胞符合GMP规范,可应用于临床治疗。
  2.应用脐带间充质干细胞输注治疗的2型糖尿患者,按照疗效评价标准,分为治疗有效组和治疗无效组两组,二者在临床基础特征方面无显著性差异(p>0.05)。治疗有效组患者的空腹血糖和餐后血糖均明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);在治疗有效组中血浆C肽水平及调节性T细胞有升高的趋势,但无显著性差异(p>0.05)。在脐带间充质干细胞输注过程中前及输注后,仅有4例患者(4/18,占22.2%)有轻度发热反应,未发现其他明显不良反应。脐带间充质干细胞输注治疗后随访观察了6个月,18例患者均感觉身体的一般情况较前明显改善,生活质量得到了提高。
  研究结论:
  脐带间充质干细胞治疗2型糖尿病是安全的,未发现严重不良反应。对部分患者,MSC能有效降低空腹血糖和餐后血糖,其作用机制可能与促进Treg的生成,抑制异常免疫系统对胰岛β细胞损伤和提高外周组织对胰岛素的敏感性有关。该研究为临床上进一步应用UMSC治疗2型糖尿病奠定了实践基础。
  第二部分 间充质干细胞治疗强直性脊柱炎的临床研究
  研究目的:
  研究静脉输注间充质干细胞治疗强直性脊柱炎患者的安全性和有效性。为了找到一种治疗强直性脊柱炎的安全有效的治疗方法。
  研究方法:
  本临床试验在提交我院伦理委员会审批通过后,向捐献者详细说明本临床试验的目的、意义,捐献者充分理解并同意后,签署知情同意书,在无菌条件下留取健康产妇的脐带组织,剥离华通氏胶,并剪碎,经过培养及消化处理后,获得原代脐带间充质干细胞,继续在体外培养并扩增间充质干细胞,获得足量的间充质干细胞。这些细胞经过免疫表型鉴定、形态学鉴定、多向分化能力的鉴定和内毒素及病原微生物检测后,以确定培养出了可应用于临床治疗的符合GMP标准的脐带组织来源的间充质干细胞。
  本研究入组了2009年7月-2012年10月5例在我院治疗的强直性脊柱炎患者。签署间充质干细胞输注治疗知情同意书后,给予静脉输注间充质干细胞,每次输注细胞数为1IU/10Kg(1IU=1×107个间充质干细胞),平均输注1-2次,每次间隔3个月。根据疗效评价标准,比较治疗前、治疗后第1、3、6月患者的各项指标变化,包括:体格检查、BASDAI、BASFI、BASMI评分;C反应蛋白、血沉、尿常规、血常规、肝肾功能检测;影像学等检测,并详细记录不良反应。
  研究结果:
  1.本研究5例患者输注UMSC后有3例(60%)出现发热,体温在38.5-39℃之间,所有发热患者体温在2-6小时内降至正常范围。
  2.患者治疗前、后疗效对比:所有患者治疗后较治疗前BASDAI、BASMI评分下降了,BASFI评分升高了;3例患者的血沉降低了,1例患者的C反应蛋白明显下降;所有患者的症状较前好转,并维持稳定。
  研究结论:
  脐带间充质干细胞治疗强直性脊柱炎是安全、有效的,在输注过程中及输注后未发现严重的并发症及不良反应,患者耐受性良好。能有效降低炎性指标,改善患者脊柱和关节的功能并提高生活质量。该研究为临床上进一步应用UMSC治疗强直性脊柱炎奠定了实践基础。
[硕士论文] 杨杰
影像医学与核医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:近年来,临床工作中发现患有甲状腺结节的患者越来越多,有关甲状腺癌发病率的问题已成为研究热点,高频率超声诊断仪的应用在甲状腺疾病筛查和诊断中的作用愈发明显。据Cooper DS等国外学者研究,甲状腺结节的检查率高达67%,尤以女性多见,在检出结节中恶性结节占5%~10%,并有逐年增高的趋势。因此,甲状腺癌的临床检测显得尤为重要,需要做到尽早发现与确诊,并采取积极治疗措施,从而达到显著改善患者病情的效果。现在,超声检测(ultrasonography,USG)已经成为甲状腺结节的常规检测方法,其主要依赖常规二维超声、彩色多普勒超声进行诊断,但单纯以普通二维超声方法对甲状腺结节进行良恶性诊断时只可以从病灶边界状态、钙化程度、回声、纵横比等方面作为鉴别指标,其敏感性、特异性不高。近些年来随着超声检查技术地快速发展和超声弹性成像技术越来越被临床所接受,为鉴别甲状腺结节的良恶性增添了新的检查方法。超声弹性成像(ultrasound elastography,UE)提供了组织硬度的图像,以图像形式来表现各组织的硬度情况,从而明显反映出各组织的不同硬度,以此作为判断组织良恶性的依据,该技术也逐渐成为了诊断良恶性甲状腺结节的新方法。
  在甲状腺超声弹性成像的应用方面按照不同激励方式可以将其分成如下几类:声辐射力脉冲弹性成像(acoustic radiation force impulse,ARFI)、压迫式弹性成像(compression elastography,CE)以及超声剪切波成像(supersonic shear-wave imaging,SSI),三者是目前使用最普遍的超声弹性成像技术,分别在甲状腺疾病的诊断中得到很好的应用。
  CE成像技术以静态方式实现,也可以将其称为弹性应变成像(strain elastography,SE),该成像技术在临床应用方面出现最早。CE技术的加压过程通过手持探头实现,从探头轴线方向对相应组织区域产生纵向压迫感,从而引起组织微小变形,并通过超声波监测跟踪变形状态,之后采用复合相关法分析变形组织在压缩前以及压缩后得到的回波信号,同时计算出组织中的应变/位移情况,最后通过伪彩或者灰阶将其编码为所需的图像。ARFI成像技术的原理是通过声辐射力对特定组织区域的硬度与弹性进行测试,属于动态弹性成像方式。ARFI技术利用超声聚焦方式,通过探头发射低频声波脉冲来测试感兴趣组织,当测试区域的组织接收到激励后其内部产生微小变形同时生成朝四周各个方向传播的剪切波,对提取到的回波信号进行分析得到测试区的组织变形程度或者剪切波传播(shear wave velocity,SWV),从而获得感兴趣组织反馈的弹性信息。ARFI技术包括了声触诊组织量化(virtual touch tissue quantification,VTQ)以及声触诊组织成像(virtual touch tissue imaging,VTI)这两项技术,其中,VTI技术对组织纵向压缩形成的位移反馈信息进行收集后,再通过灰阶编码图像表现组织硬度与弹性状态。其中,较暗区域代表此处组织的硬度比较大,亮度较大的区域则说明此处的组织硬度比较低。VTQ技术先收集组织的横向变形信息,之后再计算剪切波传播速度便可得到组织的硬度与弹性状态,该技术也被称为点剪切波成像技术(point shear wave elastography,point SWE)。通常而言,剪切波在较高硬度组织内具有相对更快的传播速率,反之当组织硬度较低时传播速率也较小。本研究主要采用VTI技术中的弹性面积比(elastic area radio,EAR)与应变率比(strain rate,SR)对甲状腺结节进行定量评价,两者的应用有助于甲状腺良恶性结节的鉴别诊断,在诊断甲状腺结节时,超声检查的价值会有更大的体现。尽管如此,因合并弥漫性病变的甲状腺结节,受到基础疾病的影响,会引发组织的病变,对临床诊断结果有一定的影响。在合并及未合并弥漫性病变的甲状腺结节诊断方面,上述两类超声弹性成像技术的应用标准并未一致,且两种弹性成像技术对甲状腺结节诊断价值的对比研究目前文献研究尚少。
  目的:
  1、研究合并与未合并弥漫性病变的甲状腺结节的弹性情况,为甲状腺良恶性结节的鉴别诊断提供依据;
  2、比较声触诊组织成像(VTI)弹性面积比与应变率比对合并与未合并弥漫性病变的甲状腺结节的诊断价值。
  方法:
  1、临床资料:
  选择2014年3~12月于本院就诊的疑似甲状腺结节患者72例(共84个结节),均经病理检查证实。选定的样本要具备:①结节都是实性的,或者实性占主导;②结节的直径为5~40mm;③结节内部不存在出现明显钙化、液化的区域。其中男性患者20人,女性患者52人;年龄最大者为65岁,最小者为32岁(45.1±9.6)岁。经病理证实可知,共有39个合并弥漫性病变结节(包含26个结节性甲状腺肿,13个合并桥本氏甲状腺炎),恶性结节和良性结节分别为22个和17个;共有45个未合并弥漫性病变结节,恶性结节和良性结节分别为30个和15个。
  2、仪器与方法
  对患者实施检查,运用的都是常规超声和内置VTI软件的超声诊断仪。使用的S2000超声诊断仪,由德国西门子研制,内置VTI软件,所用探头为9L4,其频率最小为4MHz,最大为9MHz。患者保持仰卧姿势,将颈部完全显露出来,保持均匀的呼吸状态,将增益、焦点和深度调到合适值,对患者的甲状腺结节的声像图特征进行细致观察,详细记录,将诊断仪调节到“EI”模式,将取样框设定为病灶范围的两到三倍。患者短暂停止呼吸,医生将探头置于患者病灶处,在质量分数大于等于60时,保存图像,挑选成像良好的VTI图像,通过ImageJ软件进行选取,将结节在常规二维超声成像和VTI成像的面积分别记录下来。此外,还要选取甲状腺组织当做参照物,其结节深度要相同,将结节的应变率记作A,尺寸、深度都相同的甲状腺组织的应变率记作B,所有的结节都要选取5帧可信图像,计算出均值。将显示的结节面积除以常规超声显示的结节面积,就可得到EAR;SR=B/A。
  3、统计学分析
  进行统计运用的是SPSS19.0软件。使用(x)±s表示计量资料,通过t检验进行比较;比较计数资料使用的是x2检验。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价EAR、SR对甲状腺结节的诊断效能,运用Z检验来比较曲线下面积(AUC)。P<0.05意味着差异有统计学意义。
  结果:
  1、常规超声、EAR、SR对甲状腺结节的诊断结果:
  1.1、运用常规超声波来诊断未合并弥漫性病变良恶性结节,其灵敏度为66.7%、特异度为88.3%、准确率为77.8%,EAR依次是73.3%、90.0%、84.4%,8R依次是80.0%、86.7%、84.4%。相对于常规超声,EAR、SR的灵敏度、特异度、准确率的P均<0.05;EAR特异度、灵敏度与SR比较,P均<0.05,二者准确率比较,P>0.05。
  1.2、运用常规超声诊断合并弥漫性病变良恶性结节,其灵敏度为70.6%、特异度为77.3%、准确率74.4%,EAR依次是82.4%、81.8%、82.1%,SR依次是76.5%、86.4%、82.1%。相对于常规超声,EAR、SR的灵敏度、特异度、准确率的P均<0.05;EAR特异度、灵敏度和SR对比可知,P均<0.05,对比两者的准确率,P>0.05。
  1.3、常规超声、EAR、SR对合并与未合并弥漫性病变良恶性结节诊断的特异度、准确率比较,P均<0.05。
  2、良恶性结节的EAR、SR比较
  2.1、合并弥漫性病变组良性结节EAR明显低于恶性结节{(0.92±0.23)vs(1.33±0.13),P<0.05}、良性结节SR明显低于恶性结节{(3.05±1.17)vs(4.76±1.06),P<0.05};
  2.2、未合并弥漫性病变组良性结节EAR亦明显低于恶性结节{(0.93±0.21)vs(1.30±0.17),P<0.05}、良性结节SR亦明显低于恶性结节{(3.77±2.40)vs(5.35±1.57),P<0.05}。
  3、EAR、SR对甲状腺结节的诊断效能
  EAR诊断合并弥漫性病变结节的截断值为1.06,诊断未合并弥漫性病变结节的截断值为0.89,两者的曲线下面积都是0.877,对比它们的曲线下面积,P>0.05。SR诊断合并弥漫性病变结节的截断值为3.48,诊断未合并弥漫性病变结节的截断值为3.62,两者的曲线下面积依次为0.869、0.772,对比它们的曲线下面积,P>0.05。
  结论:
  对合并与未合并弥漫性病变甲状腺良恶性结节进行鉴别诊断,VTI弹性面积比及应变率比都有良好的效果,提高超声鉴别诊断甲状腺良恶性结节的灵敏度、特异度和准确率,但两者的鉴别诊断效能相差不大。在鉴别诊断甲状腺良恶性结节时,运用超声弹性成像技术,为临床诊断工作提供了新方法,显示出在甲状腺疾病临床诊断中的广阔前景。
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