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[硕士论文] 巫海锋
外科学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  睾丸是生殖系统的重要器官,胚胎期其发育经历了形态、结构、功能及位置等系列变化,与整个泌尿生殖系统特别是外生殖系统的形态、结构、功能等发育(畸形、异常等)密切相关,近年来,随着“睾丸发育不全综合征”(testicular dysgenesis syndrome, TDS)以及“成人疾病胎源/发育源学说”(Fetal Origin of Adult Disease, FOAD)和“健康与疾病的发育源说”(Developmental Origins of Health and Disease, DOHAD)等研究的逐步深入,胚胎期睾丸发育的研究显得越来越重要。胚胎期睾丸的正常发育需要伴随正常的下降过程,反之,如果下降过程异常则发育必然受到影响。因此睾丸下降过程及其影响因素也是研究睾丸发育的重要方面。既往,在这方面比较集中的是对睾丸下降调控机理的研究,而对睾丸下降发育的相关结构研究则很不够。事实上,胚胎期的睾丸是一个与诸多毗连或相邻结构密切关联的器官,比如其头侧的悬韧带、尾侧的引带,周围的腹股沟管结构以及直到生后并伴随终生的附睾、鞘膜等。提示睾丸的下降发育涉及多种组织、结构,是一个相当复杂的过程,特别是在胚胎发育期这些组织结构的形态、位置随时间不断变化、移位,甚至消失,更给相关研究带来很大困难。致使既往不少研究结果及资料大多是局部的和某个特定时间点的,未能给出个整体的、综合的、纵向时序性的印象及结论。基于此,本研究探索运用三维组织学重建技术(3D histology reconstruction),在显微组织学水平重建出睾丸下降发育的几个重要时间点的泌尿生殖系统重要结构,希望能把睾丸、附睾、引带及膀胱等作为一个密切关联的整体进行研究,通过观察正常及经典外源性雌激素(EEs)己烯雌酚(DES)实验影响条件下,它们的形态变化及位置关系,从立体形态学的角度研究睾丸下降的大致过程及其毗邻和影响关系,为进一步的发育及影响—效应研究提供基础。
  方法:
  ⑴取以上正常组 GD15、GD17、GD19胎鼠及 PD3、PD7仔鼠和对照组、实验组 GD19胎鼠以20μm厚度行连续切片,切片间隔取片后行HE染色,封片后按顺序拍摄、存储,借助 photoshop软件将图片配准,运用3D-doctor软件进行三维重建,并对图像进行研究分析。⑵取以上正常组GD19胎鼠以10μm厚度行连续切片,切片间隔取片后行免疫组化S100法处理,封片后按顺序拍摄、存储,借助 photoshop软件将图片配准,运用3D-doctor软件进行三维重建,并对图像进行研究分析。
  结果:
  ①三维组织学重建技术观察睾丸下降:系统性观察:三维组织学重建技术可以将小鼠的泌尿生殖系统主要器官形态重建出来进行系统性观察,通过软件自由旋转可任意角度观察整个系统,通过不同时间点的重建图像研究,可以了解睾丸下降过程中睾丸及相关结构的位置和形态变化,此外,还可通过软件去除某些结构,对被阻挡部分的器官进行详细观察研究;重点结构的观察:将睾丸、附睾、引带三者作为一个研究整体进行重点观察,观察三者的相对位置关系发现:睾丸与附睾头部相连,睾丸下极与附睾尾有引带组织相连,往下延伸包绕附睾尾与输精管返折部分,最终融合而终止于腹股沟内侧壁,但在显微下观察,睾丸与附睾相连部分的引带组织在细胞形态上与附睾尾向下延伸的引带有所不同;附睾尾的位置始终位于睾丸底部之下,附睾下降先于睾丸;在孕期,附睾将睾丸半包绕,出生后,附睾将睾丸的上下极均包绕其中,使睾丸位置相对固定;局部结构的观察:引带(附睾尾向下延伸部分)形态形如锥体状,基底部体积较大,上部较小,出生后引带开始退化,呈现条索状;另外,运用免疫组化 S100显色法可发现引带组织上的支配神经,神经也可标记重建,并在重建出来的图像中观察到神经的大致走向;重建泌尿生殖系统后可自动获得各组织器官的形态学参数,这些形态学参数可进行统计学分析,特别对于不规则的组织、器官,如附睾等,这些形态学参数的获得或许更加弥足珍贵;小鼠双侧睾丸形态大小无明显差异,左侧睾丸先于右侧下降。在 GD15时,双侧睾丸位置仍然很高,位于肾脏下极平面,GD17时,睾丸开始远离肾下极而降至膀胱中部以上,GD19时,睾丸明显远离肾脏,左侧睾丸降至膀胱中部以下,而右侧睾丸位置仍在膀胱中部以上,出生后至PD3时,左侧睾丸下降速度减缓,右侧睾丸下降速度增快,此时双侧睾丸位置基本位于同一水平,PD7时,左侧睾丸下降速度加快,下降程度比右侧大,最终左侧睾丸的位置低于右侧。总的来说,左侧睾丸的下降幅度比右侧大。此外,伴随着睾丸的下降,附睾和引带的形态亦发生了改变。在孕期附睾尾部较短小及粗大,该期附睾并未上下将睾丸包绕,睾丸的上极突出附睾头以上,此时引带的体积相对较大,呈锥体状;出生后附睾尾部变得细小及冗长,此时附睾已将睾丸的上下极完全包绕,使睾丸的位置相对固定,而此期引带亦开始退化为索状组织,形态上较细长。②DES对睾丸下降过程的影响:正常情况下,小鼠双侧睾丸呈现左低右高表现,左侧睾丸比右侧先下降,而且双侧睾丸较圆润,近似球状,经DES处理后,睾丸明显下降受阻,主要表现在左侧睾丸,左侧睾丸均比右侧睾丸位置高,且随DES浓度增加,受影响程度越大;另外,睾丸的形态亦发生了改变,双侧睾丸变得细长,形如梭状,DES剂量在0.5μ g/kg/d和25μ g/kg/d时表现为甚;测量小鼠双侧睾丸体积及表面积参数后进行比较可以得出:正常条件下,左侧睾丸体积及表面积比右侧大,DES作用后其体积和表面积均减小,且随DES浓度增加,减小越明显。正常组与对照组比较,P>0.05,无明显统计学意义,正常组与实验组(I、II、III)比较,P<0.05,差别均有统计学意义。实验组小鼠睾丸体积与表面积均比正常组减小,而且左侧减小的程度比右侧大,随着DES浓度的升高,减小越明显;测量小鼠双侧附睾体积及表面积参数后进行比较可以得出:正常条件下,左侧附睾体积及表面积比右侧大。对于附睾体积,实验组与正常组比较,P<0.05,差别均有统计学意义,实验组双侧附睾的体积均减小,左侧减少程度明显大于右侧,随DES浓度增高,减小的程度亦不同;对于附睾表面积,正常组与实验组比较,实验各组左侧附睾表面积亦明显减少,但右侧未减小,实验组I和实验组III右侧附睾表面积与正常组大致相当,而实验组II右侧附睾表面积却大于正常组。
  结论:
  ⑴三维组织学重建技术可应用于观察睾丸下降的动态过程,可从系统-重点-局部进行全方位任意角度的观察,并可获得相关形态学参数,特别是对于不规则的器官,从形态上难以辨别其差异性,在获得形态参数后可进行统计分析得出差异性;⑵运用免疫组化S100显色法可标记出引带的神经支配,并可重建出来了解其大致走向;⑶睾丸、附睾、引带三者位置关系紧密,睾丸上极与附睾头连接,睾丸下极与附睾尾连接,向下包绕附睾尾与输精管返折处,最终融合而终止于腹股沟内侧壁,它们的位置和发育变化相互联系,在研究睾丸下降过程时应将其作为一个整体;⑷小鼠双侧睾丸下降在时间上不同步,左侧睾丸比右侧睾丸先下降;在孕期,睾丸从位于肾脏下极开始下降至膀胱,再到膀胱以下而进入阴囊,最终是左侧睾丸位置比右侧底,而且左侧睾丸经历的演变路线比右侧长,提示左侧睾丸的演变过程比右侧更加复杂;⑸EEs对睾丸、附睾、引带等生殖系统组织器官的发育可产生影响,接触浓度越大,影响越明显。此外,EEs对双侧睾丸、附睾的影响不一致,左侧更加容易受影响。三维组织学重建技术可以很好地、系统加局部地显示甚至量化出这种影响。
[硕士论文] 邓翼遥
内科学 大连医科大学 2016(学位年度)
摘要:背景:慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)影响超过全球10%人口的健康,带来巨大的经济和健康负担。肾间质纤维化是慢性肾脏病进展的共同病理表现,而肌成纤维细胞增多是导致肾间质纤维化的核心事件。关于肌成纤维细胞的来源一直存在争议,新近有学者运用遗传命运示踪技术发现,周细胞是肌成纤维细胞的主要来源。周细胞与血管内皮细胞及肾小管上皮细胞间存在对话机制,如TGF通路、PDGF通路、VEGF通路等,形成了复杂的信号交互网络。另有学者研究发现,这些对话机制中的关键受体蛋白均受到核心岩藻糖基化的修饰,核心岩藻糖基化可能在这些信号网络中发挥着重要作用。
  目的:探讨周细胞核心岩藻糖基化在肾间质纤维化中的作用。
  方法:我们选取了2015年1月至2015年12月32例肾活检确诊为IgA肾病的患者,观察患者临床指标,肾间质核心岩藻糖基化水平及肾间质周细胞脱离、转分化的变化情况,并进行相关性分析。体外研究我们建立了原代肾脏周细胞分离培养技术平台,即采用PDGFRβ标记C57BL6小鼠肾脏周细胞,利用无菌流式分选和磁珠分选出周细胞,并对分选后的细胞进行培养及鉴定。采用TGFβ1刺激周细胞,建立体外周细胞-肌成纤维细胞转分化模型,进一步观察TGFβ1刺激24h,48h后周细胞TGFβ、PDGF通路关键蛋白的核心岩藻糖基化水平变化及向肌成纤维细胞转分化情况。体内研究我们采用单侧输尿管梗阻(UUO) C57BL/6小鼠肾间质纤维化模型,观察UUO模型1、3、7天中周细胞核心岩藻糖基化水平变化及周细胞从微血管脱离、向肌成纤维细胞转分化等情况。体外采用FUT8siRNA瞬时转染周细胞,降低周细胞核心岩藻糖基化水平,观察其对周细胞转分化的影响。体内采用FUT8shRNA腺病毒尾静脉注射,降低体内核心岩藻糖基化水平,观察其对周细胞脱离、转分化及肾间质纤维化的影响。
  结果:在不同牛津分型的IgA肾病的患者中,观察到肾间质周细胞脱离内皮细胞、转分化为肌成纤维细胞及周细胞核心岩藻糖基化水平升高。在体外周细胞转分化模型中发现,周细胞在24h即开始出现α-SMA表达,48hα-SMA表达明显增多,同时伴随着核心岩藻糖基化水平的增高。在小鼠UUO模型中我们观察到随输尿管梗阻时间的延长,肾间质纤维化程度逐渐加重,同时发现核心岩藻糖基化水平呈现逐渐升高趋势,以及周细胞脱离内皮细胞转分化为肌成纤维细胞。而在抑制体外及体内的核心岩藻糖基化水平后,发现UUO模型中肾间质纤维化明显减轻,而周细胞脱离及转分化也明显降低。
  结论:通过体内、体外及临床研究,我们发现在肾间质纤维化过程中核心岩藻糖基化对周细胞-肌成纤维细胞转分化具有重要的调控作用,这一结果可能与对周细胞TGFβ,PDGF信号通路活化的抑制有关。这可能为治疗慢性肾脏病肾间质纤维化的提供一个潜在的干预靶点及治疗新思路。
[博士论文] 王建一
临床医学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2016(学位年度)
摘要:成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)是一种以骨骼脆性增加、骨量减少为特征的单基因遗传病。Ⅵ型OI是常染色体隐性遗传、表现为严重骨骼畸形、血清色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)含量下降的罕见类型OI。PEDF是一种由SERPINF1基因编码的分泌性糖蛋白,在骨代谢中可能通过多种信号通路调节成骨细胞和破骨细胞活性、并与血管内皮生长因子(vascularepithelial growth factor,VEGF)相互作用从而影响骨骼矿化。
  目的:本研究旨在分析Ⅵ型OI患者的表型特征,检测致病基因SERPINF1的突变类型,同时检测134例不同类型OI患者血清PEDF水平,分析其在Ⅵ型OI患者诊断和治疗过程中的价值,并探讨PEDF在OI发病机制中可能的作用。
  方法:纳入来自五个非近亲婚配家系的六例OI患者,评估临床表现、血清钙磷及骨转换指标水平和骨骼X线表现。采用双能X线吸收仪(dual energy X-rayabsorptiometry,DXA)测量骨密度。采用自主设计的基因芯片,通过二代测序技术进行致病基因突变检测。纳入94例分子诊断明确及41例临床诊断的OI患者、6例SERPINF1基因突变携带者及24例年龄性别匹配的正常对照。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PEDF含量。分析血清PEDF水平与患者的年龄、性别、身高、体重、身体质量指数、骨转换指标、25羟维生素D、甲状旁腺激素、骨密度、疾病严重程度及双膦酸盐疗效的相关性。
  结果:六例患者均婴幼儿起病,具有四肢长骨屈曲、脊柱侧凸、后凸等不同程度的骨骼畸形,无蓝色巩膜、牙本质发育不全或听力障碍;影像学表现为严重骨质疏松、长骨干骺端爆米花样改变、骨骼延迟愈合等。致病基因检测提示一例患者为第3外显子纯合突变,c.271_279dupGCCCTCTCG(p.Ala91_Ser93dup);一例患者为第3内含子和第5外显子复合杂合突变,c.283+1G<T,c.498_499delCA(p.Arg167SerfsX35);一例患者为第8外显子纯合突变,c.1202_1203delCA(p.Thr401ArgfsX);一例患者为第3外显子复合杂合突变,c.184G<A(p.Gly62Ser),c.271_279dupGCCCTCTCG(p.Ala91_Ser93dup);最后来自同一家系的两例患者中检测到第4外显子杂合突变,c.397C<T(p.Gln133X)。本研究共检出5种SERPINF1基因的新突变。上述基因突变使成骨细胞分泌的PEDF表达水平显著下降(0.0001-3.93μg/ml)。血清PEDF含量测定提示六例Ⅵ型OI患者的血清PEDF含量较年龄、性别匹配的其他基因型和Sillence分型的OI患者、正常对照及SERPINF1基因突变携带者均显著下降(P<0.01);双膦酸盐治疗前后血清PEDF含量、骨转换指标、骨密度无显著变化(P=0.58,0.78,0.11,0.37,0.83);体重与血清PEDF水平呈正相关(PEDF=6.48+0.378×体重Z值,r2=0.127,P=0.003)。
  结论:本研究首次报道国内SERPINF1基因突变导致罕见的常染色体隐性遗传Ⅵ型OI患者的临床特点,在中国患者中检测出五种SERPINF1基因的新型突变。血清PEDF含量显著下降对Ⅵ型OI患者具有独特的诊断价值,但PEDF在Ⅵ型OI发病机制中的作用有待进一步研究。脂肪细胞能够大量分泌PEDF,故体重可以是血清PEDF水平的影响因素之一。双膦酸盐治疗不影响Ⅵ型OI患者的血清PEDF水平、骨转换指标和骨密度,因此新型单克隆抗体类生物制剂在Ⅵ型OI的治疗中充满前景。
[硕士论文] 王超超
外科学(骨外科) 青海大学 2016(学位年度)
摘要:目的:比较初次全膝关节置术中不同外翻髌骨程度与术后获得性低位髌骨的发生率。
  方法:将61位84例因膝关节骨性关节炎行初次全膝关节置换术的患者,随机分为髌骨外翻90°±5°组(组1:共37位45例)及髌骨外翻180°±10°组(组2:共28位39例),手术方法全部采取髌前正中切口,经髌旁内侧入路。对所有85例行手术的患者进行膝关节X线片随访。应用Insall-salvati法测量髌骨的高度,观察低位髌骨在各组中的发生情况,并进行比较,以Blackburne-Peel指数排除术后假性低位髌骨。本研究以髌韧带短缩大于5%以上定性为出现了髌骨高度改变。
  结果:组1中共有7例出现髌韧带短缩(发生率为15.6%),而组2中出现髌韧带缩短的共有20例(发生率为51.3%)。术中出血及手术时间等情况无显著差异。
  结论:初次全膝关节置换术中过度外翻髌骨可导致术后髌腱短缩及髌骨高度降低,术中髌骨外翻90°±5°有利于减少获得性低位髌骨的发生率。
[硕士论文] 郭磊
骨外科学 解放军总医院;军医进修学院;中国人民解放军总医院;解放军医学院 2016(学位年度)
摘要:目的:观察大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白(Aβ)的表达变化,并应用γ分泌酶抑制剂DAPT降低Aβ蛋白表达,观察其对大鼠功能恢复、神经元存活和小胶质细胞活化的影响,探讨Aβ蛋白在大鼠脊髓损伤中的作用机制。
  方法:实验一采用SD大鼠128只,随机分为轻度损伤组(SCI-M组)、中度损伤组(SCI-Mo组)、重度损伤组(SCI-S组)和假手术组(Sham组),每组各32只。按照Allen's打击法进行T8节段脊髓打击损伤,分别采用(1) BBB评分评估大鼠运动功能;(2)HE染色观察脊髓损伤区形态学改变;(3)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血液及脑脊液中Aβ蛋白浓度水平;(4)免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脊髓组织中APP、Aβ表达变化;(5)对大鼠血清和脑脊液中Aβ蛋白水平与BBB评分做Pearson相关性分析;实验二采用SD大鼠96只,随机分为脊髓损伤组(SCI)、治疗组(DAPT)、假手术组(Sham),每组各32只。分别采用(1) BBB评分评估大鼠运动功能恢复情况;(2)HE染色观察脊髓损伤区形态学变化;(3)尼氏染色观察脊髓前角运动神经元形态及神经元细胞计数;(4)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和脑脊液中Aβ蛋白浓度水平,以及血清中IL-1β、 IL-6、TNF-α等炎症因子水平;(5)免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织中APP和Aβ表达变化;(6)免疫荧光试验观察脊髓中Aβ、Iba-1等阳性细胞及共染情况。
  结果:实验一(1)大鼠SCI术后BBB评分下降;(2)大鼠SCI后12h血液及脑脊液中Aβ蛋白水平开始升高,至损伤后3d升至高峰(P<0.05),各损伤组蛋白水平升高幅度随损伤程度加重而增高,损伤后28d SCI-S组仍高于Sham组水平(P<0.05);(3)SCI后1d和3d大鼠脊髓组织中Aβ蛋白表达明显增高(P<0.05),各损伤组脊髓组织Aβ蛋白表达水平随损伤严重程度加重而增加;(4) SCI后3d大鼠血清和脑脊液Aβ蛋白水平与损伤后28d运动功能BBB评分均呈负相关(P<0.01)。实验二(1) DAPT组大鼠运动功能评分自SCI后14d始明显高于SCI组(P<0.05);(2)HE染色发现SCI后3d和14d DAPT组大鼠脊髓背侧白质和灰质区坏死程度明显轻于SCI组;(3)尼氏染色发现SCI后3d和14d DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元计数明显高于SCI组(P<0.05);(4) ELISA法检测发现SCI后12h DAPT组大鼠血清和脑脊液中Aβ蛋白水平明显低于SCI组(P<0.05);(5) Western blot检测发现SCI后3d DAPT组和SCI组大鼠脊髓组织APP蛋白表达较Sham组均明显增高(P<0.05),DAPT组Aβ蛋白表达较SCI组明显降低(P<0.05);(6)免疫荧光实验发现DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元区Aβ和Iba-1阳性细胞数明显低于SCI组(P<0.05),免疫荧光共染发现DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元区NeuN阳性神经元细胞中Aβ表达较SCI组明显减少(P<0.05);(7)损伤后3d DAPT组大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α水平较SCI组明显降低(P<0.05)。
  结论:(1)大鼠SCI后早期Aβ蛋白表达升高,其升高水平呈现时间依赖性,且Aβ蛋白升高水平随SCI严重程度加重而增高。(2)大鼠SCI后血清和脑脊液中Aβ蛋白水平越高,运动功能恢复越差,监测血清和脑脊液中Aβ蛋白水平对于脊髓损伤的评估可能具有一定的参考价值。(3)大鼠SCI后脊髓中APP、Aβ蛋白表达增多,导致神经元细胞中Aβ蛋白沉积,能够引起小胶质细胞活动、释放炎症因子,导致神经元的死亡。(4)应用DAPT能够有效降低大鼠SCI后Aβ蛋白表达水平,促进运动功能恢复。其机制可能是通过减少急性期小胶质细胞激活,减轻局部炎症反应程度,从而改善了神经元的存活环境,促进了运动功能的恢复。
[硕士论文] 平牧野
临床检验诊断学 解放军总医院;军医进修学院;中国人民解放军总医院;解放军医学院 2016(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过实验观察肾小球疾病患者尿红细胞形态学特点并分析其相关参数(包括红细胞大小、形状),结合病理学结果,探讨两者间的联系,寻求其在肾小球疾病中的临床意义。
  方法:
  选择我院2014年10月-2015年10月经病理学首诊确诊的115例肾小球疾病患者,于活检前留取其晨尿样,检测观察其尿红细胞形态并分析尿红细胞形态学相关参数(尿红细胞大小、形状)进行前瞻性分析。
  结果:
  1.115例肾小球疾病分布:原发性肾小球疾病87例(膜性肾病41例,IgA肾病28例,微小病变性肾病10例,其他原发性肾小球疾病8例);继发性肾小球疾病28例(糖尿病肾病13例,狼疮肾炎5例,高血压肾损害4例,其他继发性肾小球疾病6例)。
  2.原发性肾小球疾病组血尿芽胞红细胞检出率常高于继发性肾小球疾病组(42.53%vs17.86%,P=0.018);同时,原发性肾小球疾病组芽胞红细胞百分率分布范围高值在50%以上,继发性肾小球疾病组芽胞红细胞百分率分布范围高值在20%以下。
  3.多因素logistics分析显示系膜细胞增殖与芽孢红细胞的出现相关(P=0.034)。
  4.系膜细胞呈局灶、节段、轻度增生(M0)的IgA肾病患者,14.29%的血尿样本芽孢红细胞百分率在5%以上;系膜细胞呈弥漫、球性、中重度增生(M1)的IgA肾病患者,66.67%的血尿样本芽孢红细胞百分率在5%以上,二者相比有统计学意义(P=0.036),同时,M1较M0时的芽孢红细胞百分率均值高,分布范围广。
  5.基底膜中度增厚的膜性肾病患者血尿样本茅孢红细胞百分率多集中在5%以下,而轻度增厚和明显增厚时,芽孢红细胞的百分率较为离散;免疫复合物沉积产生空泡伴随(不伴随)钉突时,血尿样本芽孢红细胞的百分率集中在10%以下,产生双轨时,血尿样本芽孢红细胞的百分率均值近10%,高值在20%以上。
  6.原发性肾小球疾病组血尿中95%为肾性血尿,5%为混合性血尿;继发性肾小球疾病组血尿中62.5%为肾性血尿,25%为混合性血尿,12.5%为非肾性血尿。
  7.出现芽孢形红细胞的样本中95.24%为肾性血尿,4.76%为混合性血尿,非肾性血尿中未见芽孢形红细胞。芽孢形红细胞的出现一定伴随着其他G红细胞的出现。
  8.红细胞大小-形状位相图可根据形状特点分为横条形、倒三角形、拖尾形和散点形四种。四种位相图在原发性肾小球疾病组和继发性肾小球疾病组中出现率有所不同(P=0.009):在原发性肾小球疾病组均有出现,继发性肾小球疾病组仅出现横条形和拖尾形。
  9.在原发性肾小球疾病中,膜性肾病的位相图86.36%为横条形,IgA肾病的位相图38.10%为倒三角形,28.57%为拖尾形,23.81%为横条形。
  结论:
  1.原发性肾小球疾病患者较继发性肾小球疾病患者更易出现芽孢形红细胞,同时,原发性肾小球疾病患者血尿的芽胞红细胞百分率分布范围明显宽于继发性肾小球疾病;
  2.系膜细胞增殖是影响芽孢红细胞产生的重要因素,呈现系膜增殖越严重,越易出现芽孢形红细胞的趋势;
  3.系膜细胞增殖严重的IgA肾病患者血尿样本更易出现芽孢红细胞,且其百分率常高于5%,易判为肾性血尿而具有诊断意义,而系膜细胞增殖轻微的IgA肾病患者血尿样本,则易被判为混合性血尿,从而导致初筛的漏诊。
  4.膜性肾病患者血尿中芽孢红细胞的出现与基底膜增厚及免疫复合物沉积未发现相关性,但基底膜增厚程度与芽孢红细胞百分率呈现“中间低两头高”的趋势;同时,免疫复合物沉积严重时,其芽孢红细胞百分率常较高。
  5.茅孢形红细胞的产生必须经过渗透压梯度的改变和溶血环境的浸泡,其可间接证明肾小球滤过屏障病变的存在。
  6.原发性肾小球疾病患者血尿红细胞大小-形状位相图以横条形和倒三角形为主,继发性肾小球疾病以拖尾形为主。在原发性肾小球疾病中,膜性肾病患者多表现为横条形位相图, IgA肾病患者多表现为倒三角形位相图。其可帮助肾小球疾病的初筛。
[博士论文] 李彦明
外科学(骨外) 第二军医大学 2016(学位年度)
摘要:成人退变性脊柱侧凸(adult degenerative scoliosis,ADS)是指既往无脊柱侧凸的病史,骨骼成熟后出现的脊柱侧凸,脊柱冠状面Cobb角>10°。常见于50岁以上的中老年人,累及腰椎或者胸腰段脊柱。患者椎间盘和关节突关节退变呈不对称性。这会导致脊柱节段负荷的不对称,而脊柱负荷的不对称反过来会导致脊柱出现不对称畸形。这样就形成了恶性循环。由于目前对该病的发病原因及进展因素认识不清,尚无法有效预防疾病发生和进展。因此,深入研究该疾病发生、发展的机制显得尤为重要,能够为疾病的早期防治奠定理论基础。
  研究表明,遗传易感性的差异可能是导致ADS发生和发展的原因。因此,一些受到基因多态性调控且能够影响退变过程的代谢通路应是脊柱侧凸病因学机制研究的突破口,其中MnSOD-ROS-MMPs通路在退变性疾病研究中的作用已被研究证实,然而此通路在ADS中的作用未见文献报道。同时比较公认的是,椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是退变性脊柱疾病的始发因素,包括ADS。IDD的发病机制至今不明。近年来一系列研究认为遗传因素在IDD过程中可能发挥了较大作用。MnSOD参与很多退变性疾病的发病过程,其基因启动子调节区存在SNP,然而该SNP在IDD中的作用未见报道。
  ADS患者一旦确诊,就需要脊柱外科医师给予影像学评估,以明确患者的病情、决定进一步治疗方案和估计预后。然而目前对ADS患者的影像学参数的研究较少。影响ADS患者矢状面平衡相关参数的信息,学者们知之甚少。然而这些参数与患者的症状和健康状况相关,并且可以用来指导治疗策略、制定手术计划。因此,探索矢状面平衡与ADS患者冠状面和矢状面影像学参数之间的关系显得至关重要。通常这些参数的获得都需要站立位拍片。但ADS患者大多为老年人,有相当一部分患者因其他合并疾病,站立困难甚至无法站立。如果ADS患者可以以仰卧位X线片代替站立位X线片,就会给临床检查带来很大方便,ADS患者仰卧位与站立位Cobb角的关系目前还未见报道。
  目的:
  1、通过检测ADS患者顶椎及下端椎凹、凸侧关节囊中核因子E2相关因子2(NRF2)、超氧化物歧化酶2(SOD2或MnSOD)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平特点,并与腰椎管狭窄症(lumbar spinal stenosis,LSS)患者对应位置各因子的表达比较,以明确ADS的发病是否与实验中的各因子表达相关。
  2、通过检测腰椎间盘退变(lumbar disc degeneration,LDD)患者和非LDD受试者的MnSOD单核苷酸多态性(SNP),探讨MnSOD基因SNP与LDD的关系。
  3、总结和描述ADS患者的影像学参数,并且探讨矢状面平衡和失衡的ADS患者中有显著差异的影像学参数,为ADS的影像学研究及疗效的评估提供可靠的参考。
  4、研究ADS患者站立位与仰卧位X线平片Cobb角之间的差别及相互关系,以简化ADS患者在诊断及随访中的检查过程。
  方法:
  1、ADS患者关节囊中NRF2、SOD2、MMP1、MMP2和MMP9的表达研究
  30例ADS患者作为实验组,30例腰椎管狭窄症(lumbar spinal stenosis,LSS)患者作为对照组。取ADS患者的项椎凸凹侧的下关节突关节囊、下端椎凹凸侧的关节突关节囊,同时取LSS患者的腰椎相应的关节囊,进行rtPCR定量分析,明确NRF2、SOD2、MMP1、MMP2和MMP9基因在各个位点的表达的情况,并分析比较病例组内各个位置的表达情况和病例组与对照组相同位置表达情况。
  2、MnSOD基因SNP与LDD的相关性研究
  采用病例-对照研究方法,60例中国汉族LDD患者与60例中国汉族非LDD患者,提取外周血中的基因组DNA,对MnSOD启动子调节区进行扩增并测序,观察其SNP与LDD的相关性。
  3、ADS患者影像学参数特征及其与矢状面平衡的关系分析
  回顾既往就诊的ADS患者的医疗记录。包括年龄、性别、冠状面Cobb角、顶椎椎体/椎间盘的位置、弯曲的方向、顶椎的旋转度、弯曲节段、胸椎后凸(TK)、腰椎前凸(LL)、胸腰椎后凸(TL)、骶骨角(SS)、骨盆倾斜角(PT)、骨盆入射角(PI)、矢状面垂直轴(SVA)和PI-LL。并根据患者矢状面平衡情况将患者分为2组:A组(失平衡,SVA>5cm)和B组(平衡组,SVA≤5cm)。在2组间进行人口学和放射学参数的比较。
  4、ADS患者站立位与仰卧位X线片之间Cobb角关系的研究
  前瞻性收集ADS患者的医学记录资料和放射学信息。患者同一时间摄站立位和仰卧位脊柱后前位X线片,记录侧凸冠状位顶椎、端椎的位置信息,测量患者的Cobb角和项椎旋转度。应用相关性和线性回归分析检测站立位和仰卧位X线平片的Cobb角和顶椎旋转的相关关系。
  结果:
  1、ADS患者自身比较:顶椎凹侧下关节突中NRF2、SOD2的表达显著低于凸侧,MMP1、MMP2的表达恰恰相反,凹侧显著高于凸侧,而MMP9的表达凹凸两侧的差别无显著性;下端椎凹凸双侧各因子的表达差异无显著性。LSS患者自身比较:各因子在不同位置的表达差异均无显著性。ADS患者和LSS患者顶椎间比较:ADS患者凹侧下关节突中NRF2、SOD2的表达显著低于LSS患者相对应的位置,而同样位置MMP1、MMP2、MMP9的表达ADS患者显著高于LSS患者,其中MMP9的差别相对较小;ADS患者凸侧下关节突中NRF2的表达与LSS患者无明显差异,SOD2的表达高于LSS患者,而同样位置MMP1、MMP2、MMP9的表达ADS患者显著高于LSS患者,其中MMP9的差别相对较小。ADS患者和LSS患者下端椎间比较:MMP1在ADS患者中的表达高于在LSS患者中的表达,其余各因子在下端椎凹凸侧的表达均无显著差异。
  2、MnSOD启动子区域存在SNP,为C/G突变,此位点为rs5746082。该基因的SNP分布在LDD组和对照组显著不同(P=0.001);其SNP分布与腰椎间盘退变严重程度和退变节段数量相关(P=0.033和P=0.019),但与退变节段位置无明显相关性(P>0.05)。
  3、该研究共纳入99例患者。其中,A组33例,B组66例;女性83例,男性16例;性别比为女∶男=5∶1。患者年龄的中位数为67岁(范围:41-92岁);冠状位Cobb角中位数为23°(范围:10-75°);侧凸长度中位数为5个椎体(范围:3-7个)。顶椎最常见的位置在L2-L3(81%),顶椎椎体旋转程度的中位数为2°(范围:1-3°)。我们的研究同时显示冠状面Cobb角和侧凸节段有显著相关性(r=0.23,P<0.005),同时冠状面Cobb角和顶椎旋转也显著相关(r=0.53,P<0.005)。至于矢状面平衡,矢状面失衡组和平衡组之间年龄、LL、PT、冠状面Cobb角、顶椎旋转度和PI-LL差异均有显著性(所有的P<0.05);然而,2组之间性别、TK、TL、SS和PI无显著性差异。
  4、共有94位ADS患者符合纳入标准,男性14例(15%),女性80例(85%),年龄41-92岁,平均67岁。平均仰卧位X线平片的Cobb角为21±10°,而平均站立位X线平片Cobb角为26±12°,差异有统计学意义(P<0.01)。仰卧位和站立位的顶椎旋转度分别为1.8±0.7和1.9±0.7,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示仰卧位和站立位X线平片之间的Cobb角强相关(r=0.92,P<0.01)。顶椎旋转度的相关系数为r=0.81(P<0.01)。由仰卧位预测站立位Cobb角的公式为:站立位Cobb角=1.15×仰卧位Cobb角+1.53(R2=0.838)。仰卧位Cobb角+5°约等于站立位Cobb角(P=0.413)。
  结论:
  1、ADS患者顶椎凹凸侧关节突退变程度不一致,凹侧退变重于凸侧。NRF2、SOD2、MMP1、MMP2在ADS患者顶椎凹凸侧的表达存在显著的差异。ADS患者这种凹凸侧表达的差异考虑为脊柱侧凸畸形引起凹、凸侧应力不同所导致;也可能为这种表达的差异引起凹凸侧关节突退变程度不同,从而引起脊柱双侧应力改变,最终导致脊柱侧凸畸形的产生。
  2、在中国汉族人群中,rs5746082位点的等位基因分布频率在LDD患者和非LDD人群显著不同。其SNP分布与腰椎间盘退变严重程度和退变节段数量相关,但与退变节段位置无明显相关性。MnSOD基因的SNP可能是腰椎间盘退变的危险因素。
  3、该研究发现ADS患者的冠状面Cobb角与侧凸节段和顶椎旋转度有较弱的相关性,但是该相关性有统计学意义。还有,矢状面平衡和失衡的ADS患者在年龄、冠状面Cobb角、LL、PT、和PI-LL方面均显著不同。
  4、ADS患者脊柱的仰卧后前位X线片能够提供站立位侧凸冠状位相似的信息。如Cobb角、顶椎旋转度在仰卧位和站立位X线片上高度相关。就冠状位指标而言,仰卧位X线Cobb角能预测站立位X线Cobb角,仰卧位片可代替正位片。
[硕士论文] 范文桔
泌尿外科学 广西医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:通过建立小型猪肾盂高压灌注模型研究肾盂高压与血尿的关系,并对其机制进行初步探讨。
  方法:成年雄性巴马小型猪20头,共40个肾脏,根据肾盂灌注压力将肾脏随机分为A、B、C、D、E组(n=8),各组灌注压力分别为:0.00kPa、6.67kPa、13.33kPa、20.00kPa、26.67kPa(1kPa=7.5mmHg)。各组均维持肾盂内灌注压力恒定45min,其中每灌注5min暂停并收集尿液标本1次,共灌注9次,若实验过程中出现有血凝块形成的严重血尿即结束灌注,解剖肾脏。对尿标本行尿红细胞计数检查,对肾脏标本行HE、Masson、Desmin和弹力纤维染色。对比观察各组出现血尿的时间、性质和程度,肾脏的解剖形态学及组织病理学情况。
  结果:1.肾盂高压灌注与血尿的关系:各组均有不同程度的血尿,其中所有样本均可见镜下血尿,肉眼血尿C组3/8例、D组6/8例、E组8/8例,严重血尿D组1/8例、E组6/8例(P<0.05);C、D、E组出现肉眼血尿的时间分别为(10.00±5.00)min、(9.17±3.76)min、(6.25±2.31)min。
  2.肾盂高压灌注与尿红细胞数的关系:各组灌注前血尿程度无统计学差异(P>0.05),A、B组各时间点血尿程度无统计学差异(P>0.05);开始灌注后,A、C、D三组间各时间点的血尿程度比较均有显著性差异(P<0.05)。
  3.肾盂高压灌注后肾脏表现:A、B组肾脏均未见明显颜色及形态学变化,C组的部分肾脏、D组和E组的所有肾脏随灌注时间的延长出现不同程度的花白斑、瘀斑,其中C组和D组的部分肾脏及E组的全部肾脏中可见肾集合系统穹窿部有不同程度的撕裂、出血并血凝块附着,发生率随灌注压力的增加而增加。
  4.肾盂高压灌注后肾脏组织病理改变:除A组肾脏组织病理正常外,其余各组均可见不同程度的泌尿小管扩张、穹窿部淤血。其中C、D、E组还可见集合系统移行上皮撕脱,部分肾脏甚至发生穹窿部撕裂现象,C组与E组撕裂发生率相比差异有统计学意义(P<0.05)。但C组撕裂伤仅局限于肾髓质区,D组1/8例和E组4/8例撕裂伤可达肾皮质区(P>0.05)。
  5.正常肾脏穹窿部特征:穹窿部为肾乳头和肾小盏的移行区,呈类“V”字形特殊结构,特殊染色显示穹窿部及其临近组织存在胶原纤维、肌纤维和弹性纤维,但分布不均匀,导致该部位是肾集合系统最薄弱的部位。
  结论:肾盂高压灌注不但会引起泌尿小管扩张、肾脏肿胀、花白斑、淤斑,还会导致集合系统损伤性血尿,并随肾盂灌注压力的增大而加重。当肾盂灌注压≤6.67kPa时血尿并不明显;灌注压达13.33kPa时开始出现肉眼血尿、集合系统上皮撕脱和穹窿部撕裂等;灌注压达到20.00kPa时,有诱发穹窿部严重撕裂及严重出血的可能;灌注压达26.67kPa时,穹窿部撕裂伤及血尿的发生率可达100%。实验证明:肾盂高压可以引起血尿,严重时可导致肾集合系统穹窿部撕裂性严重出血,发生机制与穹窿部的物理结构特点和肾脏纤维组织的分布有关。
[硕士论文] 谢波
运动医学 西南医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:关节镜外科作为运动医学的重要组成部分,其技术的发展,已成为与关节置换术并列的20世纪骨科领域重大进步。因肘关节周围结构密集,重要的血管和神经交错,在建立肘关节镜手术入路时要通过这些复杂的解剖结构,造成血管、神经损伤的风险较大,其中神经的损伤发生率相对高且后果严重,同时肘关节腔间隙不规则、狭窄、弧度大等解剖特点,使肘关节镜手术器械操作受限,从而限制了肘关节镜的发展。因此入路选择对肘关节镜的安全性、操作的灵活性都尤为重要。目前文献报道的肘关节镜术的常用手术入路有9个,其中垂直外侧入路与中外侧入路体表标准清楚,定位清晰,距离关节囊近,不易损伤桡神经;后正中入路与后外侧入路的周围无重要神经及血管因而安全;近端前内侧入路、前内侧入路、近端前外侧入路、前外侧入路、前上外侧入路周围有重要的神经及血管通过,因而仍有风险较大。同时由于肘关节镜的手术入路定位也有不同,其中前外侧入路定位差异大,其一(前外侧入路A)定位于肱骨外上髁远端3cm,前方1cm;其二(前外侧入路B)定位于肱骨外上髁远端1cm,前方1cm。究竟哪个入路的安全性较高还没明确的定论。为减少肘关节镜术的并发症,提高疗效,推动其临床应用,本课题通过研究不同入路的安全性,选择最为安全的入路,指导临床工作。
  方法:福尔马林浸泡的成人肘关节标本10个,标本无畸形、无损伤,没有接受过外科手术。应用标准肘关节镜的配置器材,解剖器械及测量工具:游标卡尺(精确到1mm)。操作前先于肘关节标本上,仔细触摸体表的解剖标志,并用龙胆紫标记其位置,同时标记肘关节镜所需测量的入路点。先注入20~30 ml水膨胀肘关节。于确定肘关节镜手术入路点,先选择近端前内侧入路处做3mm切口,仅穿透至皮下,然后止血钳分离皮下,用穿刺锥指向肘关节中心穿刺,有水流出后再穿刺锥带上镜鞘穿刺进入关节腔建立入路成功,同时镜鞘引流管开启入水口。生理盐水悬吊约2m高,引流入水。同样方法依次建立前内侧入路、近端前外侧入路、前上外侧入路、前外侧入路A、前外侧入路B。肘关节镜手术入路完成后,肘关节标本从上臂中段到前臂中段所有皮肤、皮下组织剔除,解剖分离出主要神经:尺、正中、桡神经;同时解剖分离肱动静脉以便观察。在肘关节标本上分别做所选肘关节镜手术入路点的解剖观察、解剖测量。在每一个需测量的肘关节镜手术入路点,将肘关节镜的镜鞘连同穿刺锥,指向肘关节的中心插入关节,并留在关节中,助手保持镜鞘的位置,测量屈肘90°位和伸直位下所选肘关节镜手术入路点与毗邻神经的距离(垂直投影距离),游标卡尺测量,精确到1mm,记录测量结果。比较每一个不同肘关节镜手术入路操作的安全性。考虑肘关节肱动脉在正中神经的外侧,较正中神经距离内侧入路更远,因而较正中神经更为安全,故主要测量近端前内侧入路,前内侧入路与尺神经的距离,近端前内侧入路,前内侧入路与正中神经的距离,近端前外侧入路,前外侧入路A,前外侧入路B,前上外侧入路与桡神经(深支)的距离。
  结果:肘关节镜入路点与周围神经关系及测量结果(见附件表格)。近端前内侧入路与正中神经的距离伸直位(9.6±2.36mm)屈曲90°位(13.4±2.63mm),前内侧入路与正中神经的距离伸直位(6.8±1.93mm)屈曲90°位(10.4±2.22mm);近端前内侧入路与尺神经的距离伸直位(11.7±2.58mm)屈曲90°位(15.4±2.63mm),前内侧入路与尺神经的距离伸直位(17.4±1.64mm)屈曲90°位(21.6±1.57mm);近端前外侧入路与桡神经的距离伸直位(7.0±1.69mm)屈曲90°位(10.2±1.61mm);前外侧入路A与桡神经(深支)的距离伸直位(2.6±1.07mm)屈曲90°位(5.6±2.06mm);前外侧入路B与桡神经(深支)的距离伸直位(3.4±1.35mm)屈曲90°位(7.8±2.25mm);前上外侧入路与桡神经(深支)的距离伸直位(5.1±1.66mm)屈曲90°位(8.1±1.85mm)。
  结论:⑴前外侧入路距离桡神经(深支)最近,临床操作最危险,前外侧入路B(位于肱骨外上髁远端1 cm,前方1cm)较A(位于肱骨外上髁远端3cm,前方1cm)安全,建议术中使用定位点B。⑵近端前内侧入路距离尺神经及正中神经在内侧入路中最远,为内侧入路中最安全。⑶近端前外侧入路在外侧入路中距离桡神经最远,为外侧最安全的入路。⑷比较屈曲90度与伸直比较,屈曲90度时神经离穿刺入路更远更安全。⑸比较近端前内侧入路与近端前外侧入路及体位变化,肘关节镜的初始入路选择屈曲90度,近端前内侧入路。
[硕士论文] 董海江
外科学 郑州大学 2016(学位年度)
摘要:背景:唇裂是较常见的颜面部先天性发育畸形,发病机制不甚明确,一期(初期)修复常在半岁之内进行,随着患者的生长发育,其唇鼻畸形逐渐显现,绝大多数患者需二期修复。其继发畸形程度呈现多样性,病变部位结构呈现一定的特殊性,其修复目的主要是功能的恢复和外观的修整。术前能准确认识唇裂患者骨骼异常及肌肉畸形的程度,实现精确、完美修复是整形外科的一个恒久的课题,为此我们进行了一系列的研究,在前期的研究中,应用64排螺旋CT三维重建对正常人梨状孔区域正常骨骼以及单侧唇裂患者梨状孔区域骨骼异常进行了深入探讨,其在唇腭裂畸形矫正手术中已经获得了良好的效果及临床意义。肌肉修复应与骨骼修复同等重要,在获得了64排螺旋CT三维重建骨骼对治疗唇裂畸形良好的效果后,我们更需一种有效的方式去检测正常人体唇鼻区肌肉的解剖特点及唇裂患者唇鼻区肌肉的解剖特点,借此评估唇裂患者畸形的程度及其个性差异情况,并由此来指导我们制定个性化的手术修复治疗方案,同时对我们的术后治疗效果进行相对评估。了解正常人体唇鼻区肌肉解剖特点是唇裂修复手术的基础,本实验通过临床观察单侧唇裂继发唇鼻畸形患者20例,对大体观状态及术中所见肌肉组织状态进行综合分析;同时对2具大体湿性标本进行解剖观察,分析10例磁共振对正常人体唇鼻区肌肉软组织的成像,探讨大体观状态下单侧唇裂继发唇鼻畸形的特点及分类,正常人体唇鼻区肌肉解剖特点,以及MRI在对人体唇鼻区肌肉解剖特点描绘的准确性及可行性。并为MRI检测单侧唇裂继发唇鼻畸形患者唇鼻区肌肉解剖特点的研究提供依据。
  目的:①提出大体观状态下单侧唇裂继发唇鼻畸形的特点及大致分类;②从唇裂修复的角度了解正常人体唇鼻区肌肉解剖特点及其综合检测方法;③探讨MRI检测人体唇鼻区肌肉软组织的准确性、可行性及实际意义。
  方法:⑴采用2014年9月至2015年9月郑州大学第一附属医院整形外科收治“单侧唇裂继发唇鼻畸形”患者20例,观察所收集单侧唇裂继发唇鼻畸形患者的外观改变情况,及术中探查患者唇鼻区的肌肉状态,对单侧唇裂术后继发唇鼻畸形患者的畸形程度进行统计和分类;⑵对两具(1男1女)大体湿性标本(由郑州大学基础医学院解剖教研室提供)唇鼻部进行分层解剖,观察正常人体标本唇鼻区肌肉的起止点、排列、走向、层次及交汇点等;⑶收集2014年9月至2015年9月间于郑州大学第一附属医院行非颌面部软组织疾病患者的头颅MRI影像信息10例,对患者的资料进行回顾性综合分析,观察MRI扫描及重建情况下,正常人体唇鼻区肌肉的起止点、排列、走向及层次等;⑷结合大体标本的观察结果以及院内收集的非唇裂患者相关头颅MRI检查结果,综合对比分析唇鼻区肌肉解剖特点,观察MRI描绘唇鼻区肌肉解剖特点的准确性及可行性。
  结果:①可根据唇鼻部外观形态改变和术中所见肌肉形态解剖,将单侧唇裂术后继发唇鼻畸形分为三度四类:轻度:即一类,鼻部外观形态改变较轻或无,其中鼻孔宽度及高度双侧差异〈2.0mm,术中所见组织改变较轻;唇部外观形态改变均较轻或无,术中所见组织改变较轻;中度:包括二类和三类:二类、鼻部外观形态改变明显,其中鼻孔宽度及高度双侧差异〉2.0mm,术中所见组织改变明显;唇部外观形态改变均较轻或无,术中所见组织改变较轻;三类、鼻部外观形态改变均较轻或无,其中鼻孔宽度及高度双侧差异〈2.0mm,术中所见组织改变较轻;唇部外观形态改变明显,术中所见组织改变明显;重度:鼻部外观形态改变明显,其中鼻孔宽度及高度双侧差异〉2.0mm,术中所见组织改变明显;且唇部外观形态改变明显,术中所见组织改变明显。②非颌面部软组织疾病患者MRI影像学检查所得唇鼻部肌肉的起止点、排列、走向、层次及交汇点等与大体湿性标本解剖所得结果一致;③唇周围肌包括唇上组、唇下组和口轮匝肌组;上组包括笑肌、颧大肌、颧小肌、提上唇鼻翼肌、提口角肌及提上唇肌;下组包括降下唇肌、降口角肌和颏肌;口轮匝肌呈环形排列,其肌纤维位于上、下两唇内,浅层由固有纤维组成,中层由唇周围肌的上、下两组肌纤维交织而成,深层由颊肌和唇周围肌的部分肌纤维组成。④鼻部的肌肉主要包括鼻根肌、降鼻中隔肌以及鼻肌。降鼻中隔肌和鼻肌的主要作用为缩小或开大鼻孔;鼻根肌则可牵拉眉间皮肤使其向下,且使鼻根部皮肤皱缩而产生横纹。⑤口轮匝肌位于深层的肌肉除具有水平方向环绕的肌纤维之外,还有沿口角斜向内上走行呈扇形的肌纤维,这些肌纤维一部分跨越中线,在鼻底移行为鼻翼鼻肌,在上唇近红唇缘处移行为颧小肌和上唇提肌,并在鼻底下方移行为上唇鼻翼提肌;另一部分止于鼻小柱下前鼻嵴处,移行为鼻中隔降肌。鼻翼鼻肌一端与鼻翼软骨外侧角相连,另一端则移行为口轮匝肌;鼻中隔降肌一端与鼻翼软骨内侧角相连,另一端则移行为口轮匝肌。颧小肌和上唇提肌从鼻翼外侧缘向中线走行,最后在口轮匝肌深层靠近红唇侧外翻处交汇,并对唇弓的形成有着很重要的意义。
  结论:⑴根据唇鼻部外观形态改变和术中所见肌肉解剖形态,可将单侧唇裂术后继发唇鼻畸形分为三度四类;⑵MRI检测人体唇鼻区肌肉解剖特点具有准确性及可行性;⑶MRI及大体湿性标本解剖对正常人唇鼻区肌肉解剖特点的综合检测有助于唇裂修复手术的实施。
[硕士论文] 陈凯凯
外科学 大连医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:肾结石是飞行人员的常见病和多发病,其发病机制目前尚不十分明确。通过建立大鼠肾草酸钙结石模型,给予重复暴露飞行因素正加速度(+Gz),旨在探讨正加速度对大鼠肾结石形成及氧化应激反应的影响,为防治飞行人员肾结石的发生及发展提供理论依据。
  方法:采用乙二醇饮水和氯化铵灌胃法诱导建立大鼠肾草酸钙结石模型,将40只8周龄Wistar健康雄性大鼠按完全随机设计法随机分为4组(n=10):空白对照组(A组)、结石模型组(B组)、加速度并模型组(C组)和单纯加速度组(D组),其中A组给予去离子水饮水+生理盐水2 ml/d灌胃28 d,B组采用1%乙二醇溶液饮水+2%氯化铵溶液2 ml/d灌胃28d,C组在B组的基础上给予+6 G暴露,3次/周,共4周,D组在A组的基础上给予+6 G暴露,3次/周,共4周。各组大鼠在相同条件下饲养28天后收集血液及双肾标本,左肾组织做HE染色石蜡切片,光镜下观察肾草酸钙结晶情况并评分;右肾组织制成组织匀浆,测定血清和右肾组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,以了解肾脏组织氧化应激反应指标变化情况。
  结果:大鼠肾组织草酸钙结晶评分方面,B组(7.1±2.9)和C组(16±3.2)较A组(0)和D组(0)的结晶评分显著增高(P<0.01),C组(16±3.2)较B组(7.1±2.9)的结晶评分显著增高(P<0.01)。大鼠氧化应激反应指标方面,B组和C组大鼠血清、肾组织MDA浓度较A组显著升高(P<0.01),B组和C组大鼠血清、肾组织SOD、CAT、GSH-Px浓度较A组显著降低(P<0.01),B组、C组、D组大鼠血清、肾组织GSH浓度较A组未见显著差异(P>0.05)。A组大鼠肾脏组织无结晶形成,肾乳头、肾盂、肾盏结构清晰,肾小管腔内无坏死脱落样物质;B组大鼠肾皮质或及髓质或及肾乳头见少量无色透明草酸钙结晶,少量炎细胞浸润,上皮细胞有时可见肿胀;C组大鼠皮质、髓质、肾乳头皆可见结晶形成,切片各部分均可见大量炎细胞浸润,肾小管上皮细胞肿胀;D组大鼠肾组织无结晶形成,肾乳头、肾盂、肾盏结构清晰,少量炎细胞浸润,上皮细胞有时可见肿胀。
  结论:正加速度(+Gz)暴露促进了大鼠肾脏草酸钙结晶量的增加,其机制可能与正加速度(+Gz)暴露引起肾脏组织氧化应激反应损伤有关。
[博士论文] 宋庆鑫
外科学(骨外) 第二军医大学 2016(学位年度)
摘要:人椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD)是脊柱退行性病变发生的病理基础。据统计,由IVDD所导致的颈椎功能障碍性疾病在我国的发病率高达6%-10%,且发病年龄呈年轻化的趋势。IVDD的远期预后很差,其晚期的高致残率也越来越被医学界重视。该病不仅给患者带来严重痛苦,而且对患者家庭乃至社会都带来沉重的经济负担。因此有效地治疗IVDD、预防残疾的发生是关系国计民生的重大科学问题。
  目前对于椎间盘退变的具体机制仍不甚了解。许多研究发现髓核细胞凋亡及细胞外基质过度降解是椎间盘退变的主要病理改变,而MMPs在髓核细胞凋亡及细胞外基质过度降解引起的间盘退变过程中,扮演了关键角色。最新的研究表明,IVDD还受到microRNA介导的转录后调控机制影响。microRNA是一种长约19-22bp的小双链RNA,其家族是体内天然存在的一种内源性调节性分子。其在体内可以通过严格或不严格匹配机制,调节靶基因mRNA的翻译及其降解,可系统性改变一系列基因的表达,并进一步影响细胞表型的变化。microRNA本身在体内也可以接受各种转录因子及信号转导通路的调控。最近,有研究发现mir-21在IVDD中会显著上调,通过转录后抑制PTEN的表达,促进髓核的异常分化,从而在IVDD中发挥作用。最新的研究还发现人IVDD中miR-155出现表达显著下调,其能特异性靶向凋亡相关分子FADD、caspase-3的3'UTR区,过表达mir-155可导致FADD、caspase-3的表达下调,从而抑制髓核细胞的凋亡。上述研究可见microRNA的表达改变在IVDD发生发展中可能具有重要意义。因此,本课题组设想,可能存在一条miRNA/MMPs通路,通过转录后调控来影响髓核细胞凋亡及细胞外基质过度降解,进一步导致CIDD的发生发展。
  目的:
  本课题通过前期研究发现了miR-874在IVDD中出现表达异常,随着退变程度的加重表达逐渐下调,而分解代谢及髓核细胞凋亡相关分子MMP-2、MMP-3随着退变程度的加重表达逐渐上调,与miR-874的表达存在负相关,提示二者可能存在潜在的相互关系,在IVDD中共同发挥重要的作用。但是,上述调控因素之间如何相互协作,目前的认识还很不充分,也是当前研究的前沿问题。如果发现这些调控因素间新的相互作用机制和模式,无疑大大有利于加深对IVDD发生发展机制的认识,并有助于推动IVDD分子治疗的进展,具有重要的科学及社会意义。
  针对上述问题,本课题提出一种新的颈椎间盘退变调控机制:microRNAmiR-874通过直接结合MMP-2的3'UTR区调控其表达丰度,抑制髓核细胞外基质主要成分即Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖的表达,从而促进人髓核细胞凋亡及细胞外基质的过度降解。通过多种实验方法揭示microRNA的转录后调控协调参与到人IVDD调控网络中的方式和机制,找出可干预的新靶点,为最终有效地防治IVDD并发的残疾提供科技支撑。
  方法:
  1.明确miR-874与人IVDD相关,收集不同退变程度椎间盘髓核组织样本,抽提RNA,经过反转录后,qRT-PCR检测miR-874在髓核中表达水平与疾病严重程度的相关性。
  2.实验证实miR-874与MMP-2表达量相关,在不同miR-874表达水平的人髓核样本中,利用qRT-RCR、Western-blot及免疫组化检测MMP-2表达量,分析miR-874与MMP-2表达量的相关性。
  3.利用miRNA靶向预测软件RNA22进行miR-874靶基因生物信息学分析,在髓核细胞中转染miR-874模拟物(miR-874 mimics),qRT-PCR以及Northern-blot检测MMP2的表达水平;构建MMP2荧光素酶报告基因,验证miR-874是否可以靶向调节MMP2。
  4.体外实验研究miR-874对IVDD相关表型的影响,分离培养人髓核细胞,构建miR-874过表达以及干扰慢病毒,在髓核细胞中分别感染上述慢病毒,在过表达及干扰/敲除miR-874后分别检测如下指标:Annexin V-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡、MTT髓核细胞增殖检测实验。
  5.研究miR-874对人髓核细胞外基质的影响,培养人髓核细胞,感染上述慢病毒,在过表达及干扰/敲除miR-874后,利用qRT-RCR以及Western-blot检测MMP-2表达量,并检测Ⅱ型胶原及蛋白聚糖等ECM主要成分的表达情况。
  6.体内实验验证miR-874干预对IVDD的作用及机制,通过超声引导下兔椎间盘纤维环刺破方法,以18G针头刺破纤维环,进针深度0.5cm,抽吸部分髓核组织建立兔椎间盘退变模型。造模成功后,分别与超声引导下在模型兔的椎间盘中注射miR-874Agomirs及miR-874 mimics,在时间点4周、8周、12周分别进行X线、MRI检测进行影像学评估,12周后处死IVDD模型动物,获取椎间盘组织行病理学检测,评价miR-874对IVDD的影响。
  结果:
  1.miR-874在退变较重组髓核组织中下调了0.7倍,同时MMP-2 mRNA及蛋白水平表达上调,与riR-874的表达存在负相关,而ACAN mRNA及蛋白水平表达下调。免疫组化发现随着退变的加重,髓核组织中ACAN及Ⅱ型胶原表达下调。
  2.构建包含2个miR-874结合位点的MMP23'UTR区报告基因质粒与mir-874共转染,检测发现荧光素酶活性抑制,证实二者靶向关系。
  3.体外实验研究,在髓核细胞中分别感染miR-874过表达以及干扰慢病毒后,MTT检测发现髓核细胞增殖在干扰时非常缓慢,而过表达后增殖明显加快,二者有显著差异。流式细胞仪检测结果显示干扰时凋亡数增加,而过表达后凋亡数显著减少,二者有显著差异。
  4.体外实验研究,在髓核细胞中分别感染miR-874过表达以及干扰慢病毒后,发现过表达miR-874导致MMP-2下调,同时抑制Aggrecan和CollagenⅡ降解,且发生COL2A1增加和COL1A1减少,提示细胞外基质合成增多。而下调miR-874导致相反结果。
  5.体内实验研究,在模型兔的椎间盘中注射miR-874 Agomirs及miR-874mimics后,发现过表达miR-874可减缓兔椎间盘退变的进程,X线及MRI均发现过表达组椎间盘退变程度较下调组降低,且MMP-2表达降低,Aggrecan表达增高,提示细胞外基质合成增多,miR-874为椎间盘退变中的保护因子。
  结论:
  1.通过本课题研究证实了miR-874通过调控细胞外基质分解代谢相关分子MMP-2表达,从而抑制Ⅱ型胶原及蛋白聚糖等ECM主要成分的表达,促进髓核细胞凋亡及ECM降解,在IVDD中发挥重要作用。
  2.探明miR-874可作为新的人IVDD评价marker及防治IVDD的分子靶点。
[博士论文] 唐利军
内科学(肾脏病) 山东大学 2016(学位年度)
摘要:慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)已经成为一个全球关注的公共健康问题。综合文献报道慢性肾脏病的发病率高达每年每百万人群中有200例-400例。大多数慢性肾脏病起病及进展缓慢,症状隐匿,患者往往在“无症状”中,“突然”进入终末期肾病(End Stage Renal Disease,ESRD)。慢性肾脏病被医务人员称为“沉默的杀手”。患者一旦进入终末期肾病,就需要给予肾脏移植、血液透析或腹膜透析等花费高昂的肾脏替代治疗,患者生命依赖医院的程度明显增加,给患者本人及家庭、社会造成巨大精神及经济压力。北京大学第一医院组织的多中心的全国性调查研究发现,我国慢性肾脏病的发病率为10.8%-13%.其他发达国家慢性肾脏病的发病率与我国相近,比如,美国截止到2004年的数据显示慢性肾脏病的发病率已逐年增加至13.1%。由于它的高发病率、低知晓率、预后差、花费巨大等特点,慢性肾脏病越来越引起人们的重视。最近一些研究表明在中国接受肾脏穿刺活检病理检查的患者中原发性肾小球疾病仍然是最为常见的肾脏疾病。原发性肾小球疾病在接受肾脏穿刺活检的病理类型中占63.3%-71.1%。数量有限的单中心小规模研究表明近年来原发性肾小球疾病肾脏病理类型的比例不断的发生着变化。变化之一是膜性肾病及IgA肾病的发病率显著增加,但IgA肾病在中国及其他一些国家仍是最为常见的慢性肾小球疾病。研究发现IgA肾病在亚洲、欧洲、大洋洲中的发病率最高占原发性肾小球疾病的36.8-54.2%。但在同一时期,另有一些研究并未发现相同的趋势。据我们所知,我国最近的肾脏疾病病理谱变化的统计分析要追溯至2012,至今3年过去了,是否有新的变化呢?另外,目前的研究都是小规模的单中心研究,为了能够更加深入的分析最新的原发性肾小球疾病病理类型的变化,我们收集了来自山东省2家大型肾脏病理检查中心共37家医院最近5年的肾脏穿刺病理结果进行统计分析。
  目的:在中国,原发性肾小球疾病仍是最为常见的肾脏疾病类型。数量有限的单中心小规模分析研究表明膜性肾病发病率逐年升高。然而,IgA肾病仍是最为常见的原发性肾小球疾病。剧我们所知,目前在中国还没有关于原发性肾小球疾病谱变化的多中心研究。为更加深入的研究肾脏组织病理类型变化,收集了来自山东省2家大型肾脏病理检查中心37家医院近5年的肾脏穿刺病理结果进行统计分析。以期发现肾脏病理疾病谱的最新变化趋势。
  方法:在这个横断面回顾性研究中,我们选取2010年6月到2015年5月来自山东省两家大型肾脏病理中心(山东省千佛山医院病理科及济南银丰医学研究中心)共37家医院6017名接收肾穿刺的患者作为研究对象进行统计分析。剔除一般资料记录不完整的21人,剔除肾组织标本不充分的44人(即光镜下肾小球小于10个,并且免疫荧光或电镜下没有典型发现者),剔除重复肾活检标本17人。因此,在此回顾性研究中纳入5935个合格的样本。其中,4855(81.8%)病人诊断为原发性肾小球疾病。根据患者年龄分为4个组别(儿童患者组≤18岁,青年患者组19-44岁,中年患者组45-59岁,老年患者组≥60岁)。以1年为一个时间间隔共分为5个阶段进行统计分析。
  结果:在4855例原发性肾小球疾病患者中,2610(53.8%)为男性,2245(46.2%)为女性。肾组织样本患者的平均年龄为39.78±15.43岁(从1岁到88岁)。5个时期中平均年龄分别为39.3±14.4岁,38.1±13.9岁,39±15.8岁,40.2±16.1岁,41.6±15.9岁。
  根据年龄分层分析提示原发性肾小球肾炎在青年患者(19-44岁)中发病率最高,2623例(54.0%),其他依次是中年患者(45-59岁)1317例(27.1%),老年患者(≥60岁)555例(11.4%),儿童患者(≤18岁)349例(7.2%)。
  在整个研究时期和不同阶段原发性肾小球疾病的病理类型变化:
  在4855个原发性肾小球疾病患者中,占首位的病理类型是膜性肾病(2103,43.3%),其他依次是IgA肾病(1655,34.1%),微小病变(488,10.3%),局灶节段性肾小球硬化(332,6.8%),膜增生性肾小球肾炎(64,1.3%),硬化性肾小球肾炎(49,1.0%),新月体性肾小球肾炎(45,0.9%),毛细血管内增生肾小球肾炎(37,0.8%)和系膜增生性肾小球肾炎(27,0.6%)。
  根据年度分段后发现膜性肾病的的比例逐年明显增加,依次为30.7%,34.5%,39.4%,50.7%,53.5%。另外,从第3年度开始膜性肾病取代IgA肾病成为原发性肾小球疾病的最主要病理类型。IgA肾病在第1、2年是原发性肾小球疾病的最主要病理类型。然而,其比例从第2年的41.8%逐年下降至第5年的25.2%(p<0.001)。局灶节段性肾小球硬化性肾小球疾病的比例从第2年的11.1%下降至第5年的4.1%。微小病变的比例在第1年最高为17.8%,但第5年下降至9.6%。
  根据年龄分层后原发性肾小球疾病的病理类型变化:
  根据年龄分层后分析发现,随着年龄的增加,膜性肾病的比例显著增加,依次为儿童患者29.8%,青年患者38.3%,中年患者48.6%,老年患者63.2%。与之相反,微小病变呈现相反的走势。IgA肾病于青年患者中发病率最高(38.5%),随着年龄增加其比例不断下降,至老年的(18.9%)。根据年龄分层后分析发现,在每个年龄层面膜性肾病的比例均呈现逐年增加的趋势。然而,IgA肾病所占的比例几乎在每个年龄层面呈现相反的逐年下降趋势。此外,IgA肾病在青年人中发病率最高。
  在349位儿童患者(≤18岁)原发性肾小球疾病中,排在首位的病理类型为IgA肾病(121,34.7%),其他依次为膜性肾病(104,29.8%),微小病变(71,20.3%),毛细血管内增生肾小球肾炎(16,4.6%),局灶节段硬化性肾小球疾病(15,4.3%),膜增生性肾小球肾炎(6,1.7%),硬化性肾小球疾病(5,1.4%),新月体性肾小球肾炎(2,0.6%),系膜增生性肾小球肾炎(1,0.3%)。
  在青年患者中,IgA肾病是最常见的原发性肾小球疾病(38.5%),其他依次为膜性肾病(38.3%),微小病变(10.6%),局灶节段硬化性肾小球疾病(8%),硬化性肾小球疾病(1.1%),膜增生性肾小球肾炎(0.9%),新月体性肾炎(0.7%),系膜增生性肾小球肾炎(0.6%),毛细血管内增生性肾小球肾炎(0.5%)。
  在中年患者中,膜性肾病均成为最主要的病理类型(48.6%),其他依次为IgA肾病(31.5%),微小病变(8.0%),局灶节段硬化性肾小球疾病(6.4%),膜增生性肾小球肾炎(1.6%),新月体性肾小球肾炎(1.0%),硬化性肾小球疾病(0.8%),毛细血管内增生肾小球肾炎(0.5&),系膜增生性肾小球肾炎(0.5%)。
  在老年患者中,膜性肾病均成为最主要的病理类型(63.2%),其他依次为IgA肾病(18.9%),微小病变(5.8%),局灶节段硬化性肾小球疾病(4.0%),膜增生性肾小球肾炎(2.5%),新月体性肾小球肾炎(2.0%),硬化性肾小球疾病(0.9%),毛细血管内增生肾小球肾炎(0.5%),系膜增生性肾小球肾炎(0.4%)。
  总之,在5935例合格的肾穿刺患者中,原发性肾小球疾病有4855例,占81.8%。其中膜性肾病(43.3%)成为最为常见的原发性肾小球疾病,而IgA肾病退至第二位(34.1%)(P<0.001)。膜性肾病的发病率从第1年的30.7%增加到第5年的53.5%(P<0.001)。膜性肾病的发病率在每个年龄阶段都呈现增加趋势。在第1、2年期间IgA仍然是原发性肾小球疾病的主要原因。然而,IgA所占比例明显下降,从第2年的41.8%下降至第5年的25.2%(p<0.001)。
  结论:我们的分析研究表明,原发性肾小球疾病仍然是目前最为常见的肾脏疾病。在各个年龄层面,膜性肾病的发病率逐年增加,IgA的发病率逐年下降成为近5年原发性肾小球疾病病理类型比例变化的主旋律。我们目前的横断面研究首次表明膜性肾病取代IgA肾病成为原发性肾小球疾病的最主要的病理类型。
[博士论文] 雷斌
泌尿外科 南方医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  1.探讨PRPS2表达与人睾丸组织学类型的关系及其意义。
  2.探讨PRPS2表达对生精细胞生物学功能的影响。
  3.探讨PRPS2表达对睾丸精子发生过程的影响。
  4.探讨PRPS2参与精子发生过程的机制。
  方法:
  1.免疫组化检测PRPS2表达与睾丸生精功能的关系:收集了163例穿刺活检的睾丸组织标本,病理诊断包括生精功能正常60例,生精功能不良103例。生精功能不良包括:轻度生精功能不良14例,中度生精功能不良33例,重度生精功能不良56例。采用免疫组化检测PRPS2在不同组织学类型睾丸组织中的表达,以半定量方法分析其表达与睾丸生精功能的关系。
  2.qRT-PCR检测PRPS2表达与睾丸生精功能的关系:收集了生精功能正常、轻度生精功能不良、中度生精功能不良及重度生精功能不良新鲜睾丸组织标本各3例,经组织研磨提取RNA,采用qRT-PCR定量检测PRPS2mRNA表达水平,探讨其表达与睾丸生精功能的关系。
  3.构建PRPS2敲低及过表达的稳转细胞株:首先通过瞬时转染筛选PRPS2敲低效果最佳的干扰片段,然后包装成慢病毒载体。同时,合成外源性PRPS2过表达载体并包装成慢病毒载体。分别将PRPS2敲低及过表达的慢病毒载体感染小鼠精原细胞GC1及小鼠精母细胞GC2,以空载包装的慢病毒载体作为对照组。通过荧光强度判定转染效率,并行基因序列检测、qRT-PCR及Western blot实验验证。
  4.体外实验探讨PRPS2敲低及过表达对生精细胞增殖及凋亡的影响:PRPS2敲低及过表达的稳转生精细胞GC1及GC2成功构建后,通过流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期。同时,采用MTT实验检测细胞的增殖,并采用免疫组化检测增殖指标Ki-67的表达,综合评定PRPS2敲低及过表达对生精细胞增殖的影响。
  结果:
  1.PRPS2表达与人睾丸组织学类型的关系及其意义
  免疫组化结果显示PRPS2阳性表达主要定位于精原细胞、精母细胞、支持细胞及间质细胞的细胞核与细胞质,而在精子细胞及成熟精子中未见明显阳性表达。其中,PRPS2阳性表达主要见于生精功能正常及轻度生精功能不良的睾丸组织,而在中度及重度生精功能不良睾丸组织中的阳性表达较少,统计学分析显示PRPS2在生精功能正常及生精功能不良睾丸组织中的阳性表达率分别为68.3%(41/60),35%(36/103),二者差异明显,具有统计学意义(P=0.000)。PRPS2在轻度、中度及重度生精功能不良睾丸组织中的阳性表达率分别为:50%(7/14)、48.5%(16/33)、23.2%(13/56),组内比较,差异具有统计学意义(P=0.02)。
  采用qRT-PCR定量检测了PRPS2mRNA在生精功能正常、轻度生精功能不良、中度生精功能不良及重度生精功能不良新鲜睾丸组织标本中的表达。结果显示:PRPS2在生精功能正常及轻度生精功能不良睾丸组织中的表达均明显高于其在中度生精功能不良及重度生精功能不良睾丸组织中的表达,差异具有明显统计学意义(P=0.000)。然而,PRPS2在生精功能正常睾丸组织中的表达与轻度生精功能不良睾丸组织中的表达无明显差异(P>0.05)。
  2.PRPS2表达对生精细胞生物学功能的影响
  首先,我们通过siRNA干扰片段,瞬时转染了小鼠精原细胞株GG1及小鼠精母细胞株GC2,筛选出PRPS2敲低效果最佳的干扰片段构建了慢病毒载体。随后,我们克隆了外源性PRPS2质粒,构建了PRPS2过表达的慢病毒载体。以空载序列构建的慢病毒载体作为对照,我们分别通过基因序列的检测验证了PRPS2干扰及过表达载体构建序列的正确性。随后,我们将PRPS2干扰、过表达及空载对照组慢病毒载体分别感染GC1及GC2细胞株。在荧光显微镜下观察,我们发现细胞的感染效率较高(>90%)。同时,qRT-PCR及Wstern blot检测均表明经慢病毒感染后,PRPS2在GC1及GC2细胞中的表达成功被敲低及过表达。
  随后,我们通过流式细胞仪检测了细胞的凋亡率,结果表明PRPS2表达敲低后,GC1细胞的凋亡率为16.1%±3.0%,与对照组相比(2.8%±0.2%),差异明显,具有统计学意义(P=0.000)。而PRPS2过表达后,GC1细胞的凋亡率为0.6%±0.3%,与对照组相比(2.8%±0.2%),差异也具有统计学意义(P=0.000)。同时,PRPS2表达敲低后,GC2细胞的凋亡率为18.7%±1.9%,与对照组相比(4.0%±0.2%),差异明显,具有统计学意义(P=0.000)。而PRPS2过表达后,GC2细胞的凋亡率为1.9%±0.2%,与对照组相比(4.0%±0.2%),差异也具有统计学意义(P=0.000)。
  为了探讨PRPS2表达对生精细胞增殖的影响,我们进行了MTT实验,连续观察5天,结果表明:与对照组相比,PRPS2在GC1细胞中的表达敲低后,细胞的增殖能力明显下降,而PRPS2过表达后,细胞的增殖能力明显增强,(P=0.000)。同样,在GC2细胞中,PRPS2表达下调后,细胞的增殖能力明显低于对照组,而PRPS2过表达后,细胞的增殖能力明显高于对照组(P=0.000)。同时,与对照组相比,PRPS2表达下调后,Ki-67在GC1及GC2细胞中的表达明显减弱,而PRPS2表达上调后,Ki-67在GC1及GC2细胞中的表达明显增强。
  3.PRPS2表达对睾丸精子发生过程的影响
  首先,为了明确内源性PRPS2是否表达于正常的睾丸组织,我们通过qRT-PCR及Western blot检测了PRPS2在小鼠出生后4W、6W、8W及10W睾丸组织中的表达,结果显示:随着小鼠周龄的增加,PRPS2表达逐渐增加,提示PRPS2参与睾丸的正常发育过程。随后,我们将PRPS2干扰片段慢病毒载体行活体内小鼠睾丸注射,观察1周后小鼠睾丸组织的形态学改变。结果表明PRPS2干扰片段慢病毒载体活体内注射1周后,干扰组中PRPS2表达水平明显低于空载对照组及空白对照组,差异具有统计学意义(P=0.000)。PRPS2表达下调后,睾丸组织内多数生精小管被破坏,生精小管内各级生精细胞明显减少,精子发生过程发生明显异常,表达为明显的生精功能不良。而在空载对照组中,仅看到极少部分生精小管被破坏,大多数生精小管未受影响,精子发生大致正常。空白对照组未发现生精小管被破坏,精子发生正常。
  为了进一步探讨PRPS2表达与睾丸生精功能的关系,我们通过白消安构建了生精功能低下的小鼠动物模型。免疫组化检测了PRPS2在小鼠睾丸组织中的表达,结果显示PRPS2明显高表达于精原细胞、精母细胞、支持细胞及间质细胞,而成熟精子中未见明显阳性表达,当睾丸发生明显生精功能低下后,PRPS2在生精小管中的表达也明显下降,而其在间质细胞中的表达无明显变化。Western blot及qRT-PCR检测结果也均显示PRPS2在生精功能不良睾丸组织中的表达明显下降。
  最后,评估了PRPS2表达下调对生精细胞增殖能力的影响。结果显示:Ki-67在空白对照组及空载组睾丸组织中均阳性表达于精原细胞及间质细胞,而在干扰组中Ki-67的表达明显减弱,提示PRPS2表达下调后,生精细胞的增殖能力下降。
  4.PRPS2参与精子发生过程的机制研究
  为了寻找PRPS2参与调控的信号通路,我们将PRPS2敲低、过表达及空载对照组的GC1细胞株进行高通量基因芯片分析,结果表明PRPS2敲低组与对照组相比,差异显著(P<0.05)的基因共有2543个,其中包括1571个基因出现明显上调,972个基因出现明显下调。PRPS2过表达组与对照组相比,差异显著(P<0.05)的基因共有3131个,其中包括1582个基因出现明显上调,1549个基因出现明显下调。PRPS2表达下调涉及的信号通路主要为细胞骨架、分化、细胞周期、细胞粘附、细胞连接及凋亡。PRPS2过表达所涉及的信号通路主要为细胞骨架、细胞周期、分化、凋亡、细胞粘附及细胞分裂。
  经qRT-PCR验证,我们发现E2F1为PRPS2正向调控的下游潜在靶基因。PRPS2表达下调后E2F1mRNA表达明显下降,而PRPS2过表达后E2F1mRNA表达明显增加。为验证PRPS2是否在转录水平调控E2F1,我们构建了E2F1的荧光素酶载体,分别转染PRPS2过表达及空载对照组的GC1及GC2细胞。结果显示:与对照组相比,PRPS2过表达的GC1(GC1/PRPS2)及GC2(GC2/PRPS2)细胞中E2F1的荧光素酶活性明显增强(P<0.05),提示PRPS2在转录水平可以直接调控E2F1的表达,E2F1可能为PRPS2调控的靶基因。
  结论:
  1.PRPS2表达与人睾丸组织学类型相关,其表达的检测有助于评估睾丸的生精功能。
  2.PRPS2参与正常的精子发生及睾丸发育过程,其表达下调与睾丸生精功能不良相关。
  3.PRPS2表达下调有助于生精细胞的凋亡,并抑制生精细胞的增殖,其作用机制与E2F1/P53/Bcl-2/Bcl-xl/Caspase6/Caspase9/CDKN2A信号通路相关。
[硕士论文] 皮婷婷
内科学 大连医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:探讨EGFR核心岩藻糖基化在肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis RIF)中的作用
  方法:选取2015年在大连医科大学附属第一医院肾内科住院并接受肾脏活检的原发性肾小球疾病患者24例,排除各种继发性肾小球疾病,根据RIF评分分为4组,分别为无病变组、轻度组、中度组、重度组。对照组患者共6例,取自泌尿外科因外伤、肿瘤等原因行手术治疗所留取的肾组织标本,为正常组。对5组患者肾组织标本行免疫组化技术检测α-1,6核心岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltransferase8,FUT-8)的表达变化,分析RIF和FUT8表达的相关性。
  为验证临床患者RIF和FUT8表达的相关性,探讨其作用机制,通过给予Wistar大鼠尾静脉注射FUT8ShRNA重组腺病毒抑制FUT8基因的表达,建立RUUO模型。50只SD大鼠随机分为10组。(1)N组,正常组;(2) SHAM组,假手术组;(3) SHAM+GFP组,假手术加空载体组;(4) UU03d组,UUO术后3d处死;(5)RUU07d组,UUO术后3d解除梗阻,梗阻解除后7d处死;(6) RUU07d+Fut8ShRNA组,UUO术后3d解除梗阻,经大鼠尾静脉注入适量重组腺病毒,梗阻解除后7d处死;(7) RUU014d组;(8) RUU014d+Fut8ShRNA组;(9) RUU028d组;(10) RUU028d+Fut8ShRNA。评价指标:1)肾组织行PAS染色,观察肾小管及间质的变化;2)免疫组化观察α-SMA、E-cadherin的表达变化;3)免疫荧光检测FUT8的表达变化;4) RT-PCR检测FUT8、α-SMA、E-cadherin的mRNA表达变化;5)western blot检测EGFR糖链及EGFR/ERK/JNK各通路蛋白的表达变化。
  结果:5组患者在一般情况年龄、性别、甘油三酯、胆固醇、血钙、血磷、血尿素氮差异无统计学意义(P>0.05);血肌酐水平重度组较其它组增高(P<0.05),24h尿蛋白水平无病变组、轻度组、中度组、重度组均高于正常组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示FUT8的表达与肾间质纤维化呈正相关(r=0.696,P<0.05);免疫组化显示FUT8在UU03d组表达升高,FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组FUT8表达降低,RT-PCR及western blot分别从mRNA及蛋白质水平验证了FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组FUT8表达降低。PAS染色结果显示UU03d组肾小管扩张,出现空泡样变,肾间质炎细胞浸润,随着梗阻的解除,肾小管逐渐恢复至接近正常,炎细胞浸润减轻,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组减轻。免疫组化结果显示UU03d组α-SMA表达升高,随着梗阻的解除,逐渐恢复至接近正常水平,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组表达降低,RT-PCR及western blot与此结果一致;UU03d组E-cadherin表达降低,随着梗阻的解除,逐渐恢复,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组表达升高,RT-PCR及western blot与此结果一致;Western Blot检测EGFR通路总蛋白EGFR、ERK、JNK在UU03d组表达增高,梗阻缓解7d、14d、28d表达逐渐降低,其中FUT8ShRNA(+)组与FUT8ShRNA(-)无差异;p-EGFR、p-ERK、p-JNK在UU03d组表达增高,梗阻缓解7d、14d、28d表达逐渐降低,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)表达降低。
  结论:Fut8的表达随着RIF的加重而增加,抑制FUT8表达可以抑制EGFR/ERK/JNK通路蛋白磷酸化所致的RIF。
[硕士论文] 肖捷成
外科学(骨外) 福建医科大学 2015(学位年度)
摘要:目的:探讨股骨大转子顶点与股骨头中心的位置关系为人工髋关节置换术中调整下肢长度提供参考。通过对股骨近端解剖测量,了解大转子顶点与股骨头中心的位置关系,对指导人工髋关节置换术中下肢长度均衡有一定的临床意义。明确近端股骨髓腔形态,为临床合理选择及设计人工股骨柄假体提供参考。
  方法:所有数据来源莆田学院附属医院,拍摄标准骨盆正位片,包括股骨中上段,排除髋关节有明显病变的病例,并采用螺旋CT对髋关节及股骨进行连续薄层扫描,通过医院PACS系统输出DICOM图像并存储,利用Mimics三维重建软件对近端股骨解剖结构及髓腔形态进行研究。测量参数包括大转子高度、股骨偏心距、前倾角、侧位髓腔内径等。比较分析参数左右侧之间有无统计学差异,并用三维重建方法对股骨近端形态进行分析。
  结果:⑴近端股骨解剖参数测量值:股骨偏心距为31.84±7.11mm(20.54mm~47.12mm),大转子顶点与股骨头中心垂直距离(大转子高度)为6.71±3.14mm(1.45mm~14.11mm),前倾角为12.76±2.73°(7.65°~18.31°)。侧位髓腔小转子水平内径为19.98±3.74mm,侧位峡部髓腔内径为10.10±1.80mm。近端股骨解剖参数左右侧之间比较差异无统计学意义。⑵股骨近端髓腔三维重建整体形态学特点:股骨近端髓腔由近到远,从大变小、从不规则向类圆形演变。大致有倒梯形、直筒形等。
  结论:①大转子顶点与股骨头中心不在同一水平线上,绝大多数情况下相对偏高,平均偏高6.71mm;大转子高度、股骨偏心距及前倾角左右侧无明显差异;大转子高度的评估对人工髋关节置换术中调节下肢长度具有重要参考意义。②近端股骨髓腔形态变异大,具有弯曲的特性,股骨柄假体长度不应超过股骨前弓顶点,最好不要超过175mm,三维重建股骨髓腔能更细致、全面反映其形态,设计股骨柄假体需带一定弧度与股骨近端髓腔形态相适配;在临床行人工髋关节置换术时应根据不同个体的股骨髓腔形态选择与之相匹配的股骨柄假体,使之能达到良好的稳定性,对合理选择股骨柄假体提供参考依据。
[硕士论文] 陈林
中西医结合临床内科学 贵阳中医学院 2015(学位年度)
摘要:冠心病是严重危害人类健康的一种常见疾病,随着社会环境的变化,人们生活习惯的改变,由其造成的健康问题、社会问题日益加重。冠心病的发生与脂代谢异常、炎症反应密切相关。ApoCⅢ参与脂代谢异常,同时还可促进TNF-α、hs-CRP等炎症因子释放,通过多种途径参与冠心病的发生和发展。ApoCⅢ的表达及其介导的炎症反应受多种因素调节,如种族、遗传、地域、环境等。关于海南地区黎族人群ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平与汉族人群有何差异、及其与冠心病的相关性目前尚不知晓。
  目的:
  通过研究海南黎汉族人群ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平有无种族差异,及其与冠心病类型及冠状动脉狭窄程度的关系,探讨海南黎族人群ApoCⅢ及其介导的炎症反应在冠心病发病中的作用,为海南地区黎族人群冠心病的预防和治疗提供依据。
  方法:
  选取2012年9月至2014年11月期间海南省三亚市人民医院心血管内科住院冠心病患者238例(其中黎族112例,汉族126例)作为实验组,选取健康人员236例(其中黎族120例,汉族116例)作为对照组,通过ELISA方法测定ApoCⅢ、TNF-α水平,使用胶乳比浊法测定hs-CRP水平,以及冠状动脉造影明确冠脉狭窄情况。对比研究黎汉族人群ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平的差异,分析三者与冠心病类型、冠脉狭窄程度的关系。应用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计学处理,以P<0.05为差异有统计学意义。
  结果:
  (1)冠心病组收缩压、舒张压、FBS、TC、TG、LDL-C、ApoB、Lp(a)水平高于健康对照组(P<0.05);冠心病组HDL-C、ApoAI水平低于健康对照组(P<0.01)。
  (2)黎、汉族冠心病人群ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平均显著高于健康对照组(P<0.01)。
  (3)冠心病组黎、汉族人群ApoCⅢ水平无统计学差异(P>0.05);TNF-α、hs-CRP水平黎族人群低于汉族人群(P<0.05)。健康组中黎族人群ApoCⅢ水平高于汉族人群(P<0.05);TNF-α、hs-CRP水平黎汉族人群无差异(P>0.05)。
  (4)ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平在冠脉有狭窄组中高于健康对照组(P<0.01),而狭窄组组内两两比较均无统计学差异(P>0.05)。即,三者在狭窄组中虽显著高于健康对照组,但是并没有随狭窄程度的加重而增加。
  (5)ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平在冠心病不同类型中依次为:急性心肌梗死>不稳定型心绞痛>稳定型心绞痛,且都高于健康对照组(P<0.01)。
  (6)ApoCⅢ与TNF-α、hs-CRP,以及TNF-α与hs-CRP均呈直线正相关,相关系数分别为:0.425、0.319、0.400,P值均<0.01。
  结论:
  (1)ApoCⅢ及其介导的炎症反应参与冠心病的发病。
  (2)ApoCⅢ介导TNF-α、hs-CRP表达。
  (3)ApoCⅢ、TNF-α、hs-CRP水平高低与冠心病类型密切相关,与冠状动脉狭窄程度轻重无关。
  (4)ApoCⅢ及其介导的炎症反应在冠心病发病中存在种族差异。
[博士论文] 刘阳
外科学(骨外) 华中科技大学 2015(学位年度)
摘要:第一部分、小鼠大脑中PPARγ的表达分布研究
  目的:越来越多的证据表明PPARγ信号通路在中枢神经系统内发挥着重要的作用:PPARγ激动剂可以调节神经元脂肪酸代谢相关与脑损伤相关基因的表达,同时该通路也参与了葡萄糖的中枢控制,摄食行为和能量的体内平衡。研究其中枢神经系统内的表达位点和表达细胞类型将大大有利于我们理解脑损伤修复的机制和中枢控制代谢功能的机制。目前,中枢神经系统内PPARγ的分布和表达水平存在一定的争议,所以本研究旨在全面系统的研究成年小鼠大脑内PPARγ的完整表达。
  方法:本研究采用多种ISH和组织学技术描绘了PPARγ在成年小鼠大脑内的表达。首先我们使用了标记S35的核糖核酸探针利用放射性ISH初步定位大脑内表达PPARγ的区域。接着我们使用了一种基本没有背景干扰的新技术Chromogenic ISH辨别表达PPARγ细胞。然后我们使用组织化学技术和蛋白印记技术再次评估大脑内PPARγ的免疫活性。下一步使用qPCR技术测定下丘脑中PPARγmRNA的表达。最后我们还使用多重荧光ISH技术进一步定位表达PPARγ的细胞,研究了其与泛神经元标记物Rbof3和脂蛋白脂肪酶Lpl的共表达。
  结果:经具体测定,PPARγmRNA在整个皮质层,终板下器官,和穹窿下器官内高表达。除此以外,在嗅球、下丘脑的视交叉上核、海马、选择丘脑核、后内侧杏仁核、小脑、脉络丛以及第三脑室内低度至中度表达。在其余部分的脑实质组织中,包括与进食相关的相关下丘脑核群,PPARγ的表达水平非常低,几乎超出了可检测水平。同时,我们还证明了在下丘脑的视交叉上核内PPARγmRNA的表达水平会随着禁食的影响而上调,但在进食反馈相关的丘脑核中PPARγmRNA水平并不会随着禁食或饲喂高脂饲料而变化。我们还使用了双重原位杂交技术进一步证明PPARγ表达在整个脑实质的神经元中。我们在室管膜细胞中也发现了PPARγ的表达,特别是高表达于室管膜血管内终板和穹隆下器,在后者中PPARγ与Lpl广泛共表达。
  结论:总的来说,我们的实验结果完整的描述了PPARγ在成年小鼠大脑的分布,为理解大脑中脂质代谢提供了新的途径。
  第二部分、非人类灵长类动物RYGB术后肠道重建的研究
  目的:目前认为Roux-en-Y胃分流术(RYGB)有减肥和缓解糖尿病的作用。因此,研究 RYGB引起的肠道形态学改变可以使我们更好的理解减肥手术的代谢学作用的机制。目前,所有的实验室研究都是在大鼠身上进行的,所以RYGB是否可以在其他动物模型中引起肠道增生还难以下结论。我们的研究使用了非人类灵长类动物(NHPs)的肥胖模型作为研究对象,使实验结果更易于转化到人类身上。
  方法:我们的研究对象是恒河猴肥胖模型RYGB术后28天的肠道样本,分别取自9只RYGB手术组和8只假手术组动物。我们系统的研究了RYGB术后肠道的形态学改变,重点讨论了病理性和适应性肠道增生的几个指标。我们主要检测了以下参数:1)肠管横截面的周长;2)肌层以及粘膜厚度,粘膜横截面积;3) Peripherin免疫活性;4)肠道截面Iba1计数;5)杯状细胞计数及胞体大小的测量;6) Ki67阳性率;7)有丝分裂指数。
  结果:RYGB手术引起了胃-空肠吻合口附近Roux袢肌层的增厚,同时Peripherin免疫活性的增高以及巨噬细胞的浸润提示了组织的损伤和修复。我们没有发现肠道粘膜的增生,这与我们预测的结果不一致。上皮细胞的有丝分裂指数和回肠内L细胞在两组间均无差别,进一步证实了NHP-RYGB模型并未发生粘膜的增生。两个实验组间粘膜组织最大的区别是手术组靠近胃-空肠吻合口处的杯状细胞数的增加。
  结论:实验结果可以帮助我们理解RYGB手术的代谢学效用以及它的副作用:RYGB术后早期糖尿病症状缓解和体重减轻的原因可能包括术后的食欲不振,肠-脑轴活性和胆汁代谢等改变,但并不伴随着组织的肥大或细胞增殖的加强。
[博士论文] 李忱
中西医结合临床 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2015(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 SAPH0综合征患者血清T细胞相关细胞因子、促炎性细胞因子及RANKL/OPG的表达情况
  目的:SAPHO综合征(synovitis,acne,pustulosis,hyperostosis osteomyelitis,滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨髓炎)属于罕见病,病因尙不明确。本文探讨活动期和稳定期SAPHO综合征患者血清T细胞相关细胞因子、促炎性细胞因子及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)的表达情况。
  方法:30例确诊SAPHO患者,临床资料完整,根据VAS疼痛评分、BASDAI疼痛评分,分为活动组15例和稳定组15例,同时招募15名健康志愿者作为正常对照。取外周血,分离血清,用ELISA方法检测血清中T细胞相关细胞因子:IFN-γ、IL-4、IL-22、IL-17和TGF-β1,促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和骨免疫相关因子RANKL和OPG的水平。三组间比较使用Kruskal-Wallis检验,两组间比较使用Mann-Whitney检验,相关性分析使用Spearman's等级相关系数检验。
  结果:活动组IL-17水平(29.17±4.01 pg/ml)显著升高,明显高于稳定组(20.72±0.03 pg/ml)(PA.vsS<0.0001)和健康对照组(20.72±0.02 pg/ml)(PA.vsC.<0.0001);与之相对的是活动组TGF-β1水平(2891±1983 pg/ml)明显低于疾病稳定组(18348±10831 pg/ml)(PA.vsS.<0.0001)和对照组(13857±6411 pg/ml)(PA.vsC.<0.0001),而稳定组较对照组水平没有明显差异(PS.vsC.=0.2290)。活动组IL-6(2.34±1.31 pg/ml)显著高于稳定组(1.21±0.35 pg/ml)(PA.vsS.=0.0021)和健康组(1.19±0.35 pg/ml)(P.vsC.=0.0061)。活动组IL-8(36.41±12.93 pg/ml)明显高于疾病稳定组(10.06±5.07 pg/ml)(PA.vsS.<0.0001)和健康对照组(3.73±1.20 pg/ml)(PA.vsC<0.0001),而且稳定组IL-8水平也显著高于健康对照组(PS.vsC.=0.0012)。活动组血清RANKL(73.43±57.07 pg/ml)显著高于稳定组(4.67±3.03 pg/ml)(PA.vsS.<0.0001)和对照组(8.89±6.95 pg/ml)(PA.vsC.<0.0001);活动组OPG水平(59.29±31.22 pg/ml)与稳定组(55.78±10.62 pg/ml)和健康对照组(43.93±9.88pg/ml)之间没有显著差异(PA.vsS.=0.5056,PA.vC.=0.0884)。IFN-γ、 TNF-α、IL-4和IL-22在活动组、稳定组和健康对照3组间没有显著差异。
  结论:结果显示血清炎性因子IL-6和IL-8水平升高与疾病活动度有关;血清IL-17升高和TGF-β1水平降低与本病的活动度有关,提示Th17/Treg失衡可能是导致疾病的原因;同时RANKL升高也与疾病活动度有关。
  第二部分 活动期SAPHO综合征患者外周血Th17/Treg失衡
  目的:SAPHO综合征是以特征皮肤损伤和骨骼关节改变为表现的临床综合征,发病机制不明,可能与感染和免疫反应异常有关。本项研究旨从不同时期SAPHO患者外周血Th17/Treg平衡角度探讨SAPHO综合征的发病机制。
  方法:30名SAPHO综合征患者按照疾病活动情况(VAS评分、BASDAI和BASFI数值)分为活动组和稳定组,并完善患者资料(性别、年龄、病程、影像学以及治疗)和实验室检查。同时招募15名健康志愿者作为对照组。分离研究样本外周血单核细胞后运用流式细胞术检测Th17与Treg细胞的比例,分析Th17/Treg平衡的变化。
  结果:SAPHO综合征活动组患者Th17比例显著升高,Treg比例没有变化,Th17/Treg的比值升高,并且与VAS值呈显著正相关性。
  结论:SAPHO综合征的发展与Th17/Treg失衡密切相关。活动期Th17/Treg比例升高可能是导致疾病复发的主要因素,从而导致患者的炎症水平升高和骨关节疼痛等表现。
  第三部分:临床部分
  3.199例SAPHO综合征的临床分析
  目的:熟悉SAPHO综合征的临床表现和首发症状及诊断,提高对SAPHO综合征的诊断水平。
  方法:根据2012年Nguyen MT在Semin Arthritis Rheum中提出的诊断标准,收集2004年1月至2014年7月门诊及住院的SAPHO综合征99例患者,回顾分析其一般情况、临床表现、实验室检查、影像学及有创操作及手术。
  结果:99例患者首发症状诊断为掌跖脓疱病32例、肋软骨炎16例、关节炎12例、强直性脊柱炎7例、肩周炎6例、骨结核5例、腰椎间盘突出5例、慢性骨髓炎4例、疑似骨肿瘤4例、颈椎病2例、类风湿关节炎、无菌性骨炎、反应性关节炎、下颌骨炎、代谢性骨病、致密性骨炎各1例。
  结论:通过对SAPHO综合征的临床表现特点和影像学特征的分析,认为掌握本病的诊断标准,尽早完善骨扫描,是提高诊断率的关键,从而减少不必要的有创操作及手术是非常重要的。
  3.2抗肿瘤坏死因子-α拮抗剂在SAPHO综合征治疗中的应用
  目的:SAPHO综合征属罕见病,尚缺乏统一的治疗方案,本文旨在探讨抗肿瘤坏死因子-α拮抗剂在本病治疗中的作用。
  方法:对8例难治性SAPHO综合征患者的临床资料、治疗及转归进行分析并复习相关文献。
  结果:8例患者均为女性。7例表现为掌跖脓疱病,1例无皮肤损害。骨关节受累中上胸壁处受累8例,外周关节受累6例,骶髂关节受累6例,脊柱关节受累2例。8例患者均给予非甾体抗炎药(NSAID),糖皮质激素或(和)改变病情抗风湿药(DMARD)或(和)双磷酸盐,症状均无改善,后加用抗肿瘤坏死因子-α拮抗剂,症状均改善。但在治疗过程中,1例出现皮疹加重,1例出现颌下腺炎;4例停药后复发;3例配合中药治疗,症状均不同程度改善。
  结论:抗肿瘤坏死因子-α可显著改善SAPHO综合征的症状,但个别患者出现皮疹加重,有潜在的感染风险,且停药后易复发。
  3.3柴胡桂枝汤加味治疗SAPHO综合征20例临床观察
  目的:通过12周开放性试验评价中药柴胡桂枝汤加味治疗SAPHO综合征的疗效和安全性。
  方法:将符合纳入标准的40例SAPHO综合征,辨证为太少两感、营卫失调、湿热血瘀的患者采用随机数字表法分为2组,对照组20例,口服阿伦磷酸钠,每周1次,每次70mg/片;治疗组20例,应用柴胡桂枝汤加味合验方“三两三”加味。疗程均为12周。两组均在治疗初基线水平及治疗12周后评估全身疼痛评分,采用VAS评分(0-10分),毕式强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)评分和毕式强直性脊柱炎功能指数(BASFI)评分,并检测血沉(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)进行观察,并评价两组治疗效果。
  结果:40例患者均完成了试验观察,其中治疗组20例,对照组20例。与治疗前比较,治疗组在ESR、VAS评分、BASDAI评分、BASFI评分均显著改善(P<0.05);对照组仅BASDAI评分有名显著改善(P<0.05);两组治疗后组间比较,治疗组在VAS评分和BASDAI评分优于对照组(P<0.05),在ESR、hs-CRP和BASFI评分上,两组比较无统计学意义。对照组有3例病人出现消化道症状的不良反应,治疗组无明显药物不良反应。
  结论:柴胡桂枝汤加味治疗SAPHO综合征患者疗效优于单用阿伦磷酸钠患者,并且无明显的药物不良反应。
[硕士论文] 刘飞
外科学(骨科) 南京医科大学 2015(学位年度)
摘要:本文对髋、膝关节疾病患者脊柱--骨盆--下肢矢状面形态变化进行了研究。本研究分为三个部分:
  第一部分:膝关节骨关节炎患者脊柱-骨盆-下肢矢状面形态变化的初步研究。
  目的:通过比较膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者与正常人的矢状面相关参数,探讨KOA患者矢状面形态异常及其临床意义。
  方法:研究收集正常人58例、KOA患者75例的站立位全脊柱侧位X线片并测量下列参数:(1)脊柱矢状面参数:脊柱骶骨角(spinal-sacral angle,SSA)、脊柱前倾角(spinal tilt,ST/C7T)、腰椎前凸角(lumbar lordosis,LL);(2)骨盆及相关下肢矢状面参数:骨盆投射角(pelvic incidence,PI)、骶骨倾斜角(sacral slope,SS)、骨盆倾斜角(pelvic tilt,PT)、骶骨股骨角(sacrum femoral angle,SFA)、骨盆股骨角(pelvic femoral angle,PFA);股骨倾斜角(femoral inclination,FI)。采用独立样本t检验分析组间各矢状面参数间的差异性,同时应用Pearson相关性分析KOA组各个参数相关性。
  结果:KOA组FI(11.1±4.9)较正常对照组(4.2±3.5)增大,但SFA(42.7±11.4)和PFA(2.0±8.7)值较正常对照组(SFA:51.8±8.5; PFA:9.1±8.1)减小,且差异均有统计学意义(p<0.05);此外KOA组ST(88.9±4.3)值较正常对照组(92.9±3.5)减小,且差异有统计学意义(p<0.05);而SS、PT和PI值与正常对照组相近,且差异无统计学意义(p>0.05)。KOA组SFA与PFA存在明显正相关(r=0.494),而与FI则存在明显负相关(r=-0.668);PFA与FI存在明显负相关(r=-0.586)。
  结论:KOA患者膝关节明显屈曲,导致其脊柱和骨盆前倾。KOA患者的这些矢状面形态在行全膝关节置换术设计时需要加以考虑。
  第二部分:膝关节骨关节炎患者脊柱-骨盆-下肢矢状面形态变化与腰痛关系的初步研究。
  目的:对KOA患者的脊柱-骨盆-下肢矢状面形态进行测量分析,并与正常人进行比较,明确KOA患者的矢状面形态、相关机制及临床意义,并探究慢性腰痛继发于KOA的可能机制。
  方法:研究收集正常人58例、KOA患者75例的站立位全脊柱侧位X线片并测量下列参数:(1)脊柱矢状面参数:脊柱骶骨角(spinal-sacral angle,SSA)、脊柱前倾角(spinal tilt,ST/C7T)、腰椎前凸角(lumbar lordosis,LL);(2)骨盆及相关下肢矢状面参数:骨盆投射角(pelvic incidence,PI)、骶骨倾斜角(sacral slope,SS)、骨盆倾斜角(pelvic tilt,PT)、骶骨股骨角(sacrum femoral angle,SFA)、骨盆股骨角(pelvic femoral angle,PFA);股骨倾斜角(femoral inclination,FI);腰痛评分(Visual analoguescore,VAS)。采用独立样本t检验分析组间各矢状面参数间的差异性,同时应用Pearson相关性分析KOA组各个参数相关性。根据C7铅垂线到骨盆的相对位置,将脊柱-骨盆平衡分为三类。
  结果:KOA组FI(11.1±4.9)较正常对照组增大,但SFA(42.7±11.4)和PFA(2.0±8.7)值较正常对照组减小,且差异均有统计学意义(p<0.05);此外KOA组ST(88.9±4.3)值较正常对照组减小,且差异有统计学意义(p<0.05);FI≤10°的患者,相比对照组LL减小, FI和C7T明显减小,但骨盆(PT,PI,SS)和髋关节屈曲(SFA,PFA)参数没有差别。相反地,FI>10°的患者,相比对照组FI和SS显著增大,但C7T、SFA和PFA减小。比较KOA组的两个子组之间的这些参数后,我们发现,与FI≤10°组相比FI>10°组C7T,SFA和PFA明显减小,但FI却明显增大。另外, FI>10°组LL较FI≤10°组明显增大。与正常对照组相比KOA组有严重的脊柱-骨盆矢状面失平衡,且FI>10°组较FI≤10°组更易出现矢状面的失平衡。
  结论:KOA患者膝关节明显屈曲,导致其脊柱和骨盆前倾。FI≤10°的膝关节骨性关节炎患者腰椎将作为代偿轻度膝关节屈曲, LL减小。然而,严重的患者膝关节屈曲(FI>10°),脊柱、骨盆和髋关节都参与了矢状面的代偿,表现为脊柱前倾、骨盆前倾和髋关节屈曲。腰椎前凸的减小和脊柱前倾可加快慢性腰痛在这些患者的发展或恶化。
  第三部分:CroweⅣ型DDH脊柱-骨盆-下肢矢状面平衡状态异常及其临床意义。
  目的:通过比较CroweⅣ型髋关节发育不良患者(Developmental dysplasiaof hip,DDH)与正常人和原发性髋骨性关节炎患者(hip osteoarthritis,HOA)的矢状面相关参数,探讨DDH患者矢状面形态异常及其临床意义。
  方法:研究收集正常人40例、HOA患者30例和双侧CroweⅣ型DDH患者16例的站立位全脊柱侧位X线片并测量下列参数:骨盆矢状面参数:骨盆投射角(pelvic incidence,PI)、骶骨倾斜角(sacral slope,SS)、骨盆倾斜角(pelvictilt, PT)、骶骨骨盆角(sacrum pubic incidence,SPI)、骶骨股骨角(sacrum femoralangle,SFA)、骨盆股骨角(pelvic femoral angle,PFA);脊柱矢状面参数:脊柱前倾角(spinal tilt,ST)、腰椎前凸角(lumbar lordosis,LL);下肢矢状面参数:股骨倾斜角(femoral inclination,FI)。采用ANOVA检验分析各组间各矢状面参数间的差异性,同时进行各组间各个参数的可信度比较分析。
  结果:三组间年龄、性别分布差异无统计学意义。DDH组的PI可信度(a=0.008)较正常对照(a=0.350)及HOA组(a=0.276)低。DDH组SS(45.6±12.09)、PT(16.7±8.81)、PI(55.3±16.63)、PFA(12.7±15.15)、SPI(76.4±10.87)、FI(14.3±7.12)均较HOA组增大,且差异有统计学意义(P<0.05);LL(37.3±15.87)、ST(87.8±5.43)均与HOA组相近,且差异无统计学意义,但与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。
  结论:DDH患者较HOA患者骨盆更加前倾,导致其脊柱前倾,髋、膝关节屈曲。DDH患者的这些矢状面形态在行全髋关节置换术设计时需要加以考虑。
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