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[硕士论文] 樊莹莹
预防兽医学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:隐孢子虫(Cryptosporidium)和贾第虫(Giardia)是两种重要的人畜共患肠道原虫,它们通常是经过粪-口途径直接进入人或动物的宿主体内,伴随着卵囊的摄取,最终引起人和动物的隐孢子虫病和贾第虫病,并伴随着宿主的腹泻;最近的流行病学研究表明,在隐孢子虫病和贾第虫病中,人畜共患之间的传播起着重要的作用;牛,尤其是乳牛,是作为隐孢子虫病和贾第虫病在人和动物之间传播的重要来源。然而,在一些地区,例如中国湖北省,关于人和犊牛的隐孢子虫和贾第虫的流行病学的数据(比如优势虫种和基因型)却仍是一片空白。为此,本文针对这些问题开展了如下的研究:
  在第1章中,对这两种原生寄生虫的背景知识、关键的物种、生活史、传播途径、病原体的发病机制、诊断及其防控进行详细的介绍;并总结了已有的物种和基因型。通过对分子流行病学调查的总结,提供了对隐孢子虫和贾第虫病防控的研究方向。
  在第2章中,对湖北省武汉市腹泻儿童的隐孢子虫、贾第虫和微孢子虫的分子流行病学调查进行了首次报道。在2016年6月至2016年8月,对武汉市儿童医院和武汉大学人民医院门诊部的腹泻儿童新鲜粪便样品共计500份进行了隐孢子虫、贾第虫和微孢子虫的分子流行病学调查,基于SSU基因,tpi基因和ITS基因位点采用Nested-PCR方法对所有样品进行扩增,序列比对结果经遗传进化分析,鉴定出隐孢子虫为C.meleagridis,贾第虫为assemblage A型,微孢子虫的基因型为D型。值得一提的是,在隐孢子虫中,发现了C.meleagridis是该地区的优势虫种,而该虫种主要的宿主是在鸟类中,该发现也为后续对该地区人和鸟之间病原的传播研究奠定了基础。
  在第3章中,进一步对湖北省犊牛进行了隐孢子虫和贾第虫的分子流行病学调查。在2016年9月至2016年12月,对湖北省北部、东部和西部地区的5个奶牛场和1个肉牛场的1-12周龄的断奶前和断奶后的犊牛进行了采样,旨在探索隐孢子虫和贾第虫的优势虫种和基因型。共鉴定出3种隐孢子虫,分别为C.bovis,C.andersoni和C.ryanae;在贾第虫中,确立了贾第虫的assemblage E型;在该研究中,并针对人畜共患之间的传播问题进行了讨论。
  在第4章中,对目前所取得的成果进行了综合性的讨论,并提供了对未来研究的视角和方向;本论文对隐孢子虫和贾第虫在中国湖北省的分子流行病学的调查提供了数据参考;获得的数据提示我们,仍需开展更多的流行病学调查和采集更多的样品进行遗传多样性分析,以便更好的了解这些病原体在中国的传播。
[硕士论文] 宋林栋
预防兽医学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:刚地弓形虫是人兽共患寄生虫病,可以感染几乎所有的温血动物,通过其分泌蛋白改变宿主细胞的信号通路状态、调节宿主基因的表达量,进而影响宿主的生命活动进程。根据弓形虫感染小鼠的毒力可以分为:Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。近些年来,随着经济的增长,人们生活水平的不断提高,对猪肉的需求大幅上涨,然而猪弓形虫病不仅给养猪业造成了重大的经济损失,同时也造成了我国居民弓形虫感染率的上升。由于目前对弓形虫病防控的基础研究不足,尤其是对弓形虫与宿主之间相互作用的分子机制尚不清楚。因此,国内外许多科研工作者建立动物模型,用于研究对弓形虫与宿主之间相互作用的分子机制。
  本研究利用RNA-Seq高通量测序研究不同基因型弓形虫对猪巨噬细胞感染后的转录组变化,鉴定出弓形虫感染细胞后的差异表达的基因及免疫途径,发现不同基因型弓形虫在调控型Ⅰ干扰素和NF-κB信号通路的差异,通过弓形虫感染BALB/c小鼠,利用Real-time PCR检测小鼠脾脏中细胞因子的变化,同时利用Western Blot研究GRA15调控NF-κB信号通路的分子机制,将质粒GRA15电转到RAW264.7细胞,研究其对免疫因子的影响。
  (1)不同基因型弓形虫的速殖子感染3D4/21细胞后的转录组分析
  将RH、HB1和ME49弓形虫速殖子感染3D4/21细胞,利用RNA-Seq高通量测序检测6h、12h和24h时间点转录组的变化,发现差异表达基因随着感染时间的延长而增加,Ⅱ型虫株诱导的差异表达基因明显高于Ⅰ型虫株,进行GO富集和KEGG分析,三种弓形虫速殖子在涉及巨噬细胞的免疫或疾病相关途径存在差异。
  (2)不同基因型弓形虫对小鼠脾脏的免疫因子的影响
  通过腹腔接种弓形虫Ⅰ型RH、HB1和Ⅱ型Me49感染BALB/c小鼠,根据不同基因型弓形虫的毒力,设置不同的时间间隔来定时收取脾脏组织。利用Real-time PCR技术检测小鼠先天性免疫细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-10和PD-1的相对表达量。结果显示,在RH、HB1急性感染和Me49慢性感染中,IFN-γ和IL-10的表达变化十分明显,且均在感染后期有着很高的表达量。而相对地,PD-1在各基因型弓形虫感染中所诱导的表达量较低,且随时间变化不太明显。
  (3)GRA15激活NF-κB信号通路的分子机制
  将GRA15质粒脂质转染到HEK293T细胞,利用Western blot检测细胞中IκB和p-IκB的表达,发现p-IκB的表达水平显著增加,当使用IκB激酶抑制剂MG-132后p-IκB表达水平明显减少。结果说明GRA15有可能是通过降解IκB蛋白来激活NF-κB信号通路。
  (4)GRA15对RAW264.7细胞因子的影响
  使用电穿孔法将GRA15质粒转染到RAW264.7细胞中,分别收集12h和24h的细胞,通过Real-time PCR检测细胞因子的表达水平。实验结果表明,GRA15(-4)可以引起细胞IFN-β表达量的显著上升;GRA15(Ⅰ)和GRA15(Ⅱ)则可以激活并诱导细胞分泌IFN-γ;而GRA15(Ⅰ)、GRA15(Ⅱ)以及GRA15(-4)对IL-12、TNF-α、iNOS和PD1均无明显影响。
  本研究首次对猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)感染不同基因型弓形虫后的转录组进行了研究和分析,描述了细胞感染弓形虫后差异基因的表达变化。同时,在不同时间点鉴定的功能性差异表达基因和KEGG通路有助于更好地了解宿主免疫和防御机制,促进对弓形虫感染的预防和控制,了解这些途径提供的信息可能对开发合理设计的弓形虫治疗剂和疫苗至关重要。
[博士论文] 王艳歌
军事预防医学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:本课题采用HSC细胞系模型,合成并转染虫源miRNA的mimics,大量筛选并初步鉴定能活化HSC细胞和上调纤维化相关标志基因表达的虫源miRNA。同时,我们分离感染血吸虫小鼠的原代HSC,通过高通量测序鉴定存在于HSC的虫源miRNA。基于体外激活HSC-T6筛选、宿主HSC内高通量测序鉴定虫源miRNA及其特异性方面,我们选取了既能参与宿主肝纤维化调控又能进入宿主HSC的虫源miRNA(即Sja-miR-2162)作为本课题的研究对象,研究其对宿主肝纤维化的调控作用及其分子机制,包括:在体外HSC中确定其活化HSC和促纤维化发生的作用;通过在正常小鼠中过表达虫源miRNA或在感染小鼠中对虫源miRNA进行干预,检测小鼠肝纤维化程度及HSC活化状态,从而确定虫源miRNA在血吸虫病肝纤维化中的功能;通过生物信息学预测虫源miRNA的宿主靶基因,并通过体内、体外实验验证两者的靶向关系及调控的信号通路,从而阐明虫源miRNA调控血吸虫病肝纤维化中的分子机制。本研究取得了以下结果:
  1.虫源miRNA的筛选与鉴定
  为从日本血吸虫miRNA中筛选和鉴定出能够活化HSC并促进纤维化相关基因表达的的虫源miRNA,本课题选取了本实验室及其他实验室鉴定的日本血吸虫miRNA共51条,合成其miRNA mimics,并采用HSC细胞系(HSC-T6)作为体外细胞模型进行筛选,虫源miRNA mimics转染HSC-T6,48小时后采用qPCR技术检测HSC活化标志基因(Col1α1、Col3α1和α-SMA)的表达水平。结果显示,Col1α1、Col3α1和α-SMA表达水平相比对照组,表达水平显著升高的有19条虫源miRNAs,表达水平显著下降的有4条虫源miRNAs。23条虫源miRNA中有15条为血吸虫特异性miRNA,8条为保守miRNA。这些结果表明了虫源miRNA可调控宿主HSC的激活。
  2.感染小鼠HSC分离及虫源miRNA的检测
  (1)原代HSC的分离和检测
  (2)二代测序分析感染小鼠HSC中的虫源miRNAs
  3.虫源Sja-miR-2162促进HSC的活化和肝纤维化的发生
  通过综合分析上述实验结果,本课题选取日本血吸虫Sja-miR-2162为研究对象,分析其在宿主肝纤维化中的作用及其分子机制。
  (1)Sja-pri-miR-2162过表达质粒的构建及其表达
  4.中和Sja-miR-2162抑制血吸虫病肝纤维化
  上述实验已经表明日本血吸虫产生的Sja-pri-miR-2162能分泌至体外,并进入宿主细胞,包括肝脏HSC。进入HSC的Sja-pri-miR-2162能够上调肝纤维化相关标志基因的表达,导致纤维化的发生。日本血吸虫感染的主要病理变化是肝纤维化的发生,以往的工作已经表明,血吸虫感染诱导宿主产生的一些因子,包括宿主miRNA和IL-13等,是导致宿主肝纤维化的主要因素。根据本课题上述结果,我们提出假设:在日本血吸虫感染和致宿主肝纤维化过程中,虫源性miRNA(Sja-miR-2162)起到促进肝纤维化的作用。对此,本课题设计了以下实验加以验证。
  (1)体外细胞模型验证:虫卵分泌的Sja-miR-2162进入HSC并调控肝纤维化相关基因表达
  (2)体外下调Sja-miR-2162可抑制HSC的活化
  (3)体内验证Sja-miR-2162能促进小鼠肝纤维化的作用
  为验证虫源Sja-miR-2162在体内能参与血吸虫病肝纤维化的过程,我们构建了能在肝脏中特异性下调Sja-miR-2162的rAAV8病毒载体(rAAV8-anti-Sja-miR-2162-sponge)。将7周龄BALB/c雄性小鼠感染日本血吸虫后第24天注射1012v.g./只剂量的rAAV8-anti-Sja-miR-2162-sponge病毒载体,其中scramble组、PBS组以及正常小鼠组为对照组,在感染后第56天处死小鼠取肝脏检测其肝纤维化指标。结果显示,rAAV8-anti-Sja-miR-2162-sponge组相比scramble组,羟脯氨酸含量显著下降(p<0.05),与肝纤维化相关的基因,如Col1α1、Col3α1、α-SMA、TIMP和Col4α1,其表达水平均显著下降(p<0.001),Masson三色染色显示肝组织中胶原蛋白沉积明显减少(p<0.05),HE染色显示虫卵肉芽肿面积显著减小(p<0.001)。分离各组小鼠的原代HSC并检测相关基因表达,在rAAV8-anti-Sja-miR-2162-sponge病毒载体感染组的HSC中,其Col1α1、Col3α1、α-SMA和TIMP表达水平均显著下降(p<0.001)。以上两部分结果验证了我们的假设,即血吸虫Sja-miR-2162可跨物种调控宿主肝纤维化。
  5.Sja-miR-2162的靶基因及其通路
  (1)靶基因的预测和验证:
  (2)上调Sja-miR-2162可抑制宿主TGFR3的表达
  (3)下调Sja-miR-2162促进靶基因TGFR3的表达
  在感染小鼠后第56天中分离的原代HSC中转染Sja-miR-2162抑制剂后,TGFR3的表达水平均显著升高(p<0.01);利用rAAV8载体在血吸虫感染小鼠肝脏中中和Sja-miR-2162后,肝组织和HSC中的TGFR3的表达水平则显著升高(p<0.01)。
  小结:本课题通过对日本血吸虫miRNA促纤维化功能的大量体外筛选以及对感染血吸虫小鼠HSC的深度测序,发现了血吸虫特异性虫源Sja-miR-2162在血吸虫感染过程中进入宿主HSC,并在体外细胞模型中显示出促纤维化作用。在此基础上,我们对Sja-miR-2162的促纤维化功能及其分子机制开展进一步的研究。通过体外原代HSC及HSC-T6细胞系研究显示,转染Sja-miR-2162mimics和过表达载体,均能促进HSC的活化。将表达Sja-miR-2162的rAAV8病毒载体转染正常小鼠,后者的肝纤维化相关基因表达升高,同时,实验证实转入的Sj a-pre-miR-2162(前体)在宿主细胞能够加工为成熟的miRNA。在日本血吸虫感染和致宿主肝纤维化过程中,虫源性Sja-miR-2162是否能跨物种调控宿主的肝纤维化,这是本课题的重要科学问题。本课题从不同的角度阐明该科学问题:一是体外验证:采用Transwell小室将虫卵与原代HSC共培养,发现虫源性Sja-miR-2162进入HSC,并使HSC活化,但这种激活HSC作用可以被Sja-miR-2162抑制剂所阻断;二是体内外相结合的验证:分离和培养感染小鼠的原代HSC,并转染Sja-miR-2162抑制剂,发现转染抑制剂的原代HSC其肝纤维化相关基因表达下调;三是体内验证:将特异性下调Sja-miR-2162的rAAV8病毒载体转染感染小鼠,其肝纤维化相关基因表达下降。以上三方面的实验结果表明了虫源性Sja-miR-2162能跨物种调控宿主肝纤维化。本课题最后部分阐明了TGFR3是Sja-miR-2162靶基因,即:Sja-miR-2162是通过靶向TGFR3蛋白,继而上调TGF-β1/SMAD信号通路,提高肝纤维化相关基因的表达。本研究首次证实血吸虫的miRNA可进入宿主细胞并在宿主病理过程中发挥重要调控作用,从而丰富了我们对血吸虫病发病机制的认识,并为预防和治疗血吸虫病提供新的干预靶点和思路。
[硕士论文] 杨争辉
控制科学与工程;模式识别与智能系统 东南大学 2017(学位年度)
摘要:血吸虫病作为一种影响民众健康和危害社会发展的寄生虫病,疫情监测预警是血吸虫病防治的重点。目前,我国血吸虫病预警监测诊断网络平台的建设已经具备一定规模,但是由于起步较晚,如何保持持续有效的运行和长足的发展仍然是一个重要的命题。
  本文研究的正是基于Java的血吸虫病防治系统的WEB服务器的设计与实现,它旨在解决血吸虫病疫情监测、控制、预警的数字化问题,将血防滞后预警变为实时预警,成为一项有针对性、实时性的数字化疾病控制系统。
  本文首先调研了国内外血吸虫病防治系统的发展情况,明确了本研究课题的主要任务和研究意义。对现有的血吸虫病防治系统进行分析,根据实际需求对其中的不足之处进行改进,设计出合理的系统架构,论证了系统的工作原理和功能需求,并选择了合适的开发环境以及体系结构。
  接着本文建立了血吸虫病指标体系和疫情预测模型。本文通过对灰色预测模型和支持向量机预测模型的深入研究,且考虑到疫情预测与时间有较强的关系,提出了一种基于灰色支持向量机的血吸虫病疫情预测模型。该模型利用灰色预测理论中累加生成的思想,弱化了原始序列的随机性,将生成的新序列用支持向量机的方式进行预测。
  随后本文对数据库系统进行了设计与实现。数据库作为血吸虫病防治系统的数据枢纽,存储并管理着整个系统的数据信息。基于用户和系统需求,本文通过概念设计、逻辑设计,完成了数据库和数据表的设计与实现。为提高数据库的性能和可靠性,本文对数据库进行了性能优化并制定了相应的备份与恢复策略。
  然后本文对血吸虫病防治系统的WEB软件进行了详细的设计与实现。根据软件使用群体的不同,本文将用户分为四个级别,不同级别的用户拥有着不同操作权限。从功能上,本文将WEB软件划分为数据库访问子系统、数据导入与导出子系统、疫情监控子系统、查灭螺子系统、用户管理子系统五个部分。数据库访问子系统主要将数据库增删改查等操作封装成接口,提高代码的复用性和可维护性;数据导入与导出子系统主要用于Excel的自动导入与导出;疫情监控子系统利用建立好的指标体系,通过对各地区的相关数据进行分析,生成各地区的风险指数,并利用前面建立的疫情预测模型进行疫情预警;查灭螺子系统涵盖了查灭螺的整个流程,包括管理员创建派发任务,查灭螺人员反馈任务结果等;人员管理子系统提供了高效的人员管理方案,管理员可以查看人员列表,注销多余用户。
  最后,本文对基于Java的血吸虫病防治系统的WEB服务器进行了白盒测试、功能测试、性能测试和安全性测试。其结果表明,本文设计的系统运行稳定,安全可靠,达到了整个系统的预期目标。
[硕士论文] 王祥
流行病与卫生统计学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:以县(区)级行政区域为空间单元创建山西省人布鲁氏菌病地理信息数据库,描述全省2011~2015年人布鲁氏菌病的人群分布、时间分布和地区分布,探索空间分布关系和时空聚集特征及某些可能影响布病分布的相关因素,并对结果进行可视化展示,为山西省制定有效、合理的布病防控策略提供科学的依据。
  方法:利用现有的山西省布病监测数据,并从《山西省统计年鉴》、国家地球系统科学数据共享平台和地理空间数据云收集其它相关数据,以县级行政区划为空间单元对山西省布病开展系统研究。首先,采用探索性空间数据分析描述布病的分布特征,并揭示疾病的空间关联类型;继而,应用时空扫描统分析的方法,准确探测山西省布病的高危时空聚集区;并应用ArcGis10.2.2等相关软件对以上结果进行可视化展示。
  结果:①40~60岁年龄的人有较高的报告病例数,且男性的报告病例数要高于女性,布病患者大部分从事农牧业工作;②2011~2015年人布鲁氏菌病的报告发病率总体上呈上升趋势,且有明显的季节特征,主要发生在3~7月份,其中以5月最高;③主要集中在山西省北部县区,大致呈南低北高和西低东高的弧形趋势,这些地区大都为海拔1500-1800m,牧业发达且以牛羊为主的地区。全局Moran’s I系数显示,2011~2015年山西省119县(区)人布病报告发病率存在空间正相关,呈聚集性分布。局部Moran’s I系数显示,5年期间共有43个县区为“高-高”聚集区,且这些县区均集中在山西省北方。时空扫描分析结果指出山西省有统计学意义的时空聚集区一共有9个,分别为一级时空聚集区和8个次级时空聚集区。其中一级时空聚集区(LLR=4087.85,RR=3.98,P<0.001)的聚集中心为新荣区,半径为158.03km,聚集时间段始于2013年1月1日,止于2014年12月31日,总人口数为580.47万人,所辖县区数为21。次级时空聚集区主要有:以榆社县为中心,辖4个县区,聚集于2011年1月1日-2012年12月31日(LLR=475.71,RR=3.18, P<0.001),总人口数为89.18万人;以永和县为中心,辖1个县区,聚集于2013年1月1日-2014年1月1日(LLR=319.34,RR=9.62,P<0.001);以沁源县为中心,辖2个县区,聚集于2013年1月1日-2014年12月31日(LLR=145.27,RR=2.90, P<0.001)。
  结论:针对山西省最近几年人布病发病率的上升趋势,围绕其流行特征及相关因素、空间分布关系和时空聚集的研究思路,综合运用遥感和地理信息技术、空间自相关分析和时空扫描分析。可以较好且形象直观的:描述山西省布病的人群分布、时间分布和空间分布的特点;探索山西省布病的空间分布关系和时空聚集性。提示山西省布病的防控工作应将重点放到北部的一些县(区),应特别注意在春、夏季节从事牛、羊养殖的人群。
[硕士论文] 杨名宜
新闻与传播 广西大学 2017(学位年度)
摘要:包虫病是由寄生于犬、狼、狐狸等动物的棘球蚴感染人和动物所引起的人畜共患寄生虫病。中国是世界上包虫病流行范围最广的国家之一。包虫病在中国西部地区流行严重,不仅危害畜牧业生产,而且严重威胁人类身体健康,影响公共卫生安全和生态安全,是导致部分群众因病致贫、因病返贫的主要原因之一,是严重影响西部民族地区社会经济发展和稳定的重大传染病。开展健康传播是包虫病防治的重要措施,通过研究掌握西部地区农牧民对包虫病的态度、健康防控知识的了解程度与感染包虫病相关的日常行为,对进一步提高中国包虫病健康传播的科学性具有重要意义。
  本研究以新疆、西藏、青海、甘肃和四川五省(区)的包虫病高发区的农牧户作为调查的总体,选取以上地区部分包虫病流行县开展问卷调查和现场调查,共回收有效问卷1213份。结果显示,西部五省(区)的包虫病防治知识知晓率仅为21.3%,远低于《防治包虫病行动计划(2010-2015年)》提出的达标要求。通过卡方检验,结果显示省份、宗教、语言等人口统计学变量与西部五省农牧民健康知识知晓率之间的显著性具有统计学意义,而由于主客观原因,性别、文化程度、婚姻状况和家庭是否有包虫病患者等统计学变量与知晓率之间的联系不具有统计学意义。通过将健康信念五个变量建立多元回归模型预测西部农牧民的防治行为,结果显示,回归模型是显著的,知道防治行为的障碍、采取防治措施的自信心和动力、知道包虫病的严重性和知道防控包虫病的利益是显著的预测变量,而知道包虫病易感性对防治行为的实施影响不大。
  因此,干预效果的正面宣传和营造社会广泛防治的氛围是未来西部包虫病防范知识宣传的重点。笔者建议提高实施干预措施的便利性,减少实施防范措施的心理障碍,采用适合西部农牧民实际情况的宣传策略进行健康教育和宣传干预工作,在西部少数民族居住地区继续推广普通话,健全宣传干预或健康教育工作的评估机制。
[硕士论文] 王震
基础兽医学 河南农业大学 2017(学位年度)
摘要:蜱是一类具有顽强生命力并对环境适应性强的体表寄生虫。是世界第二大生物传播媒介,能够传播多种疾病,可感染动物和人类。在世界范围内广泛存在,对人类自身健康、动物养殖业和自然环境带来严重危害,每年造成巨大的经济损失。当前主要的灭蜱方法有生物防治、化学药物防治、植物源防治、人工防治等,最普遍最主要的防治方法是化学药物防治。长期的化学药物使用,使蜱的某些基因发生突变而导致耐药性,并且化学药物的残留对自然环境和人畜的危害也在不断地加重。为了能够快速、准确、高效的检测出蜱的耐药性,避免化学药物的滥用和减少因化学药物造成的蜱耐药性引起的经济损失,指导临床合理用药,本实验探索建立了快速检测蜱耐药性基因的实时荧光定量PCR检测方法。主要研究的内容和结果如下:
  1、通过对实验室保存的微小牛蜱的阳性基因组克隆,构建普通PCR方法所需要的阳性标准质粒。通过序列比对设计出普通PCR检测方法和实时荧光定量PCR检测方法所需要的引物和探针。并提取300份来自湖南、甘肃等地的血红扇头蜱、青海血蜱、长角血蜱的基因组作为待测样品。筛选特异性引物和探针,并与普通PCR方法进行敏感性比对。
  2、构建实时荧光定量PCR的阳性标准质粒,成功建立蜱钠通道耐药性基因的TaqMan探针实时荧光定量PCR的检测方法。对定量PCR的反应条件和体系进行不断优化,得到较好的扩增效率和线性相关性。并与感染梨形虫的蜱基因组进行特异性试验,显示此方法的特异性较好。阳性检测结果与普通PCR相比,其敏感性是普通PCR的1000倍,表明此方法的敏感性较好。并使用不同浓度梯度的标准阳性质粒进行组内重复性试验和组间重复性试验,结果显示组内重复性变异系数Ct值均小于5%,组间的变异系数均小于10%,表明此方法的重复性、稳定性较好。
  3、使用本实验建立的实时荧光定量PCR检测方法对来自湖南芷江血红扇头蜱、甘肃临潭青海血蜱、甘肃永靖长角血蜱的300份基因组进行检测。按照TaqMan探针法的阳性标准在300份样品中共检测到263份样品含有钠通道耐药性基因,阳性率为87.67%。蜱种内的阳性分布分别为湖南芷江微小牛蜱的阳性率为8734%(69/79),湖南芷江血红扇头蜱的阳性率为8750%(63/72),甘肃临潭青海血蜱的阳性率为92.31%(60/65),甘肃永靖长角血蜱的阳性率为8452%(71/81)。使用普通PCR检测出来的阳性率为47.0%,使用本实验所建立的实时荧光定量PCR检测方法检测出来的阳性率为8767%阳性符合率为100%。普通PCR检测为阴性的样品中有110份使用荧光定量PCR检测为阳性,从而证明了TaqMan探针实时荧光定量PCR的方法更加可靠和灵敏。使用实时荧光定量PCR的方法检测蜱的耐药性基因在我国尚属首次该方法的建立为准确了解我国蜱虫的耐药状况和指导临床合理用药具有重要意义。
[硕士论文] 夏雨
临床检验诊断学 贵州医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:调查糖尿病患者的弓形虫感染情况,探讨糖尿病合并弓形虫感染患者的免疫功能状态及其对血糖和肝肾功能的影响。
  方法:1.405例糖尿病患者(DM组)和150例正常对照人群(NC组)均选自贵州医科大学附属医院。根据弓形虫抗原抗体的检测结果将DM组又分为DM合并弓形虫感染阳性组(DM-TP组)和DM合并弓形虫感染阴性组(DM-TN组)。2.采集所有研究对象的外周血样本。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其血浆中弓形虫特异性抗体(IgG、IgM)及循环抗原(CAg);用聚合酶链反应(PCR)扩增弓形虫的529bp基因片段以检测弓形虫核酸;用ELISA定量检测血浆细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4的含量;收集入组病例的25(OH)D3、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肝功能指标[总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)]及肾功能指标[血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)及尿微量白蛋白/肌酐(UmALB/Ucr)]等临床数据。3.用SPSS17.0软件进行数据分析:计数资料采用?2检验,计量资料多组间比较采用单因素方差分析或秩和检验,相关性分析用Pearson相关分析,P<0.05为差异具有统计学意义。
  结果:1.DM组和NC组弓形虫感染血清学总阳性率分别为19.75%、6.67%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中DM组弓形虫IgG类抗体、IgM类抗体及循环抗原(CAg)的阳性率分别为17.28%、2.72%和0.49%,有3例弓形虫IgG类抗体和IgM类抗体双阳性病人。NC组中未检测到弓形虫IgM类抗体和循环抗原(CAg)。2.本研究在所有研究对象中均未检测到弓形虫特异性核酸片段,因此未能进行弓形虫基因分型。3. DM-TP组及 DM-TN组的25(OH)D3含量(16.75±4.69ng/ml、19.70±4.41 ng/ml)均明显低于NC组(37.55±7.35ng/ml),DM-TP组又低于DM-TN组(P<0.05)。4. DM-TP组的IFN-γ、IL-2(52.08±9.25pg/ml、174.48±68.69pg/ml)明显高于DM-TN组(45.07±7.89pg/ml、137.37±27.26pg/ml)和NC组(40.20±7.61pg/ml、135.30±26.82pg/ml),而三组间IL-4水平比较无显著性差异(P>0.05)。5. DM-TP组、DM-TN组和NC组的FBG和HbA1c 分别为(11.23±2.27mmol/L、9.32±1.98%)、(9.24±2.74mmol/L、8.11±1.27%)、(5.01±0.84mmol/L、4.78±0.59%),组间两两比较均有统计学意义(P<0.05);DM-TP组的TP、ALB均低于DM-TN组和NC组(P<0.05),而其ALT水平则明显高于DM-TN组和NC组(P<0.01);DM-TP组的Scr和UmALB/Ucr均高于DM-TN组和NC组,两两比较均有统计学意义(P<0.05),而三组的AST、BUN和UA比较均无统计学意义(P>0.05)。6.相关性分析:25(OH)D3与HbA1c、 IFN-γ和 IL-2均呈负相关关系(P<0.05),而与FBG和IL-4无相关关系(P>0.05)。
  结论:1.糖尿病患者弓形虫感染率高于一般健康人群;2.糖尿病合并弓形虫感染患者体内维生素D水平和Th1/Th2平衡失调可能导致其免疫功能紊乱;3.弓形虫感染可能对糖尿病患者血糖和肝肾功能有一定的影响;4.人外周血中弓形虫核酸检出阳性率低。
[硕士论文] 程慧敏
预防兽医学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:MicroRNA(简称 miRNA)是一类长约18-22个核苷酸的小分子 RNA,它们组成了机体内的RNA调控网络,可以在多水平控制基因的表达。参与了细胞增殖、分化和凋亡的调控,影响着动物和植物的生长发育以及各种病理过程。要了解miRNA在机体生理、病理过程中的表达情况及其所发挥的重要作用,就需要有合适的方法对miRNA进行准确的检测,从而才能够开展更为深入的功能性研究。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)可以对目标分子实现精确定量,是目前一种常用的miRNA检测手段。本研究在qRT-PCR的基础上,建立一种灵敏、特异的miRNA通用探针检测方法,以达到仅利用一种检测探针和下游引物实现对多条miRNA进行检测的目的。
  布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种严重的人兽共患传染病,对人类健康和畜牧养殖业造成了极大危害。布鲁氏菌具有多种毒力因子,通过逃避巨噬细胞的杀伤作用达到胞内生存的目的,与机体细胞免疫反应密切相关,其中四型分泌系统(T4SS)是一种重要毒力因子。布鲁氏菌借助T4SS将相关效应蛋白或毒素通过细胞膜分泌到宿主细胞内造成持续感染,而编码T4SS的基因受virB操纵子编码,所以virB对布鲁氏菌的胞内生存和毒力具有十分重要的影响。敲除virB启动子毒力基因可以关闭T4SS,最终导致突变型存活率降低,不进行持续感染,本实验即利用了实验室构建保存的16M菌株virB基因缺失株。分别用布鲁氏菌16M和16M△virB菌株感染小鼠巨噬细胞 RAW264.7、建立 BALB/c小鼠感染模型,观察毒力引起的宿主microRNA-155(miR-155)表达水平变化。最终应用通用探针检测方法,对123例医院临床血清样本miR-155表达水平进行了统计分析。
  miR-155是一种与免疫相关的小分子 RNA,在多种病原微生物感染后表达水平均发生变化,可以参与到病原微生物致病过程。本实验建立并应用通用探针检测方法,将该方法应用于临床样本检测,探讨布鲁氏菌感染后宿主 miR-155的表达规律,挖掘miR-155作为诊断布鲁氏菌病特征性标识的可能性。具体研究内容及结果如下:
  一、通用检测方法的建立
  (1)逆转录引物设计设计Uni-RT12、Uni-RT12A、Uni-RT12C、Uni-RT12G、Uni-RT12V、 Uni-RT12VN共6种逆转录引物,在人工合成的microRNA-146a(miR-146a)模拟物和临床血浆样本中比较各引物的差异。为二者的总RNA加Poly(A)尾,分别用以上6种逆转录引物进行逆转录,扩增6种逆转录产物中的 miR-146a,扩增时使用设计的同一种通用探针和通用下游引物。根据qRT-PCR结果判断扩增效果。利用高分辨溶解曲线(HRM)分析各逆转录引物特异性,最终筛选出特异性最强的逆转录引物。结果显示,在检测实际样本时,Uni-RT12A和Uni-RT12VN获得了较好的效果。进一步通过HRM分析,发现Uni-RT12A的溶解曲线峰值最高,没有波肩,峰的跨度最小,特异性最好。
  (2)反应体系优化利用正交实验设计,选定三因素四水平,具体如下:三个独立因素即试剂盒种类、退火温度和通用探针浓度,试剂盒种类包括 GoldStar TaqMan Mixture(Low ROX)、Premix Ex Taq(Probe qPCR)、2×EasyTaq PCR SuperMix和SuperReal PreMix(Probe)。退火温度分别为62℃、60.7℃、58.4℃和55℃,通用探针浓度分别为0.2μM、0.4μM、0.6μM和0.8μM。在 miR-146a模拟物中进行L16(4)3正交实验,共16次实验,通过直观分析法比较各次实验结果。结果表明,在使用2×GoldStar TaqMan Mixture、退火温度为58.4℃、探针浓度为0.6μM时效果最佳。
  (3)通用探针检测方法评价通过与实验室较为常用的SYBR Green I染料法比较,对通用探针法的性能、通用性和扩增范围进行评价。性能(特异性和灵敏性)比较:TRIzol法提取10例健康志愿者血浆总RNA制成混合样本,加Poly(A)尾后分别取不等量产物用于逆转录,分别用染料法和通用探针法进行 qRT-PCR扩增 miR-146a、miR-122、miR-155,比较两种方法的差别。通用性评价:分别用这2种方法扩增随机挑选的8条miRNA,证明该方法对miRNA普遍适用。扩增范围分析:将已知浓度miR-146a模拟物逆转录后10倍梯度稀释,分析该方法的扩增范围。结果表明,通用探针法特异性和灵敏性均高于染料法,扩增范围0.2μM-0.2×10-4μM,在临床样本中可以检测 miR-155、miR-146b、miR-223、miR-181c、miNA-27a、miR-29a、miR-29b-1、miR-146a共8条miRNA,具有较好通用性。
  二、布鲁氏菌病感染后宿主miR-155表达规律研究
  (1)RAW264.7细胞侵染实验用布鲁氏菌16M和16M△virB菌株接种小鼠巨噬细胞RAW264.7,阴性对照组接种PBS,在第0、24、和48小时裂解细胞提取总RNA,分别检测miR-155表达水平,采用相对定量(RQ)分析miR-155随时间变化及组间差异。结果显示,小鼠巨噬细胞在感染16M后的24小时,miR-155表达水平升高,在感染16M△virB后的0至48小时, miR-155表达水平降低。
  (2)BALB/c小鼠感染实验分别用布鲁氏菌16M和16M△virB菌株感染BALB/c小鼠,建立小鼠感染模型,以PBS作为阴性对照,在第7、14和28天提取小鼠脾脏总RNA,分别检测miR-155表达水平,采用相对定量分析miR-155随时间变化及组间差异。结果显示,小鼠内源miR-155表达水平在感染16M后的7和14天被抑制,但是第28天升高,miR-155表达水平在感染16M△virB后的7天和14天与16M相反。在第7天时,感染16M△virB后的miR-155表达水平明显高于16M。
  (3)临床样本检测收集布鲁氏菌病患者、非布鲁氏菌感染者和健康志愿者血清样本,分别提取血清总RNA,采用绝对定量(AQ)的方法检测血清中miR-155表达水平,分析组间差异,统计样本基本信息,分析血清miR-155的表达水平与抗体滴度和临床症状之间的相关性。结果显示,布鲁氏菌病患者血清 miR-155表达水平与非布鲁氏菌感染者和健康志愿者相比被显著抑制,分析病例信息,血清miR-155表达水平与布鲁氏菌抗体滴度和临床症状(盗汗)明显相关。
  综上所述,本研究建立了一种miRNA检测新方法,与SYBR Green I染料法相比特异性高、反应灵敏,一次可检测多条 miRNA,在进行大量样本检测时具有较大优势。将该方法应用于医院临床样本miR-155的检测中,发现布鲁氏菌病患者与非布鲁氏菌病感染者和健康志愿者相比,miR-155表达水平具有显著性差异,布鲁氏菌病患者血清miR-155与抗体滴度和临床症状(盗汗)呈正相关,提示 miR-155可作为布鲁氏菌病诊断的一个分子标识。在早期感染中,布鲁氏菌16M感染细胞和小鼠后,宿主 miR-155表达水平低于布鲁氏菌16M△virB,初步表明布鲁氏菌干扰了miR-155介导的宿主免疫应答反应,这种干扰可能与virB或者T4SS有关,具体机制需要进一步探讨。
[硕士论文] 魏然
流行病与卫生统计学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:一.研究背景:
  无形体(Anaplasma)是一种胞内寄生菌,常寄生于血细胞引起无形体病。病原体可由多种蜱通过叮咬传播给人或动物,在家畜中广泛存在,也是一类人畜共患的蜱传疾病。无形体属包括,嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、山羊无形体(A.capra)、绵羊无形体(A.ovis)、边缘无形体(A.marginale)、中央无形体(A.centrale)、血小板无形体(A.platys)、牛无形体(A.bovis)。目前已测得全序的包括A.marginale、A.centrale、A.phagocytophilum。
  六种无形体中只有A.phagocytophilum,A. marginale,A.capra可以在体外分离到,其中A.phagocytophilum可以在HL60(人早幼粒白血病细胞)、ISE6(肩突硬蜱细胞)、IDE8(肩突硬蜱细胞)中生长,A. marginale可以在IDE8和BME26中生长,A.capra可以在HL60细胞中生长。目前,没有关于A.ovis体外分离培养的相关报道。
  目前,经报道可以引起人无形体病的有以下三种,A.phagocytophilum、A.capra、A.ovis变种。A.phagocytophilum于1994年首次被美国人报道可感染人,并于1996
  年分离到人来源的无形体。随后,人粒细胞无形体病在美国大量报道,欧洲多国和中国也均有报道。并可在人与人间传播。表现为发热、头痛、不适、肌痛、白细胞减少、血小板减少、转氨酶升高等。2015年首次报道了28例A.cpara感染人的病例,同时分离到人来源的病原体。临床表现为发热、头痛、乏力、眩晕等。体内靶细胞尚不明确。而关于A.ovis感染人一直存在争议,到目前为止仅有2007年发生在塞浦路斯的A.ovis变种感染人的一例报道。尚无关于病原体分离的报道。
  黑龙江省牡丹江地区和云南横断山区是我国两大重要的蜱媒病自然疫源地。以往的调查发现两地蜱和宿主动物携带多种蜱媒病原体,因此是监测的重点区域。绵羊无形体由于感染症状轻,长期以来缺乏系统研究,尤其是病原体的确认、分离鉴定的研究更是匮乏。
  二、研究目的:
  调查媒介蜱和家畜中A.ovis的流行特征,并以此为依据评估当地绵羊无形体病对人群的威胁。从家畜中分离绵羊无形体,为后续绵羊无形体病血清学检测提供条件。开展基于哨点医院的人感染绵羊无形体的监测,旨在发现蜱传绵羊无形体病例,鉴定其病原学特征及描述病例临床表现特点。
  三、研究方法:
  2014年至2016年,每年4月至8月采集黑龙江牡丹江地区及云南横断山区的蜱和宿主动物样本,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增样本中绵羊无形体特异的基因片段,进行针对绵羊无形体的宿主动物调查。使用 HL-60细胞从牡丹江地区感染的山羊和绵羊血液中分离培养A.ovis,并通过PCR、瑞士吉姆萨染色IFA、FISH、扫描电镜等进行鉴定。开展基于哨点医院的绵羊无形体的主动监测,纳入两个月内有蜱叮咬史的病人,并通过调查问卷的形式来获得病人流行病学信息,住院病人信息则通过病案记录进行登记存档。本研究实验室检测以PCR对病人进行初筛,并结合IFA辅助绵羊无形体病的诊断。
  四、研究结果
  在牡丹江地区和横断山区开展绵羊无形体自然疫源地调查发现,游离蜱中A.ovis感染率为0.36%(6/1657),其中森林革蜱4只(4/275),全沟硬蜱1只(1/990),嗜群血蜱1只(1/239)。家畜中A.ovis感染率22.39%(150/670),牡丹江地区家畜绵羊无形体阳性率为12.10%(53/438),横断山区家畜绵羊无形体阳性率为41.81%(97/232)。
  使用HL-60细胞成功从家畜血液中分离培养A.ovis,并通过PCR、瑞士吉姆萨染色IFA、FISH、扫描电镜等手段对分离物进行了鉴定。
  2014-2016年共收集到蜱咬病人血样1631份,2010-2016年共收集386例蜱咬病人双份血清。针对2014-2016年主动监测PCR初筛阳性的蜱咬病人双份血清进行IFA检测。针对2010-2016所有蜱咬病人双份血清采用IFA方法进行回顾性调查。在主动监测和回顾性调查中各发现1例A.ovis感染患者。
  五、研究结论:
  经过有针对性的对A.ovis媒介蜱和宿主动物调查,我们发现森林革蜱是牡丹江地区A.ovis的主要媒介蜱,绵羊、山羊和牛均是A.ovis的宿主动物。蜱及家畜中A.ovis的发现证实牡丹江地区为A.ovis的自然疫源地。通过HL-60细胞首次实现了A.ovis的分离培养并进行了鉴定。基于主动监测和回顾性调查中各发现了1例A.ovis感染病例,补充了A.ovis人的直接证据。也反映了A.ovis很难引起人无形体病。
  六、意义与创新性
  由于感染症状较轻,我们常常忽视绵羊无形体病,本研究显示绵羊无形体病在家畜中广泛存在,对人类有潜在威胁应予以足够的重视。首次实现了动物源A.ovis的分离培养,尽管A.ovis在HL-60细胞中的培养仅能维持四个月,但可以用来制作抗原片用于A.ovis感染的检测。临床感染病例的发现,为进一步研究绵羊无形体病的致病性和临床表现谱提供了重要依据。
[硕士论文] 陈士雷
药学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:疟疾是由蚊虫传播的一种疾病,是严重危害人类健康的全球性传染病之一,与艾滋病、结核病一起被世界卫生组织列为全球急需控制的三大公共卫生问题,广泛流行于亚洲、非洲及拉丁美洲的107个国家或地区。
  疟疾的治疗药物有很多,但是有些由于使用时间过长,不可避免的出现了一些抗药性,在研制新型抗疟药物的同时,将原有的药物组成复方制剂用于治疗疟疾不失为一种有效的手段,由蒿甲醚与本芴醇组成的复方制剂,为世界卫生组织推荐的疟疾治疗药物,在疟疾的治疗中发挥了巨大作用。但蒿甲醚与本芴醇水溶性差、生物利用度低,因此有必要提高它们的水溶性以改善生物利用度,从而减少给药量、降低毒副作用。本课题首先对复方蒿甲醚/本芴醇片剂目前企业存在的问题进行研究;然后将蒿甲醚制备包合物,本芴醇制备纳米脂质载体,改善蒿甲醚和本芴醇溶解度,提高生物利用度的方法,通过动物实验验证溶解度的改善和生物利用度的提高,为复方蒿甲醚/本芴醇新剂型的开发提供依据。
  1.复方蒿甲醚/本芴醇片的处方工艺改进
  目前“复方蒿甲醚/本芴醇片”企业存在的主要问题是:可压性差、黏冲、崩解时间长,溶出度低。
  对蒿甲醚和本芴醇分别制粒、分别压片,确定粘冲的原因,以分散均匀性、脆碎度、粘冲情况为评价指标,分别选用乳糖、甘露醇、MCC、乳糖与MCC的混合物作为填充剂,通过改变处方组成成分及比例调节可压性差;采用薄膜液法、改变制粒工艺,解决片剂生产过程中存在的粘冲问题;在保证片子硬度和脆碎度合格的同时,减小片子压力,分别选用L-HPC、CMS-Na、PVPP作为崩解剂进行筛选,调节使用崩解剂的种类、用量和加入方法等改善片剂崩解时间和溶出度。
  结果表明,采用薄膜液法解决粘冲问题,该方法简单有效、便于大规模生产。以MCC作为填充剂效果最佳;分别选用不同浓度的HPMC E50溶液作为粘合剂进行筛选,最终选择3%的HPMC E50溶液作为粘合剂解决粘冲问题;选用L-HPC和PVPP作为崩解剂,分别内加75%外加25%,压片厚度选择2.7mm,压片速度选择15rpm。三批重现性试验所制备的片剂,外观、含量、含量均匀度、脆碎度均符合要求。
  以上通过处方工艺改进,复方蒿甲醚和本芴醇片的溶出度较原工艺片有所提高,但蒿甲醚的溶出较慢,本芴醇的溶出介质中加入了较多的表面活性剂才满足溶出要求,与体内环境差别较大,因此,寻找新的方法提高蒿甲醚和本芴醇的溶解度,提高其生物利用度非常重要。
  2.蒿甲醚-2-HP-β-CD包合物研究
  针对蒿甲醚的结构和理化性质,选择2-HP-β-CD为载体制备包合物增加其溶解度。
  (1)将蒿甲醚与1mol/1盐酸进行衍生化反应,采用UV法测定蒿甲醚包合物的含量并进行了方法学考察;
  (2)采用溶液搅拌法制备蒿甲醚包合物,分别对投料比、搅拌时间、搅拌温度进行了考察,以载药量和包合率为评价指标,对处方工艺因素进行优化,通过重现性试验确定了处方工艺的稳定性;
  (3)分别用红外光谱法、差示扫描量热法、溶解度实验和熔点测定法对所制备的包合物进行了验证,并对包合物的稳定性进行了初步考察;
  (4)建立了高效液相法测定血浆样品中蒿甲醚浓度的方法并进行了方法学考察,以火鼠为研究对象,分别灌胃给予蒿甲醚原料药和包合物,分别于给药后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8h于大鼠颈静脉窦取血,将样品处理后进行血药浓度的测定,绘制蒿甲醚的血浆药物浓度随时间变化的曲线,用DAS2.0软件求算相关药物动力学参数,对原料药和包合物的体内释药进行分析比较。
  结果表明:
  (1)蒿甲醚衍生物在1 mmol/1盐酸溶液中,线性关系良好,精密度、回收率高,辅料不干扰主药测定,采用UV法测定蒿甲醚包合物的含量方法可行。分别用研磨法、溶液搅拌法和超声法制备了蒿甲醚包合物,结果选择溶液搅拌法,投料比为1:36、搅拌温度50℃、搅拌时间1h,三批重现性实验制备的包合物载药量和包合率分别为2.63%±0.01%和97.53%±0.36%,说明该法制各蒿甲醚包合物处方工艺稳定、重现性好。
  (2)红外光谱法验证结果表明包合物的红外图谱和2-HP-β-CD的基本一致,与蒿甲醚和2-HP-β-CD物理混合物的图谱略有不同;差示扫描量热法验证结果表明,与物理混合物比较,包合物中药物的吸热峰和放热峰均消失;溶解度实验测定结果显示蒿甲醚包合物的溶解度为11.28±2.24mg/ml,较原料药在水中的溶解度1.18μg/ml有显著提高;采用毛细管法测定蒿甲醚包合物的熔点,结果为226-229℃,查阅文献可知,蒿甲醚的熔点为86-89℃,2-HP-β-CD的熔点为278℃,蒿甲醚包合物的熔点与原料药和载体材料明显不同。以上四种验证方法均说明包合物已形成。
  (3)稳定性实验考察结果表明,在高温和光照条件下,包合物中的药物含量下降较少,高湿条件下药物含量下降较大,具有较强的引湿性,因此,该制剂储存时,应密闭防潮保存。
  (4)采用高效液相法测定血浆样品中蒿甲醚浓度,专属性强、线性关系良好、精密度高、回收率和稳定性符合测定要求,内源性成分不干扰主药测定,符合生物测定要求。药物动力学实验结果表明,原料药组和包合物组的消除半衰期(t1/2)分别为2.73h和1.80h;平均滞留时问(MRT0-∞)分别为3.94h和3.72h;达峰时(tmax)分别为3h和2h;峰浓度(Cmax)分别为4.19μg/ml和8.86μg/ml;血药浓度-时问曲线下面积(AUC0-∞)分别为25.55μg/ml·h和36.88μg/ml·h,血浆中的AUC0-∞包合物组是原料药组的1.44倍,蒿甲醚制备成包合物后,吸收更快,起效更为迅速,生物利用度明显提高。
  3.本芴醇NLC的研究
  针对本芴醇的结构和理化性质,选择纳米脂质载体(NLC)增加其溶解度。
  (1)采用UV法测定本芴醇NLC的含量并进行了方法学考察;
  (2)采用超声分散法制备本芴醇NLC,以粒径、包封率、载药量为评价指标,进行了处方工艺的筛选,考察了药脂比、液固脂质比、相体积比等处方因素以及滴加速度、乳化时间、搅拌时间等工艺因素,通过重现性试验验证处方工艺的稳定性,并对本芴醇NLC理化性质进行了研究;
  (3)采用冷冻干燥技术制备本芴醇NLC粉针剂,筛选了冻干保护剂甘露醇的用量,以粒径、包封率为评价指标对三批重现性试验制各的本芴醇NLC进行评价;
  (4)对本芴醇NLC冻干制剂的稳定性进行了初步考察;
  (5)建立了高效液相法测定血浆样品中本芴醇浓度的方法并进行了方法学考察,以大鼠为研究对象,分别灌胃本芴醇原料药和本芴醇NLC,分别于给药后0.5、2.0、5.0、8.0、24.0、30.0、48.0、54.0、72.0、120.0h于大鼠颈静脉窦取血,将样品处理后进行血药浓度的测定,绘制本芴醇的血浆药物浓度随时间变化的曲线,用DAS2.0软件求算相关药物动力学参数,对原料药和NLC的体内释药进行分析比较。
  结果表明:
  (1)本芴醇在乙醇溶液中,线性关系良好,精密度、回收率高,辅料不干扰主药测定,采用UV法测定本芴醇NLC的含量方法可行。
  (2)分别用熔融乳化-低温固化法、超声分散法、高压匀质法制备本芴醇NLC,结果选择超声分散法,确定的最优处方为:药脂比1∶8、液固脂质比为1∶3、泊洛沙姆188的浓度为0.50%、相体积比1∶4;最佳制备工艺为:滴加速度12ml/h、乳化时间40min、搅拌速度1000rpm、超声时间15min。按最优处方工艺制备三批本芴醇NLC,电镜图片显示其为类球形、大小均一,粒径为213.30±8.54nm,分布较为均匀,pH为6.43±0.19,包封率为94.90±0.51%、载药量为9.05±0.19%,表明处方工艺稳定,重现性好。
  (3)进行了本芴醇NLC冻干制剂的研究,筛选了冻干保护剂甘露醇的用量,以粒径、包封率为指标对三批重现性试验制备的本芴醇NLC进行评价,结果为,粒径295.7±11.9nm,包封率93.70±1.52%,说明处方工艺稳定,重现性好。
  (4)稳定性实验考察结果表明,在高温和光照条件下,本芴醇NLC中的药物含量下降程较少,高湿条件下药物含量下降较大,具有较强的引湿性,因此,该制剂储存时,应密闭防潮保存。
  (5)采用高效液相法测定血浆样品中本芴醇浓度,专属性强、线性关系良好、精密度高、回收率和稳定性符合测定要求,内源性成分不干扰主药测定,符合生物测定要求。药物动力学实验结果表明,原料药组和NLC组的消除半衰期(t1/2)分别为23.09h和42.89h;平均滞留时间(MRT0-∞)分别为43.81h和42.00h;达峰时(tmax)分别为8h和2h;峰浓度(Cmax)分别为2.57μg/ml和4.81μg/ml;血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-∞)分别为111.07μg/ml·h和182.93μg/ml·h,血浆中的AUC0-∞包合物组是原料药组的1.65倍,蒿甲醚制备成NLC后,吸收更快,起效更为迅速,生物利用度明显提高。
  4.结论
  薄膜液法解决片剂工业生产中的粘冲问题是一种有效的、便于大规模生产的方法;溶液搅拌法制备的蒿甲醚包合物溶解性较原料药显著提高,生物利用度也有较大改善,该方法对解决难溶性药物的溶解度,对包合物的工业生产具有一定的指导意义;采用超声分散法制备了本芴醇NLC,该方法有效的改善了本芴醇的生物利用度,所采用的制备方法对NLC的制备具有一定的指导意义,为改善其它难溶性药物的溶解性,提供了一种有效的手段。
[硕士论文] 沈元曦
动物学 上海师范大学 2017(学位年度)
摘要:日本血吸虫病(schistosomiasis)流行广泛、危害严重,是我国重大的公共卫生问题之一。日本血吸虫可感染40多种哺乳动物宿主,不同宿主对血吸虫感染的适宜性存在较大的差别。不同宿主有着独特的机体内环境,会影响日本血吸虫的生长发育、雌雄合抱和虫卵形成,最终影响虫体在宿主体内的存活状态及宿主的病理变化。
  microRNAs为近年来发现的一类小分子非编码RNA,它在包括免疫应答在内的许多生物学过程中均发挥重要的转录后调控功能。microRNA223(miR-223)是一种在髓系细胞中特异高表达的miRNA,前期研究表明,不同适宜性宿主感染日本血吸虫后,miR-223表达水平呈现较大差别,可能在宿主抗血吸虫感染天然免疫中发挥重要的作用,但对其调节机制等仍了解甚少。本文比较分析了不同易感性宿主感染日本血吸虫后miR-223的表达差别,再深入分析了血吸虫童虫抗原SSA和虫卵抗原SEA等抗原刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后miR-223的表达差别,及巨噬细胞转染miR-223模拟物后,对SSA和SEA抗原刺激的调节作用。
  研究结果为加深理解宿主miR-223在抗血吸虫感染天然免疫中的调节作用提供了理论基础。
  1.不同易感宿主在血吸虫感染早期miR-223的表达水平分析
  分别用日本血吸虫尾蚴感染易感宿主BALB/c小鼠、非易感宿主Wistar大鼠和抗性宿主东方田鼠,在感染后3d、7d和10d收集血清,应用荧光实时定量PCR法测定了不同宿主在血吸虫感染前和感染后不同时期里miR-223的表达情况。结果显示不同易感性宿主感染血吸虫后miR-223表达呈现明显的差别,小鼠感染血吸虫后miR-223的表达水平呈上升趋势,大鼠先上升后略有下降,而东方田鼠则呈下降趋势。另从miR-223的总体表达水平看,感染日本血吸虫的小鼠一直高于大鼠,而大鼠一直高于东方田鼠。研究结果提示miR-223可能在不同适宜性宿主抗血吸虫感染中发挥独特的调节作用,并影响着日本血吸虫在不同适宜性宿主体内的生长发育及存活。
  2.不同抗原刺激巨噬细胞后miR-223的表达水平分析
  分别以血吸虫童虫抗原SSA、虫卵抗原SEA和三种TLR配体刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,分析不同抗原刺激后miR-223的表达变化。结果表明POLY(I:C)(TLR3受体配体)和LPS(TLR4受体配体)刺激巨噬细胞后都下调了miR-223的表达,而PAM3CSK4(TLR2受体配体)刺激后上调了miR-223的表达。血吸虫童虫抗原SSA和虫卵抗原SEA刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后,前者下调了miR-223的表达,而后者则起上调作用,提示SSA和SEA刺激巨噬细胞时,miR-223可能通过不同的TLR信号通路发挥调节作用。
  3. miR-223对血吸虫抗原刺激巨噬细胞的调节作用分析
  为明确miR-223对SSA和SEA刺激巨噬细胞的调节作用,先用miR-223模拟物转染RAW264.7巨噬细胞,再分别用SSA或SEA刺激,进而分析巨噬细胞转染/刺激后部分TLR受体及其相关通路分子、炎性分子、巨噬细胞表面分子和iNOS等的表达变化。
  结果显示,单用SEA刺激巨噬细胞时,TLR1、2、3、4的表达都呈现不同水平的上调,其中TLR2和TLR1表达水平差异显著(P<0.05),TLR通路分子MyD88表达下调,而TRIF表达上调,IL-1β、IL-10、IL-6和TNF四种炎性因子都呈不同水平上调。而单用SSA抗原刺激时,TLR4和TLR1的表达上调显著(P<0.05), TLR2表达则显著下调,MyD88表达上调,TRIF表达水平下调,IL-1β和IL-10表达水平上调,TNF表达略有下调,IL-6表达水平变化不明显。提示SEA和SSA识别和激活的巨噬细胞TLR分子和通路分子,及诱导产生的免疫效应分子可能有差别,在刺激和诱导宿主抗血吸虫感染和血吸虫致病过程中可能也发挥不同的作用。
  当先用miR-223模拟物转染细胞,再用SEA刺激细胞时,除TLR2与未刺激细胞表达水平相当外,TLR1、3、4表达水平都低于未刺激细胞,其中TLR4下调最明显。通路分子中MyD88表达水平上调,TRIF表达水平下调。炎性因子中IL-6、IL-1β、IL-10呈上调表达,而TNF表达下调。但相对单用SEA刺激,巨噬细胞各种炎性因子的表达都呈不同程度下调,其中IL-6下调最明显,其次是IL-1β。提示miR-223对SEA刺激巨噬细胞TLR1、2、3、4可能有负调控作用,对MyD88可能有正调控作用,而对TRIF则起负调控作用,同时诱导了IL-6、IL-1β、IL-10和TNF呈下调表达。
  而miR-223模拟物先转染巨噬细胞,再用SSA刺激细胞时,除了TLR4显著上调(P<0.05),其余3种TLR的表达水平都下调。其中相对于单独用SSA抗原刺激的细胞,TLR3表达水平相当,TLR1、4表达水平下调,TLR2表达水平上调。信号通路分子MyD88和TRIF表达都下调,其中MyD88的表达水平比单独用SSA抗原刺激的低,而TRIF则比单独用SSA抗原刺激的高。炎症分子IL-1β和IL-10上调表达,TNF和IL-6则下调表达。但相对单用SEA刺激,TNF的表达水平略有上调,其余三种都呈下调表达,其中IL-1β下调最明显。提示miR-223对SSA抗原刺激的巨噬细胞TLR1、4表达可能有负调控作用,对TLR2表达有正调控作用,对MyD88可能有负调控作用,对TRIF则起正调控作用。同时诱导IL-1β、IL-10和IL-6表达下调。
  本研究比较分析了不同易感性宿主感染日本血吸虫后miR-223的表达差别,同时探讨了miR-223对日本血吸虫虫卵抗原SEA和童虫抗原SSA刺激巨噬细胞的调控作用,该研究结果为阐述miR-223和巨噬细胞在抗血吸虫天然免疫应答中的调节作用机制增添了新的认识。
[博士论文] 汪敏
细胞生物学 中国科学技术大学 2017(学位年度)
摘要:疟疾是由原虫类寄生虫疟原虫感染引起的热带疾病,是目前危害人类健康的主要传染性疾病之一。感染地区主要分布在撒哈拉沙漠以南的非洲地区以及东南亚。5岁以下的儿童是疟疾易感人群。感染疟疾的病人表现出严重贫血、代谢性酸中毒、肺衰竭以及脑疟等病理特征。抗疟疾类药物是目前最有效的控制和治疗疟疾的手段。然而由于耐药疟原虫株的出现,尤其在东南亚地区出现耐青蒿素的疟原虫株,使得疟疾防治工作面临越来越大的困难,因此,人们寄希望于高保护效率的疟疾疫苗。研究疟原虫基因的功能以及疟原虫与宿主之间的相互作用将为研发疟疾疫苗和发现新的抗疟药物靶标提供可靠的信息。疟原虫生长发育的红细胞期(红内期)阶段,是引起疟疾病人严重临床病理的阶段,此阶段,疟原虫是单倍体基因组,因此使用永久性基因敲除技术无法研究必需基因的功能。在我们的研究中,我们使用小鼠伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)和夏氏疟原虫(Plasmodiumchabaudi)作为疟疾研究的模型进行以下几个问题的探索和研究(i)在伯氏疟原虫探索建立了四环素诱导基因表达系统(Tetracycline-inducedgeneexpressionsystem,Tet-on);并采用该系统条件性敲除红内期P.berghei己糖转运体(HexoseTransporter1,HT1)基因;分析研究了该遗传致弱性全虫疫苗的疫苗效能。(ii)研究红内期P.berghei硫辛酸蛋白连接酶1(Lipoicacidproteinligase1,Lp1A1)基因的功能,并探究可能的代偿途径(iii)在P.chabaudi中尝试建立条件性基因敲除系统,比较研究疟原虫与宿主细胞之间的相互作用。
  1.条件性敲除系统的建立及全虫疟疾疫苗的研究
  全虫疟疾疫苗被认为是最有效的疟疾疫苗策略,然而由于现有的疟疾全虫疫苗策略存在很多技术上的问题,从而限制了这些全虫疟疾疫苗进入临床研究。在本研究中,我们使用Tet-on系统条件性敲除了红细胞期P.berghei的必需基因己糖转运体(HTconditionalknockout,HT-cKO),分析了HT-cKO疟原虫的表型特症,并研究了HT-cKO致弱性疟原虫感染诱导免疫保护力的效果。HT-cKO转基因疟原虫感染小鼠后,在提供无水四环素(anhydrotetracycline,ATc)的情况下,可以正常增殖和持续提供大量的转基因全虫疫苗;但在不提供ATc的情况下,转基因疟原虫的生长受到严重抑制,表现为自灭性感染过程,这些清除了HT-cKO疟原虫初次感染的小鼠对野生型疟原虫攻击感染表现出完全的免疫保护力。进一步分析表明,HT-cKO疟原虫在小鼠体内连续传代未检测到回复突变,表明该转基因疟原虫是遗传稳定的,具有免疫原性的,同时也可以大规模培养供给疫苗使用。该研究结果表明,采用条件性敲除系统建立遗传可控致弱并可诱导理想的免疫保护力的转基因疟原虫是开发全虫疟疾疫苗的一条可行途径。
  2.红内期P.berghei拥有硫辛酸拯救代偿途径
  硫辛酸是α-酮酸脱氢酶(α-ketoaciddehydrogenase,KADH)多酶复合物和甘氨酸切割系统(GlycineCleavageSystem,GCV)的必需辅因子,这些脱氢酶复合物主要参与能量代谢、脂肪酸生物合成和氨基酸降解。在顶复门微生物的研究中发现,硫辛酸蛋白连接酶1(LplA1)和硫辛酸蛋白连接酶2(LplA2)催化从环境中摄取的外源硫辛酸连接到线粒体定位的多酶复合物E2亚单位上,而辛酰载体蛋白(ACP)-N-辛酰转移酶(octanoyl-[ayclcarrierprotein]:proteinN-octanoyltransferase,LipB)和硫辛酸合成酶A(Lipoicacidsynthase,LipA)是定位在顶复门微生物的顶体中,催化硫辛酸的生物合成,将硫辛酸连接到丙酮酸脱氢酶复合物的硫辛酸结构域。上述硫辛酸蛋白连接酶或合成酶在硫辛酸利用中的功能有初步研究,但在顶复门微生物中的相互关系则尚未阐明。
  我们利用Tet-on系统条件性敲除了红内期P.berghei的LplA1基因(LplA1conditionalknockout,LplA1-cKO)并且分析研究了LplA1-cKO疟原虫的表型变化和特征。结果表明,在不提供ATc时,LplA1-cKO疟原虫在感染的前八天生长被严重的抑制,而八天之后转基因疟原虫恢复了生长增殖能力。我们用实时定量PCR分析LplA1基因和LplA2基因的mRNA表达,并发现,在缺失LplA1的条件下,LplA2代偿性增高表达以补偿了LplA1的功能。由此得出结论:红内期P.berghei有选择性硫辛酸拯救途径,LplA2可能是LplA1的代偿基因。
  3.夏氏疟原虫P.chabaudi建立条件性基因敲除系统
  伯氏疟原虫P.berghei在小鼠可引起致死性感染,但夏氏疟原虫P.chabaudi感染后,小鼠能清除疟原虫的感染。此外,小鼠夏氏疟原虫P.chabaudi与人恶性疟原虫P.falciparum在许多生物学特征上表现出相似性。我们试图在P.chabaudi中建立条件性敲除系统,以便将致死型P.berghei和非致死型P.chabaudi两种疟原虫做同步比较研究,以揭示不同种属疟原虫特定基因功能的差异以及疟原虫在网织红细胞和成熟红细胞中代谢的不同特点。虽然在P.chabaudi疟原虫中成功转入了条件性基因敲除质粒,并验证质粒被整合到疟原虫基因组,但由于该疟原虫生存力较低,我们未能成功克隆获得基因型一致的转基因P.chabaudi疟原虫。
[硕士论文] 李晋文
比较医学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 猴B病毒血清学检测方法的比较
  目的:
  猴B病毒(Monkey B virus,BV)(也称猴疱疹病毒Ⅰ型(Cercopithecine herpesvirus1)),是重要的人兽共患病原,属一类病原,四级生物安全实验室防护。国家标准检测要求猴B病毒作为抗原,但由于生物安全问题,其抗原制备受到很大限制,因此使用替代抗原进行其血清学检测并对其比对验证。
  方法:
  应用2种ELISA方法(抗原分别为BV和HVP2)、1种IEA方法(抗原为HSV-1)和1种IFA方法(抗原为HSV-1)对本实验室135份送检恒河猴血液样品进行筛查,对阳性及可疑样品再用Western Blot(抗原为HSV-1)方法以及以HSV-1gC1纯化糖蛋白为抗原的免疫印迹方法验证。
  结果:
  HVP2-ELISA、BV-ELISA、HSV-1-IEA和HSV-1-IFA阳性检出率分别为36.3%、38.5%、35.6%和34.1%;4种方法检测结果一致的样品占91.9%(124/135),阳性结果均可被WB和免疫印迹方法确证;可疑样品11份,27.3%(3/11)的样品经验证检验为阳性。
  结论:
  几种抗体检测方法检测结果符合率较高,均可以作为初筛检测方法;阳性样品及可疑样品的确证检验应使用多种方法,避免漏检;在ELISA法初筛检测中,阳性样品的判定标准可适当降低,避免可疑样品漏检。
  第二部分 猴B病毒诊断表位的研究
  目的:
  鉴定B病毒特异的检测抗原表位。
  方法:
  利用生物信息学的预测分析技术对BV和HSV全病毒的序列进行分析比对,选择B病毒特异表位以及B病毒可能的线性表位肽段合成多肽;同时,利用跨叠多肽阵列技术,针对B病毒核心抗原蛋白gB和gD的氨基酸序列进行跨叠阵列设计并合成多肽。再利用合成肽与B病毒标准血清样品进行ELISA验证,评价表位肽段的特异性和敏感性。
  结果:
  ELISA测定结果显示,gD蛋白肽段(序列为AQLPPNWHVPEAS)和gB蛋白肽段(序列为YVRELLREQERRPGDAAATPKP SA)可检测猴B病毒抗体,与传统ELISA比较,二者的组合检测敏感性为98%(49/50);然而,使用生物信息学预测的B病毒特异表位在多次实验无法获得证实。
  结论:
  多肽表位抗原,在ELISA实验中与病毒颗粒抗原相比,具有较为一致的准确性,且检测灵敏度高,此类抗原可以作为初筛的检测技术应用于猴B病毒检测;生物信息学预测的B病毒特异表位多位于B病毒的功能基因位置,抗原性较差,而最后具有检测应用价值的表位仍位于核心抗原蛋白中。
[硕士论文] 杨丽雪
病原生物学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:疟疾是一种虫媒性传染病,主要流行于热带及亚热带地区,与艾滋病、结核病并称为世界三大传染病,严重威胁着人类的健康。据WHO最新数据统计,2015年全球共发生2.12亿疟疾病例,约有42.9万人死于疟疾,其中多数为撒哈拉以南非洲地区的五岁以下儿童。药浸蚊帐和以青蒿素为基础的联合疗法是减少疟疾发病率的重要策略。但是,随着蚊媒对杀虫剂拟除虫菊酯的耐药性以及疟原虫耐药虫株的出现,使得疟疾的预防和控制手段面临巨大的挑战。
  由于疟原虫抗原具有阶段特异性、株间变异性、序列多态性等特点,恶性疟原虫红内期疫苗多种候选抗原单独或简单的联合使用时,其免疫效果并不理想。因此,针对恶性疟原虫抗原多样性所构建多表位重组蛋白疫苗具有一定的优势。本课题组前期工作中,利用“表位重组技术”构建了多表位基因库,并筛选出免疫原性最佳、稳定性最好的疟原虫随机重组抗原-1(malaria random constructed antigen-1,M.RCAg-1)。该疟疾疫苗己在小鼠、新西兰兔和非人灵长类动物模型中证实具有较强的免疫原性,并可在体外抑制恶性疟原虫的生长,具有较好的研究前景。本研究的目的是寻找一种安全、有效,并可使M.RCAg-1应用于临床的免疫佐剂。
  本研究在课题组前期工作的基础上,选用了具有较好研究前景的纳米乳佐剂,选取三种不同的剂量(剂量A为纳米乳∶抗原=7∶3;剂量B为纳米乳∶抗原=5∶5;剂量C为纳米乳∶抗原=3∶7),将其与M.RCAg-1相配伍,在Balb/C小鼠和新西兰兔体内评价其免疫效果,筛选出最佳纳米乳佐剂剂量组,为M.RCAg-1的临床前研究奠定基础。目前主要取得的进展:
  1.将三种不同剂量的纳米乳佐剂与M.RCAg-1相配伍免疫小鼠,均能诱导机体产生较高的体液免疫反应。
  2.纳米乳剂量A佐剂与M.RCAg-1相配伍免疫新西兰兔,获得疟原虫体外生长抑制率最高32.6%,纳米乳剂量B佐剂与M.RCAg-1相配伍免疫新西兰兔,获得疟原虫体外生长抑制率最高32.7%。
  3.证实纳米乳单独作为重组蛋白疫苗的佐剂效应弱,提示需要添加其它免疫增强剂。
[硕士论文] 韩彦雪
应用数学 华中师范大学 2017(学位年度)
摘要:疟疾是世界上最常见也是最严重的热带传染病之一,对人类生活带来了极大的危害.为控制疟疾的传播,科学家们作出了大量的研究.世界卫生组织和很多国家对疟疾也高度重视,均采取了相应措施以对抗疟疾.本文建立了两个含有绝育蚊子的疟疾传播模型,对疟疾模型作出定性分析并得到相关结论.最后根据所得出的结论提出了相应的控制策略.
  本文共分为四章,第一章的引言部分介绍了疟疾的发病原理和传播机制以及科学家们为对抗疟疾所采取的相关措施.预备知识部分介绍了本文所涉及到的传染病动力学的相关概念和定理.本章最后介绍了疟疾动力学模型的发展进程并提出了本文的基本模型.
  第二章研究了绝育蚊子常数投放的疟疾传染病模型.首先在第一节中研究了仅含有绝育蚊子和野生蚊子的二维动力学模型,通过对模型进行定性分析,寻找到绝育蚊子的投放阈值b0,当绝育蚊子投放量b大于或等于b0,野生蚊子最终消失;当b小于b0时,野生蚊子与绝育蚊子共存.接着本章研究了既含有人口项又含有蚊虫项的八维疟疾模型,通过对无病平衡点局部稳定性的分析,得出当基本再生数R0小于1时,无病平衡点局部渐进稳定;当基本再生数R0大于1时,地方病平衡点存在.通过令R0=1寻找到小于b0的更具有实际意义的投放阈值b*.数值模拟显示结论与实际相符,数值模拟过程中发现当R0小于1时,地方病平衡点依旧存在,因此系统在R0=1处可能存在后向分支,则第四节中对后向分支的存在性作出了理论性证明.本章结论显示投放绝育蚊子对控制疟疾传播有显著作用.
  考虑到有些地区野生蚊子数量相对较少,从经济学角度来讲,常数投放的成本较大,因此第三章研究了绝育蚊子成比例投放的疟疾传染病模型,相应的此时野生蚊子输入项中考虑Allee效应.具体的分析计算过程与常数投放类似,通过数值模拟,验证所得结论与实际相符.绝育蚊子对疟疾控制作用显著,而且根据不同地区蚊子的数量情况,采取不同的投放措施也是必要的.绝育蚊子投放成本相对较大,因此要在控制疟疾的同时尽可能降低成本.
  在第四章中,对本文的主要结论作出总结并提出了未来还需要继续研究努力的目标.
[硕士论文] 诺欧
公共卫生 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  疟疾(Malaria)是目前世界危害较严重的虫媒传染性疾病,主要在热带、亚热带地区广泛流行,是威胁人类健康和经济发展的主要因素之一。虽然近年来,世界卫生组织防控疟疾的国际项目与措施的采用,大幅度的降低了疟疾的发病、死亡率,但非洲地区仍然是疟疾的高发地区。尼日尔共和国(The Republic of Niger)是恶性疟疾最主要的传播地区,虽然这十几年对疟疾采取了相关控制策略和措施,疟疾发病率得到了一定的控制,但疟疾仍然是影响当地居民健康的主要疾病,是威胁当地公共卫生的主要问题。当地对疟疾的监控系统和措施力度不足,也没有太多的文献研究尼日尔共和国疟疾的流行。本研究旨在探讨尼日尔共和国2009-2014年疟疾疫情分布特征,为相关部门制定疟疾防控策略与措施提供依据。
  方法:
  本研究通过收集尼日尔共和国2009-2014年疟疾患病例数、死亡例数、重症病例数、孕妇疟疾病例数,采用描述性流行病学方法分析尼日尔共和国疟疾流行的时间、空间和人群分布特征,重点分析5岁以下儿童疟疾患病、死亡和时间、空间分布特征,趋势检验采用χ2趋势检验,分析不同时间疟疾患病率、死亡率是否有差异。χ2检验分析对不同地区、不同年龄的疟疾患病率、死亡率和病死率是否有差异。
  结果:
  (1)疟疾流行概况:总患病率为23.88%,死亡率为0.022%,病死率为0.11%;重症疟疾病例占总疟疾病例数6.58%,孕妇疟疾病例占总疟疾病例数的2.11%。
  (2)疟疾流行的时间分布:不同年份疟疾患病率变化趋势差异有统计学意义(X2=88195.82,P=0.000);不同年份疟疾死亡率变化趋势差异有统计学意义(X2=940.64,P=0.000);不同年份疟疾病死率变化趋势差异有统计学意义(X2=1698.55,P=0.000)。
  (3)疟疾流行的地区分布:疟疾患病率最高的是多索(24.19%),最低的地区为阿加德兹(11.42%),不同地区的疟疾患病率差异有统计学意义(X2=519232.31,P=0.000);疟疾死亡率最高的是迪法(0.042%),最低的为首都尼亚美(0.004%),不同地区的疟疾死亡率差异有统计学意义(X2=2608.07,P=0.000);疟疾病死率最高的为阿加德兹(0.50%),最低的为首都尼亚美(0.02%),不同地区的疟疾病死率差异有统计学意义(X2=4704.21,P=0.000)。
  (4)疟疾流行的人群分布:年龄分布中,5岁以下儿童感染疟疾占总疟疾病例数的52.24%,5岁以下儿童与5岁以上人口疟疾患病率差异具有统计学意义(X2=2.196x107,P=0.000);死亡率差异具有统计学意义(X2=33050.94,P=0.000);病死率差异具有统计学意义(X2=969.60, P=0.000)。
  (5)5岁以下儿童疟疾流行概况:5岁以下儿童疟疾患病率为54.65%,死亡率为0.071%,病死率为0.13%。
  (6)5岁以下儿童疟疾流行的时间分布:5岁以下儿童疟疾年均患病率变化趋势差异具有统计学意义(X2=5901.28,P=0.000);年均死亡率变化趋势差异具有统计学意义(X2=233.58,P=0.000);年均病死率变化趋势差异具有统计学意义(X2=341.50,P=0.000)。
  (7)5岁以下儿童疟疾流行的地区分布:5岁以下儿童疟疾患病专率最高为首都尼亚美(68.73%),最低为阿加德兹(20.96%),不同地区5岁以下儿童疟疾患病专率差异具有统计学意义(X2=1148153.81,P=0.000);死亡专率最高为蒂拉贝里(0.0944%),最低为首都尼亚美(0.0059%),不同地区5岁以下儿童疟疾死亡专率差异具有统计学意义(X2=1367.07, P=0.000);病死专率最高为阿加德兹(0.405%),最低为首都尼亚美(0.009%),不同地区5岁以下儿童疟疾病死专率差异具有统计学意义(X2=2381.57,P=0.000)。
  结论:
  尼日尔共和国2009-2014年疟疾患病呈隔年变化趋势;除2010年外,其余年份疟疾的死亡率和病死率基本稳定。疟疾患病地区分布主要在多索、马腊迪和塔瓦。5岁以下儿童是尼日尔共和国疟疾感染的重点人群,患病率和死亡率均高于全国水平,病死率几乎持平。不同地区疟疾流行不同,具有环境和行政区域特征。
[硕士论文] 杨继红
应用数学 华中师范大学 2017(学位年度)
摘要:疟疾是全世界流行最为广泛的疾病之一,主要流行于非洲.2015年,仍有91个国家和地区存在疟疾传播问题.疟疾作为一种蚊媒疾病,由于抗疟药的广泛应用,疟原虫产生了抗药性,这使得控制疟疾传播更加困难,但最新的研究显示,疟原虫对一种药物的抗药性不能通过蚊子传播,这种特征可以应用于控制疟疾的传播.同样,HIV作为一个全球主要的公共卫生问题也主要流行于非洲,因此疟疾与HIV的共患是现如今不得不关注的一个问题.
  本文一共分为四章.第一章介绍了疟疾及HIV的流行现状、研究背景、研究现状及相关的数学知识.
  第二章,本章研究了一类疟疾的抗药性不能通过蚊子传播的模型.通过计算,得出了两个阈值R0,R*.当R0<1时,系统存在一个局部渐近稳定的无病平衡点;当R0>1时,系统存在唯一的正平衡点;当R0<1且k3>k2+k4时,若R*≥1,系统存在正平衡点,若R*<1,系统不存在正平衡点;之后,本文证明了后向分支的存在性,分析了抗药性生成率σh和疟疾患者的康复率ηi(i=1,2)对疟疾传播的影响.最后,利用数值模拟验证了所得结论的正确性.
  第三章,本章研究了一类疟疾与分阶段的HIV共患的模型.通过计算,得出了几类基本再生数R0,R0H,R0M,R0M(EH),R0H(EM).当R0<1时,系统存在一个局部渐近稳定的无病平衡点;当R0H>1时,系统存在唯一一个仅有HIV传播的边界平衡点EH,且平衡点是局部渐近稳定的;当R0M>1时,系统存在唯一一个仅有疟疾传播的边界平衡点;当R0M<1且h3>h2+h4时,系统在R*≥1时存在正平衡点;当R0H>1时,若R0M(EH)<1,平衡点EH是稳定的,仅有HIV流行,若R0M(EH)>1,平衡点EH是不稳定的,疟疾打破仅有HIV传播的平衡态,两种疾病共患;当R0M>1时,若R0H(EM)<1,平衡点EM是稳定的,仅有疟疾流行,若R0H(EM)>1,平衡点EM是不稳定的,HIV打破仅有疟疾传播的平衡态,两种疾病共患.最后,通过参数模拟得出对患者I2M进行疟疾治疗对HIV的治疗起到了积极的影响和在对疟疾进行治疗的情况下疟疾对HIV的传播起到了抑制的作用.
  第四章,总结了本文的主要结论并指出了文章中的不足与今后的研究方向.
应用数学 安徽大学 2017(学位年度)
摘要:传染病是严重危及人类健康和制约社会经济发展的一类疾病,每年被感染的人数很多,部分传染病死亡率也很高。血吸虫病是一种比较常见的传染病,常见于世界各地,老挝就是一个有血吸虫病传播的国家之一。在老挝,血吸虫病最早于公元1957年被发现在占巴塞省的两座城市(孔市和幕拉巴某市)。这两座城市都是老挝最南部的城市,位于湄公河流域,都包含有很多大大小小的岛屿,这也是滋生吸血虫病的原因之一。
  在本论文当中,我只研究老挝血吸虫病(湄公血吸虫病),其中部分用来写这篇毕业论文的资料都是来自于占巴塞医院。本文分为两章:第一章是介绍老挝血吸虫病,简单介绍老挝血吸虫病和它的历史背景,湄公血吸虫病的传播,湄公血吸虫病的防治策略包括现有问题及未来的挑战。第二章是建立血吸虫病模型。基于实际数据中的不同年龄段病人的比例不一样的现象,本章我们建立了一个湄公血吸虫病数学模型,模型当中考虑人宿主中感染的比例和钉螺宿主中感染的比例。这里我们分别将人宿主分为不同的8个年龄段(k=1,2,...,8;k代表年龄段“1:1~4岁,2:5~9岁,3:10~14岁,4:15~19岁,5:20~29岁,6:30~39岁,7:40~49,8:49>”),然后计算出平衡点的存在性,求出基本再生数,讨论模型的无病平衡点的稳定性。最后利用Matlab软件进行数值模拟,对地方病平衡点稳定性进行讨论,并针对不同年龄段病人的传染率进行控制比较,结果发现10~14岁病人的防控对湄公吸虫病的控制是最有效的,而大于49岁病人的防控是效果最差的。
[硕士论文] ABDOULAYE NOUHOU 诺欧
公共卫生 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:疟疾(Malaria)是目前世界危害较严重的虫媒传染性疾病,主要在热带、亚热带地区广泛流行,是威胁人类健康和经济发展的主要因素之一。虽然近年来,世界卫生组织防控疟疾的国际项目与措施的采用,大幅度的降低了疟疾的发病、死亡率,但非洲地区仍然是疟疾的高发地区。尼日尔共和国(The Republic of Niger)是恶性疟疾最主要的传播地区,虽然这十几年对疟疾采取了相关控制策略和措施,疟疾发病率得到了一定的控制,但疟疾仍然是影响当地居民健康的主要疾病,是威胁当地公共卫生的主要问题。当地对疟疾的监控系统和措施力度不足,也没有太多的文献研究尼日尔共和国疟疾的流行。本研究旨在探讨尼日尔共和国2009-2014年疟疾疫情分布特征,为相关部门制定疟疾防控策略与措施提供依据。
  方法:本研究通过收集尼日尔共和国2009-2014年疟疾患病例数、死亡例数、重症病例数、孕妇疟疾病例数,采用描述性流行病学方法分析尼日尔共和国疟疾流行的时间、空间和人群分布特征,重点分析5岁以下儿童疟疾患病、死亡和时间、空间分布特征,趋势检验采用x2趋势检验,分析不同时间疟疾患病率、死亡率是否有差异。x2检验分析对不同地区、不同年龄的疟疾患病率、死亡率和病死率是否有差异。
  结果:
  (1)疟疾流行概况:总患病率为23.88%,死亡率为0.022%,病死率为0.11%;重症疟疾病例占总疟疾病例数6.58%,孕妇疟疾病例占总疟疾病例数的2.11%。
  (2)疟疾流行的时间分布:不同年份疟疾患病率变化趋势差异有统计学意义(X2=88195.82,P=0.000);不同年份疟疾死亡率变化趋势差异有统计学意义(X2=940.64,P=0.000);不同年份疟疾病死率变化趋势差异有统计学意义(X2=1698.55,P=0.000)。
  (3)疟疾流行的地区分布:疟疾患病率最高的是多索(24.19%),最低的地区为阿加德兹(11.42%),不同地区的疟疾患病率差异有统计学意义(X2=519232.31,P=0.000);疟疾死亡率最高的是迪法(0.042%),最低的为首都尼亚美(0.004%),不同地区的疟疾死亡率差异有统计学意义(X2=2608.07,P=0.000);疟疾病死率最高的为阿加德兹(0.50%),最低的为首都尼亚美(0.02%),不同地区的疟疾病死率差异有统计学意义(X2=4704.21,P=0.000)。
  (4)疟疾流行的人群分布:年龄分布中,5岁以下儿童感染疟疾占总疟疾病例数的52.24%,5岁以下儿童与5岁以上人口疟疾患病率差异具有统计学意义(X2=2.196×107,P=0.000);死亡率差异具有统计学意义(X2=33050.94,P=0.000);病死率差异具有统计学意义(X2=969.60,P=0.000)。
  (5)5岁以下儿童疟疾流行概况:5岁以下儿童疟疾患病率为54.65%,死亡率为0.071%,病死率为0.13%。
  (6)5岁以下儿童疟疾流行的时间分布:5岁以下儿童疟疾年均患病率变化趋势差异具有统计学意义(X2=5901.28,P=0.000);年均死亡率变化趋势差异具有统计学意义(X2=233.58,P=0.000);年均病死率变化趋势差异具有统计学意义(X2=341.50,P=0.000)。
  (7)5岁以下儿童疟疾流行的地区分布:5岁以下儿童疟疾患病专率最高为首都尼亚美(68.73%),最低为阿加德兹(20.96%),不同地区5岁以下儿童疟疾患病专率差异具有统计学意义(X2=1148153.81,P=0.000);死亡专率最高为蒂拉贝里(0.0944%),最低为首都尼亚美(0.0059%),不同地区5岁以下儿童疟疾死亡专率差异具有统计学意义(X2=1367.07,P=0.000);病死专率最高为阿加德兹(0.405%),最低为首都尼亚美(0.009%),不同地区5岁以下儿童疟疾病死专率差异具有统计学意义(X2=2381.57,P=0.000)。
  结论:尼日尔共和国2009-2014年疟疾患病呈隔年变化趋势;除2010年外,其余年份疟疾的死亡率和病死率基本稳定。疟疾患病地区分布主要在多索、马腊迪和塔瓦。5岁以下儿童是尼日尔共和国疟疾感染的重点人群,患病率和死亡率均高于全国水平,病死率几乎持平。不同地区疟疾流行不同,具有环境和行政区域特征。
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