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[硕士论文] 朱江煜
营养与食品卫生学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:微藻,作为一类营养丰富,而且可以循环再生的新兴资源,有着非常广阔的开发和应用前景。其中,雨生红球藻,钝顶螺旋藻以及纤细裸藻,是三种常见的经济类藻株。在生长过程中,它们分别能够产生虾青素,藻蓝蛋白,副淀粉等营养代谢产物,对人体具有极高的营养保健作用。然而,在其自然生长过程中,因为生长条件如光照,pH,温度等因素的限制,这些代谢产物的天然产率较低。如何有效地促进微藻的生长,提高营养代谢产物的含量,是微藻研究领域的热点。本试验以雨生红球藻,钝顶螺旋藻以及纤细裸藻为试验材料,选取农业废弃物米麸提取的植酸和阿魏酸作为生长调节剂,研究了它们在三种微藻生长过程中对细胞生长,细胞形态,光合色素含量,特征代谢产物如虾青素,藻蓝蛋白,副淀粉含量,以及细胞内抗氧化酶活性的影响,并分析了不同藻株之间的差异,为大规模利用天然植物添加剂来提高微藻生物量及营养代谢产物的产率奠定了基础。具体结果如下:
  (1)植酸对雨生红球藻的影响:不同浓度的植酸对雨生红球藻细胞密度,生物量,细胞大小,细胞内叶绿素含量,虾青素含量及抗氧化酶活性影响显著。在0.001%(v/v)的植酸浓度的情况下,雨生红球藻的细胞密度和生物量分别提高了16.5%和12.0%,但随着植酸浓度升高,生长逐渐受到抑制,在0.05%(v/v)浓度下,细胞密度及生物量分别下降47.37%和32.80%;此外,植酸还加速了细胞变大的过程和增加了细胞的最终大小;在0.001%(v/v)和0.01%(v/v)浓度的植酸处理下,细胞内叶绿素及虾青素的含量(占细胞干重的百分比)变化均不显著,在0.05%(v/v)浓度植酸处理下,叶绿素的含量比对照组中下降了20.21%,但虾青素的含量增加了33.83%;超氧化物歧化酶(SOD)的活性随着植酸浓度的升高先上升然后下降,在0.01%(v/v)浓度下达到最高165U/mg·DW,过氧化氢酶(CAT)的活性不断下降,在0.05%(v/v)浓度时下降到31U/g·DW。
  (2)阿魏酸对雨生红球藻的影响:阿魏酸的共溶剂二甲基亚砜(DMSO)对雨生红球藻的生长具有抑制作用,溶剂对照组中细胞密度及生物量分别下降16.67%和47.48%,细胞变大过程加速,细胞内叶绿素下降37.89%,虾青素含量变化并不显著;阿魏酸的加入缓解了DMSO的生长抑制作用,相对于溶剂对照组,500mg/L的阿魏酸处理组中细胞密度和生物量分别上升了45.45%和103.65%,最终细胞大小缩小了16.35%,细胞内叶绿素含量上升了72.11%,但虾青素含量下降32.47%。SOD活性在溶剂对照组中略有上升但并不显著,在500mg/L的阿魏酸处理组中下降到88U/mg·DW,CAT活性在DMSO作用下显著下降,但在500mg/L阿魏酸组中恢复到空白对照组水平。
  (3)植酸对钝顶螺旋藻的影响:植酸对于钝顶螺旋藻生长,细胞形态,叶绿素和藻蓝蛋白含量,SOD及CAT活性的影响因浓度而异。当植酸浓度低于0.05%(v/v)时,钝顶螺旋藻的生物量,藻丝体长度,藻丝体宽度,藻螺旋数,细胞内叶绿素含量,藻蓝蛋白含量,SOD和CAT酶活性均未发生显著变化;当植酸浓度上升至0.05%(v/v)时,螺旋藻生物量相对于对照组下降24.35%,细胞缠绕成团状,形态发生显著变异,藻丝体长度变成对照组的3.93倍,藻丝体宽度并无显著差异,细胞螺旋数上升到对照组的3.63倍,细胞内藻蓝蛋白的含量变化并不显著,叶绿素的含量下降14.08%,SOD活性与CAT活性分别下降到8.3U/mg·DW和6.3U/g·DW。
  (4)阿魏酸对钝顶螺旋藻的影响:本研究中各浓度的阿魏酸对钝顶螺旋藻的细胞干重,藻丝体长度,藻丝体宽度,藻螺旋数,细胞内叶绿素和藻蓝蛋白含量,SOD和CAT酶活性的影响均不显著。
  (5)植酸对纤细裸藻的影响:植酸对于纤细裸藻的生长具有显著的促进作用,且呈浓度依赖的关系,当植酸浓度为0.05%(v/v)时,纤细裸藻的细胞密度及生物量分别提高67.68%和52.94%,纤细裸藻细胞长度的中位值在光暗周期下也均得到延长,表示了更活跃的细胞状态,细胞内叶绿素a的含量提高了76.88%,叶绿素b和类胡萝卜素含量变化并不显著,副淀粉含量变化也不具有显著性,但因为细胞密度的提升,最终得到的副淀粉的总产量相比对照组提高了37.83%。植酸浓度继续升高到0.2%(v/v)时,生长促进作用略有下降,但相对于对照组,细胞密度及生物量仍分别增长了48.17%和33.33%,细胞长度的中位值相对于0.05%(v/v)中有所下降,类胡萝卜素的含量相对于对照组增加了60.59%。SOD活性随着植酸浓度而下降,在0.05%(v/v)浓度时降到41U/mg·DW,但在0.2%(v/v)回升到51U/mg·DW,CAT活性变化变化趋势与SOD活性类似,但并不显著。
  (6)阿魏酸对纤细裸藻的影响:阿魏酸不仅可以缓解共溶剂DMSO的生长抑制作用,且能显著促进纤细裸藻的生长。纤细裸藻的细胞密度及细胞干重在溶剂对照组中分别下降30.64%和12.90%,在光照和黑暗条件下细胞中值长度也均有所下降,细胞内叶绿素a的含量下降29.47%,副淀粉的含量上升77.37%;随着阿魏酸的加入生长抑制作用逐渐减弱,且纤细裸藻的生长有所促进。当阿魏酸浓度为500mg/L时,细胞密度及生物量相比空白对照组分别提高了149.65%和116.13%,相比溶剂对照组分别提高了259.93%和148.15%,细胞长度在光照和黑暗条件下均得到延长,光合色素含量,特别是叶绿素a含量也显著增加。细胞内的副淀粉含量变化并不显著,但因为细胞数量的增加,副淀粉的总产量增加了69.05%。SOD和CAT活性在溶剂对照组显著上升,但在500mg/L阿魏酸的处理下两种抗氧化酶的活性均发生下降。
  米麸提取的植酸和阿魏酸对于微藻生长及高营养价值产物的影响因藻株的种类而异。在本研究中,我们首次发现,植酸及阿魏酸对于雨生红球藻和纤细裸藻的生长均有一定的促进作用,尤其是纤细裸藻,这是一种绿色而高效的促进微藻产率的方法,为大规模利用农业废弃物,促进微藻生长及高营养代谢产物的生产提供了理论基础,此外,在钝顶螺旋藻的研究中,我们还发现高浓度的植酸会导致螺旋藻细胞聚集成团,这项发现在钝顶螺旋藻的收获方面也具有应用潜力。
[硕士论文] 何旺泉
水产 集美大学 2018(学位年度)
摘要:为探讨饲料中添加精油与有机酸复合包被物(AviPlus(R)AP)对凡纳滨对虾生长和非特异性免疫力的影响,本研究设计了两个试验。
  1.不同水平梯度的AP对凡纳滨对虾生长、肠道健康和抗副溶血弧菌感染力的影响
  本试验选取525尾均重为0.2g的试验虾苗进行为期8周的养殖试验。在基础组饲料上分别添加0、0.3、0.6、0.9和1.2g/kg AP,形成Con组、AP0.3组、AP0.6组、AP0.9组和AP1.2组。每组设置3个平行,每个平行35尾虾。结果:各组凡纳滨对虾的存活率差异不显著(P>0.05),且各组平均存活率均在94.29%以上。除AP0.3组外,其他添加组的血清总蛋白含量均显著高于Con组(P<0.05)。AP0.9和AP1.2组的血清碱性磷酸酶和酚氧化酶活性均显著高于Con组(P<0.05)。AP0.6组血清谷胱甘肽过氧化氢酶活性达到最大值,并且显著高于Con组(P<0.05)。AP添加组的促炎因子(TNF-α、LITAF和Rab6a)的表达量均下调。AP0.6和AP1.2组肠道菌群OTUs值均高于Con组。AP0.9和AP1.2组中的厚壁菌门丰富度高于Con组,而变形菌门丰富度趋势相反,AP1.2组中的乳酸杆菌数量显著高于Con组(P>0.05)。副溶血弧菌感染48h后,AP0.3组凡纳滨对虾的存活率显著高于Con组,AP添加组的免疫相关因子(溶菌酶、对虾素和过氧化氢酶)表达量均显上调(P<0.05)。表明,添加AP有益于肠道健康和提升凡纳滨对虾的免疫力。
  2.低鱼粉饲料中添加AP对凡纳滨对虾生长、消化率以及肝胰腺和肠道健康的影响
  本试验以含有25%鱼粉的饲料作为对照组(HFM),用豆粕分别替代对照组饲料20%和40%的鱼粉形成饲料SM1和SM2,分别向SM1和SM2组饲料中添加0.6g/kg添加剂AP,形成饲料ASM1和ASM2组,共计5种试验饲料,进行为期8周的摄食生长试验。每组设置4个平行,每个平行50尾虾(初始重:0.56±0.01g)。结果:各组凡纳滨对虾的成活率无显著差异(P>0.05),且均在88%以上。HFM和ASM1组凡纳滨对虾的增重率均显著高于SMA、SM2和ASM2组(P<0.05)。与HFM组相比,SM1和ASM1组的饲料系数无显著变化(P>0.05),而SM2和ASM2组的饲料系数均显著上升(P<0.05)。与SM1组相比,ASM1组饲料的粗蛋白表观消化率显著升高(P<0.05)。与HFM组相比,ASM1组血清总蛋白和谷草转氨酶含量显著升高(P<0.05);血清中白蛋白、葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶和丙二醛含量均无显著变化(P>0.05);SM1和ASM1组血清酚氧化酶活性显著升高(P<0.05),而SM2和ASM2组的血清酚氧化酶活性无显著变化(P>0.05);SM1组血清谷胱甘肽过氧化氢酶活性无显著变化(P>0.05),而ASM1组血清谷胱甘肽过氧化氢酶活性显著升高(P<0.05);ASM1和ASM2组血清总抗氧化能力无显著变化(P>0.05),而SM1和SM2组血清总抗氧化能力显著下降(P<0.05)。肝胰腺切片观察显示,随着替代水平增加,肝胰腺中B细胞逐渐变小,ASM1和ASM2组肝小体中R细胞数量高于其他组,SM2组中肝小体基底膜破损较为严重。各组肝胰腺中过氧化氢酶、Pen-3a和碱性磷酸酶的基因表达量均无显著差异(P>0.05)。与HFM组相比,ASM1组肝胰腺中溶菌酶和C型凝集素3的基因表达量无显著变化(P>0.05),而SM2和ASM2组显著下调(P<0.05)。HFM和ASM1组肠道中厚壁菌门的丰富度均高于其他组。ASM1和ASM2组肠道中假交替单胞菌的数量均低于SM1和SM2组。与HFM组相比,ASM1和ASM2组肠道中TNF-α的基因表达量无显著变化(P>0.05),而SM1和SM2组上调;SM1和SM2组肠道中Rab6a的基因表达量均无显著变化(P>0.05),而ASM1和ASM2组均显著下调(P<0.05);ASM1组肠道中溶菌酶的基因表达量无显著变化(P>0.05),而SM1、SM2和ASM2组均显著下调(P<0.05)。各组肠道中超氧化物歧化酶的基因表达量无显著变化(P>0.05)。SM2组肠道中一氧化氮合酶的基因表达量显著高于其他组(P<0.05)。表明:高豆粕饲料会降低南美白虾的生长、消化和非特异性免疫力。饲料中添加0.6g/kg AP可以提高凡纳滨对虾的生长和免疫力,改善肠道菌群环境,解肠道炎性,降低肝胰腺组织损伤缓。
[硕士论文] 鲍诗源
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:本研究根据实验室转录组数据库利用PCR技术克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)转化生长因子-β激活激酶1(LcTAK1)和TAK1结合蛋白1(LcTAB1)、TAK1结合蛋白2(LcTAB2)的cDNA序列,对其氨基酸序列及蛋白结构进行了预测和分析。研究了它们在大黄鱼各组织中的表达情况;检测了经病原相关分子模式(PAMP)刺激后,TAK1和TAB1、TAB2基因在大黄鱼肾细胞系(LCK)中转录水平的时空表达谱;并对三个基因进行亚细胞定位分析。此外,本研究还构建了它们的过表达重组载体,将TAK1与其结合蛋白TAB1/TAB2分别或共转染人胚胎肾细胞系293T(HEK293T),检测不同PAMPs刺激后对NF-κB的激活及下游细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素(IL)IL-6、IL-1β、IL-8和Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)等基因转录水平表达的调控。主要结果如下:
  (1)LcTAK1与其结合蛋白TAB1、TAB2的克隆、表达分析及定位
  LcTAK1基因ORF为1725bp,编码574个氨基酸(aa),预测分子量(Mw)64.2kDa,理论等电点(pI)6.69;包括一个典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(S_TKc),属于保守的TAK1家族。LcTAK1遍布于大黄鱼多个组织,其中在脑和脾脏中表达量较高,肌肉中表达量最低;亚细胞定位表明其主要存在于细胞质;LPS、flagellin和poly I:C刺激可诱导LCK细胞系中LcTAK1转录水平显著上调(p<0.05)。
  LcTAB1基因ORF为1521bp,编码506aa,预测Mw54.6kDa,理论pI5.35;包括一个PP2Cc结构域和一个TAB1家族保守的C末端基序(PYVDFSQFYLLWGSDH),属于保守的TAB1家族。LcTAB1遍布于大黄鱼多个组织,其中脑和脾脏中表达量较高,肌肉中表达最少;亚细胞定位表明LcTAB1主要在细胞浆中表达;LPS和poly I:C刺激后LCK细胞系中LcTAB1表达量显著增加(p<0.05)。
  LcTAB2基因ORF为2271bp,编码756aa,预测Mw为81.7kDa,理论pI8.26;包括一个N末端CUE结构域和一个ZnF_RBZ结构域,属于保守的TAB2家族。LcTAB2在多个组织中都有表达,其中在血、脑和脾脏中表达量较高,在肝脏中表达量最低;主要定位于细胞质;在LCK细胞系中LPS、flagellin和poly I:C刺激可诱导LcTAB2的显著上调(p<0.05)。
  (2)LcTAK1与LcTAB1对NF-κB及下游免疫反应的激活
  LcTAK1或LcTAB1单独过表达均不能激活NF-κB启动子转录,但LcTAK1与LcTAB1共同过表达可以显著激活NF-κB活性,并诱导HEK293T细胞中IL-8表达量增加(p<0.01)。LPS刺激可以增强LcTAK1和LcTAB1共同过表达对NF-κB启动子的激活(p<0.05),进而诱导细胞因子TNF-α,IL-6和IL-8的表达(p<0.01)。在LcTAK1和LcTAB1共同过表达细胞中,poly I:C刺激也能增强NF-κB启动子的活性,但不能诱导TNF-α,IL-6和IL-8转录。以上结果显示LcTAK1和LcTAB1的相互作用可能在NF-κB活化中起关键作用,并且在鱼类抗细菌和抗病毒免疫防御中发挥不同的功能。
  (3)LcTAK1与LcTAB2对NF-κB及下游免疫反应的激活
  LcTAB2单独过表达可激活NF-κB和大黄鱼炎症细胞因子TNF-α、IL-1β启动子活性(p<0.05)。LcTAK1单独过表达可激活大黄鱼NF-κB-P65、TNF-α、IL-1β和干扰素IFNⅠ的启动子活性(p<0.05);其中大黄鱼TNF-α启动子活性与HEK293T细胞中TNF-α转录表达的结果不同,表明不同物种的TAK1在NF-κB信号通路中可能发挥不同的激酶功能。而LcTAK1与LcTAB2共同过表达会显著抑制NF-κB及其亚基P65、TNF-α、IL-1β和IFNⅠ的启动子活性(p<0.05);表明TAK1与TAB2的相互作用参与了NF-κB介导的炎症反应及抗病毒免疫应答,并且LcTAB2可能对LcTAK1存在负调控作用。
[硕士论文] 孙莎
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:鱼类在动物进化中处于承前启后的地位,不仅数量多而且性别决定类型也多种多样,是研究性染色体进化和性别决定机制很好的材料。多数鱼类具有性别二态性,性别特异分子标记的开发和应用对开展性别控制育种和解析鱼类的性别决定机制具有重要的意义。本研究以黄姑鱼(Nibea albiflora)为研究对象,成功开发出可以鉴别其遗传性别的特异分子标记,并克隆了黄姑鱼Dmrt1、Gsdf和Amh三个性别相关基因,分析了这三个基因在黄姑鱼中的表达特性,初步探讨了黄姑鱼的性别决定机制。主要研究结果如下:
  1、从分析黄姑鱼Dmrt1基因的结构差异入手,发现该基因的第1个内含子在X和Y染色体上存在45bp插入缺失片段。针对Y染色体上的45bp缺失设计了两对特异引物用于其遗传性别鉴定,通过验证不同的黄姑鱼群体发现该分子标记稳定性良好、鉴别结果可靠,可用于黄姑鱼遗传性别的鉴定。
  2、黄姑鱼Dmrt1基因cDNA序列全长2457bp,其中ORF为906bp,编码301个氨基酸。该基因的3'UTR区域同其他物种中的Dmrt1基因一样含有11bp的蛋白结合基序。黄姑鱼Dmrt1基因在雄性的精巢中特异性高表达(P=0.0016)。孵化后第49天(49day past hatch)的雄鱼性腺中检测到有明显表达,104dph表达量达到高峰,之后表达量开始下降,稳定后的表达量约为104dph时的20%左右。在整个发育过程中Dmrt1基因在卵巢中几乎检测不到其表达,表明该基因的表达与黄姑鱼精巢的分化和发育有重要联系。
  3、黄姑鱼Gsdf基因在精巢中高表达(P<0.001),除性腺以外的其他组织中也有检测到该基因的表达,但表达量远低于精巢。Gsdf基因在40dph的雄鱼性腺中开始表达,在120dph表达量达到高峰,整个发育过程中Gsdf基因在卵巢中几乎检测不到其表达,表明Gsdf基因的表达与黄姑鱼精巢的发育密切相关。
  4、黄姑鱼Amh基因在黄姑鱼雄性的精巢中特异性高表达(P=5.35×10-6)。Amh基因在40dph的雄鱼性腺中开始检测有微量表达,78dph表达量达到高峰,390dph之后表达量基本保持稳定,约为78dph时的10%左右。整个发育过程中Amh基因在卵巢中的表达量相对极低,该基因在黄姑鱼精巢分化时期高表达,预示着Amh基因参与了黄姑鱼精巢的分化和发育过程。
[硕士论文] 高玉雪
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:大黄鱼(Larimichthys crocea)是我国特有的最重要的海水经济鱼类之一,在生长上存在性别二态性,但是目前对其性别决定机制的了解还比较欠缺。对大黄鱼性别决定关键基因的研究,有助于今后繁殖生产和育种工作的开展。本研究从在大黄鱼精巢特异性表达的Dmrt1基因入手,克隆了其全长cDNA及X和Y染色体上Dmrt1基因(分别称为LcDmrt1X和LcDmrt1Y)的启动子序列,构建了该基因的表达载体注射到青鳉受精卵观察其表达和对青鳉性别发育的影响,并通过构建荧光素酶报告基因载体,对启动子活性区域进行了初步分析。主要研究结果如下:
  1、通过RACE技术获得了大黄鱼Dmrt1基因(LcDmrt1)的全长cDNA序列,共3037bp,其中包括918bp的ORF,132bp的5'UTR和1932bp的3'UTR。以大黄鱼BAC文库中包含Dmrt1基因的X和Y染色体片段的单克隆为模板扩增了Dmrt1基因启动子区的核苷酸序列,发现两者之间存在许多SNP和插入缺失变异。生物信息学软件预测的结果表明,LcDmrt1的启动区存在多个转录因子结合位点,包括TATA结合蛋白(TBP)、SMAD2以及性别相关蛋白SOX家族成员(SOX5、SOX10、SOX17)和SRY等结合位点;其中,LcDmrt1Y在-1375bp处含有1个特异的TBP结合位点,LcDmrt1X在-1813bp处和在-2416bp处分别有一个特异的SOX5结合位点和SRY结合位点。此外,LcDmrt1Y在启动子区还含有2个DMRT1结合位点,分别位于-1040bp和-287bp处,而LcDmrt1X有3个DMRT1的结合位点,分别位于-1820bp,-1048bp和-298bp处,其中-1820处的DMRT1结合位点是X染色体特异的。
  2、利用克隆的大黄鱼Dmrt1全长cDNA成功构建了PCS2-LcDmrt1过表达载体,利用显微注射技术导入模式鱼青鳉受精卵中,观察LcDmrt1在青鳉体内的基因整合、表达和对青鳉性别发育的影响。结果表明,注射48h后,Lc Dmrt1基因在青鳉胚胎内大量表达,孵化后40d的稚鱼中LcDmrt1的整合率为24.3%,并观察到1尾遗传型为XX的青鳉发育成了雄鱼,表明LcDmrt1具有诱导青鳉雌鱼性腺分化发育成精巢的作用。
  3、构建了含有LcDmrt1X和Lc Dmrt1Y不同长度启动子序列的双荧光素酶报告载体ProD2K-X(-1983,+133)、Pro-D2K-Y(-1975,+133)、Pro-D700-X(-615,+133)和Pro-D700-Y(-607,+133)。分别共转染人胚胎肾细胞系(HEK-293)检测其表达活性。结果表明,LcDmrt1X和LcDmrt1Y启动子都有活性,LcDmrt1Y的启动子活性高于LcDmrt1X的启动子。将上述4种启动子活性分析质粒分别与PCS2-LcDmrt1共转染,观察LcDmrt1是否有自我反馈的调节机制。结果表明,过表达LcDmrt1会降低启动子活性,说明大黄鱼DMRT1具有具有负反馈调节作用,结合LcDmrt1Y启动子的表达活性明显高于LcDmrt1X的结果分析,表明LcDmrt1的抑制程度可能与其启动子区DMRT1结合位点数目有关,其中包含3个DMRT1结合位点的LcDmrt1X的启动子活性受到抑制的程度明显高于2个结合位点的LcDmrt1Y启动子。此外,LcDmrt1Y的这种自我抑制作用具有剂量效应,具有2个DMRT1结合位点的Pro-D2K-Y启动子活性受到抑制的程度显著高于只有1个DMRT1结合位点的Pro-D700-Y的启动子活性(p<0.05);而LcDmrt1X的结果正好相反,共转染后Pro-D700-X表达活性下降幅度极显著大于Pro-D2K-X,暗示(-615bp,0)区域中的结合位点可能是该启动子接受DMRT1的负反馈调节的主要位点。
  本研究获得了大黄鱼Dmrt1基因cDNA全长序列和X与Y染色体上该基因的启动子序列,并成功构建了一系列表达质粒,初步揭示了DMRT1的功能及X、Y染色体上LcDmrt1启动子的表达特性,研究结果为阐明大黄鱼性别决定与分化的分子机制,提供了良好的基础和有价值的研究资料。
[硕士论文] 王小龙
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)是一种关键的酶类抗氧化物质,筑起了生物体针对氧毒性的第一道防线,将氧自由基快速歧化为普通分子氧(O2)和过氧化氢(H2O2)。本研究从已构建的黄姑鱼(Nibea albiflora)转录组数据库中筛选出三种SOD基因:胞质型铜锌SOD(IcSOD,MG208871)、胞外型铜锌SOD(EcSOD,MF974567)和锰SOD(MnSOD,MG208872),并对它们的分子特征及功能进行了研究,结果如下:
  (1)在氨氮和亚硝态氮急性毒性实验中,黄姑鱼表现出对氨氮胁迫更为敏感,其氨氮和亚硝态氮的96小时半致死浓度(LC50)分别为20.23mg/L(换算成非离子氨0.57mg/L)和99.08mg/L,安全浓度分别为2.02mg/L(换算成非离子氨0.06mg/L)和9.91mg/L。
  (2)黄姑鱼IcSOD(NaIcSOD)cDNA全长793bp,包括58bp的5'非编码区(UTR)、270bp的3’非编码区(UTR)和465bp的开放阅读框(ORF),编码154个氨基酸。NaIcSOD不具有信号肽和跨膜区。NaIcSOD mRNA在所检测的11个组织或器官(心脏、肝、脾脏、头肾、中肾、鳃、肠、胃、脑、肌肉和鳔)中均有表达,在头肾中表达量最高,其次为脑、肝脏、心脏和鳃,在肌肉中表达量最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaIcSOD mRNA均不同程度上调。此外,通过原核表达获得了具有生物活性的NaIcSOD,研究表明该酶具有良好的温度和pH稳定性。
  (3)黄姑鱼EcSOD(NaEcSOD)cDNA全长1101bp,包括224bp的5'UTR、229bp的3'UTR和648bp的ORF,编码215个氨基酸。氨基酸序列分析表明,NaIcSOD不具有跨膜区,含有1条信号肽序列(0-26aa)。NaEcSOD mRNA在所检测的11个组织或器官中均有表达,肝脏中表达量最高,其次为脑、鳔和胃,在肌肉中最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaEcSOD mRNA均有不同程度上调。通过原核表达,获得了具有生物活性的NaEcSOD,测得该酶具有良好的温度和pH稳定性。此外,GST pull-down实验表明NaEcSOD蛋白与膜联蛋白A4(annexin A4)存在相互作用。
  (4)黄姑鱼MnSOD(NaMnSOD)cDNA全长949bp,包括38bp的5'UTR、233bp的3'UTR和678bp的ORF,编码225个氨基酸。NaMnSOD无跨膜区,含有1条信号肽序列(0-27aa)。NaMnSOD mRNA在所检测的11个组织或器官中均有表达,心脏中表达量最高,其次为脑、肝脏和鳃,在脾脏中最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaMnSOD mRNA均不同程度上调。
  上述研究结果表明,黄姑鱼对氨氮和亚硝态氮的耐受力差,在黄姑鱼的集约化养殖过程中,对养殖水体中氨氮和亚硝态氮的实时监控尤为重要。IcSOD、EcSOD和MnSOD在黄姑鱼抵抗氨氮/亚硝态氮污染中均发挥重要作用,可以作为水体污染监测的早期生物标志物。NaIcSOD和NaEcSOD蛋白均表现出良好的酶活力以及温度/pH稳定性,具有较大的应用前景。
[硕士论文] 邱昌亮
水产 集美大学 2018(学位年度)
摘要:高密度、高分辨率的遗传连锁图谱作为一种关键的、必不可少的工具已经被广泛地应用到数量性状的精细定位、候选基因的图位克隆、标记辅助育种、基因组共线性的比较分析和基因组染色体水平的组装等一系列遗传学和基因组学的研究中。黄姑鱼(Nibea albiflora)是一种具有重要经济价值的海水鱼类,然而对其遗传学方面的研究极为有限,对其遗传图谱的研究更未见报道,严重影响了黄姑鱼相关的遗传与育种研究的进展。本研究利用从1个黄姑鱼家系的基因组重测序数据中挖掘得到的SNP标记,构建了黄姑鱼的高密度遗传连锁图谱,随后利用该图谱对黄姑鱼的参考基因组序列进行了染色体水平的组装,与青鳉、斑马鱼的基因组进行了共线性比较分析,对黄姑鱼的若干生长相关性状和性别进行了QTL定位。主要的研究结果如下:
  1、利用黄姑鱼1个家系的1对亲本及111个子代个体的全基因组重测序(父母本测序深度分别为34.2×和32.8×,子代个体平均测序深度为6.5×)数据进行了SNP标记挖掘。经过滤(SNP calling rate>95%;MAF>5%),共得到约120万个SNP,经过滤偏分离(P<0.01)标记,最终获得158,825和153,722个分别只在父母本中杂合的SNP标记。
  2、采用双拟测交策略分别构建了雌、雄性别特异遗传连锁图谱,再通过锚定标记构建了整合图谱。该图谱由24个连锁群组成,与黄姑鱼单倍体染色体数目相一致,图谱总长3,818.24cM(预期长度为3,843.02cM),平均标记密度为0.47cM,包含了8,094个SNP标记,包括3,826个雌性特异标记、3,735个雄性特异标记和533个共有标记,图谱覆盖度达99.4%。
  3、借助构建的高密度遗传图谱对黄姑鱼的参考基因组序列进行了染色体水平的组装,最终组装了1,457个scaffold共计435.2Mb的基因组序列,组装率为80.7%。
  4、对黄姑鱼与青鳉、斑马鱼的基因组进行了共线性比较分析,揭示了黄姑鱼与青鳉基因组在染色体水平上相对较高的共线性,黄姑鱼和斑马鱼在分化过程中可能发生了较频繁的染色体间重排。
  5、对黄姑鱼的体重、体长、体高和体宽4个生长相关性状进行了QTL定位和关联分析,定位了22个染色体水平显著的QTL,鉴定了PLA2G4A,BRINP3和P2RY1等调控这些生长性状的候选基因。
  6、对黄姑鱼的性别进行了QTL定位和关联分析,将黄姑鱼的性别QTL定位在LG9上,在最显著的QTL区域注释到了一系列调控性别的候选基因,如DMRT1,DMRT2和DMRT3等。
[硕士论文] 王健
水产 集美大学 2018(学位年度)
摘要:本实验室在前期的研究中,从牛蛙肠道中筛选并分离出一株具备产植酸酶能力的酵母菌ZR1(Pseudozyma aphidis strain),本实验拟在此基础上,研究该菌种发酵特性,再以豆粕为发酵基底,以植酸磷降解情况为指标探究最优发酵条件组合,并在后期使用最优发酵条件组合发酵的豆粕,不同比例替代牛蛙饲料中的鱼粉、普通豆粕饲喂牛蛙,研究发酵豆粕对牛蛙生长性能、血清氨氮含量、营养物质消化率、肠道消化酶活力及肠道组织结构的影响。主要研究结果如下:
  1.蛙源酵母菌ZR1生长特性及产酶特性的探究
  蛙源酵母菌ZR1为兼性厌氧菌,但在有氧条件下显更强产植酸酶能力;最适生长温度为33℃,活化三代后培养13h达到对数生长中期,最高耐受温度为45℃,pH耐受范围为pH4~8,对数中期发酵种子液显蛋白酶活和脂肪酶活性,分别为39.71U/dL和10.34U/dL。
  2.使用蛙源酵母菌ZR1发酵豆粕对植酸磷的降解情况
  发酵实验设置3个因素,每个因素3个水平,分别为接种菌量(1×106CFU/mL、5×106CFU/mL、1×107CFU/mL)、料水比(1∶0.6、1∶0.8、1∶1)和发酵周期(24h、48h、72h),研究不同发酵条件对发酵豆粕中植酸磷含量的降解情况。结果显示,综合最优发酵条件为接种菌量为1×107CFU/mL,料水比为1∶0.8,发酵周期为48h,在此条件下豆粕植酸磷降解率为41.68%;通过SDS-PAGE力法对发酵豆粕的大豆球蛋白和β-大豆伴球蛋白含量进行测定,结果显示使用蛙源酵母菌ZR1发酵能完全降解豆粕中β-大豆伴球蛋白和大豆球蛋白酸性基团,能降解80.56%的大豆球蛋白碱性基团;发酵后的豆粕营养价值有所提高,其中粗蛋白提高4.71%,粗脂肪提高0.17%,总氨基酸含量提高3.1%。
  3.蛙源酵母菌ZR1发酵豆粕对牛蛙生长、消化、全体成分和血清生化指标的影响
  实验设置4组等氮等脂的牛蛙膨化饲料,分别为FM组(含20%鱼粉和25%豆粕)、SM组(含55%豆粕)、SM+FSM(含25%豆粕和27.5%发酵豆粕)和FSM组(含50%发酵豆粕),研究发酵豆粕替代鱼粉及普通豆粕对牛蛙生长、消化、全体成分和血清生化指标影响。牛蛙初始体重为(35.23±0.03g),每组4个重复,每个重复12只牛蛙,每天2次饱食投喂,实验周期为8周。结果显示末均重(FBW)、摄食率(FR)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)及蛋白质效率(PER)最高值均出现在FM组(P<0.05),其余各组无显著差异;各组间肝体比(HSI)和腿体比(HLI)没有显著差异(P>0.05);干物质表观消化率最高值出现在SM组,显著高于FM组和FSM组(P<0.05),但与SM+FSM组差异不显著(P>0.05),表现出随饲料中发酵豆粕替代豆粕比例升高而降低的趋势;粗蛋白表观消化率最高值出现在FM组(P<0.05),并表现出随饲料中发酵豆粕替代豆粕比例升高而显著降低的趋势(P<0.05);钙的表观消化率最高值出现在FM组,最低值为SM组,磷的表观消化率最高值出现在FM组,最低值为SM组,钙与磷的表观消化率均表现出随饲料中发酵豆粕替代豆粕比例升高而显著上升的趋势(P<0.05);全体水分最大值出现在SM组(P<0.05),最低值为FM组,表现出随饲料中发酵豆粕替代豆粕比例升高而降低的趋势;全体粗蛋白FM组和SM组显著大于SM+FSM组和FSM组(P<0.05);全体粗脂肪和粗灰分四组没有显著差异(P>0.05),但均表现出随饲料中发酵豆粕替代豆粕比例升高而上升的趋势;SM+FSM组和FSM组血氨和尿素氮均低于FM组和SM组,其中FSM组显著低于FM组和SM组(P<0.05)。
  4.蛙源酵母菌ZR1发酵豆粕对牛蛙肠道消化酶及肠道结构影响
  肠道蛋白酶最低值出现在SM组(P<0.05),其余组间无显著差异;淀粉酶最高值出现在SM组(P<0.05),其余组间无显著差异;脂肪酶最低值出现在SM组,最高值出现在FM组(P<0.05),并表现出随饲料发酵豆粕替代豆粕比例升高而显著上升的趋势。SM组相比FM,肠绒毛短而稀疏,末端出现破损,杯状细胞减少,SM+FSM组和FSM肠绒毛长而密,末端未出现破损,杯状细胞增多,肠道健康得到改善。
[硕士论文] 吴瑞
渔业 集美大学 2018(学位年度)
摘要:本实验以均重5.77±0.03g的花鲈幼鱼为养殖对象,研究复合蛋白KT67替代鱼粉对花鲈生长、消化和肠道健康的影响。实验在室内循环水系统中进行,各实验组分别投喂含35%鱼粉的基础饲料(对照组)和分别以复合蛋白KT67替代20%、40%、60%和80%鱼粉配制的4种等氮等脂实验饲料,每个处理4个重复,每缸饲喂30尾花鲈,养殖为期70d。实验期间水温29.5±1.5℃,盐度29±1‰,溶解氧6.5±1mg/L。主要研究结果如下:
  1、复合蛋白KT67替代鱼粉对花鲈生长性能、体组成、消化酶活力和表观消化率的影响
  20%替代组花鲈生长性能与对照组无显著差异(P>0.05),然而,随着替代比例的升高,花鲈增重率、存活率、饲料效率以及蛋白质效率显著下降(P<0.05)。全体粗蛋白含量随KT67添加水平升高而下降,水分、粗脂肪和灰分含量差异不显著(P>0.05)。随着KT67替代水平的升高,花鲈肠道蛋白酶活力以及饲料干物质、粗蛋白与粗脂肪表观消化率皆显著降低(P<0.05)。以上结果表明:复合蛋白KT67替代鱼粉会导致花鲈肠道消化能力下降,从而使其生长性能受到影响。
  2、复合蛋白KT67替代鱼粉对花鲈后肠和肝脏组织形态的影响
  组织切片观察发现:各组肠道黏膜皱襞清晰,对照组花鲈后肠绒毛形态完整,整齐伸入肠腔内,无破损,脱落现象,杯状细胞正常。当替代水平达到40%时,可观察到肠道黏膜中杯状细胞开始增多,替代水平进一步升高,则肠道黏膜皱襞弯曲伸入肠腔内,固有层变宽,绒毛长度增加,肠上皮细胞出现空泡。各组花鲈肝细胞形态皆正常,结构完整,排列均匀,无偏移及空泡化,可观察到清晰肝细胞索。各实验组花鲈血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活力和总抗氧化能力与对照组无显著差异(P>0.05)。以上结果表明:复合蛋白KT67替代鱼粉会损伤花鲈后肠黏膜组织结构,但对肝脏健康无负面影响。
  3、复合蛋白KT67替代鱼粉对花鲈肠道炎性因子基因表达量和肠道微生物菌群的影响
  当复合蛋白KT67高比例替代鱼粉时,花鲈肠道出现炎性反应,肠道促炎因子TNF-α、IL-1β基因表达量升高,抗炎因子基因IL-4、IL-10表达量相应降低。花鲈肠道菌群多样性不受替代所影响,但最优势菌变形菌门占比随替代水平上升而略有下降,次优势菌厚壁菌门显著增加。
[硕士论文] 张树威
水产 集美大学 2018(学位年度)
摘要:磷是鱼类必需的矿物质元素,养殖鱼类磷的主要来源是饲料,饲料磷摄入不足会导致鱼体生长缓慢、死亡率升高、脂肪沉积增加等不利影响;饲料磷摄入过多鱼体会将多余的磷排到水体中,造成营养元素的浪费、增加饲料成本,此外还会导致养殖水体环境污染等。因此,研究鱼类对磷的适宜需要量非常重要。本实验以花鲈(Lateolabrax japonicus)为研究对象,以磷酸氢二钾(K2HPO4)和磷酸二氢钠(NaH2PO4)为磷源,研究淡水养殖花鲈对饲料磷的适宜需求量,为商业饲料磷的添加提供理论依据;此外,为探讨饲料磷水平对鱼体脂代谢的影响及途径,研究了摄食不同磷水平饲料鱼体的脂代谢酶的活性、肝脏组织学及脂代谢相关基因表达等变化。主要内容如下:
  1.饲料磷水平对花鲈生长、体组成及营养物质表观消化率的影响
  实验设有效磷水平分别为0.48%、0.69%、0.89%、1.10%、1.28%、1.51%、1.77%。用这7组饲料养殖花鲈[初重为(4.26土0.03)g]10周后,分析鱼体生长、体组成、表观消化率等指标。各组WGR、SGR、PER、PPV结果表明,0.89%磷水平的添加使生长和蛋白质沉积达到最大值;各组FCR、HSI、VSI、肝脏脂肪含量结果发现,0.89%磷水平的添加FCR显著低于其余各组(P<0.05),HSI在1.10%磷水平达到最小值,而肝脏脂肪含量、VSI在0.89%磷水平最小;体组成的研究中发现,随磷水平的增加全体粗脂肪含量降低,粗蛋白、灰分、钙磷含量则显著增加(P<0.05)。以上研究结果表明,磷能提高花鲈的生长性能,以WGR为判定指标,用折线回归模型确定花鲈有效磷的需求量为0.72%;以肝脏脂肪含量为判定指标,有效磷的需要量为0.89%。低磷饲料(0.48%)会导致鱼体脂肪的过度沉积。
  饲料0.89%的磷水平显著降低了血清AST、ALT的活性。肝脏磷含量随饲料磷水平的升高而显著升高(P<0.05)。表观消化率结果表明,随饲料磷水平的升高干物质表观消化率显著升高(P<0.05),而钙、磷表观消化率则显著降低(P<0.05);脊椎骨的矿物质元素含量结果发现,磷水平的升高导致钙、磷、铜的含量增加,在磷水平为0.89%时,钙、磷的含量显著高于0.48%组,1.10%组鱼体铜的含量显著高于0.48%组,而锌、铁、镁、锰的含量则显著降低(P<0.05);以上研究结果表明,饲料磷水平为0.89%时可降低鱼体肝脏损伤;随饲料磷水平的升高干物质的表观消化率、骨骼矿物质含量上升,表明骨矿化能力增强。
  2.饲料磷水平对花鲈肝脏酶活性、脂肪酸组成及组织学的影响
  饲料磷水平的升高显著降低TG与T-CHO的含量(P<0.05);HL、LPL、总脂酶的活性随磷水平的升高呈现先上升后下降的趋势。肝脏脂肪酸组成的数据表明,1.10%磷水平的添加显著提高了HUFA所占比例,显著降低了SFA和MUFA所占比例(P<0.05)。从鱼体肝脏组织学研究发现,0.48%磷水平的肝细胞分界不明显,细胞空泡化比较严重,含有较多脂肪滴,随着磷水平升高,肝细胞空泡化程度减轻。研究结果表明,适宜的磷水平可以缓解肝脏脂肪的过度沉积,增加肝脏HUFA的含量。综合考虑,当饲料磷水平为0.89%以上时,肝脏脂肪沉积减少。
  3.饲料磷水平对花鲈脂代谢相关基因表达的影响
  脂代谢相关基因表达量的结果表明,CYP2781、CYP24、HSL、FAS、ACC-2、SREBP-1的表达量随磷水平升高呈现先下降后上升的趋势(P<0.05);LPL、PPARα、CPT-1表达量则呈现相反的趋势(P<0.05)。VDR与AMPK的表达则随磷水平升高呈现上升的趋势(P<0.05)。本部分实验结果表明,饲料磷水平影响肝脏脂代谢相关基因的表达,当饲料磷水平为0.48%时,脂肪分解相关基因表达下调,脂肪合成相关基因表达上调。
  综上所述,0.89%磷水平有利于骨骼矿化;0.89%以上磷水平可增加HUFA的含量,缓解肝脏脂肪的沉积;0.48%磷水平饲料会导致鱼体脂肪分解相关基因表达下调,脂肪合成相关基因表达上调。以增重率为判定指标,淡水养殖花鲈对磷的适宜需求量为0.72%(有效磷)。以肝脏脂肪含量为判定指标,有效磷的需要量为0.89%。
[硕士论文] 胡梦君
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:蟹类作为一种营养价值高、肉质鲜美的水产品,广受消费者喜爱,但是随之引起的食物过敏发病率持续上升。本文以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)为研究对象,对青蟹中的新型过敏原肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP)进行重组表达,对其抗原表位进行定位分析,探讨酶法交联反应、美拉德反应对重组SCP(rSCP)致敏性的影响,以期为过敏性疾病诊断和低致敏性食品开发提供理论依据。
  本研究首先从拟穴青蟹肌肉中纯化出分子量约20kDa的SCP,通过免疫新西兰大白兔获得兔抗青蟹SCP血清,纯化得到兔抗SCP-IgG多克隆抗体。构建表达载体pET-22b-SCP,在E.coli Rossetta菌株中诱导表达获得可溶性的rSCP。圆二色谱、抑制性ELISA、免疫杂交分析结果显示,rSCP与天然SCP(nSCP)均呈典型的α/β蛋白特征,在IgE结合活性方面能够相互抑制,在高温(60℃~100℃)、弱酸(pH2.0~5.0)、强碱(pH10.0~11.0)条件下均易发生聚合,表现出结构、免疫结合能力及理化特性的一致性。体内动物及体外细胞试验结果显示,rSCP使BALB/c小鼠的脾脏淋巴细胞Th2型相关细胞因子IL-4和IL-13分别升高至300pg/mL、250pg/mL,也能够上调蟹类过敏患者嗜碱性粒细胞的表面分子CD63和CD203c水平。不同甲壳类动物的SCP与rSCP可以竞争结合虾蟹类过敏患者血清中IgE,且rSCP的抑制效果最强,提示rSCP可以代替天然蛋白用于过敏原组分诊断。
  其次,采用嗜碱性粒细胞活化试验确定SCP过敏患者,并用鼠抗人anti-IgE富集SCP过敏患者血清中的IgE;以兔抗SCP-IgG多克隆抗体和SCP过敏患者血清IgE为靶蛋白,经过噬菌体展示技术亲和淘选共定位得到3个IgG抗原表位和6个IgE抗原表位,值得指出的是IgG表位的氨基酸组成均在IgE表位中存在。这些抗原表位主要分布在SCP的一级序列保守区域、二级结构的α-螺旋末端和无规则卷曲柔性区域、蛋白质空间结构的表面;其中Epitope1(N37T38L39I38E41G42R43Y51N54T112)为IgE与IgG所共同识别的抗原表位,在淘选到的克隆子序列中重复性最高,推测为SCP的关键表位。
  最后,通过分析食品加工处理对rSCP致敏性的影响,发现酪氨酸酶作用下的rSCP酶法交联反应产物(CL-SCP)、木糖与rSCP发生美拉德反应的产物(MR-SCP)致敏性均降低。圆二色谱分析显示,MR-SCP、CL-SCP的α螺旋含量分别降低至16.4%和16.2%,β折叠的含量分别升高至32.2%和31.3%。与rSCP相比,MR-SCP、CL-SCP激活患者嗜碱性粒细胞表达的CD63和CD203c比例下降。结合SCP抗原表位分析认为,酪氨酸酶可以催化交联SCP蛋白表位区域的酪氨酸残基,而美拉德反应可以修饰SCP蛋白的关键抗原表位区域,提示这两种加工方法可以改变过敏原结构与抗原表位,从而降低SCP的致敏性。
[硕士论文] 谭智蓉
渔业 集美大学 2018(学位年度)
摘要:随着水体的富营养化程度不断加剧,淡水水体中蓝藻水华的暴发也变得日趋频繁。微囊藻毒素是铜绿微囊藻等水华优势藻类死亡分解时能释放出的二级毒性代谢物,污染水环境,对水产养殖行业是一个巨大的挑战。微囊藻毒素的水溶性好、热稳定性高且能在生物体内蓄积,所以其造成的污染具有持续性、广泛性。MC-LR则是微囊藻毒素中一种毒性较强,分布较广,以肝脏为主要的靶器官的毒素。当前微囊藻毒素的污染已成为一个与人们生活息息相关的重大环境问题。
  欧洲鳗鲡是我国出口创汇的重要经济水产动物,但在淡水养殖过程中却容易受到蓝藻水华的影响。本研究主要利用转录组测序技术和荧光定量PCR技术,全面分析欧洲鳗鲡肝脏组织中受MC-LR影响的脂质代谢途径及其相关的重要基因。
  对健康欧洲鳗鲡分别注射相应浓度的MC-LR溶液与等量的生理盐水溶液24小时后,取出足够的肝脏样品,提取RNA后进行纯化和文库构建,转录组测序并数据分析。本次实验九个样品平均产出23.44M转录组数据,通过KEGG分析发现,14μg/kgMC-LR暴露24h后与欧洲鳗鲡肝脏脂质代谢相关的通路有15条会受到影响,140μg/kgMC-LR暴露24h后与欧洲鳗鲡肝脏脂质代谢相关的通路有13条会受到影响。MC-LR影响的脂质代谢基因涉及脂肪酸、丙酮酸、类固醇、肌醇磷酸盐、甘油磷脂、鞘脂、醚酯、亚麻油酸、花生四烯酸和酮体等物质的代谢。14μg/kgMC-LR处理组与对照组对比,其肝脏脂质代谢相关的差异基因片段一共有201个,其中上调的基因片段79个,下调的基因片段122个;140μg/kgMC-LR处理组与对照组对比,其肝脏脂质代谢相关的差异基因片段一共有92个,其中上调的基因片段64个,下调的基因片段28个。有53个基因片段在这两种不同MC-LR浓度处理后都出现了显著性差异变化,并且其中的52个基因片段上下调变化情况一致。荧光定量PCR检测结果验证了本次测序结果的可靠性。本实验结果可以为诊断和防治MC-LR毒素引发的代谢性疾病提供科学的判断依据。
[硕士论文] 邵韦涵
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:物种间基因表达的差异与表型的多样性紧密相关。探究转录调控差异的分子机制对于揭示物种间遗传差异以及其种间杂交子代的基因表达模式十分重要。本研究通过转录组测序技术对黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代“黄优1号”肝脏组织的基因和等位基因的表达量进行定量分析,并利用杂交子代体内来自父本和母本的基因序列受到相同细胞环境即反式作用因子的影响来探究黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼转录调控差异,以及这两个物种间顺反元件的变异程度对于“黄优1号”体内基因表达模式的影响。
  实验结果显示,黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼物种间多数基因发生了顺式元件的变异,这与两个物种间显著遗传差异密切相关,并且决定了“黄优1号”大多数基因呈现加性表达模式,即表达量居于亲本之间。这也表明物种间足够长的独立演化时间会令这两个物种的大多数基因发生了顺式元件的突变。而在对杂交优势起决定性作用的非加性基因中,表现为亲本显性的基因数目远超过偏离亲本表达的基因数目。此外,“黄优1号”体内表达量偏向黄颡鱼的基因数目多于偏向瓦氏黄颡鱼的基因数目,在进一步对其体内等位基因偏离表达的研究中发现,这主要是通过“黄优1号”中来自瓦氏黄颡鱼的等位基因显著偏离表达实现。
  本研究证实,黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼漫长的独立演化史以及反式元件变异的有害性导致了自然选择将顺式原件变异的基因累积起来,进而导致两个物种间基因表达量的显著差异以及“黄优1号”体内大多数基因为加性表达模式,“黄优1号”杂交优势则主要由显性表达的基因决定。“黄优1号”体内基因表达量偏向母本黄颡鱼的现象则是由于来自父本瓦氏黄颡鱼的等位基因受来自母本黄颡鱼的反式元件作用程度更为明显的结果。
[硕士论文] 王金华
生态学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:如何将有限的水土资源有效利用,在粮食供给得以保障的前提下,降低农业生产对资源环境的负面影响,是当今全球各农业大国面临的重大挑战。稻虾共作通过稻田养殖小龙虾,能充分利用稻田光、热、水及生物资源,将水稻种植和小龙虾饲养有机结合起来,具有农田减排和农民增收的双重效应,社会、经济和生态效益显著,应用前景广阔。
  本试验通过室内养虾试验和田间秸秆还田投食试验,研究投食和秸秆还田对水稻和小龙虾生长及稻田土壤氮素动态变化的影响,为稻虾共作氮肥运筹提供理论依据和技术支撑。(1)室内养虾试验于2016年4月-2016年7月在华中农业大学水产学院实习基地(114°29′E,30°28′N)以克氏原螯虾为研究对象,通过设置不同含氮量的饲料:玉米(9.86mg/g)、花生(17.34mg/g)、复合饲料(22.22mg/g)、大豆(37.98mg/g)、不投食(CK)五个处理,研究饲料对小龙虾生长动态的影响,明确小龙虾对饲料中的氮的同化量和排泄量的差异性和相关性;(2)秸秆还田与投食试验于2016年和2017年在湖北省潜江市后湖管理区华中农业大学稻虾试验基地(112°71′E,30°39′N),以水稻泰优390和克氏原螯虾为供试材料,设置秸秆还田投食(S+F)、秸秆还田不投食(S+NF)、秸秆不还田投食(NS+F)、秸秆不还田不投食(NS+NF)、水稻单作秸秆还田(CK+S)、水稻单作秸秆不还田(CK+NS)6个不同处理,每个处理设置3个重复,研究稻田氮素转化的动态特征,明确秸秆还田和投食双因素影响下,不同处理对稻虾系统水稻产量及构成因子、小龙虾产量、土壤理化性质、氮素动态特征以及氮素利用效率的影响。主要结果如下:
  (1)投喂不同饲料对小龙虾生长动态、饲料摄取与同化的影响研究表明,投食显著增加了小龙虾的体重、头胸甲长和头胸甲宽。不同处理间,放养前和收获后小龙虾体重的差异表现为:投喂复合饲料>投喂大豆>投喂花生>投喂玉米>不投食,差异显著;体长的差异表现为:投喂复合饲料>投喂大豆>投喂花生>投喂玉米>不投食;小龙虾头胸甲长和头胸甲宽在不同处理间没有显著影响。投喂复合饲料可以使小龙虾的同化量氮达到最大值,不同处理同化量氮大小表现为:投喂复合饲料(337.18mg)>投喂玉米(299.39mg)>投喂大豆(294.11mg)>投喂花生(216.26mg)>不投食(66.65mg);粪便中氮总累计量的大小表现为:投喂复合饲料>投喂玉米>投喂大豆>投喂花生>不投食;小龙虾对饲料氮的利用率差异显著,具体为:投喂玉米>投喂复合饲料>投喂花生>投喂大豆。投喂复合饲料不仅有利于小龙虾的生长,还可以提高饲料中氮的利用率,取食复合饲料的小龙虾排放的粪便中氮总累计量高,进入稻田中可以达到氮肥补偿和减肥增效的目的。
  (2)秸秆还田与投食对产量的影响研究表明,稻田养虾对水稻产量比较结果为:NS+F>S+F>NS+NF>S+NF,投食对产量有一定的正效应,秸秆还田对产量的影响不显著,投食能显著增加水稻的产量、有效穗数、结实率和每穗粒数,但对千粒重的影响不显著。稻虾系统中不同处理对小龙虾产量影响结果表现为:S+F>NS+F>S+NF>NS+NF,投食显著增加了小龙虾的产量,秸秆还田对小龙虾的产量没有显著影响。
  (3)秸秆还田与投食对土壤氮素的影响研究表明,土壤总氮含量相对稳定,在整个水稻生育期不同处理间、周年间没有显著差异,但总氮含量在S+F处理中最高,于收获期达到了2.0338g/kg,与CK+S相比,增加了18.8%,稻虾系统中投食会增加土壤总氮含量;土壤铵态氮、碱解氮含量在水稻整个生育期的变化趋势较一致,均表现为先升高后降低的趋势,同一生育期不同处理之间,NS+F处理中的铵态氮含量显著高于其他处理,稻田养虾增加了土壤铵态氮和碱解氮的含量;稻虾系统中土壤硝态氮含量在整个生育期内表现为先降低后升高的趋势,与CK相比,硝态氮含量偏低,稻田养虾降低了土壤硝态氮含量。
  (4)秸秆还田与投食对氮素利用的影响研究表明,稻田养虾增加了氮肥偏生产力,同时也增加了氮收获指数和谷物收获指数。在稻虾系统中,不同处理之间氮肥偏生产力的大小表现为:NS+F>S+F>NS+NF>S+NF,稻虾系统中投食提高了氮肥偏生产力,秸秆不还田也会提高氮肥偏生产力;在氮素利用效率方面,不同处理之间表现为:S+NF>NS+F>NS+NF>S+F,稻谷收获指数大小表现为:S+F>S+NF>NS+NF>NS+F,表明S+F处理虽然会增加稻谷收获指数,可以达到增产的目的,同时会造成氮素利用效率偏低,导致氮肥流失和浪费,也会造成环境污染,因此在稻虾田中应合理秸秆还田和适当投喂饲料。
  (5)秸秆还田与投食对稻虾系统中氮平衡的影响研究表明,在四个不同处理中,氮素累计输出量和氮素输出/投入比值大小均表现为:S+F>NS+F>S+NF>NS+NF,S+F处理更有利于稻虾系统中投入的氮素流入到水稻籽粒和小龙虾体内。在稻虾系统中,氮素转化率偏低,处于21.2%-58.7%之间,大部分氮素流失到了环境中,造成了资源的浪费。
[博士论文] 陈昕
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:在鱼类中,雌雄生长异型模式有着重要的理论和实践意义。由Y、X特异等位基因标记所支持的性别控制技术已经应用于全雄黄颡鱼品系的大规模育种,但黄颡鱼遗传育种的遗传信息仍不太明确。在此,我们首次对来自XX雌鱼、XY和YY雄鱼的多种组织进行了全转录组分析。总共获得1,202,933个高质量reads(约540Mbp),并拼接成为28,297个contigs和141,951个singletons。通过使用BLASTX与NCBI nr数据库的比对,获得了总共52,564个unique sequences,其中包括18,748个contigs和33,816个singletons,并能与25,669个已知的或预测的蛋白相比对。这些被注释的序列经过GO数据库分析,其中有712个可被注释到生殖与繁殖过程的条目中。并通过KEGG富集分析发现了一些与生殖系统潜在相关的基因,预测到了至少21个性别决定与分化潜在相关基因,例如Dmrt1、Sox9a/b、Cyp19b、WT1、AMH。从转录组数据中还获得了总共82,794个SSRs、26,450个SNPs、和4,145个INDELs。因此,我们的转录组分析为黄颡鱼的性别控制育种提供了有意义的研究,并有利于将来硬骨鱼类的生殖与性别决定研究。
  通过对转录组测序数据的荧光定量PCR分析发现,与肿瘤发生和细胞增殖密切相关的增殖细胞核抗原(PCNA)相关因子p15PAF在黄颡鱼XX雌鱼卵巢中的表达量显著高于XY雄鱼精巢中的表达量。然而,p15PAF在脊椎动物发育中的功能仍是未知。为了探索p15PAF在斑马鱼发育中的作用,我们使用CRISPR/Cas9技术构建了p15PAF突变体斑马鱼。我们发现缺失母源p15PAF的突变体(即p15PAF母源突变体)会在早期胚胎发育时期出现严重缺陷,包括由一些早期胚胎腹背轴分化相关标记基因减少或者异位所指示的体轴形成异常。值得注意的是,p15PAF母源突变体在母源-合子转换(MZT)期间,正常的母源因子降解和合子基因激活被严重影响,Wnt/β-catenin信号通路中的一些基因表达量下调。而p15PAF母源突变体的腹背轴分化缺陷可以由过表达的β-catenin所挽救。TOPFlash荧光素酶报告实验可以用来检测Wnt/β-catenin信号通路中TCF/LEF的活性,结果表明p15PAF和β-catenin配合调节下游基因。免疫共沉淀实验证明了斑马鱼的P15PAF蛋白可以和β-catenin蛋白相互结合。总之,我们的结果揭示了斑马鱼p15PAF结合β-catenin并且调节β-catenin的活性,并在包括MZT和体轴形成的早期胚胎发育过程中发挥关键作用。
[硕士论文] 曾珍珍
动物营养与饲料科学 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:本文旨在研究黄曲霉毒素B1(AFB1)对幼草鱼生产性能、免疫器官(头肾和脾脏)和粘膜免疫组织(肠道、鳃和皮肤)的结构完整性和免疫功能的影响及其机制。选择均重为12.96±0.03g的健康草鱼1440尾,随机分为6个处理组,每组设3个重复,分别用AFB1含量为0.04、29.48、58.66、85.94、110.43和143.92μg/kg的饲粮饲喂60天,生长试验结束后,进行嗜水气单胞菌和柱状黄杆菌攻毒试验,研究AFB1对幼草鱼疾病抵抗力的影响。
  结果表明:饲粮中AFB1水平达到或超过58.66μg/kg时,显著降低了幼草鱼增重百分比(PWG)、特定生长率(P<0.05),抑制了草鱼生长。鱼类生长与机体免疫器官(头肾和脾脏)和粘膜免疫组织(肠道、鳃和皮肤)结构完整性和免疫功能密切相关。研究发现:(1)AFB1增加了幼草鱼头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的活性氧、丙二醛和蛋白质羰基的含量,造成氧化损伤,同时AFB1下调了铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)(除了鳃和皮肤)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶亚型(GPx1a、GPx1b、GPx4a和GPx4b)(除了前、中和后肠)、谷胱甘肽硫转移酶亚型R(GSTR)、GSTP1(除了头肾、脾脏和皮肤)、GSTP2、GSTO1、GSTO2和谷胱甘肽还原酶(GR)的mRNA水平降低了相应抗氧化酶的活力,下调了核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA水平和蛋白水平,上调了锚定蛋白1a(Keap1a)(而不是Keap1b)mRNA水平,降低了其抗氧化损伤能力;(2)其次,AFB1上调了p38丝裂源活化蛋白激酶,半胱天冬酶-2(caspase-2)、caspase-3、caspase-7、caspasse-8、caspase-9、凋亡相关因子配体(FasL)、促凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)和B细胞淋巴瘤蛋白-2相关X蛋白(Bax)的mRNA水平,下调了抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)(除了鳃和皮肤)、凋亡抑制蛋白(IAP)和髓细胞白血病基因1(Mcl-1)(除了前、中和后肠)mRNA水平,加剧了头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的细胞凋亡;(3)AFB1下调了幼草鱼头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的紧密连接蛋白occludin(除了脾脏)、ZO-1、ZO-2b(除了中肠和后肠)、claudin-b(除了前、中和后肠)、claudin-c、claudin-f、claudin-3c(除了头肾、脾脏和皮肤)、claudin-7a、claudin-7b、claudin-11、claudin-15a和claudin-15b,上调了claudin-12以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)mRNA水平,破坏了头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的细胞间结构完整性。\进一步研究发现:AFB1降低了幼草鱼抵抗肠炎、烂鳃和赤皮病的能力,这可能与AFB1降低了头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的免疫功能有关:(1)AFB1降低了头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤抗菌物质溶菌酶和酸性磷酸酶的活力,补体3(C3)、C4和IgM的含量;下调了抗菌肽β-defensin-1、铁调素(hepcidin)(除了头肾和脾脏)以及肝脏表达抗菌肽2A(LEAP-2A)、LEAP-2B和黏蛋白2(Mucin2)mRNA水平,降低了头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤免疫功能;(2)AFB1上调了幼草鱼头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)(除了鳃)、干扰素γ2(IFN-γ2)、白介素-1β(IL-1β)(除了头肾、脾脏和皮肤)、IL-6(除了前、中和后肠)、IL-8(除了鳃)、IL-15、IL-17D(除了中肠和后肠)、IL-12p35(除了头肾、脾脏和皮肤)和IL-12p40mRNA水平,下调了抗炎细胞因子IL-10(除了皮肤)、IL-11、转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β2(除了中肠和后肠)、IL-4/13A(除了前、中和后肠)和IL-4/13BmRNA水平,上调了促炎信号分子抑制蛋白κB激酶β(IKKβ)、IKKγ、NF-κB p65和c-Rel mRNA水平(而不是IKKα/NF-κBp52),以及下调了抑制因子IκBαmRNA水平,下调了TOR和S6K1mRNA水平,上调了4E-BP1和4E-BP2mRNA水平,加剧了炎症反应,降低了幼草鱼头肾、脾脏、肠道、鳃和皮肤的免疫功能。
  综上所述,AFB1降低了幼草鱼疾病抵抗能力和生产性能,这可能与其破坏了机体免疫器官(头肾和脾脏)和粘膜免疫组织(肠道、鳃和皮肤)的结构完整性,降低了其免疫功能有关。以生产性能PWG为标识,确定的AFB1在草鱼(12.96-91.25g)饲粮中的控制限量为29.48μg/kg。
[硕士论文] 方健
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:CRISPR/Cas9是一种来源于细菌获得性免疫系统,经人工改造后可对靶基因进行修饰的技术,具有构建方法简单、效率高、成本低、使用范围广等优点。目前,该技术已经成功应用于细菌以及多种动植物的基因组精确修饰中,是最具有临床应用前景的基因编辑技术。Nanog基因作为诱导多能性干细胞关键因子之一,对胚胎早期发育和维持胚胎干细胞全能性具有重要的作用。本实验以青鳉为研究对象,通过使用斑马鱼密码子优化的Cas9编码序列,对青鳉tyr和nanog基因进行基因编辑。实验结果表明斑马鱼密码子优化的CRISPR/Cas9系统可以高效率敲除青鳉tyr和nanog基因,而且通过同源重组机制也可以介导青鳉nanog基因敲入。总而言之,青鳉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系的建立为研究青鳉nanog基因功能奠定重要的基础。
  主要研究结果如下:
  (1)使用CRISPR/Cas9系统,采用单靶点方式敲除青鳉tyr基因。在F0代可以观察到眼睛部位有明显的色素缺失,并通过连续自交和表型筛选的方式快速获得了能够稳定遗传的青鳉白化品系。
  (2)使用CRISPR/Cas9系统,采用双靶点敲除方式敲除青鳉nanog基因,测序结果表明nanog基因约有900bp片段缺失。通过PCR筛选,我们获得了3种不同突变类型的F2代纯合突变体。将F2代纯合突变体自交,观察F3代胚胎发育情况,实验结果表明F2代纯合突变体自交产生的F3代胚胎在发育到囊胚晚期后停滞发育。
  (3)使用CRISPR/Cas9系统介导青鳉nanog基因敲入。通过荧光观察和测序分析,实验结果表明Hyg-EGFP敲入片段精确整合到nanog基因靶点位置。
[硕士论文] 刘玉廷
特种经济动物饲养 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:本文旨在探究复方中草药(Compound Chinese herbal medicine,CCM)对泥鳅幼鱼生长性能、肝胰脏脂代谢、抗氧化作用及肠道功能影响,优化最佳添加量,为泥鳅绿色安全养殖提供参考。选取健康泥鳅幼鱼750尾,随机分为5组,分别为C(对照组)、5CCM、10CCM、15CCM、20CCM组(日粮CCM添加量分别为0、5、10、15和20mg/g),置于120×80×60cm的水族箱中饲养,饲喂70d后,取肝胰脏、肠道样本,检测相应指标。主要试验结果如下:
  1.与C组鱼相比:10CCM组鱼特异生长率、蛋白质效率均显著提高,饲料系数显著降低(P<0.05);各组鱼存活率及增重率无显著性差异(P>0.05);各组鱼体粗蛋白、粗灰分及水分含量无显著差异,但20CCM组鱼体粗脂肪显著低于C组鱼(P<0.05)。
  2.与C组鱼相比:各CCM添加组鱼肝胰脏LDL含量均极显著降低(P<0.01),10CCM组肝胰脏鱼TCHO、TG含量极显著降低(P<0.01),HDL的含量显著升高(P<0.05);15CCM组肝胰脏TCHO含量极显著降低(P<0.01),TG含量显著降低(P<0.05)。10CCM组鱼肝胰脏MDA含量极显著降低(P<0.01),CAT和GSH-PX活性显著增加(P<0.05);15CCM组肝胰脏MDA、AKP含量极显著降低(P<0.01),GSH-PX活性显著增加(P<0.05);组织学切片油红O染色后观察显示,各组鱼肝胰脏脂滴数量与分布范围随CCM添加量增加明显减小,10CCM、15CCM和20CCM组鱼肝胰脏切片未见明显脂滴,肝索结构逐渐清晰。
  3.与C组鱼相比:10CCM组鱼肠道胃蛋白酶、淀粉酶活性极显著提高(P<0.01),脂肪酶活性显著提高(P<0.05);15CCM组鱼肠道胃蛋白酶活性明显提升(P<0.01),淀粉酶和脂肪酶显著提高(P<0.05);5CCM组鱼肠道羟自由基清除率最高(P<0.01);10CCM组鱼肠道CAT、GSH-PX活性和AKP含量显著提高,PC和MDA含量显著降低(P<0.05);经16S rDNA V3-V4区高通量测序,比较分析结果显示:饲料添加CCM改变了肠道微生物构成,10CCM组鱼肠道有益菌鲸杆菌属比例上升,而条件致病菌群伊丽莎白菌、肠杆菌、不动杆菌、红球菌比例下降。
  由上述试验结果可以得出,日粮添加CCM可改善泥鳅生长性能、提高肝胰脏非特异性免疫功能、调节肝胰脏脂代谢;还可能通过调节肠道菌群构成、促进肠道消化吸收功能和增强肠道非特异性免疫功能的作用,推荐最佳添加剂量为10mg/g。
[硕士论文] 石焱
水产 集美大学 2018(学位年度)
摘要:鱼类的摄食生态和营养关系是鱼类生态营养动力学的重要内容。闽江口作为福建第一大入海河口,是沿岸渔民传统的捕捞海域,在这一水域开展常见鱼类的营养关系和摄食生态的研究,具有非常重要的科研和实践价值。本研究通过2015年1月(冬季)、5月(春季)、8月(夏季)和11月(秋季)闽江口底拖网定点采样调查,以碳、氮稳定同位素技术对闽江口常见鱼类种群营养生态位和群落营养结构的季节性变化进行研究分析,主要结果如下:
  (1)凤鲚(Coilia mystus)δ13C季节间差异性极显著(p<0.01),δ15N季节间差异性极显著(p<0.01),春季凤鲚的营养生态位与其他季节在碳氮稳定同位素二维坐标图上有明显的分离。凤鲚的全年平均营养级为3.96。结合稳定同位素混合模型分析可得凤鲚主要以浮游动物和甲壳类为食,其平均贡献率共达61.45%。春季凤鲚所占据的核心生态位面积(SEAc)最大。
  (2)棘头梅童鱼(Collichthy lucidus)δ13C季节间差异性极显著(p<0.01),δ15N季节间没有表现出显著性差异(p>0.05),在碳氮稳定同位素二维坐标图上棘头梅童鱼春季营养生态位与冬季呈现完全分离。棘头梅童鱼全年平均营养级为3.62。结合稳定同位素混合模型分析可得棘头梅童鱼主要以浮游动物为食,其贡献率达58.51%。秋季棘头梅童鱼所占据的核心生态位面积(S EAc)最大。
  (3)龙头鱼(Harpadon nehereus)δ13C在季节间差异性极显著(p<0.01),δ15N季节间差异性显著(p<0.05),在碳氮稳定同位素二维坐标图上春季龙头鱼营养生态位与夏、秋、冬季有明显的分离。龙头鱼全年平均营养级为3.59。结合稳定同位素混合模型分析可得龙头鱼主要食物来源为鱼类,平均贡献率为50.1%。冬季龙头鱼所占据的核心生态位面积(SEAc)最大。
  (4)根据鱼类相对重要性指数(IRI)确定闽江口常见鱼类种类共为22种。群落中常见鱼类的营养结构存在季节差异。从夏季至秋季、冬季再至春季,生态位总空间(TA)、核心生态位空间(SEAc)、基础食物来源(CR)、营养长度(NR)、营养多样性(CD)和营养位置差异(NND)均逐步上升。闽江口常见鱼类群落营养结构的季节差异可能与鱼类生殖洄游和群落内食源多样性的变化密切相关。
[硕士论文] 孙福华
农业机械化工程 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:我国是一个水产养殖大国,2015年我国水产养殖产量达4500万吨,占世界水产养殖总量的70%左右。随着水产养殖业的快速发展,对水产饲料的需求也越来越大。特别是近几年,我国对于水产饲料需求正高速增长,但我国水产养殖饲料的生产仍处于粗放型发展阶段,有些地区由于饲料盲目投放,不仅造成资源浪费,而且引发水污染问题和水产品健康问题。针对我国现阶段水产饲料在工艺和技术上得不到解决的现状,本论文开展浮性水产饲料的相关装备研究与试验研究。旨在通过双螺杆挤压膨化技术,达到节约资源、降低饲料成本、提高工作效率的效果,同时优化饲料生产工艺,提高饲料的品质。
  本课题来源于2016年农业部现代农业装备重点实验室项目,根据理论分析及项目需求,分析了膨化水产饲料在膨化过程中的微观机理,包括物料从有序到无序的转变、气核生成、模口膨胀、气泡生长和气泡停止生长或收缩五个部分。着重分析了水产饲料熔体气泡生长的过程,把细胞生长的物理模型应用到气泡生长,并建立相应的数学模型,最后选取合适的本构方程,计算出熔体外壳内外的压力与气泡半径、细胞半径的关系。研究设计了饲料喂料装置,减小了因喂料不均引起的饲料品质下降的影响。主要包括1)料斗的研究与尺寸设计;2)搅拌器的结构设计和尺寸安排;3)电机的选型和动平衡研究。并通过尺寸,生产制造了喂料装置。
  通过水产饲料生产的单因素试验探讨了螺杆转速、出料段机筒温度、物料含水率和喂料速度对水产饲料膨化度、容积密度、吸水性以及水中稳定性之间的关系,得出了每个因素对水产饲料品质影响的规律,并根据理论分析做出解释。
  根据单因素试验,采用三因素五水平的二次回归正交组合试验方案,开展了正交组合试验研究。通过Design-Expert8.0数据分析软件,分别分析了螺杆转速、出料段机筒温度和物料含水率三者间的交互影响对水产饲料膨化度、容积密度、吸水性以及溶失率的影响,通过数据和图表清楚的揭示了自变量和因变量之间的规律。
  通过对水产饲料膨化度、容积密度、吸水性和溶失率最优目标函数的设定,确定了最佳工艺路线为螺杆转速31Hz,出料段机筒温度149℃,物料含水率17.5%。并进行了验证实验的数据与模型预测数据的对比,并且最后通过扫描电镜观察最优工艺路线下生产出的水产饲料的微观结构。
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