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[硕士论文] 冯昭君
中医外科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  观察健脾活血汤联合甲泼尼龙片治疗寻常型天疱疮(脾虚血瘀证)的临床疗效。
  方法:
  入选病例来自于黑龙江中医药大学附属第一医院皮肤科门诊和黑龙江省医院皮肤科门诊2017年02月-2018年01月就诊且符合入选标准的51例患者,采用随机分组的方法,按就诊顺序分为3组,每组均为17例,分别给予治疗组(健脾活血汤联合甲泼尼龙片)口服、对照A组(甲泼尼龙片)口服、对照B组(健脾活血汤)口服。4周为一个疗程,分别记录三组用药前、用药后4周、8周的病情严重程度评分,激素控制计量情况,以及相关并发症及用药不良反应等指标进行组间的疗效评价,并进行统计学处理。
  结果:
  1、经治疗后,治疗组、对照A组、对照B组总有效率分别为94.11%、70.58%、64.70%,三组临床疗效比较经统计学分析(P<0.05)具有显著性差异,即治疗组优于对照A组与对照B组。
  2、病情严重程度评分比较具有统计学意义(P<0.05),即皮损的改善情况治疗组优于对照A组与对照B组。
  3、激素的控制计量情况比较具有统计学意义(P<0.05),即治疗组激素控制计量明显少于对照A组。
  4、三组患者其相关并发症情况比较具有统计学意义(P<0.05),即治疗组与对照B组并发症少于对照A组。
  5、三组患者未出现影响本临床观察的不良反应,治疗组与对照B组安全性相对更高。
  结论:
  1、健脾活血汤联合甲泼尼龙片治疗寻常型天疱疮(脾虚血瘀证)能够明显改善患者病情。
  2、健脾活血汤联合甲泼尼龙片治疗寻常型天疱疮(脾虚血瘀证)中激素的计量少于单用激素组。
  3、健脾活血汤联合甲泼尼龙片治疗寻常型天疱疮(脾虚血瘀证)过程中出现的并发症少于单用激素组。
  4、健脾活血汤联合甲泼尼龙片治疗寻常型天疱疮(脾虚血瘀证)安全、稳妥、有效。
[博士论文] 元星花
皮肤病与性病学 延边大学 2018(学位年度)
摘要:血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,简称VIP)是组成皮肤神经肽的重要成员之一,在不同的生物学条件下可由分布于表皮、基底层、真皮、汗腺以及毛囊等部位的感觉及自主神经末梢分泌。VIP是属于胃泌素/分泌素/胰高血糖素家族的分泌型多肽,由28个氨基酸组成并与有不同结构特点的G蛋白偶联受体-VIP受体1(VIPreceptor1,VIPR1)及VIPR2结合。VIP/VIPR系统的激活可介导血管扩张、血浆外渗、肥大细胞脱颗粒、免疫调节等多方面的生理过程。有研究报道VIP在特应性皮炎、银屑病等炎症性皮肤病的发病机制中起到重要的作用,而炎症性皮肤病的恢复期往往会导致炎症后色素沉着(Postinflammatory hyperpigmentation,PIH)。目前有关VIP在黑色素生成过程中的作用方面研究尚未见报道。
  目的:探讨血管活性肠肽在黑色素生成过程中的作用以及相关机制。
  方法:1)利用VIP处理小鼠黑素瘤B16F10细胞,并以不同浓度分析细胞活性、黑色素含量,在不同时间段测定酪氨酸酶活性;2)分别利用RNA逆转录合成eDNA试验、实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及蛋白免疫印迹试验(Western blotting)来检测黑色素生成关键酶-酪氨酸酶(Tyrosinase)以及小眼畸形相关转录因子(microphthalmia associatedtranscription factor,MITF)基因的mRNA及蛋白质表达水平;3)通过Westernblotting法在不同时间段对VIP诱导的信号通路相关蛋白PKA、CREB、p38MAPK、AKT、ERK1/2等磷酸化及总蛋白表达水平进行检测;4)利用选择性PKA抑制剂H89抑制cAMP-PKA-CREB信号通路,观察黑色素生成含量以及MITF、Tyrosinase等蛋白的表达变化,进一步确认有效的由VIP诱导的黑色素生成相关信号通路;5)通过Westernblotting法检测小鼠黑素瘤B16F10细胞中VIP受体的表达情况;6)利用特异性VIPR1/R2小干扰RNA下调相应VIP受体的表达,观察黑色素生成含量以及Tyrosinase蛋白的表达变化,检测VIP诱导的促黑色素生成过程中有效的VIP受体信号通路7)通过黑色素生成含量测定以及Western blotting法检测Tyrosinase、MITF等相关蛋白的表达,进一步在人表皮黑色素细胞中验证VIP在黑色素生成过程中的作用。
  结果:1)小鼠黑素瘤B16F10细胞以及人表皮黑色素细胞以不同浓度VIP(1-100 nM)处理后,其黑色素含量以浓度依赖的形式递增,且在此浓度范围内未对细胞产生毒性;2)在B16F10细胞中,VIP有效地增加细胞内酪氨酸酶活性;3)VIP在B16F10细胞中显著地增加Tyrosinase以及MITF蛋白质表达水平;4)VIP在B16F10细胞中以时间依赖性的形式显著地增加了MITF、Tyrosinase基因的mRNA表达水平;5)在B16F10细胞中VIP诱导CREB、PKA等蛋白的磷酸化,对p38 MAPK、AKT以及ERK等通路未见影响;6)利用选择性PKA抑制剂H89抑制PKA-CREB通路,明显地抑制了由VIP诱导的黑色素生成含量以及Tyrosinase、MITF等蛋白的表达增加;7)B16F10细胞表达VIP受体VIPR1及VIPR2;8)在B16F10细胞中利用特异性VIPR1/R2小干扰RNA下调相应VIP受体的表达,可降低由VIP诱导的黑色素生成含量以及Tyrosinase蛋白的表达增加;9) VIP在人表皮黑色素细胞中显著地增加黑色素生成含量;10) VIP在人表皮黑色素细胞中显著地增加Tyrosinase、MITF等蛋白的表达水平。
  结论:1)VIP在小鼠黑素瘤B16F10细胞及人表皮黑色素细胞中增加黑色素的生成含量;2) VIP增加酪氨酸酶活性以及tyrosinase基因的mRNA及蛋白质表达水平;3)VIP增加MITF基因的mRNA及蛋白质表达水平;4)VIP通过PKA-CERB-MITF-Tyrosinase信号通路促进黑色素的生成过程。
[硕士论文] 傅云
中医外科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  研究来源于中药甘草中的活性成分甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化的保护作用及其作用机制,为有效成分甘草苷预防和治疗皮肤光老化提供理论依据。
  方法:
  1.用不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,筛选出药物的最佳有效安全浓度。
  2.用30mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,将筛选出的有效安全浓度作用于光老化HaCaT细胞,MTT法测定甘草苷对光老化HaCaT细胞增殖率的影响。
  3.用试剂盒分别测定甘草苷对光老化HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量的影响。
  4.蛋白免疫印记(Western Blot)法检测甘草苷对光老化HaCaT细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)蛋白表达量的影响。
  5.流式细胞术检测甘草苷对光老化HaCaT细胞总凋亡率的影响。
  6.实时定量PCR(RT-PCR)法检测甘草苷对光老化HaCaT中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平的影响。
  结果:
  1.与空白对照组比较,10-10、10-9、10-8mol/L甘草苷组细胞增殖率显著升高(P<0.05,P<0.01),可明显促进细胞增殖;10-4、10-3mol/L甘草苷组细胞增殖率显著降低(P<0.01),可明显抑制细胞增殖;10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷组细胞增殖率无统计学差异(P>0.05),对细胞无明显的促增殖与抑制作用,为最佳有效安全浓度。
  2.与空白对照组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01)。
  3.与空白对照组比较,UVB组SOD、GSH、CAT活性显著降低(P<0.01),MDA、ROS含量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组SOD、GSH、CAT活性明显上升(P<0.05,P<0.01),MDA、ROS含量显著降低(P<0.01)。
  4.与空白对照组比较,UVB组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  5.与空白对照组比较,UVB组细胞总凋亡率显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞总凋亡率显著降低(P<0.01)。
  6.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  7.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  结论:
  甘草苷可促进光老化HaCaT细胞的增殖,提高细胞中SOD、GSH、CAT活性,降低MDA、ROS含量,抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,降低细胞总凋亡率,促进抗凋亡细胞因子Bcl-2mRNA及蛋白的表达,抑制促凋亡相关细胞因子Bax、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白的表达,从而有效的抑制皮肤光老化。
[硕士论文] 程秀君
皮肤病与性病学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:传统的皮肤病诊断方式依靠患者的病史、体格检查(主要是皮肤科检查)以及组织病理学结果。尽管许多皮肤病以组织病理学检查结果为诊断的金标准,但存在以下问题:一方面病理取材会造成创伤,不宜作为皮肤病的筛查技术而广泛应用;另一方面,病理诊断有时难以确定病因,因此有必要探讨新的皮肤病诊断技术。
  影像学技术已广泛应用于临床诊断,但在皮肤科的应用价值尚待探讨,近年来,高频超声技术已逐渐应用于某些皮肤病的诊断,但在中国尚未被广泛推广。
  微滴数字PCR技术是近年来新出现的分子生物学技术,是一种基于油包水乳化微滴技术的核酸定量分析技术且无需标准曲线,既往报道该技术在感染性疾病病原微生物检测中有明显的优势,但在中国尚缺乏广泛的临床实践。
  本文拟探讨高频超声技术和微滴数字PCR技术在某些皮肤病诊断中的应用价值,为该两项技术在皮肤科的广泛应用积累基础。
  研究目的:
  1.探索影像学技术—高频超声对大疱性皮肤病的筛查诊断的价值。
  2.建立并评估微滴数字PCR技术在麻风尤其是少菌型麻风诊断中的应用价值,加深对分子生物学技术推动皮肤科进步的理解。
  研究方法:
  1.以大疱性类天疱疮和寻常型天疱疮分别作为表皮下水疱和表皮内水疱的代表疾病,使用22MHz和50MHz探头对病人进行超声检查,同时结合病理学结果进行比较分析。
  2.首先利用多菌型麻风患者和对照组建立用于麻风诊断的数字微滴PCR技术;然后应用于少菌型病人的检测,并与Taqman qPCR结果进行比较
  研究结果:
  1.大疱性类天疱疮为代表的表皮下水疱的超声图像是表皮下有一类圆形的低回声暗区,此为水疱位置所在,该低回声暗区下缘延伸至真皮浅层,而以寻常型天疱疮为代表的表皮内水疱皮肤高频超声图像表现为水疱位置可见低回声暗区,底部为一条细长的高回声明亮条带,同表皮的回声强度类似,但BP患者超声检查图像中多无此亮带,可将此高回声明亮条带作为区分水疱所在位置的证据。
  2.使用建立的数字微滴PCR技术,33例少菌型麻风患者皮肤组织临床检测样本结果中,qPCR阳性的样本是15例(45%),数字微滴PCR阳性样本是28例(85%),这些样本中qPCR和数字微滴PCR均是阳性的样本是15例,数字微滴PCR阳性而qPCR阴性的为13例,无qPCR检测阳性而数字微滴PCR检测阴性者。
  研究结论:
  1.高频超声能够帮助临床上水疱位置的区分,可以作为大疱性皮肤病的筛查诊断手段,尤其是当尼氏征不明显时。此外,高频超声图像和病理图像有着高度的一致性。
  2.在麻风诊断中,数字微滴PCR技术优于Taqman qPCR技术,为临床上麻风早期诊断尤其是PB型患者的早期诊断提供了新的手段。
  3.关于新技术在皮肤科的应用仍需要进一步的探索,一方面,深入挖掘现有影像学技术或分子生物学技术的特点及原理,可以进一步拓展应用领域,让现有的技术为临床带来更多的便利;另一方面,新技术层出不穷,要大胆尝试其在皮肤科的应用。
[硕士论文] 詹少云
皮肤病与性病学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:黄褐斑是一种常见的色素沉着性疾病,通常于面部呈对称性分布,好发于Fitzpatrick分型为Ⅲ~Ⅳ的育龄期女性。黄褐斑发病机制复杂,目前已知的诱发因素包括遗传易感性、紫外线照射、激素水平(如女性性激素水平异常)、甲状腺疾病、妊娠,以及药物因素(如避孕药及苯妥英钠)等。一线治疗主要包括广谱防晒霜、外用酪氨酸酶抑制剂,如氢醌;二线治疗主要是化学剥脱治疗,如维甲酸、三氯乙酸;三线治疗主要是各种模式的激光和强脉冲光治疗;其余治疗还有口服氨甲环酸、中药等。虽然治疗方法众多,但存在有效率低、复发率高、治疗周期长、治疗后出现炎症后色素沉着(PHI)、色素减退等问题。皮秒激光的出现为色素类疾病的治疗提供了新选择,其脉冲持续时间为皮秒级(10-12sec),瞬间破坏黑色素,对正常组织损伤小,在清除文身方面已普遍开展,而在黄褐斑治疗方面尚处于试行阶段,国内外研究及报道案例较少。本研究对20例黄褐斑患者使用755nm皮秒翠绿宝石激光治疗,并进行有效性观察。
  目的:
  观察755nm皮秒翠绿宝石激光治疗黄褐斑的临床疗效、不良反应及复发率。
  方法:
  收集2016年11月至2017年7月在北京陆军总医院激光中心就诊并被明确诊断为轻到重度面部对称性黄褐斑患者共20例,对20例黄褐斑患者进行每4周1次,总疗程为4次的755nm皮秒翠绿宝石激光治疗。每次皮秒治疗采用Focus蜂巢模式,能量密度0.25~0.40J/cm2,光斑直径8~10mm,频率5.0Hz,脉宽550×10-12sec。治疗后随访12周。所有患者每次激光治疗前以及末次治疗结束后4、12周均给予面部拍照存档,并由两位以上皮肤科医生对照片进行黄褐斑面积及严重程度评分(MASI)评分,每次评价由固定的2名皮肤科医生进行,对有歧义的结果,由第3位医生再评价,取结果一致者。疗效判定标准根据Kimbrough-Green等制定的MASI计算公式(Melasma Area and Severity Index)进行评定。记录治疗过程中相关不良反应发生情况,并观察复发情况。
  结果:
  本组患者FiztpatrickⅡ型2例(10.0%),Ⅲ型11例(55.0%),Ⅳ型7例(35.0%)。治疗前MASI评分9.75±3.93(2.90~17.10),4次激光治疗后的平均MASI评分分别为(8.34±3.38)、(7.13±2.96)、(6.07±2.62)和(5.13±2.30),12周后随访的MASI评分为(5.74±2.68)。4次治疗结束后MASI评分下降47.36%,12周后随访MASI评分上升13.11%。其中治疗前MASI评分和4次治疗后MASI评分比为(9.75±3.93vs5.13±2.30,p<0.05),差异有统计学意义,4次治疗后和12周随访时MASI评分比为(5.13±2.30vs5.74±2.68,p<0.05),差异有统计学意义。所有20例患者均无明显不良反应发生。
  结论:
  755nm皮秒翠绿宝石激光治疗黄褐斑安全、有效、复发率低,值得临床推广应用。
[博士论文] 胡治丽
皮肤病与性病学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:尖锐湿疣是一种常见的性传播疾病,主要由人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染引起。据统计,美国14-59岁女性,生殖器部位HPV感染率为26.8%[1]而18-59岁男性中,生殖器部位HPV感染率为45.2%[2]。尖锐湿疣的复发很常见。既往研究已经证实5-氨基酮戊酸光动力疗(5-aminolevulinic Acid Photodynamic Therapy,ALA-PDT)是治疗尖锐湿疣的安全有效方法,并且能够有效降低复发率。但作用机制亦尚未完全清楚。
  目的:
  1.首先收集尖锐湿疣或生殖器部位HPV感染患者的临床资料,在治疗前,治疗过程中,治疗结束后监测HPV病毒分型载量的变化情况,观察ALA-PDT对HPV病毒分型载量的影响。
  2.分析尖锐湿疣组织中TAP-1及MHC-Ⅰ类分子的表达情况。
  3.检测ALA-PDT干预前后HPV病毒蛋白E6/E7变化情况,抗原处理相关转运复合体TAP-1,TAP-2,tapasin表达水平,及MHC-Ⅰ类分子变化情况。探讨ALA-PDT疗法降低尖HPV病毒载量的可能机制。
  方法:
  1、5-氨基酮戊酸光动力疗法降低人乳头瘤病毒载量临床观察
  1.1 5-氨基酮戊酸光动力疗法对尖锐湿疣患者病毒分型载量影响及疗效观察
  1.1.1 收集2015年12月至2017年10月就诊于南方医院皮肤科的诊断为“尖锐湿疣”的患者,符合纳入排除标准,治疗前签署知情同意书,治疗资料详细,且能够定期随访。
  1.1.2 监测ALA-PDT治疗前,治疗过程中,治疗后HPV分型载量变化情况。
  1.1.3 记录患者ALA-PDT治疗过程中出现的不良反应。
  1.1.4 随访时间至少半年,统计患者复发率。
  1.2 5-氨基酮戊酸光动力疗法对无症状的HPV感染患者病毒分型载量影响
  1.2.1 收集2015年12月至2017年10月就诊于南方医院皮肤科的无症状的“HPV感染”的患者,不伴有其他性传播疾病和系统性疾病,就诊资料详细,且能够定期随访。
  1.2.2 患者治疗前监测HPV病毒载量变化,至少连续2次监测病毒载量持续上升,判断病毒处于活动感染状态,患者行ALA-PDT治疗;若连续2次监测病毒载量逐步下降,提示病毒逐渐被清除,患者不进行治疗,定期观察HPV分型载量。
  1.2.3 患者行3次ALA-PDT治疗后,统计病毒转阴率。
  2、抗原处理相关转运体与主要组织相溶性复合体-Ⅰ类分子在尖锐湿疣皮损内的表达
  2.1 免疫组化方法检测尖锐湿疣组织TAP-1及MHC-1类分子表达情况,Western Blot,RT-PCR技术检测疣体组织与健康对照者包皮组织抗原处理相关转运复合体表达情况。
  3、ALA-PDT降低人乳头瘤病毒机制研究
  3.1 人宫颈癌细胞株Siha/Hela由南方医院临床医学实验研究中心提供。培养条件为温度37℃,含5%CO2孵箱中孵育,用含10%胎牛血清和1%双抗的DMEM(高糖)培养基进行培养。
  3.2 实验细胞分组:将实验细胞随机分为4组:①空白对照组;②ALA组;③照光组;④ALA-PDT组。
  3.3 筛选ALA-PDT最佳作用浓度:不同浓度ALA孵育24h后,激光共聚焦显微镜下观察平均荧光强度,635nm红光照射后CCK-8法检测细胞增殖活性。
  3.4 筛选ALA-PDT最佳光照能量:0.1mmol/L ALA孵育24h后,不同能量635nm红光照射后CCK-8法检测细胞增殖活性。
  3.5 细胞增殖活性检测:ALA孵育24h后,加入CCK-8试剂,酶标仪检测细胞增殖活性。
  3.6 HPV病毒蛋白E6/E7检测:Western Blot法检测ALA-PDT处理后HPV病毒E6/E7蛋白表达水平变化。
  3.7 抗原处理相关转运复合物mRNA检测:RT-PCR法检测ALA-PDT处理后TAP-1,TAP-2及tapasin mRNA表达水平。
  3.8 TAP-1蛋白检测:Western Blot法检测ALA-PDT处理后TAP-1蛋白表达情况
  3.9 MHC-Ⅰ类分子检测:流式细胞技术检测ALA-PDT处理后MHC-Ⅰ类分子平均荧光强度。
  结果:
  1.ALA-PDT降低HPV病毒载量
  1.1 ALA-PDT能够降低尖锐湿疣患者病毒载量
  1.1.1 对于单一型别HPV感染的尖锐湿疣患者3次或6次ALA-PDT治疗后病毒载量与治疗前相比明显降低;多重型别HPV感染患者6次光动力治疗后HPV病毒载量也明显降低,差异有统计学意义。
  1.1.2 单一感染患者ALA-PDT6次后病毒转阴率明显高于多重感染,差异有统计学意义。因此推测单一型别HPV感染在ALA-PDT治疗过程中病毒更易被清除。
  1.1.3 光动力治疗过程中,疼痛是最常见的不良反应。大部分患者能够忍受。无严重的系统不良反应。
  1.1.4 35例患者随访时间半年以上,其中有5例患者复发,复发率为14.28%。
  1.2 ALA-PDT能够清除无症状HPV感染
  1.2.1 对于无症状的HPV感染患者,治疗前至少连续2次监测HPV病毒载量,若载量持续上升,提示病毒活动性感染,行ALA-PDT治疗。3次ALA-PDT治疗后病毒载量明显降低,差异有统计学意义。而且与尖锐湿疣患者相比,1次ALA-PDT治疗后,无症状HPV感染患者病毒转阴率更高,差异有统计学意义。因此推测潜伏感染的HPV病毒更容易被清除。
  2.HPV感染对TAP-1及MHC-Ⅰ类分子表达的抑制作用。
  免疫组化结果提示,与对照组相比,尖锐湿疣组织中TAP-1,MHC-Ⅰ类分子表达量明显降低,差异有统计学意义。RT-PCR结果提示尖锐湿疣组织中TAP-1,TAP-2,tapasin mRNA表达水平明显低于健康对照者包皮组织,差异有统计学意义。Western-blot结果提示尖锐湿疣组织TAP-1蛋白表达量明显下降,差别有统计学意义。因此HPV感染能够抑制处理抗原相关转运复合体及MHC-Ⅰ类分子表达。
  3.ALA-PDT降低HPV病毒载量机制研究
  3.1 不同浓度,不同照光功率ALA-PDT处理后,CCK-8检测增殖活性结果提示:0.1mmol/LALA处理后,增殖活性有所下降,但与对照组比,差异无统计学意义,浓度为0.25、0.5、1、2mmol/L时,增殖活性明显降低,差异有统计学意义(p<0.001)。0.1mmol/LALA避光孵育24h后的细胞用不同能量0.6J/cm2、1.2J/cm2、2.4J/cm2、3.6J/cm2、4.8J/cm2635nm红光照射后,能量为0.6J/cm2时增殖活性有所下降,与对照组相比,差异无统计学意义。照光剂量为1.2J/cm2时,细胞增殖活性明显下降,差异有明显统计学意义(p<0.001)。照光剂量增加到2.4、3.6、4.8J/cm2细胞增殖活性也明显下降(p<0.001)。因此后续实验采用ALA浓度为0.1mmol/L,照光能量为0.6J/cm2。
  3.2 ALA-PDT能够抑制HPV病毒E6/E7蛋白表达
  Western blot结果显示,与空白对照组,ALA组,照光组相比,ALA-PDT组细胞HPV E6/E7蛋白表达量明显降低,差别有统计学意义。
  3.3 ALA-PDT能够升高抗原处理相关转运复合物mRNA表达水平
  RT-PCR结果显示,与对照组相比,ALA-PDT组细胞TAP-1,TAP-2mRNA表达水平明显上升,差别有统计学意义。
  3.4 ALA-PDT能够诱导TAP-1蛋白表达升高
  Western blot结果显示,与空白对照组,ALA组,照光组相比,ALA-PDT组细胞TAP-1表达水平明显上升,差异有统计学意义。
  3.5 ALA-PDT使MHC-1类分子表达水平升高
  流式细胞技术检测结果提示与空白对照组,ALA组,照光组相比ALA-PDT组MHC-Ⅰ类分子平均荧光强度升高,差异有统计学意义。
  结论:
  本文的研究证实,ALA-PDT不仅能够降低尖锐湿疣患者HPV病毒载量,减少复发率,而且能够使无症状HPV感染者病毒转阴。动态监测HPV病毒分型定量能够判断HPV感染状态,能够更好的指导光动力治疗。HPV感染能够抑制TAP-1及MHC-Ⅰ类分子表达水平,而ALA-PDT能够降低这种抑制作用,使TAP复合物及MHC-Ⅰ分子表达水平升高,同时抑制HPV病毒E6/E7蛋白表达从而使HPV病毒载量降低,减少尖锐湿疣患者复发率。
[硕士论文] 沈彦婷
皮肤病与性病学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  1.分析特殊部位尖锐湿疣患者不同人群间的疗效结果。
  2.评价ALA光动力疗法和派特灵之间效价比,为临床治疗提供参考依据。
  方法:
  采用临床病例对照研究的方法,将前来山东省立医院皮肤科与妇科门诊就诊的尖锐湿疣患者,结合临床症状和检测结果筛选出符合临床诊断标准的患者,并将其分为宫颈感染、肛内感染尖锐湿疣两大类。按就诊顺序及个人意愿随机分为两组,分别行ALA光动力疗法和派特灵进行对比研究。
  一.对象
  本研究选取来自2015年3月至2017年11月间就诊于山东省立医院皮肤科与妇科门诊的患者357例,患者诊断均符合《卫生部尖锐湿疣诊断标准与处理原则(WS235-2003)》。
  二.方法
  筛选出的患者随机分两组,一组行派特灵治疗;一组行ALA光动力疗法治疗。治疗四至八个疗程,每隔四周进行随访观察,对比疗效结果,必要时留取宫颈分泌物或疣体黏膜交界面混合物标本,再次进行HPV-DNA检测。对痊愈患者随访六个月,对比两种治疗的复发情况,进一步评判两种治疗方法的疗效性价比。
  比较项目包括以下方面:(1)一般资料分析(2)两种治疗方法情况分析(3)疗效性价比(4)不良反应情况。采用SPSS21.0统计学软件对研究数据进行分析处理。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用t检验;计数资料以率(%)表示,采用X2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
  结果:
  通过两种治疗方法的对比研究分析,得出以下结论:
  (1)患者共357人,年龄最大者65岁,最小者19岁;男性165人,女性192人;病程最长者15个月,最短者1周。两组无论在年龄、性别和病程上都具有可比性。
  (2)派特灵治疗组207人中,宫颈显性疣体者57人,单纯高危阳性者40人,伴有CINI、Ⅱ者10人,肛内尖锐湿疣显性疣体者100人;ALA光动力疗法治疗组150人,宫颈显性疣体者52人,单纯高危阳性30人,伴有CINI、Ⅱ者5人,肛内尖锐湿疣显性疣体者68人。
  (3)派特灵治疗组中,肛内尖锐湿疣合并HIV阳性患者另外观察10例;ALA光动力疗法组中,宫颈尖锐湿疣患者伴有免疫低下人群患者另外观察10例。
  (4)在第八周时,派特灵组痊愈率为92.8%(192/207),有效率为96.1%(199/207); ALA光动力治疗组痊愈率为78%(117/150),有效率为90%(135/150)。两组总痊愈率比较得x2=16.268,P<0.01,派特灵在短期疗效上明显优于ALA光动力疗法。
  (5)对痊愈患者随访六个月,派特灵组累积复发例数为43例,复发率22.4%;ALA光动力疗法组累积复发例数为12例,复发率为10.2%。两组总复发率比较得x2=7.322,P<0.01,ALA光动力疗法在预防复发方面更优于派特灵。
  (6)派特灵组每次治疗时间平均为3.85±1.66小时;ALA光动力疗法组平均为4.72±0.65小时。派特灵组从治疗到痊愈所需疗程平均为37.34±5.82天;ALA光动力疗法组平均为46.93±7.73天。派特灵治疗组从治疗到痊愈平均治疗费用为10505.47±1734.62元;ALA光动力疗法治疗组为21230±4247.16元。两组不论是在时间、疗程和费用上,派特灵皆优于ALA光动力疗法(P<0.01)。
  (7)派特灵组效价比为0.984; ALA光动力疗法组效价比为0.383,两组差异具有统计学意义(P<0.05),派特灵组效价比明显高于ALA光动力疗法组。
  (8)派特灵组不良反应发生率22.22%(46/207); ALA光动力疗法组不良反应发生率为16.0%(16/150),两组不良反应发生率比较无统计学差异。
  结论:
  ALA光动力疗法和派特灵在治疗宫颈及肛内尖锐湿疣上疗效显著,尤其针对宫颈亚临床及潜伏感染以及伴有免疫系统疾病的患者,ALA光动力疗法和派特灵均能有效治疗并预防复发。对于疗效及经济费用上有一定要求的患者,建议可选择先行派特灵治疗以在短期内全面去除表面疣体,随后再行ALA光动力治疗有效预防复发,达到疗效性价比较高的治疗方案。本研究两种治疗方法具有高选择性、低复发率且安全无创、不遗留疤痕、可重复治疗等优势,在特殊人群中可替代传统疗法,值得在临床上推广运用。
[硕士论文] 刘影
皮肤病与性病学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:背景:
  众所周知紫外线为黄褐斑等色素沉着性皮肤病的主要病因之一,亦是白癜风等色素脱失性皮肤黏膜疾病发病的诱因及治疗手段之一。紫外线暴露后的治疗策略多集中于黑素细胞增殖及黑素合成等中下游环节,而针对其始动环节的靶向治疗较少。
  瞬时受体电位锚蛋白1(Transient Receptor Potential Ankyrin1,TRPA1)作为一种非选择性钙离子渗透型通道参与细胞的多种生命活动。近年来有研究表明在表皮黑素细胞中,紫外线激活TRPA1通道增加细胞内钙离子内流,促进早期的黑素合成。Bellono等研究团队提出了TRPA1可能是唯一的眼外光转导通路的理论。在表皮细胞中,黑素细胞产生的黑素并通过吞噬向角质形成细胞转运。此外,研究表明钙离子在细胞吞噬的过程中起着重要的作用。因此研究TRPA1光转导通路在表皮角质形成细胞中的作用及其机制,对于深入了解紫外线相关色素障碍性皮肤病发病机制及调节黑素小体转运的上游机制具有重要意义。
  目的:
  1.明确瞬时受体电位锚蛋白l在角质形成细胞中的光转导作用。
  2.探讨瞬时受体电位锚蛋白1对角质形成细胞吞噬功能的影响。
  方法:
  1.琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)检测人永生化角质形成细胞系(HaCaT细胞)有TRPA1基因的表达。
  2.Western Blot法检测HaCaT细胞中TRPA1蛋白的表达。
  3.流式细胞仪检测到UVA、UVB照射后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流,以及激动或拮抗TRPA1后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流。
  4.激光共聚焦显微技术检测UVA、UVB照射后,TRPA1通道对HaCaT细胞吞噬功能的影响。
  结果:
  1.琼脂糖凝胶电泳、qPCR和Western Blot检测到HaCaT细胞中有TRPA1基因及蛋白的表达。
  2.在UVA或者UVB的照射下,流式细胞仪检测HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著增高。
  3.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞钙离子的内流显著增高,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著降低。
  4.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。
  5.激光共聚焦显微镜观察激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。
  结论:
  1.UVA及UVB均通过激活TRPA1通道,诱导HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子内流,即TRPA1通路在角质形成细胞中具有光转导作用。
  2.UVA及UVB均通过TRPA1通路增强HaCaT细胞的细胞吞噬功能。
[硕士论文] 易莎
皮肤病与性病学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:银屑病作为一种慢性免疫相关的炎症性疾病,其病因病机不清,迄今尚无满意疗法。近年发现,干细胞具有免疫调剂作用,有望治愈银屑病。源于真皮的干细胞即皮肤前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)易于取材、来源丰富、无异源性干扰,可成为银屑病干细胞移植的重要来源。而目前关于SKPs对银屑病的治疗尚未见报道。目的:通过构建体外银屑病三维皮肤模型,移植SKPs至银屑病模型,应用组织学、分子生物学等方法观察银屑病模型移植前后皮肤组织细胞、炎症因子及基因表达的变化,以探讨SKPs对银屑病的治疗作用及机制,为进一步体内研究SKPs治疗银屑病提供实验依据。
  方法:1.构建体外银屑病三维皮肤模型:(1)SKPs、角质形成细胞(keratinocytes,KC)、成纤维细胞(fibroblasts,FBs)的分离和培养:取新生BALB/c小鼠,分离表皮和真皮,真皮分离的细胞培养SKPs、FBs;儿童包皮的表皮分离的细胞悬液培养KC。(2)正常三维皮肤模型的构建及鉴定:将获取的FBs与Ⅰ型鼠尾胶原混合建立三维皮肤真皮结构,然后在其表面接种KC,行气-液界面培养以构建正常三维皮肤模型。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察皮肤结构和免疫组化染色显示表皮KC特异性抗体CK10及真皮FBs特异性抗体VIM表达情况。(3)银屑病三维皮肤模型的构建:在构建正常三维皮肤模型的KC培养基中加入肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)构建银屑病三维皮肤模型,HE染色观察银屑病三维皮肤组织病理学变化。2.SKPs治疗银屑病三维皮肤:(1)实验分组:将成功构建的三维皮肤随机分为4组:正常组、模型组、治疗组和对照组。(2)SKPs移植到银屑病三维皮肤:将红色荧光PKH26标记的SKPs移植到治疗组,对照组注射Hanks液。(3)标本收集:分别收集正常组、模型组造模第3、6、9、12天以及治疗组和对照组治疗后第3、6天的上清液。同时收集上述4组造模或治疗后6天的皮肤组织。HE染色观察皮肤组织病理学变化。(4)指标检测:采用ELISA法检测各组上清液中的IL-1、IL-12、IL-17浓度以及qPCR检测各组组织IL-1α、IL-12α、IL-17αmRNA表达水平。3.采用SPSS17.0软件进行统计学分析,计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,采用t检验。P<0.05差异有统计学意义。采用Graphpad Prism6软件分析数据绘图。
  结果:1.原代分离培养的KC和FBs在镜下为贴壁生长,KC呈铺路石样或卵石样形态,FBs呈多角形或菱形外观;SKPs为悬浮生长,呈圆形或球形克隆样细胞团,细胞球中央颜色较深,周围明亮。2.三维皮肤模型外观表现:(1)正常三维皮肤表现为白色半透明状,边缘整齐无卷曲;(2)银屑病三维皮肤呈乳白色不透明,边缘卷曲,较正常三维皮肤缩小变厚。3.三维皮肤模型病理组织学改变及鉴定:(1)HE染色下,正常三维皮肤由表皮层和真皮层组成,分界清楚;表皮层细胞排列较整齐、形态一致;真皮层由少量细胞和胶原构成,结构紧密。(2)银屑病三维皮肤表皮明显增厚。(3)免疫组化染色显示正常三维皮肤表皮细胞着棕黄色、表达CK10阳性即为KC;真皮层着深棕黄色、表达VIM阳性即为FBs,正常三维皮肤模型成功构建。4.SKPs移植到银屑病三维皮肤后其冰冻切片显示携带红色荧光的SKPs弥散分布于皮肤组织中,并在组织中存活良好。5.SKPs对银屑病三维皮肤的作用:(1)经SKPs移植治疗后治疗组三维皮肤表皮及棘层明显变薄;而对照组则改善不明显。(2)各组上清经ELISA检测后,模型组IL-1、IL-12、IL-17表达水平较正常组明显升高(P<0.05);但经SKPs移植后,IL-1、IL-12和IL-17表达水平较模型组及对照组均明显降低(P<0.05);对照组与模型组比较,IL-1、IL-12和IL-17水平降低不明显(P>0.05)。(3)各组皮肤组织经基因检测后,模型组表达IL-1α、IL-12α、IL-17amRNA水平较正常组显著升高(P<0.05);然而经SKPs移植后,治疗组IL-1α、IL-12α、IL-17αmRNA表达均较模型组和对照组明显降低(P<0.05);对照组与模型组比较,IL-1α、IL-12α、IL-17αmRNA水平无显著降低(P>0.05)。
  结论:1.体外培养的KC、FBs可与Ⅰ型鼠尾胶原成功构建正常三维皮肤模型。2.在正常三维皮肤基础上,持续加入TNF-α和IFN-γ,可成功建立银屑病三维皮肤模型,为银屑病发病机制及治疗研究提供良好实验载体。3.将SKPs移植到银屑病三维皮肤,可减轻表皮厚度,降低炎症因子IL-1、IL-12、IL-17表达,从而起到缓解银屑病的作用。
[硕士论文] 吴星儒
皮肤学与性病学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:本文从以下几个部分展开论述:
  第一部分 HLA-B*15:02与苯妥英钠诱发SJS/TEN的关联:系统评价和meta分析
  目的:史蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens-Johnson Syndrome,SJS)和中毒性表皮坏死松解症(Toxic Epidermal Necrolysis,TEN)是特定诱因(如药物或某些感染)而诱发的严重皮肤不良反应(Severe Cutaneous AdverseReactions,SCARs)。SCARs是潜在危及生命的疾病,发病率低但病死率及致残率高。苯妥英钠(Phenytoin,PHT)是临床常用的抗癫痫药物之一,其主要不良反应表现在皮肤上,尤其是SJS和TEN。SCARs的发生极大地限制PHT的临床使用,是临床停药的主要原因。
  近年来已经有大量研究证明,人类白细胞抗原(Human LeukocyteAntigen,HLA)等位基因与多种药物诱发的SCARs密切相关,如HLA-B*57:01等位基因与阿巴卡韦(Abacavir)相关联,HLA-B*15:02等位基因与卡马西平(Carbamazepine,CBZ)相关联。本文通过系统评价和meta分析来评估HLA-B*15:02等位基因与PHT诱发的SJS/TEN之间的关系。
  方法:两名评审者分别在Cochrane图书馆,EMBASE,PubMed和OVID等多个数据库中进行了广泛的检索。检索文献的范围从建库截止到2017年12月。根据纳入和排除标准(纳入标准:①癫痫患者作为纳入的研究对象;②研究设计类型为病例-对照研究;③SJS/TEN由PHT诱发;④确定纳入的研究对象可以检测到HLA-B*15:02等位基因;⑤研究中包含足够的数据来计算病例和对照中HLA-B*15:02等位基因携带的频率;⑥SJS或TEN的诊断定义根据受累皮肤表面积的百分比划分,其中皮肤受累面积<10%定义为SJS,皮肤受累面积在10%-30%之间定义为SJS与TEN重叠,皮肤受累面积>30%定义为TEN。排除标准:①研究类型是综述或者个案报告;②无法获取全文的研究;③重复发表的文献;④对于接受多种药物治疗癫痫的患者,SJS/TEN的诱发因素不明确,也可能由其他抗癫痫药物诱发,例如CBZ或拉莫三嗪(Lamotrigine,LTG)等;⑤研究中的研究对象年龄未满3岁。),纳入探讨HLA-B*15:02等位基因与PHT诱发的SJS和TEN之间关系的研究。同时对纳入的文献按照预先设计的方案提取以下数据:①研究的一般情况:第一作者和发表年份;②研究对象的特点:研究对象的种族,病例和对照特征和PHT暴露剂量。计算二分类数据优势比(OR)与相应的95%置信区间(CI)。各研究间的异质性采用I2和x2检验。敏感性分析评价研究结果的稳定性。漏斗图检测发表偏倚。运用Review Manager(版本5.3)软件进行meta分析。
  结果:总共纳入六项研究,涉及74例病患和378例匹配(PHT耐受对照组)。纳入的研究根据纽卡斯尔-渥太华(The Newcastle-Ottawa Scale,NOS)量表进行文献质量评价,六篇皆为高质量文献。Meta分析显示,携带HLA-B*15:02等位基因的人群发生PHT-SJS/TEN的风险是未携带人群的4.61倍(OR=4.61,95%CI:2.65-8.01,P<0.00001),未观察到异质性(I2=0%,Px2=0.54)。采用交换效应模型进行敏感性分析提示,该meta分析结果稳定、可靠。
  结论:这个研究显示HLA-B*15:02等位基因和PHT诱发的SJS/TEN显著相关。因此,笔者建议在临床使用PHT前进行基因检测,预知携带该风险基因的人群,便于指导PHT的给药和/或使用,从而降低SCARs的发生。现有的研究样本量较小,后期仍需多中心研究和大型前瞻性观察研究来加强HLA-B*15:02等位基因与PHT-SJS/TEN关联的证据。
  第二部分 CYP2C9*3与苯妥英钠诱发SJS/TEN的关联:系统评价和meta分析
  目的:苯妥英钠(Phenytoin,PHT)是最具成本效益的抗癫痫药之一,但严重皮肤药物不良反应(Severe Cutaneous Adverse Reactions,SCARs)发生在一定程度上限制其临床使用。PHT诱发的SCARs包括史蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens-Johnson syndrome,SJS)和中毒性表皮坏死松解症(ToxicEpidermal Necrolysis,TEN)。已经有研究提出细胞色素P450超家族(Cytochrome P450 proteins,CYP)的遗传多态性是某些种族SCARs易感性的关键因素。CYP2C9*3是PHT代谢的关键酶,它由CYP2C9*3突变等位基因编码。本文通过系统评价和meta分析来评估CYP2C9*3突变等位基因与PHT诱发的SJS/TEN之间的关系。
  方法:两名评价者分别在Cochrane图书馆,EMBASE,PubMed,OVID和EBSCO等多个数据库中进行了广泛的检索。检索文献的范围从建库截止到2017年6月。根据纳入和排除标准(纳入标准:①研究设计类型为病例-对照研究;②探讨CYP2C9*3突变等位基因与PHT诱发SJS和TEN之间关系的研究;③研究内容包括将PHT诱发的SJS和TEN患者与PHT耐受患者或普通人群进行比较;④研究中包含足够的数据来计算病例和对照中CYP2C9*3突变等位基因携带的频率;⑤SJS或TEN的诊断定义根据受累皮肤表面积的百分比划分,其中皮肤受累面积<10%定义为SJS,皮肤受累面积在10%-30%之间定义为SJS和TEN重叠,皮肤受累面积>30%定义为TEN。排除标准:①研究类型是综述或者个案报告;②没有全文的研究;③重复发表的研究;④研究中的研究对象年龄未满3岁。)纳入相关文献。并对纳入的文献按照预先设计的方案提取以下数据:①作者、发表年份;②研究对象的特点:研究对象种族,病例和对照特征和PHT暴露剂量。计算二分类数据优势比(OR)与相应的95%置信区间(CI)。各研究间的异质性采用I2和x2检验,敏感性分析评价研究结果的稳定性。采用漏斗图检测发表偏倚。运用Review Manager(版本5.3)软件进行meta分析。
  结果:纳入四项研究,包含117例PHT诱发的SJS/TEN病患,338例匹配(PHT耐受患者对照组)以及4231例普通人群(人群对照组)。纳入的研究根据纽卡斯尔-渥太华(The Newcastle-Ottawa Scale,NOS)量表进行文献质量评价,4篇皆为高质量文献。Meta分析结果显示,病例组不论与匹配组还是人群对照组相比,PHT诱发的SJS和TEN与CYP2C9*3突变等位基因显著相关(前者:OR=8.93;95% CI,2.63-30.36;P=0.0005;后者:OR=8.86,95%CI:5.23-15.00;P<0.00001)。其中,前者具有明显异质性(I2=46%)。通过亚组分析发现,研究对象的种族差异可能是异质性的主要来源。采用交换效应模型进行敏感性分析表明,我们的结果是稳健的。
  结论:该研究显示CYP2C9*3突变等位基因和PHT诱发的SJS/TEN之间有明显的关联性,特别是在泰国人群中。因此,CYP2C9*3突变等位基因可以作为PHT诱发的SJS/TEN的可靠的预测性遗传标记。然而这些发现仅基于很少量的病例对照研究,仍然需要更进一步的多中心研究和大型的前瞻性研究来探究CYP2C*3突变等位基因对PTH及其代谢产物的血液浓度的影响,以及CYP2C*3突变等位基因与PTH及其代谢产物所诱发的SJS/TEN之间的关联。
[硕士论文] AISHATH WISHAN
DERMATOLOGY AND VENEREOLOGY 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:背景:白癜风是自体免疫紊乱导致黑素细胞功能障碍引起的限局性或泛发性皮肤色素脱失病。白癜风男性和女性发病率相当,可以出现在任何年龄,但发病的平均年龄在不同的地理区域有一定的不同。外用皮质类固醇激素治疗是白癜风的一线治疗方法,这种治疗具有成本低,使用简单等优点。但是这种治疗方法的缺点是经过长期治疗后会出现各种副作用,如皮肤萎缩,条纹和毛细血管扩张。二氧化碳点阵激光的使用,可以在目标部位垂直产生微小的孔道,直达真皮,促进局部应用药物的吸收和扩散。
  目的:观察二氧化碳点阵激光与准分子308nm紫外光和类固醇外用的效果,并与仅使用准分子308nm紫外光和局部激素相结合治疗白癜风的结果进行比较。并观察不良反应、治疗满意率和疗程,观察色素复色的模式并计算两种方法的最终成本。
  方法:选择2016年6月至2018年1月大连医科大学第一附属医院一部的皮肤科门诊20例白癜风患者,均患有非节段型白癜风,稳定期。患者接受常规治疗己超过1年但仍未见改善。分成两组。第一组为治疗组,参与者接受308nm紫外光、外用激素和二氧化碳点阵激光联合治疗。第二组作为对照组,仅给予308nm紫外光和局部使用类固醇治疗。
  根据病史和临床检查确诊白癜风。向患有白癜风稳定病变的皮肤科OPD患者询问筛查问题。每三个月期和六个月结束时,填写临床评估包含基线,由同一个人完成。医师评分(PGS)进行客观分析,用视觉模拟评分(VAS)进行主观分析。
  结果:共有20例患者,每组10例,整个研究中,共有26处皮损,每组13处。根据我们的研究,治疗组比对照组显示出更好的色素沉着。在6个月时,治疗组在9个(69.2%)病变中出现复色,在4个(30.8%)病灶中出现色素沉着,而对照组仅在1个(77%)病变中显示优异的复色,5个皮损显示色素沉着(385%)。
  在我们的研究中,我们发现面部和躯干对治疗的反应最好,而上肢的反应最差。所有患者,在3个月及6个月时VAS均不为0,表明没有患者对所接受的治疗“完全不满意”。此外,治疗组中2例(15.4%)的满意度增至最高,表明治疗让患者完全满意。另一部分患者随着时间的推移,VAS在任何患者中都没有降低,表明所有患者的总体满意度随着治疗而改善。
  我们还注意到,在治疗期间的任何时间点,对照组没有一个患者能够达到10的VAS,这表明点阵激光联合308nm紫外光协同治疗的重要性。
  我们还计算了所有病变达到最大PGS水平的总持续时间。结果显示治疗组中的大多数患者在六个月内达到了4的PGS。其余四名患者八个月达到PGS4。在对照组中,只有一名患者六个月达到PGS4,其余的18个月的达到PGS4水平,面部病变达到相同水平约12个月。
  成本主要取决于两个因素:308nm紫外光及二氧化碳点阵激光。
  统计分析后,我们可以得出结论:治疗组和对照组之间存在显著差异,我们提出的治疗方法成本低于对照组的成本。本研究首次比较了治疗成本。
  结论:二氧化碳点阵激光、308nm紫外光联合局部激素治疗是非节段型白癜风的一种新的治疗方法。
[硕士论文] 李鑫
肿瘤学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:回顾性探究EGFR-TKI相关皮疹与临床特征的关系,寻找影响EGFR-TKI相关皮疹发生的影响因素。
  方法:收集四川省肿瘤医院2017-1-1至2017-12-20期间服用EGFR-TKI的EGFR基因突变阳性的晚期肺腺癌患者共162名,其中服用吉非替尼患者共60名,服用埃克替尼患者共75名,服用厄洛替尼共27名。利用统计学方法探究EGFR-TKI相关皮疹与临床特征的关系,寻找影响EGFR-TKI相关皮疹发生的影响因素。
  结果:162名口服EGFR-TKI患者中,吉非替尼的皮疹发生率约55.00%,埃克替尼皮疹发生率约38.67%,厄洛替尼皮疹发生率约74.07%,厄洛替尼的皮疹发生率>吉非替尼>埃克替尼(P=0.001<0.05);年龄<60岁的皮疹发生率高于>=60岁的皮疹发生率(52.11%vs49.45%,P=0.737>0.05);吸烟患者的皮疹发生率高于不吸烟患者的皮疹发生率(60.86%vs46.55%,P=0.100>0.05);男性患者的皮疹发生率高于女性患者的皮疹发生率(58.66%vs43.67%,P=0.057>0.05);21外显子突变患者的皮疹发生率高于19外显子突变患者的皮疹发生率(54.11%vs46.37%,P=0.339>0.05)。对服用不同药物的患者进行亚组分析,75名服用埃克替尼的患者中,年龄<60岁的皮疹发生率高于>=60岁的皮疹发生率(41.38%vs26.96%,P=0.635>0.05);吸烟患者的皮疹发生率高于不吸烟患者的皮疹发生率(60.87%vs28.84%,P=0.009<0.05);男性患者的皮疹发生率高于女性患者的皮疹发生率(52.63%vs24.32%,P=0.012<0.05);21外显子突变患者的皮疹发生率高于19外显子突变患者的皮疹发生率(40.48%vs32.14%,P=0.480>0.05)。60名服用吉非替尼的患者中,年龄>=60岁的皮疹发生率高于<60岁的皮疹发生率(58.82%vs50.00%,P=0.463>0.05);吸烟患者的皮疹发生率低于不吸烟患者的皮疹发生率(50。00%vs56.52%,P=0.668>0.05);男性患者的皮疹发生率低于女性患者的皮疹发生率(54.56%vs55.26%,P=0.957>0.05);21外显子突变患者的皮疹发生率高于19外显子突变患者的皮疹发生率(63.33%vs50.00%,P=0.306>0.05)。27名服用厄洛替尼的患者中,年龄<60岁的皮疹发生率高于>=60岁的皮疹发生率(75.00%vs72.72%,P=0.895>0.05);吸烟患者的皮疹发生率高于不吸烟患者的皮疹发生率(77.78%vs72.22,P=0.756>0.05);男性患者的皮疹发生率高于女性患者的皮疹发生率(80.00%vs66.67%,P=0.432>0.05);21外显子突变患者的皮疹发生率高于19外显子突变患者的皮疹发生率(76.92%vs69.23%,P=0.658>0.05)。进行logistic回归分析发现年龄、性别、是否吸烟、突变位点均不是影响发生皮疹的相关因素,只有服用药物的品种才是影响皮疹发生的相关因素(P=0.001<0.05)。
  结论:年龄<60岁患者的皮疹发生率高于年龄>=60岁患者的皮疹发生率、男性病人的皮疹发生率高于女性病人的皮疹发生率、吸烟患者的皮疹发生率高于不吸烟患者的皮疹发生率、21外显子突变患者的皮疹发生率高于19外显子患者的皮疹发生率,但由于数据样本量有限且临床特征的不均一性导致无统计学差异,所以须进一步探究。服用药物的品种是影响EGFR-TKI相关皮疹发生的相关因素。
[硕士论文] 孙小青
外科学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:瘢痕疙瘩(Keloid)是皮肤损伤形成的异常瘢痕组织,多在胸前或肩后呈进行性增长,色红或暗红。治疗方法有口服药物、同位素照射、注射药物等。瘢痕疙瘩病因广泛,致病机制不明确,有肿瘤坏死因子的异常调节,生长因子的异常表达,细胞凋亡通路的异常表达等,细胞内的表达机制尚不清楚。但有前期学者实验表明,瘢痕疙瘩的形成与K基因结合核因子(NF-κB)通路相关。细胞内NF-κB通常为失活状态,当出现脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激时,细胞膜表面的肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)与细胞内的蛋白相结合,激活下游NF-κB通路使核因子κB(inhibitor of NF-κB,IκB)的抑制蛋白泛素化后降解,从细胞质进入细胞核。肿瘤坏死因子受体6(TRAF6)主要参与NF-κB的调控的细胞质内的蛋白,可以通过泛素化作用参与到通路中,将细胞质内的多聚体复合物解离为活性二聚体,转入细胞核内启动通路的下一步。TRAF6相关的NF-κB通路为瘢痕疙瘩的治疗提供了新的研究方向。
  研究目的:
  1.通过HE染色了解瘢痕疙瘩和正常皮肤中成纤维细胞的数量。通过三种体外组织培养方法分别培养瘢痕疙瘩及正常皮肤,确定成纤维最快捷的培养途径。
  2.检测瘢痕疙瘩和正常皮肤培养出的成纤维细胞中TRAF6表达的差异性。
  3.研究NF-κB中的TRAF6抑制后,瘢痕疙瘩和正常皮肤来源成纤维细胞的生长情况。研究TRAF6与瘢痕疙瘩形成的相关性。
  4.构建TRAF6的真核质粒,为增加成纤维细胞内TRAF6的表达做准备。
  研究方法:
  1.取人正常皮肤组织和瘢痕疙瘩组织标本制作石蜡切片,采用HE染色技术检测不同组织中的成纤维细胞数量。观察成纤维细胞在正常皮肤及瘢痕疙瘩中表达的差异。
  2.应用组织贴壁培养法、胰酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法培养瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞。观察两种组织中原代成纤维细胞分离培养的情况。
  3.以瘢痕疙瘩和正常皮肤培养出的成纤维细胞为研究对象,将两者培养至第6代,以不加脂多糖(LPS)为实验对照组A1、A2,以加入LPS为实验组B1、B2。即瘢痕疙瘩组:A1,B1,正常皮肤组:A2、B2。对照组和实验组均加入0mM/ml、10mM/ml、20mM/ml、30mM/ml浓度的TRAF6蛋白抑制剂,继续培养3天,观察成纤维细胞的生长情况,提取成纤维细胞的总蛋白。通过免疫印迹试验即(Western Blot,WB),检测两者来源的成纤维细胞中TRAF6含量的变化。
  4.选取质粒PIRES2-EGFP作为载体,提取成纤维细胞的总mRNA,利用反转录的方法获得TRAF6的DNA片段,送公司检测所得DNA片段符合人类TRAF6的外显子序列,选取内切酶NheI和SALI切割质粒,连接酶连接目的片段与质粒构成目的质粒。
  研究结果:
  1.对人类的正常皮肤及瘢痕疙瘩进行HE染色,结果表明:成纤维细胞核染成蓝紫色,胞质为亮粉色,细胞周围的纤维为粉红色。瘢痕疙瘩与正常皮肤比较成纤维细胞数量较多,排列紊乱,细胞周围纤维增多。
  2.瘢痕疙瘩组和正常皮肤组相比较,A1与A2细胞数量继续增加,A1趋势低于A2。B1与B2细胞凋亡数量明显,但无明显差异。WB显示:TRAF6在正常皮肤成纤维细胞和瘢痕疙瘩的成纤维细胞中均有表达。在人类的正常皮肤和瘢痕疙瘩中加入抑制剂,体外瘢痕疙瘩培养的成纤维细胞增殖能力明显降低。
  研究结论:
  1.在瘢痕疙瘩和正常皮肤的原代成纤维细胞分离培养中,胰酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法、组织微粒贴壁法,三者比较前两者原代成纤维细胞分离、贴壁更早。
  2.NF-κB可能参与成纤维细胞的增殖,LPS刺激后瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的成纤维细胞凋亡无差异。加入TRAF6抑制剂时,与正常皮肤组织来源的成纤维细胞相比,瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖更慢。
[硕士论文] 张雪娇
皮肤病与性病学 郑州大学 2018(学位年度)
摘要:远程医学通过文本、语音、图片或视频等网络传输技术,与患者及上级医院的医疗专家或者医生之间进行交流、互通医疗信息,异地开展医疗活动,其中包括:提供诊断意见,治疗方案,会诊,或者远程教学等。我国医疗卫生资源十分有限,分布极不均衡,“看病难、看病贵”一直是我国农村和偏远地区居民所面临的就医难题。远程医学的发展有望在一定程度上解决这一难题。
  远程皮肤病学是远程医学中重要的一个分支。皮肤病学作为一个比较依赖于视诊的学科,可以非常好的利用远程医学的许多技术。许多随机对照试验都证明了,远程皮肤病学诊断,与传统面诊的诊断结果有较高一致性。远程皮肤镜学(teledermoscopy)和远程皮肤病理学(teledermatopathology)是远程皮肤病学的两个重要亚领域,近几年来发展迅速。
  目的:
  研究远程皮肤病学及其在我国的发展历史和现状,研究河南省远程医学中心开展远程会诊特别是皮肤科开展远程会诊的情况,为今后的研究和发展提供有循证依据的信息和建议。
  方法:
  1、文献复习:通过检索国内主流中文学术数据库“中国知网(Chinese National Knowledge Infrastructure,CNKI)”、“万方数据库”、“维普网”,以及国外主要的英文数据库“PubMed(MEDLINE)”、“EMBASE(Excerpt Medica Database)”、“谷歌学术”,收集与我国“远程皮肤病学”相关的文献,检索时间范围均为建库至2018年3月15日,由两位研究人员按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料,对纳入的文献进行分析。
  2、收集2014年1月1日至2017年12月31日河南省远程医学中心远程会诊资料,特别是远程皮肤病学的会诊资料。
  3、统计指标:与我国远程皮肤病学相关的纳入文献类型及数量;我国远程皮肤病学相关学术期刊类文献的年平均发表数量、范围和年均增长率,实际开展远程皮肤病学应用文献类所占总体比例;河南省远程医学中心协同医院在河南省内和省外的分布,年平均会诊量,年均增长率;开展远程会诊学科数目及所属部门、各会诊部门开展病例数目、各会诊部门开展病例所占总体比例;开展数量排名前十的学科及所占总会诊量比例;河南省远程医学中心皮肤科2014年1月1日~2017年12月31日开展远程会诊总量及所占总体比例、每年开展远程会诊数量及所占当年总体比例、年平均会诊数量和范围,以及年均增长率。
  结果:
  1、文献复习结果
  从CNKI、万方数据库、维普网、Pubmed、Embase、谷歌学术中,共收集与我国远程皮肤病学相关的文献共70篇,报纸类4篇,会议论文5篇,硕博论文类6篇,期刊类55篇。其中,我国远程皮肤病学相关学术期刊类文献的年均发表数量为2.36篇、年发表文献量范围为0~11篇,年均增长量为3.02%。其中,12.86%文献实际开展了远程皮肤病学
  报纸类文献主要介绍了我国开展远程皮肤病学的项目,远程皮肤病学移动医疗的开展项目,及其在远程皮肤病学的应用前景等。
  会议类文献主要介绍远程皮肤病学的在我国开展前景及优势,国家法律法规对其保障程度,科学技术与远程皮肤病学的结合情况,远程皮肤病理的介绍等。
  硕博论文主要研究远程皮肤病学的开展项目,开展方式,法律支持等基础建设,实际应用的准确率如何,为远程皮肤镜学在我国的开展提供基础研究。
  期刊类文献主要着眼于三个方面:对远程皮肤病学的相关概念进行介绍;实际开展远程皮肤病学的成功的经验介绍;对远程皮肤病学科学技术支持的研究。
  2、远程会诊中心结果
  根据对河南省远程医学中心数据进行统计分析可知,该中心协同合作医院遍布整个河南省,2014年1月1日~2017年12月31日间,共计147家省内各地市级、县级医院向该远程医学中心申请会诊,省外覆盖范围包含山西、新疆。协同医院申请远程会诊的数量呈现逐年递增的趋势,年平均会诊量为13831例,年均增长率为107.43%,2014年1月1日~2017年12月31日共申请远程会诊55324例。
  该中心开展远程会诊的科室达59个临床学科及医疗技术科室等,分别隶属于该院8个医疗部门。在所有远程会诊病例中,按专科排名前十名分别为,神经内科、呼吸内科、小儿内科、骨科、肿瘤科、心血管内科、神经外科、肝胆胰与肝移植外科、消化内科、妇科。
  4年来皮肤科的总远程会诊量为229例,占总会诊量的0.41%,年会诊病例数在9~72例之间,年均会诊数为57.25例,年均增长率为100%,与前十名会诊科室相比有一定差距。2017年皮肤科远程会诊量有所下降,总体来看上升趋势很明显。
  结论:
  1、1997年远程皮肤病学一词首次出现于我国文献,与我国远程皮肤病学相关文献的研究内容主要是对远程皮肤病学及其相关概念知识进行介绍,12.86%为实际应用研究,尚无大样本随机对照试验研究。
  2、目前我国皮肤病学者广泛关注皮肤镜的应用规范及其与远程皮肤病学的结合,业内专家已经启动中国人群皮肤影像资源库项目。随着“互联网+”概念的提出,软件开发者和皮肤专科医生已将目光投向“远程皮肤病的移动医疗软件应用”的研究。
  3、将数字病理切片系统应用于远程皮肤病学,有助于提高其诊断的准确性和便利性,目前尚无实际应用的报道。
  4、河南省远程医学中心远程皮肤病会诊咨询例数虽然远低于内外科等科室,但其年均增长率为100%。
[硕士论文] 温艳玲
外科学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过系统化的方式将脂肪组织进行脱细胞处理,提取细胞外基质成分,制备脱细胞基质材料,通过组织学、细胞学及动物学检查,证实人脂肪脱细胞基质材料有利于促进体细胞及干细胞的粘附、增殖、迁移及干细胞的分化,有利于促进SD大鼠全层皮肤缺损的创面愈合,可作为理想的组织修复材料之一。
  方法:通过乳糜化处理、胰酶消化、异丙醇萃取等相关处理进行脂肪组织脱细胞化,提取细胞外基质成分,冻干制成脂肪脱细胞基质材料。通过HE染色、DAPI染色、油红O染色、扫描电镜观察评价脱细胞基质材料内细胞及细胞成分清除情况。通过病理切片染色进行细胞外基质主要成分胶原蛋白的定性检测。通过体外条件下在脱细胞基质材料上接种人脐静脉内皮细胞,观察不同时间段人脐静脉内皮细胞与细胞基质材料的粘附及增殖情况。通过诱导接种到脱细胞基质材料上的人脂肪干细胞向脂肪细胞分化,观察脱细胞基质材料促进脂肪干细胞分化功能。建立SD大鼠全层皮肤缺损模型,设立自愈组、脂肪脱细胞基质材料组、人脂肪干细胞组,比较不同组间创面愈合时间及病理学改变,观察脂肪脱细胞基质材料在促进创面愈合的作用。
  结果:通过乳糜化处理、胰酶消化、异丙醇萃取后制备的脂肪脱细胞基质材料脱细胞彻底,无细胞及细胞成分残留,细胞外基质的主要成分胶原蛋白保存较好,具有适宜细胞良好生长的孔径,有利于促进体细胞及干细胞的粘附、迁移、增殖及干细胞分化的能力,并具有促进血管内皮细胞呈现“管腔”样分布。脱细胞基质材料能够有效的促进SD大鼠全层皮肤缺损的创面愈合,并能较好的改善创面愈合的质量。
  结论:研究结果表明脂肪脱细胞基质支架材料脱细胞彻底,有效成分保留良好,具有良好的生物相容性,有利于促进体细胞及干细胞的粘附、迁移、增殖及干细胞分化的能力,并可以有效的促进SD大鼠全层皮肤缺损创面愈合,并能较好的改善创面愈合的质量,可作为创面修复良好的生物支架材料。
[硕士论文] 钟泽敏
皮肤病学与性病学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:甲真菌病(onychomycosis)是皮肤科的常见病之一,是指由皮肤癣菌、酵母菌以及非皮肤癣菌感染甲板或甲下引起的疾病,其病程缓慢并且具有传染性。药物不容易进入到甲板且甲的生长较为缓慢,因此甲真菌病的治疗一直以来都是临床上的难题。近年来,激光治疗甲真菌病是研究的热门方向,本研究选用0.9ms1064nm Nd∶YAG激光在体外干预红色毛癣菌,初步探讨对其影响,并进行了激光联合口服伊曲康唑的临床研究,对比不同治疗方法的临床疗效及安全性。本文主要分为以下几个部分:
  目的:
  第一部分:
  观察接受0.9ms1064nmNd∶YAG激光照射的离体病甲和未接受激光照射的离体病甲真菌镜检和培养的结果,并在扫描电镜下观察激光照射后对病甲的结构的影响;
  第二部分:
  探究0.9ms1064nmNd∶YAG激光联合伊曲康唑治疗趾甲真菌病的临床疗效及安全性。
  方法:
  第一部分:
  收集40个确诊为甲真菌病的离体病甲,随机分为2组,即激光组和空白对照组,每组各20个病甲。激光组的病甲使用0.9ms1064nmNdYAG激光照射,空白对照组不做处理。分别取激光组和空白对照组各10个病甲做真菌镜检和培养,两组剩余各10个病甲再用扫描电镜观察。比较两组的真菌镜检结果和培养基上所长出的菌落数;比较两组组的扫描电镜观察结果。
  第二部分:
  对37例(178个甲)趾甲真菌病患者随机分为甲乙两组,再按照甲真菌病临床评分指数(SCIO)和甲真菌病严重度指数(OSI)评分各分为不同亚组。所有患者均使用0.9ms1064nmNd∶YAG激光进行治疗(参数:能量31.8J/cm2;脉宽0.9ms;光斑3mm),每周1次,共治疗8次。乙组治疗第1周同时口服伊曲康唑0.2g,每日两次。甲乙两组患者比较治疗前和治疗后3个月、12个月的临床评分变化,观察疗效及不良反应,并进行患者满意度调查。
  结果:
  第一部分:
  1、真菌镜检和真菌培养:激光组真菌镜检阳性率70.0%,空白对照组为100.0%;激光组真菌培养的阳性率为50.0%,空白对照组为100.0%。
  2、扫描电镜:甲板经激光照射后甲板的微观结构有发生变化。
  第二部分:
  治疗后的12个月,治疗后两组的临床有效率:3个月时,甲组10.00%、乙组17.28%;12个月时,甲组31.43%、乙组35.79%;真菌清除率:甲组31.25%;乙组42.86%;两组临床有效率、真菌清除率差异均无统计学意义(均P>0.05)。甲组SCIO、OSI评分治疗前后相比差异均无统计学意义(均P>0.05),而乙组治疗前后相比差异均有统计学意义(均P<0.05);当SCIO<12、OSI<16时,不同亚组之间临床有效率无明显差异(均P>0.05),当SCIO≥12、OSI≥16时,不同亚组之间临床有效率有差异(均P<0.05)。分别有33.71%、74.72%、70.79%的病甲在面积、形状、颜色方面得到改善。62.16%患者对治疗效果满意。所有患者无明显不良反应。
  结论:
  第一部分:
  1、0.9ms1064nmNd∶YAG激光对于离体病甲中的红色毛癣菌有一定的抑制或清除作用;
  2、激光照射病甲后,虽然肉眼上病甲的外观形态无明显改变,但通过扫描电镜观察到激光照射病甲后,甲板的微观结构有发生变化。
  第二部分:
  1、0.9ms1064nm Nd∶YAG激光有利于改善甲真菌病病甲的外观,提高患者的满意度;
  2、对于病情较为严重的甲真菌病,激光联合伊曲康唑的治疗方案是个更好的选择。
[硕士论文] 巩平
临床医学 河北工程大学 2018(学位年度)
摘要:背景:皮瓣是由具有血液供应的皮肤及其附着的皮下组织所组成的,是目前用于组织缺损修复、机体功能重建、创伤修复、畸形矫正、器官缺损与再造等的基本手段之一。在皮瓣移植中,皮瓣的成活关系着整个手术的成败。近年来,有学者认为影响皮瓣成活的主要原因有皮瓣的缺血-再灌注损伤、静脉回流障碍、动脉血供、感染、组织受损情况等。其中因静脉回流障碍引起的静脉淤血是皮瓣移植术的最常见并发症,如处理不及时可引起静脉危象,导致皮瓣部分或全部坏死,因此多年来对于皮瓣静脉淤血及静脉危象的防治一直是整形外科的棘手问题,学者们不断研究探索发现一些药物及非药物措施对皮瓣静脉淤血及静脉危象具有保护、防治或延缓作用,尤其因为非药物措施与药物相比,作用局部、副作用小等优点,在临床上备受欢迎,也是学者们一直研究的方向。目前研究较为成熟的技术便是负压吸引技术,在难治性创面、感染创面等中应用广泛且取得了满意的临床效果。有学者也曾设想正压对皮瓣成活的影响,并通过激光多普勒检测到间歇性正压可改善皮瓣的血循环,改善皮瓣静脉淤血情况,能够促进皮瓣成活,但因操作过程繁琐,实施困难,目前对于间歇性正压对皮瓣移植或转移疗效观察的应用与研究较少。
  目的:本实验通过自行研制间歇性正压充气装置,在先前学者的研究基础上,应用SD大鼠,建立超长宽比随意皮瓣模型,探讨间歇性正压对皮瓣成活率的影响,通过实验侧与对照侧皮瓣成活率的对比,进一步监测间歇性正压充气装置的稳定性,并将间歇性正压充气装置应用于临床,从而实现改善皮瓣血运,促进皮瓣的成活。
  方法:应用配对设计,将健康清洁雄性SD大鼠20只,10月龄,体重455±20g,将大鼠随机分为A组(左侧为对照侧,右侧为实验侧)和B组(左侧为实验侧,右侧为对照组)后,于大鼠背部制作对照侧及实验侧的超长随意型皮瓣模型后,实验侧皮瓣覆间歇性正压充气装置简易气囊,对照侧覆盖无菌纱布,观察皮瓣的成活情况、色泽及毛发生长情况,术后7d,将大鼠处死,进一步观察实验侧与对照侧皮瓣的成活情况并计算成活率,光镜下观察两组皮瓣近、中、远三段病理改变及血管密度。应用SPSS16.0软件,对实验数据进行统计学分析。
  结果:(1)A组与B组的实验侧间比较及对照侧间比较无明显差异;(2)两组中实验侧与对照侧皮瓣成活面积差异有统计学意义;(3)两组中实验侧与对照侧组织学差异有显著意义。
  结论:间歇性正压通过改善皮瓣血运,进而改善大鼠背部皮瓣存活,具体表现在大鼠背部皮瓣成活率增高、皮瓣组织炎症有所减轻。
[博士论文] 肖顺娥
外科学(整形) 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  构建组织工程毛囊实现毛囊再生是治疗秃发较有前景的方案。构建组织工程毛囊三大经典要素分别为:种子细胞、细胞支架和信号分子。
  毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是毛囊重建重要的种子细胞。但是,在常规二维培养过程中,DPCs随着传代次数的增加而逐渐丧失其毛发诱导能力。短时间内大量获取具有诱导能力的DPCs仍比较困难。因此,改善DPCs体外培养条件,扩增细胞数量的同时维持甚至增强其诱导能力至关重要。此外,寻找一种合适的毛囊组织工程支架材料也很有必要。
  富含血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)经激活后可释放出大量的生长因子,可促进细胞增殖、分化,临床研究表明PRP可用于秃发的治疗,促进毛发生长。PRP凝胶结构呈渔网状,细胞在胶内可存活并增殖,是一种合适的组织工程支架材料。因此,在本实验中通过在培养基中添加激活的PRP改善DPCs体外培养条件,并对PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建及用于DPCs三维培养的可行性进行了探讨。该研究结果,不仅为快速获取大量的具有诱导能力的DPCs提供新的方法,也为秃发的治疗提供新策略。
  方法:
  1.PRP对小鼠及人来源DPCs生物学影响的研究
  两步离心法提取PRP,经激活后将不同浓度的激活的PRP上清液添加至培养基中培养小鼠及人DPCs,通过CCK8增殖试验筛选出最佳促DPCs增殖的PRP上清液浓度,并对最佳浓度培养条件下的DPCs进行免疫荧光、Western-blot、PCR检测PRP对DPCs生物学活性和特性的影响。通过动物体内毛囊重建模型检测DPCs诱导能力。
  2.PRP对人DPCs生物学影响的机制研究
  通过免疫荧光及Western-blot对人DPCs细胞表面磷酸化受体表达情况进行了检测,并通过人磷酸化蛋白芯片对受体所介导的信号通路进行了检测。
  3.PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建的研究
  将DPCs、上皮细胞与适量的PRP混合后经凝血酶激活形成包含生发细胞的PRP凝胶,将此凝胶移植至裸鼠背部创面,观察毛囊重建的情况。
  4.PRP凝胶作为人DPCs三维培养支架的可行性研究
  将不同数量级及不同代数的人DPCs接种至PRP凝胶上进行培养,观察细胞生长状况及聚集成球情况。
  结果:
  1.PRP对小鼠及人来源DPCs生物学的影响
  低浓度激活的PRP可促进人和鼠DPCs增殖,其中5%浓度具有最强的促DPCs增殖作用。对添加5%激活的PRP培养条件下的DPCs的生物学功能指标进行了蛋白水平及基因水平检测,发现与其诱导能力相关的标记物ALP、β-catenin及Versican较对照组均表达上调。动物实验证实添加5%激活的PRP培养的小鼠DPCs较普通培养基培养的DPCs具有更强的毛囊诱导能力。而人DPCs与新生鼠上皮细胞通过微型小室法移植并不能重建出毛囊。
  2.PRP对人DPCs生物学影响的机制研究
  添加5%激活的PRP培养条件下的DPCs细胞表面磷酸化受体FGFR1,
  PDGFRα及PDGFRβ蛋白表达水平明显上调。蛋白芯片结果显示人DPCs磷酸化ERK,JUK,p38及Akt信号蛋白表达水平均出现明显上调,GSK-3信号蛋白表达水平下调。
  3.PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建的研究
  包含小鼠DPCs及新生鼠上皮细胞的PRP凝胶移植到裸鼠背部创面后可重建出新的毛囊,且毛发拔除后能够再生新的毛发。而包含人DPCs及人包皮上皮细胞的PRP凝胶移植到裸鼠背部创面后不能重建出新的毛囊。
  4.PRP凝胶作为人DPCs三维培养支架的研究
  人DPCs以0.5×104、1×104、2×104每孔的数量级接种至96孔板PRP凝胶上培养,细胞既不贴壁生长也不聚集成球;增大密度至5×104时,每孔仅可见数个细胞聚集体形成,且形状不规则,细胞间连接不紧密,其他绝大部分细胞均呈接种时的圆形状态;低代与高代DPCs生长方式相似。
  结论:
  1.培养基中添加5%激活的PRP上清液可明显促进小鼠及人DPCs的增殖,并增强其毛囊诱导能力。
  2.PRP促进人DPCs增殖并增强其诱导能力是通过上调磷酸化受体FGFR1,PDGFRα及PDGFRβ的表达,从而激活MAPK、Akt及Wnt信号通路。
  3.PRP凝胶可作为细胞支架用于组织工程毛囊再生。
  4.PRP凝胶不适用于人DPCs的三维培养。
[硕士论文] 王艳菊
皮肤病与性病学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:痤疮是一种常见的慢性炎症性皮肤病,好发于青少年。目前认为,毛囊皮脂腺导管口角化过度、皮脂分泌增加、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes,P.acnes)感染以及毛囊继发炎症为四个重要的致病因素。中重度痤疮如果不及时治疗,容易出现色素沉着,甚至遗留瘢痕,影响患者外观和心理健康。流行病学调查发现[1-4],男性痤疮患者的患病率高于女性,其中6%为重度痤疮。传统药物治疗中重度痤疮起效较慢,疗程较长,副作用较多,疗效不理想,导致患者依从性差。光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)作为一种应用于中重度痤疮治疗领域的新技术,具有起效快、疗效好、无明显副作用的优点,使得越来越多的患者选择PDT治疗。目前,国内临床上应用最多的光敏剂为5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,ALA),研究主要集中在以下几个方面:ALA-PDT治疗与传统药物治疗、红蓝光治疗的疗效比较;ALA-PDT联合药物治疗与单用ALA-PDT的疗效比较;不同光敏剂浓度、不同光源、不同敷药时间对ALA-PDT疗效的影响。由于应用时间较短、病例数量有限,ALA-PDT在治疗痤疮方面仍有很多问题需要探讨。目前,关于ALA-PDT治疗不同严重程度及不同性别痤疮的研究较少,本研究将中重度痤疮按严重程度及性别分组,分别用5%ALA-PDT治疗,观察其疗效及安全性。
  目的:评价5%ALA-PDT治疗不同严重程度及不同性别痤疮的疗效及安全性。
  方法:将门诊收集的符合入选条件的65例中重度痤疮患者纳入研究。所有患者按以下步骤治疗:①使用清水洁面;②予皮损清理术;③面部皮损区予5%ALA凝胶液均匀涂抹;④面部覆盖保鲜膜及避光面罩,避光1.5-2h;⑤清水洗净面部,使用红光照射,光源与面部距离10-15cm,照光时间20min;⑥照光结束后用蒸馏水冷喷30min。每7-10天治疗1次,共治疗3次。治疗前及治疗后第2、4、8、12周应用痤疮综合分级系统(Global Acne Grading System,GAGS)[5]评分评估患者的皮损情况,记录分值。以治疗前GAGS分值为基线,进行疗效评估,同时做好不良反应情况记录。
  结果:治疗第2周Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级痤疮患者的治疗有效率分别为:30.0%、43.5%、46.7%,分析结果为P>0.05,差异无统计学意义;第4周三组患者的治疗有效率分别为:40.0%、56.5%、66.7%,分析结果为P>0.05,差异无统计学意义;第8周三组患者的治疗有效率分别为:50.0%、739%、90.0%,分析结果为P<0.05,差异有统计学意义;第12周三组患者的治疗有效率分别为:60.0%、82.6%、93.3%,分析结果为P<0.05,差异有统计学意义。治疗第2、4、8、12周男性患者的治疗有效率分别为:40.0%、57.1%、74.3%、80.0%,女性患者的治疗有效率分别为:46.4%、60.7%、82.1%、89.3%,分别分析两组患者的有效率,结果均为P>0.05,差异无统计学意义。第2、4、8、12周所有患者的治疗有效率分别为42.9%、58.7%、77.8%、84.1%,分析结果为P<0.05,差异有统计学意义。治疗的不良反应主要有疼痛、灼热感、红斑、肿胀、皮肤干燥、紧绷、少量脱屑、色素沉着,没有出现水疱、脓疱、反向性痤疮、过敏等不良反应。
  结论:1.ALA-PDT治疗中重度痤疮,痤疮严重程度分级越高治疗有效率越高;
  2.ALA-PDT治疗中重度痤疮的有效率男女性别之间无差异;
  3.ALA-PDT治疗中重度痤疮起效快、有效率高、不良反应少,是一种疗效好、安全性高的治疗方法。
[硕士论文] 袁红英
外科学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过观察自体脂肪联合富含血小板血浆治疗痤疮凹陷性瘢痕的临床疗效及术后并发症,探索一种有效性、安全性高的治疗方案,为临床中合理选择治疗方案提供理论指导。
  方法:选取2016年1月至2017年6月期间在大连医科大学附属第一医院整形美容外科接受治疗的患者40例。经筛选符合纳入及排除标准的病例共24例,将其分为A、B两组,A组:自体脂肪填充治疗;B组:自体脂肪+富含血小板血浆填充治疗。应用ECCA权重评分表对接受治疗的患者术前、术后1周、术后3月的瘢痕情况进行评分,同时记录术后并发症及术后3个月自我满意度调查评分。应用SPSS22.0统计学软件对获取的数据进行计t检验、秩和检验,P<0.05具有统计学意义。
  结果:1.A、B组内分别行术前与术后1周、术后3月的ECCA权重评分,进行组内配对t检验,所得P值均<0.05。A、B组内术前与术后1周、术后3个月评分均具有统计学意义。
  2.将A、B两组间术前与术后3个月的ECCA权重评分差值,进行独立t检验,t>0.05。A、B两组间评分无统计学意义。
  3.术后3个月,A组的治疗有效率为75%,B组的治疗有效率为83.33%,两组数据经秩和检验,P=0.213>0.05。术后3个月A组治疗有效率与B组相比无统计学意义。
  4.术后3个月针对皮肤改善程度,进行患者满意度评分调查,A、B两组的评分结果分别为:2.08±1.24,2.42±0.99行独立t检验,P<0.05。A、B两组间评分具有统计学意义。
  5.术后常见的并发症为:术区青紫红肿、皮下结节、感染化脓、麻木不适。A组术后并发症发生率为:25%。B组术后并发症发生率为:8.3%。两组均未出现脂肪栓塞、全身感染等严重术后并发症。
  结论:1.自体脂肪联合富含血小板血浆治疗痤疮凹陷性瘢痕效果肯定。与单一自体脂肪的填充效果相比无显著差异。
  2.自体脂肪联合富含血小板血浆对皮肤质量的改善效果优于单一的自体脂肪。
  3.自体脂肪联合富含血小板血浆治疗痤疮凹陷性瘢痕术后并发症发生率低,可于临床中进行推广使用。
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